Staphopains en la bacteriemia generada por Staphylococcus aureus:

actividades de virulencia relacionadas con la aparicin de shock sptico,

trastornos de la coagulacin, y endocarditis infecciosa
Takahisa Imamura
n


Departamento de Patologa Molecular Patologa, Facultdad de ciencias de la vida, Uni versi dad Kumamot, 1-1-1 Honjo, Kumamoto 860-8556,
Japn
A b s t r a c t o
Antecedentes: Staphylococcus aureus es una importante bacteria oral que entra en el torrente sanguneo despus de
procedimientos dentales, causando bacteriemia. La endocarditis infecciosa se produce debido a la invasin de patgenos
transmitidos por la sangre en el endocardio. S. aureus es la bacteria ms frecuentemente aislada en la sepsis de Gram-
positivos, trastornos de shock y de coagulacin son consecuencias comunes y potencialmente fatales de la sepsis.
Staphopains son las enzimas ms abundantes entre proteasas proteolticas extracelulares producidas por estafilococos, y se
han dilucidado sus actividades de virulencia relacionadas con la fisiopatologa de la bacteriemia por S. aureus.
Fundamento: La Staphopain A (ScpA) -no la staphopain B (SSPB) libera bradiquinina, y las dos staphopains liberan
sinrgicamente una nueva cinina, Leu-Met-Lys-bradicinina, directamente desde quiningenos del plasma humano. Estas
cininas causan prdidas vasculares. La ScpA, similar a los dos cininas, reduce la presin arterial en cobayas mediante una
bradiquinina dependiente del receptor B2 cuando es administrada por va intraarterial, y produce sntomas de shock sptico
en ellos. La generacin de quinina a partir de plasma humano por ScpA aumenta en presencia de SSPB, lo que sugiere
fuertemente una induccin de shock por las proteasas bacterianas. Las Staphopains, SSPB siendo tres veces ms potentes que
ScpA, truncan el fibringeno escindiendo preferentemente este factor de coagulacin en la regin C-terminal de la cadena
A, lo que resulta en una prdida de la capacidad de coagulacin de fibringeno, causando con ello la tendencia al sangrado.
Las Staphopains mostraron una actividad de degradacin de colgeno de tipo I similar a la observada en la destruccin de la
piel mediada por ScpA, lo que indica que participan en la destruccin del endocardio inducida por S. aureus.
Conclusin: los factores de virulencia de la Staphopains son potentes y estn potencialmente implicados en la aparicin de un
shock sptico, trastornos de la coagulacin, y endocarditis infecciosa que se produce en bacteriemia por S. aureus.
Palabras clave: Staphylococcus aureus, Staphopain, Cinina, Fibringeno, Colgeno.

Introduccin
Staphylococcus aureus es un importante bacteria oral de
[1] que se asla en aproximadamente el 20% de las
muestras obtenidas a partir de la cavidad oral y el rea
facial [2]. S. aureus fue aislada de 12% de las muestras de
placa supragingival en adultos dentados sanos [3].
Aproximadamente el 28% de los hisopos de lengua
obtenidos de nios, que no tenan otras enfermedades
adems de enfermedad dental, presentaron S. aureus [4].
La tasa de aislamiento de la cavidad oral aumenta a ms
de 30% en pacientes con enfermedad periodontal [5].
Algunas infecciones orales son causadas, al menos en
parte, por S. aureus, tales como queilitis angular [6],
parotiditis [7], y mucositis estafiloccicas [8]. Las
bacterias en la cavidad oral entran en el torrente
sanguneo en grandes cantidades despus de
procedimientos dentales, causando bacteriemia [9,10].
Las tasas de bacteriemia fueron de 60% (rango: 18-85)
despus de extracciones dentales, 88% (rango: 60-90)
despus de ciruga periodontal, y 40% (rango: 7-50),
despus de cepillarse los dientes o irrigacin [11]. Un
sondaje periodontal puede causar bacteremia en pacientes
con periodontitis [12]. El riesgo de bacteriemia aumenta
en pacientes con enfermedad periodontal debido a la
proximidad de los organismos a la corriente sangunea a
travs de ulceraciones dentro de bolsas gingivales o
epitelio del surco gingival [13]. La bacteremia por S.
aureus se asocia a diversas enfermedades generales,
incluyendo endocarditis infecciosa y sepsis [10,14,15]. S.
aureus es el patgeno ms frecuentemente aislado en la
sepsis de Gram-positivo, que es tan comn como la sepsis
de Gram-negativas [16-18]. Las consecuencias comunes y
potencialmente fatales de la sepsis son los trastornos de
shock y coagulacin.
