VIROLOGIA - Prof. Luciane T.

Lovato
Vrus s so vistos em microscpio eletrnico (80-300
nanmetros).
ESTRUTURA

COMPOSIO: cido nuclico, protenas (capsdeo,
tegumento, envelope), lipdeos (das membranas),
carboidratos (mucopolissacardeos e dissacardeos).
DNA ou RNA + protenas estruturais + enzimas e
protenas de ligao do cido nuclico = CAPSDEO
Glicoprotenas + membrana = ENVELOPE
VRUS NO ENVELOPADOS
Ex: adenovrus.
Compostos por protena (capsdeo);
Resistentes (intestino, esgoto);
lanado pela lise celular;
Pode se manter seco e sobreviver.

VRUS ENVELOPADOS
Ex: herpes vrus, Influenza, HIV
Componentes: membrana, lipdio, protenas,
glicoprotenas;
Mas suscetveis, pois lipdio do envelope facilmente
destrudo;
lanado por lise ou por brotamento;
Precisa de inflamao / hipersensibilidade para causar
doena;
Resposta imune com anticorpos e clulas mediadora.

TERMOS
Vrion: partcula (fora da clula);
Sorotipo ou sorogrupo: reao sorolgica, etc;
Protenas do capsdeo: simetrias: helicoidais (raiva) ou
icosadricas (adenovrus);
Genomas virais:
Geralmente DNA ou RNA;
DNA: cadeia dupla ou simples ou circular;
RNA: cadeia dupla ou simples, ser segmentado ou no e
ser + (reconhecido por ribossomo ativo para ser
traduzido), ou (no reconhecido).

CLASSIFICAO DOS VRUS
De acordo com:
- Enfermidade (rgo/sistema);
- Hospedeiro (humanos, bovinos);
- Envoltrio (envelopados, no envelopados);
- Genoma (DNA ou RNA).
TAXONOMIA
1. ORDEM: virale; 2. FAMLIA: viridae; 3. SUBFAMLIA:
virinae; 4. GNERO: vrus; 5. ESPCIE: nome; 6. TIPO:
nmero.
Ex: vrus DNA: Coxviridae, Parvoviridae, Papovaviridae,
nnnnnnnAdenoviridae, Herpesviridae, Hepadnaviridae,
Ex: vrus RNA: Arenaviridae, Reoviridae, etc.

ESTRATGIAS DE SOBREVIVNCIA
1 Variao Antignica: antgenos esto no capsdeo ou
envelope (por fora), so importantes para entrar nas
clulas e so reconhecidas pelo Sistema Imune. Vrus de
RNA principalmente sofre muitas mutaes devido a
erros na replicao, o que faz surgir novos antgenos
que podem fazer com que o vrus no seja reconhecido.
2 Infeco Persistente: vrus permanece no hospedeiro
e passado para outros. Ex: HIV, herpes.
3 Vetores e Reservatrios: reservatrio vetor. Ex:
aves silvestres mosquitos.
4 Infeco Subclnica: mais evoludos (no destroem o
hospedeiro);
5 Resistncia Viral.

REPLICAO VIRAL
1 Ligao do vrus receptor na clula;
2 Penetrao;
3 Desnudamento (perodo de elipse: no h vrus, s
parte dele): libera cido nuclico;
4 Transcrio, traduo, replicao (varivel);
5 Reunio (maturao);
6 Liberao.