Las enfermedades infecciosas mediadas por S. aureus son
causadas por factores de virulencia producidos por este
patgeno. Adems de enterotoxinas y hemolisinas, S.
aureus segrega varias proteasas extracelulares, incluyendo
la proteasa V8 proteasa serina, la metaloproteasa
aureolysin y las proteasas de cistena staphopain A
(ScpA) y staphopain B (SSPB). Estas enzimas se
consideran como factores de virulencia [19,20]. Las
Staphopainas son los ms abundantes entre las proteasas
enzimas proteolticas extracelulares de estafilococos [19].
Esta revisin se centra en la fisiopatologa de la
bacteriemia producida por S. aureus y las actividades de
virulencia de staphopain que se asocian con shock sptico,
trastornos de la coagulacin, y endocarditis infecciosa.
2. Propiedades de las staphopains
La ScpA est codificada por scpA, y su forma madura
tiene una masa molecular de 20 kDa y se compone de 174
residuos de aminocidos [21]. SSPB est codificada por
SSPB, y su forma madura comprende 174 o 168 residuos
de aminocidos que comparten 46% de identidad con
ScpA [21]. A pesar de esta similitud, el pI de ScpA es
alcalino (pI 9,0), mientras que el pI de SSPB es cido (pI
4,64). Tanto ScpA como SSPB se procesan de grandes
proenzimas que contienen 363 y 357 residuos,
respectivamente [19]. La estructura terciaria de ScpA se
asemeja al plegamiento global de la papana con dos
dominios que interactan. Al igual que en las proteasas
como la papana, la residuos Cys24 y His120 (His121 en
SSPB) forman la dada cataltica de ScpA, con Gln18
involucrado en la formacin del "agujero oxianin", y
Asn
141
interactua con el anillo de imidazolio del His
cataltico. SSPB tiene pliegues muy similares y una
topologa idntica a la del sitio activo hendido de ScpA.
ScpA tiene muy amplia especificidad de sustrato, con
preferencia por un aminocido particular en cualquiera de
las varias posiciones a cada lado del enlace peptdico
escindible [22]. A pesar de la amplia especificidad, esta
proteasa muestra una capacidad limitada para escindir
sustratos peptdicos sintticos, que incluyen ABZ (cido
benzoico amino) Phe-Gly-Ala-Lys-NH2 ANB (amida del
cido 5-amino-2nitrobenzoic) [23], Z (benciloxicarbonilo)
Leu-Leu-Glu-MCA, y Z-Leu-Leu-Arg-MCA. Son
necesarios compuestos de tiol para la actividad de la
proteasa. Adems de metales pesados y agentes
oxidantes, ScpA est inhibida irreversiblemente por E-64
y 2-macroglobulina humana [24]. SSPB tiene una
especificidad de sustrato mucho ms restringida en
comparacin con ScpA, y se une con ABZ-Ile-Ala-Ala-
Gly-ANB-NH2 [23] y Z-Phe-Arg-MCA. E-64 inhibe a la
SSPB, pero no han sido identificados inhibidores
efectivos de esta proteasa en el plasma humano hasta el
momento.
3. Actividades de virulencia de las staphopains en
bacteriemia / sepsis
En la bacteriemia / sepsis, las staphopains, liberadas por
S.aureus en el torrente sanguneo, escinden a las protenas
plasmticas, ejerciendo de este modo sus actividades
virulencia.