1. Entrada do vrus
a) Fuso: envelope + membrana;
b) Endocitose: vrus fica dentro de membrana
endoctica, onde h menor pH e o vrus vai sendo
desmontado. Se ficar alm do tempo ele pode ser
destrudo (antiviral influenza).
*Se for DNA, ele desmonta prximo do ncleo para que
o DNA j entre.
2. Quatro (4) tipos de replicao:
I. Vrus RNA de sentido positivo: similar ao RNAm, ao
ser liberado no citoplasma, ele reconhecido pelos
ribossomos celulares, ento ocorre traduo. Uma
parte do RNA codifica protenas estruturais (capsdeo,
envelope), e outra, no estruturais (enzimas para
replicao). Normalmente so genomas muito simples.
Ex: raiva: 5 protenas.
Aps a formao das enzimas, a replicao ocorre no
outro sentido (RNA -), que serve de molde para o RNA+.
DNA
(azul)
RNA
(vermelho)
VRUS
Capsdeo
(verde)
Envelope
*Essa a forma mais fcil de replicar (CICLO RPIDO).

II. Vrus RNA de sentido negativo: precisa primeiro ser
transcrito para RNAm, o que dificulta o processo, pois
ele deve trazer junto enzimas que fazem essa
transcrio, pois clulas no fazem transcrio de RNA
(PROCESSO MAIS DEMORADO).
***Vrus RNA replicam no citoplasma, exceto influenza;
***Vrus RNA sofre muitos erros na replicao.

III. Vrus DNA: o cido nuclico liberado dentro do
ncleo. A clula tem enzimas que fazem transcrio,
RNAm vai para o citoplasma e cido nuclico formado.
**Exceo: Cox vrus (varola) replica no citoplasma.

IV. RETROVRUS (AIDS, Leucemia): RNA primeiro
transformado em DNA no citoplasma, com enzimas
trazidas pelo prprio vrus (transcriptase reversa).
Forma-se duplo DNA (cadeia dupla), que chamado de
cDNA. Ele levado para o ncleo onde inserido no
DNA celular por enzimas integrasse trazidas por ele.
Assim, sempre que a clula replica feita tambm a
replicao de cDNA viral. Dessa forma, uma vez
instalado, o vrus fica para sempre na clula. A
transcriptase reversa a que mais erra na transcrio,
tornando esses vrus mais mutveis.
*** vrus DNA replica no ncleo.

3 SADA DO VRUS
3.1 BROTAMENTO: quando ocorre traduo, as
glicoprotenas virais j se localizam na membrana
celular, por onde o vrus envelopado ir sair. Ex:
retrovrus e Influenza.
3.2 LISE CELULAR:

EFEITOS DO VRUS SOBRE A CLULA
I- Esgotamento da sntese de protenas:
autodestruio;
II- Resposta imune: destruio pelas clulas NK (inatas)
e CD8 (adquirida). Geralmente induzem apoptose;
III- Induo de transformao celular: causam tumores,
por agirem sobre pontos regulatrios da replicao,
fazendo-a replicar-se infinitamente. Ex: a P53 tem
funo de induzir apoptose, o papiloma vrus impede
a ao da P53. Outro ponto regulatrio a pRB, que
tambm atingida por protenas virais;
IV- Efeitos no citocidas sobre clulas especializadas. Ex:
rinovrus s lesa pouco o epitlio respiratrio, mas
facilita infeces secundrias;
V- Efeito citoptico: alterao visvel no microscpio;
VI- Corpsculos de incluso: usado no diagnstico.
Manchas celulares indicam leso viral
(patognomnico evidncia de que o vrus provocou
doena). So restos de vrus ou de suas protenas.

EPIDEMIOLOGIA E PATOLOGIA DAS DOENAS VIRAIS
1. Transmisso vertical (2): transplacentria (HIV:
maioria no infectado) ou perinatal (Herpes
simplex 2);
2. Transmisso horizontal (6):
Por contato direto: herpes vrus, influenza, HIV,
hepatite B. ex: fmites, beijo, aerossis (- de 1m
influenza);
Por veculos: gua, alimentos (norovrus), poeira
(hantavrus);
Zoontica: maioria tem origem em aves silvestres
(influenza), raiva...