3.1. Induccin de prdida vascular e hipotensin
hipovolmica
La patognesis de la sepsis Gram-positiva no ha sido
dilucidada completamente. Sin embargo, los niveles
plasmticos de componentes plasmticos del sistema
calicrena / kinin, factor XII, precalicrena y quiningeno
de alto peso molecular en moles (HK), son bajos en
pacientes con sepsis, indicando activacin y posterior
consumo de estos componentes [25-28]. La activacin del
sistema plasmtico calicrena / cinina en un modelo
animal de bacteriemia provoca hipotensin letal [29,30];
por lo tanto, la activacin del sistema plasmatico
calicrena / cinina parece contribuir a la generacin de un
shock sptico. En el plasma humano, S. aureus induce la
liberacin de bradiquinina (BK) [31], el producto final de
la activacin del sistema plasmtico calicrena / cinina, lo
que provoca fuga vascular (VL) [32] conduce a
hipotensin. Esta bacteria tiene una carga superficial neta
negativa alta debido a la presencia de cido teicoico en la
pared celular y de cido lipoteicoico [33], y puede activar
el sistema plasmtico de calicrena / cinina tan
eficientemente como lo hacen las lipopolyscaccharide y
lpido A de bacterias Gram-negativas in vitro [34]. Por lo
tanto, estas molculas de la pared celular tienen el
potencial de activar el sistema plasmtico de calicrena /
cinina en bacteriemia generada por S. aureus. Sin
embargo, se hay que los productos extracelulares lbiles
al calor de S. aureus eran mucho ms potente como
factores letales que sus componentes de la pared celular
cuando se evalu en un modelo de sepsis de ratn [35].
Entre las proteasas secretadas, se observa que la
proteinasa V8 libera cininas de HK; sin embargo, esta
actividad no se vio afectada por la presencia de
inhibidores de proteinasa serina [36], lo que sugiere que
las enzimas proteolticas que contaminan concentraciones
han sido responsables de la generacin de cinina. Por lo
tanto, se examinaron staphopains termolbiles por su
papel en la liberacin de cininas.
La inyeccin intradrmica de ScpA en conejillos de indias
indujo VL de una manera dependiente de la concentracin
a partir de una concentracin enzimtica de 20 nM (2
pmol / 100 ml) [37]. La inhibicin de esta actividad por
E-64 y el tratamiento de los animales con el BK B2-
antagonista del receptor de HOE 140 BK sugiri que fue
generado por la actividad proteoltica de SCPA. De
hecho, esta enzima induce VL a travs de la liberacin de
BK directamente desde ambos HK humana y ciningeno
de bajo peso molecular (Fig. 1), pero no a travs de la
activacin del factor XII o precalicrena. Curiosamente, a
pesar de que la SSPB mejor la actividad de VL inducida
por ScpA de una manera dependiente de la concentracin,
no mostr actividad de VL sola; esto se atribuye a la
escisin sinrgica de ciningeno. SSPB escinde a HK en -
Ile-Ser- Leu-Met, y junto con la escisin en la porcin
C-terminal de la secuencia de BK por ScpA, libera Leu-
Met-Lys-BK (Fig. 1), que exhibe una actividad de VL
casi igual a la de BK. Por lo tanto, la coexistencia de las
dos staphopains aumenta la actividad de VL a travs de la
liberacin adicional de Leu-Met-Lys-BK. Un mecanismo
fisiopatolgico importante del shock sptico es la
hipotensin hipovolmica, causada por la prdida de
plasma en el espacio extravascular. ScpA, similar a las
dos cininas, disminuye la presin arterial dependiendo de
B2 y del receptor BK cuando se administra como una
inyeccin intra-arterial en los conejillos de indias y
produce sntomas de shock sptico en ellos. La generacin
de quinina a partir de plasma humano por ScpA se mejora
en presencia de SSPB, lo que sugiere fuertemente que
estas proteasas pueden causar una descarga en pacientes
con sepsis generada por S. aureus.
3.2. Induccin de trastornos de la coagulacin
La coagulacin intravascular diseminada (DIC) es una
consecuencia comn y potencialmente mortal de la sepsis.
En casi el 40% de los pacientes spticos, DIC conduce a
fallo multiorgnico [38], y se vincula directamente a una
alta tasa de mortalidad. La induccin de coagulacin y la
tendencia a una posterior hemorragia debido al consumo
de factores de coagulacin son los datos clnicos
prominentes de la DIC. En la sepsis S. por aureus, las
staphopains pueden participar en el inicio del trastorno de
la coagulacin a travs de la activacin o inactivacin de
los factores de coagulacin del plasma por una escisin
proteoltica. Sin embargo, no ha sido estudiada la
capacidad de las staphopains de afectar la coagulacin del
plasma.