TIPOS DE INFECO
I. Sistmica: vrus entra e vai para linfonodos, onde
replica, vrus cai no sangue (viremia 1) e replica
novamente em tecidos como msculo, fgado, rim,
vasos. Desses, vrus partem para o sangue (viremia 2),
indo ento, cada vrus, para rgo especficos , como
pele (varicela), mucosas, pulmo, rins, trato
gastrointestinal, crebro, etc.
Ex: Varicela: via respiratria tonsilas (replica) sangue
tecidos (fgado, bao) (replica), leses na pele (14 d)
desaparece, mas pode reativar;
Ex: Raiva: replica nas clulas musculares terminaes
nervosas prximas SNC.

II. Propagao Local: propagao clula a clula.
Ex: Papiloma vrus: causa verrugas (induz hiperplasia
nas clulas da epiderme, ocorre lentamente).
RESPOSTA IMUNE A VRUS
I. Resposta Imune Inata: primeira linha de combate,
enquanto adaptativa se prepara.
- Barreiras: pele, muco, pH, lgrima,...;
- Peptdeos antimicrobianos: defensinas levam ao
desequilbrio osmtico que mata vrus. No HIV algumas
impedem replicao;
- Sistema Complemento: cascata de protenas do soro
que vo se ativando em sequncia. Vai at C9,
formao de poros no envelope, matando vrus. Outros
Cs so inflamatrios forma MAC (Complexo de Ataque
membrana);
- Sntese de Interferon (citocinas): protenas produzidas
pelas clulas. Normalmente no so produzidas ou so
muito pouco, a invaso intracelular ativa produo de
interferons, que se ligam a receptores de outras clulas
para que elas se preparem e no permitam replicao.
Existem do tipo1 (alfa e beta) e 2 (gama);
- Clulas NK: contra vrus e tumores. Mata clula
infectada que reconhecida por no ter MHC-I (o MHC-
I das clulas normais se encaixa a receptores NK que
inibem sinal de ataque). Nas clulas estranhas
(transformadas por tumor, infectadas por vrus e
transformadas), a perforina faz poros na membrana,
granzima entra e induz apoptose;
- Ativao de clulas dendrticas (CDs): fazem fagocitose e
apresentam antgenos aos linfcitos T
VIRGEM
(macrfago
Ham). Ligao resposta inata-resposta adaptativa!
II. Resposta Imune Adaptativa:
a) Ocorre a fagocitose do antgeno pela APC, que
apresenta esse antgeno viral em sua membrana
plasmtica atravs do MHC-II, o qual reconhecido
pelas clulas T helper (CD4
+
). Ao do LTCD4: ativa
linfcitos B (anticorpos), ativa Mo, ativa LT CD8
(citotxicos);
b) Ativao de LTCD8: Mo fagocita, apresenta antgeno
atravs de MHC-I, LTcitotxicos CD8, que induz
destruio celular;
c) Ativao LB: reconhecem antgenos dos LTCD4 (T
helper) e se multiplicam rapidamente. Diferenciam-se
em plasmcitos (anticorpos) e B de memria.
Ao dos anticorpos:
1. destruio pelo sistema complemento (s
envelopados);
2. impedimento de adeso: neutralizao;
3. impedimento de endocitose;
4. impedimento de desnudamento;
5. opsonizao promove captao (torna antgeno mais
palatvel) e eliminao da clula infectada com ao
dos macrfagos;
6. ADCC: citotoxidade celular dependente de
anticorpos: promove reconhecimento pelas
imunoglobulinas:
IgM: indica infeco primria;
IgG e IgA: 2-3 d aps IgM;
IgA: resposta estmulo viral nas aberturas naturais do
corpo (olhos, boca, trato respiratrio e TGI).


MECANISMOS VIRAIS PARA ESCAPAR DA RESPOSTA
IMUNOLGICA (EVASO DA RESPOSTA IMUNE)
- Infeco de stios imunologicamente privilegiados;
- Regulao da expresso de protenas virais;
- Variao antignica;
- Destruio de APCs;
- Inibio da apresentao de antgenos;
- Expresso de protenas que inibem a funo de clulas
efetoras;
- Expresso de protenas que retardam a morte celular;
- Infeco de LT e LB;
Ex: vrus influenza: mutaes na sequncia do genoma
(variaes antignicas), ressortimento de segmentos;
Ex: herpes simplex (HSV): latncia (no gnglio do
Trigmio), infeco de stio imunologicamente
privilegiado, regula expresso de protenas virais;
Ex: vrus do sarampo: infecta stios imunologicamente
privilegiados, causa pan-encefalite esclerosante
subaguda (PEES);
Ex: HIV: persistncia no genoma viral, variao
antignica, destri APCs, destri LTCD4;
Ex: citomegalovrus humano (protena US6) e a HSV
(protena ICP47): inibio da apresentao de antgeno;
Ex: citomegalovrus humano: expressa a protena UL18
(inibe a ao de clula efetora), homloga do MHC-I
(falso MHC-I), que expressa sobre a membrana e
protege a clula da destruio por NK;
Ex: vrus vaccnia: falsos receptores de interferon, que
inibem sua ao: Inibio de protenas regulatrias do
complemento; Inibe apoptose no incio da replicao
viral.

MTODOS DE DETECO E IDENTIFICAO VIRAL
1 - deteco direta do vrus;
2 - identificao de antgenos virais;
3 - deteco do material gentico;
4 - deteco da resposta sorolgica;

1. DETECO DIRETA DO VRUS
1.1. Isolamento em cultivos celulares:
- material para isolamento: swab (clon), fragmento de
rgos, fezes...;
- deve ser do local em que o vrus se aloja e
preferencialmente na fase aguda. Deve-se, aps a
coleta, fazer filtragem de materiais contaminados e usar
antibiticos, pois alguns vrus so suscetveis a bactrias
e fungos;
- crescimento de vrus em ovos embrionados (embrio
de galinha cultivo primrio) pouco utilizado (1:2);
- cultura de clulas: cultura de clulas primrias obtidas
pela dissociao de rgos, com TRIPSINA e agitao. As
clulas obtidas so cultivadas em monocamadas em
meios artificiais com soro bovino;
- alguns tipos de vrus so melhores isolados nessas
culturas de clulas primrias, j outras em linhagens de
clulas diploides ou linhagens tumorais;
- repique ou passado de clulas de linhagem: retirada
do meio de cultura coloca TRIPSINA lavagem com
TRIPSINA e recoloca TRIPSINA;
- manuteno das linhagens: congelamento em
nitrogenia;
- inocula-se, pois, o vrus no cultivo celular e ento
monitora-se para observao do EFEITO CITOPTICO
(visto no microscpio ptico, no olho nu) causado pela
ao viral (que sugere replicao do vrus). Ex. de
efeitos observados: arredondamento, desprendimento
do tapete, enrugamento, vacuolizao, lise,
condensao, citomegalia, corpsculos de incluso,
sinccio. Ex.: vrus da varola em clulas BSC 40:
arredondamento, lise, desprendimento; vrus do
sarampo em clulas A549: sinccio;
- dependendo do tipo de efeito e tempo que leva para
ocorrer pode-se identificar o vrus;
- monitoramento: passagem 1 (5 d) + passagem 2 (5 d) +
passagem 3 (5 d).

1.2. Quando a inoculao feita em ovo embrionado,
cada tipo de vrus inoculado em um local do ovo.
Efeitos vistos:
- alteraes e morte do embrio (Newcastle, BTV);
- alteraes sem morte do embrio (varola);
- sem alteraes (influenza);
- leses na membrana crio-alantide: poxvrus.
1.3. Visualizao por microscopia eletrnica;
1.4. Isolamento em animais: inoculao.
2. IDENTIFICAO VIRAL IDENTIFICAO DE
ANTGENOS VIRAIS (5)
2.1. Hemaglutinao: alguns vrus expressam
glicoprotena que causa ligao dos eritrcitos. Mistura-
se sangue com vrus em diferentes diluies;
2.2. Imunofluorescncia Direta: anticorpos
fluorescentes para antgeno viral so colocados no
meio. Se o vrus estiver, h ligao anticorpo-antgeno e
ficar verde, seno fica vermelho (depende do
reagente);
2.3. Imunoperoxidase / Imunohistoqumica: para
detectar antgenos (direto) ou antgeno-anticorpo,
atravs de reao com anticorpo marcado;
2.4. ELISA: identificao de anticorpo e/ou antgeno por
anticorpo marcado com enzima que reage com
substrato e faz mudar a cor.