El tiempo de la tromboplastina parcial activada (APTT)
muestra la capacidad de coagulacin del plasma a travs
de la va de coagulacin intrnseca. El APTT de ambas
phopains se vio prolongado, se hay que era
aproximadamente tres veces ms potente que ScpA [39].
El tiempo de la trombina plasmatica demuestra la
capacidad de coagulacin del fibringeno y efectos
similares de las enzimas en este ensayo indican que las
staphopains que predominan degradan el fibringeno para
reducir su capacidad de coagulacin. De hecho las
Staphopains, prolongaron eficientemente el tiempo del
fibringeno trombina en concentracin y la actividad
protsica que dependen de la construccin. El anlisis por
SDS-PAGE y la secuenciacin N-terminal de fragmentos
de fibringeno han revelado que las staphopains
preferentemente escinden la cadena A (Fig. 2). En
primer lugar, ScpA corta rpidamente un fragmento de 16
kDa de la C (C-terminal de la regin dos / tercios) de la
cadena A (66 kDa) [40], lo que resulta en la formacin
de un fragmento de 50 kDa. Una posterior escisin lenta
posterior de este fragmento reduce su masa molecular en
34 kDa. El C tambin est dirigido por SSPB, que
genera 41-, 37-, y fragmentos de 35 kDa (Fig. 2). Se cree
que SSPB libera inicialmente el fragmento de 41 kDa por
protelisis dentro de la C, a una tasa ms lenta que la de
la escisin mediada por ScpA para liberar el fragmento de
16 kDa. El fragmento de 41 kDa se corta ms en la C,
generando secuencialmente fragmentos de 37- y de 35
kDa. En contraste con la cadena A, la cadena B- y -
resisten comparativamente la escisin por las staphopains.
La plasmina degrada las tres cadenas de fibringeno, y se
une la cadena A en varios sitios, incluyendo los enlaces
peptdicos en los sitios C-terminales de Arg252, Arg424,
Arg491 y Lys508 [41]. La protelisis en esos sitios genera
fragmentos con masas moleculares diferentes de los
liberados por la escisin de la cadena A inducida por las
staphopainas. Por lo tanto, es evidente que las staphopains
escinden a la cadena A de fibringeno en sitios
diferentes a aquellos en los que plasmina. La trombina
corta y deja fuera de la cadena A a la fi brinopeptide y a
la brinopeptide fi B de la cadena B [42], lo que provoca
la polimerizacin de fibringeno DesAA- generada en la
coagulacin de las fibrinas. Las fibras de fibrinas
posteriormente se asocian lateralmente entre s a travs de
la unin de los regiones C, (. Figura 3) [43],
convirtiendo as el fibringeno en un cogulo de fibrina.
Residuos necesarios para la asociacin lateral de
aminocidos cargados se encuentran en el C [44]. El
corte eficiente del C por SSPB trunca a la mayora de las
protenas de C para interrumpir la interaccin necesaria
para la asociacin lateral de fibrillas de fibrina (Fig. 3).
ScpA tambin escinde el fibringeno en la cadena C,
ms rpidamente que SSPB, genera el primer fragmento
de fi-50 kDa, pero parece poco probable que esta escisin
cause una reduccin en la funcin del factor de
coagulacin. La siguiente escisin, por la cual se genera
un fragmento de 34 kDa, es lenta, pero hace que el
fibringeno se vuelva acoagulable (. Figuras 2 y 3). La
diferencia de los sitios de escisin explica por qu SSPB
perjudica la formacin de cogulos de fibrina ms e fi
ciente mente que ScpA. Por lo tanto, la escicin de
fibringeno por las staphopains en la sepsis por S. aureus
resulta en la prdida de la capacidad de coagulacin del
plasma, que conduce a una mayor tendencia a sangrar,
una consecuencia fatal de la sepsis.