3. IDENTIFICAO DO MATERIAL GENTICO
3.1. PCR: Reao de Polimerase em Cadeia, que
amplifica a regio do genoma (s com DNA, com RNA
deve haver passo anterior);
3.2. SDS-page.

4. IDENTIFICAO DA RESPOSTA SOROLGICA
4.1. Soroneutralizao: se houver anticorpo no haver
efeito citoptico. *Se h anticorpo, pode ser por
contato com vrus patognico ou vacina, para
diferenciar:
-deteco da doena aguda: poucos anticorpos na
primeira coleta e muitos na segunda (20 d): (sorologia
pareada);
-outra opo: 1 coleta alta IgM e baixa IgG e na 2
coleta alta IgG.
4.2. Inibio da hemoglutinao.
4.3. ELISA.
4.4. Imunodifuso.

ANTIVIRAIS
- Trabalha-se mais com profilaxia, porque tratamento
tem alta toxicidade, atingindo muitas clulas saudveis.
Ex: viroses com tratamento: hepatite A, B, C, AIDS,
herpes, influenza, etc.
- Ativao: Maioria sobre replicao do DNA/RNA;
Alguns na entrada e liberao.
1. Inibio da fixao e entrada do vrus:
Para HIV: Emfuvirtida: impede a fuso do vrus com o
CD4 do paciente
Inibidor do co-receptor CCR5: Maraviroc bloqueia a
ligao com o co-receptor das CD4 (CCR5).
2. Inibio do desnundamento viral:
Para Influenza: Amantadina e Rimantadina.
Normalmente, aps a penetrao vai havendo
acidificao na vescula em que o vrus se encontra e ele
ento liberado (desnudamento). Frmacos inibem a
sada da vescula, o material gentico do vrus
permanece no meio cido e destrudo. (no o mais
usado para influenza).
3. Inibio da replicao do genoma:
So anlogos de nucleosdeos (base + acar) ou
nucleotdeos (base + acar + fosfato).
Ex1: Acyclovir (herpes): anlogo de nucleosdeo vrus
precisa de 3 P para ser incorporado. D-se nucleosdeo
podre para ser usado na replicao (no permite
ligao dos prximos);
Ex2: Zidovutine ou AZT: inibe a transcriptase reversa ao
competir com a Timidina para HIV;
Ex3: Anti-hepatite B: Adefovir, Entecavir;
Ex4: Contra vrus RNA, Ribavirina.
4. Inibidor No-nucleotdeo da polimerase do herpes
vrus: Foscarnet anlogo ao pirofosfato.
5. Inibidores no-nucleosdeos da transcriptase reversa
do HIV: Nevirapina e Efavirenz.
6. Inibio da reunio e maturao: Retonavir e
Saquinavir.
7. Inibidores da liberao: inibidores da neuraminidase
para influenza.

PROCESSO DE DESENVOLVIMENTO DE DROGA VIRAL
a) Fase pr-clnica: determinar atividade antiviral e
toxicidade in vitro: (Passo 1)
1 testa-se frmacos usados para outras coisas e v-se
diminuio do ttulo viral. Aps, modificam-se esses
frmacos para encontrar novos (triagem automatizada
de vrios qumicos frente a uma protena especfica do
vrus. Ex: Nevirapina para HIV). Nova triagem para
testar passos bloqueadores pelo qumico dentro da
clula infectada.
*Ensaio de reduo em placas, teste de MTT, Western-
Blotting, deteco de protena viral, PCR em tempo real.
Definies:
CC
50
: concentrao citotxica para 50% das clulas;
EC
50
: concentrao efetiva para 50% das clulas (capaz
de inibir efeito citoptico);
SI: com CC
50
/ EC
50,
onde SI: ndice de Seletividade;
IC
50
= EC
50
; IC: Concentrao Inibitria;
IC
90
: composio capaz de inibir 90% do efeito
citoptico.

2 triagem em animais: (Passo 2)
- Concentrao no txica para rgos;
- Propriedades farmacolgicas;
- Determinar dose;
- Efeitos teratognicos;
- Carcinognese.
b) Fase clnica epidemio (Passo 3)
3 triagem clnica em humanos:
Fase I: pequeno nmero de voluntrios para avaliar
farmacocintica e tolerabilidade;
Fase II: avaliao da atividade antiviral e propriedades
farmacuticas em dezenas a centenas de voluntrios;
Fase III: nmero maior de indivduos para dados
estatsticos confiveis. Para alguns vrus (ex: influenza e
herpes), dados de melhora clnica so exigidos.
PRINCIPAIS ALVOS PARA DROGAS ANTIVIRAIS
- protenas codificadas pelos vrus que podem ser
inibidas pela droga (enzimas);
- protenas codificadas pelo vrus que ativam a droga e a
tornam inibidora de vrus. (ex: acyclovir).

RESISTNCIA VIRAL: fatores que afetam o
desenvolvimento de resistncia s drogas:
- taxa de mutao do vrus (RNA x DNA);
- nmero de stios de mutao;
- taxa de replicao viral;
- tamanho da populao viral pr-existente;
- capacidade de replicao dos mutantes e de
manuteno da mutao.

INFLUENZA VRUS (GRIPE)
Famlia: Orthomyxoviridae.
Gnero: Influenza A;
Influenza B;
Influenza C;
Estrutura:



desenho












*RNA fragmentado em 7 gneros ou 8 segmentos (A e
B);
*Protenas do envelope:
HA (hemaglutinina): ligar aos receptores;
NA (neuraminidase): liberao do vrus das clulas (se
desgrudar);
*Reservatrio: originalmente aves aquticas silvestres,
as quais transmitiram para todas as outras.
16 tipos de HA: H 1, 2 e 3 em humanos;
9 tipos de NA: N 1 e 2 em humanos.
Cada tipo adaptado a uma espcie.
A transmisso normalmente no ocorre entre espcies,
pelos diferentes tipos de receptores de cada uma. De
aves e sunos (principalmente sunos) so transmitidas a
humanos quando h mutao. Porcos so mais
suscetveis a vrus humanos e de aves.
Influenza em animais domsticos:
- aves domsticas: H5N2, H7N1, H7N3, H7N7, H9N2 e
H5N1. Alta patogenicidade: H5 e H7;
- sunos: H1N1, H3N2, H1N2;
- equinos: H3N8 e H7N7
- recentemente descrita em ces e gatos, mas no h no
BR.

Subtipos de HA (hemaglutinina):
1. Humanos: H 1, 2 e 3;
2. Sunos: H 1 e 3;
3. Cavalos: H 3 e 7;
4. Aves: todos (H 1 at H 15).

Subtipos de NA (neuraminidase):
1. Humanos: N 1, 2 e 8;
1. Sunos: N 1 e 2;
2. Cavalos: N 7 e 8;
3. Aves: todos (N 1 at N 9).

*Nomenclatura de novos isolados:
A / Fujian / 411 / 2002 (N3N2)
Tipo de material gentico viral / origem geogrfica / cepa /
ano do isolamento (subtipo H = HA; N = NA).