3.3. Degradacin del colgeno
La invasin de S. aureus en el endocardio que lleva a
endocarditis infecciosa, requiere la degradacin de
protenas de matriz extracelular del tejido conectivo y se
ve facilitada por proteasas. En este contexto, las proteasas
de estafilococos pueden contribuir a esta invasin, aunque
se sabe poco acerca de la capacidad de las enzimas de S.
aureus derivadas de la degradacin de protenas de la
matriz. La degradacin de la matriz extracelular es
esencial para la patogenicidad de S. aureus y se infiere de
la capacidad de ScpA para inducir la prdida de plasma a
travs de la liberacin generalizada de BK despus de una
inyeccin intradrmica en los conejillos de indias [37].
Esto est en marcado contraste con la prdida de plasma
localizada inducida por la inyeccin de BK solo. Se cree
que la fuga generalizada de plasma es debido a la
degradacin de las protenas de la matriz extracelular,
incluyendo la elastina, que pueden ser escindidas por
ScpA [24]. No se ha investigado la actividad de SSPB en
protenas de la matriz.
Ambas staphopains degradan al colgeno tipo I de una
manera dependiente de concentracin a concentraciones
tan bajas como 10 nM y de inactivacin de estas proteasas
inhibidas su actividad colagenoltica [39]. Aunque las dos
staphopains difieren en su actividad brinogenoltica, que
ejercen la misma actividad colagenoltica. La capacidad
de degradar el colgeno fuertemente sugiere que las
staphopains pueden participar en la destruccin del
endocardio causada por las S. aureus. La adherencia de S.
aureus a las clulas endoteliales es el paso inicial en el
desarrollo de la endocarditis. En este proceso, el
fibringeno acta como molcula puente entre S. aureus y
el endotelio [45], y la capacidad de este patgeno para
unirse al fibringeno se reconoce como un factor
importante para la infeccin de la vlvula y la invasin en
la endocarditis experimental [46]. Por lo tanto, la
interaccin de S. aureus con fibringeno juega un papel
crucial en la patogenia de la endocarditis causada por esta
bacteria. Por otra parte, una protena de la superficie
celular 135-kDa de S. aureus [47] se une especficamente
al colgeno [48-51], lo que constituye otro rasgo de
virulencia importante en la endocarditis experimental
[52].
4. Conclusiones
S. aureus en la cavidad oral invade el torrente sanguneo
en grandes cantidades despus de procedimientos dentales
y libera staphopains en el plasma. Escindiendo
quiningenos y fibringeno en el plasma, las staphopains
disminuyen la presin arterial a travs de la liberacin de
cininas y deterioran la capacidad de coagulacin del
plasma. Las Staphopains degradan el colgeno tipo I, que
posiblemente contribuye a la destruccin del endocardio
por S. aureus. Estas actividades patgenas de staphopains
sugieren que las proteasas producidas en S. aureus son
potentes factores de virulencia y estn potencialmente
implicados en la induccin de trastornos de la
coagulacin, shock sptico y en la aparicin de la
endocarditis infecciosa en bacteriemia por S. aureus.
Adems, tales actividades de las staphopain estn
asociadas con infecciones locales de S. aureus. El edema
se produce a travs de la liberacin de cininas, la
generacin de fibringeno sin capacidad de coagulacin
impide la induccin de la coagulacin de defensa del
husped contra los patgenos, y la degradacin del
colgeno destruye los tejidos, lo que facilita la invasin de
S. aureus en la circulacin y su difusin. Por lo tanto, las
staphopains pueden ser nuevas dianas para el desarrollo
de frmacos para la terapia de enfermedades infecciosas
causadas por S. aureus.
Aprobacin tica
No se requiere la aprobacin tica.
Conflicto de intereses
No existe conflicto de inters en esta revisin
Agradecimientos
El autor agradece al Prof. Ryutaro Kamijo, Departamento
de Bioqumica de la Facultad de Odontologa de la
Universidad de Showa, y el Prof. Hayato Ohshima,
Divisin de Anatoma y Biologa Celular del tejido duro,
Departamento de regeneracin tisular y la
Reconstruccin, la Universidad de Niigata Graduate
School of Medical y Dental Sciences, por su aliento
mientras escriba esta crtica. Los estudios del autor
incluidos en esta revisin fueron apoyados en parte por
una Subvencin en-Ayudas a la Investigacin Cient fi
(B) del Ministerio de Educacin y Ciencia de Japn
(Grant No: 18390125).