MODO DE TRANSMISSO ENTRE ESPCIES
1. Transmisso direta: ex: aves humanos;
2. Shift antignico (ressorteamento): troca de
segmentos entre vrus gera novos vrus, os quais so
geralmente mais letais, pois a populao no tem
resistncia a eles (processo raro). Ex: gerao de novo
vrus humano (H3N2) pelo processamento do HA do
vrus avirio (H3N8);


3. Drift antignico: o que mais modifica vrus e
est sempre acontecendo. Atravs de mutao pontual
principalmente em H e N. Faz com que todo ano
tenhamos gripe, por alterar stio de ligao entre
anticorpos que antes geravam resposta imune.

PANDEMIA POR INFLUENZA
Formadas por shift e ocorrem quando conseguem ser
facilmente transmitidos entre humanos.
Fases:
1-3: predomina em animais (poucos humanos);
4: transmisso entre humanos;
5-6: difuso entre humanos (pico);
Ps-pico: possibilidade de recorrncia;
Ps-pandemia: doena a nveis sazonais.
Principais pandemias por influenza:
H1N1 Espanha (1918) 1950 Rssia (1977);

N2N2 (PB1 HA NA) sia (1957) (PB1 HA NA) H3N2
Hong Kong (1968).

Origem do vrus H1N1 (gripe suna)
Ressortimento de:
H1N1 clssico suno (EUA): HA, NP, N2
H1N1 suno eurasiano: NA, M2
H1N1 dos EUA denominado vrus tripo ressortimento
por ter genes PB1 do vrus humano de origem aviria
H3N2 e os genes PB2 e PA de vrus sunos de origem
aviria.
Genoma completo do H1N1:
PB2: transcriptase cap binding
PB1: transcriptase elongation
PA: transcriptase protease activity
HA:
NP: nucleoprotein: RNA binding transport of vRNA
NA:
M1/M2: matrix protein 1: maior componente do vrion;
matrix protein 2: canal inico;
NS1/NS2: non structural protein 1: RNA transport, etc;
non structural protein 2: funo desconhecida.

DIFERENA DAS CEPAS DE ALTA E BAIXA
PATOGENICIDADE EM AVES
BAIXA: so clivados por proteases encontradas no trato
respiratrio e intestino;
ALTA: clivados por proteases ubquas (vrios tecidos).

EVOLUO GENTICA DO H7N9 na China, 2013
Mltiplos ressortimentos:
HA de patos domsticos (H7N3);
NA de aves silvestres (H7N9);
Outros 6 genes de aves domsticas (H9N2).

VACINA DA INFLUENZA BRASIL 2014
Vacina tem sua composio atualizada a cada ano de
acordo com o vrus circulante (segundo a OMS). Desse
ano so trivalentes, contendo 3 diferentes cepas.

REPLICAO
1 Ligao 2 Desnudamento (ncleo) 3 transcrio
(citoplasma) 4 sntese proteica (ncleo) 5 replicao
6 montagem (citoplasma) 7 sada por brotamento
(NA).

*Ao da Amantadina inibe fase precoce da replicao,
como o desnudamento, impedindo-o.
Outros impedem traduo ou NA.

DIAGNSTICO
- clnico;
- laboratorial:
Material: swab, secrees oculares, nasais;
Isolamento: HA, IF, RT-PCR, RRT-PCR.

HERPESVIRIDAE
- vrus envelopado de DNA com cadeia dupla;
- sensveis a agentes qumicos e fsicos, com pouca
viabilidade no meio ambiente;
- 3 subfamlias:
1. Alfa herpesvrus: HSV-1, HSV-2, VZV;
2. Gama herpesvrus: EBV, MHV-8.
3. Beta herpesvrus: CMV, HHV-6, HHV-7;
Aps infeco primria estabelecem infeco latente. A
reativao ocorre normalmente em perodos de
imunossupresso. Primria e reativao so mais
severas em imunocomprometidos.



1. ALFA HERPESVRUS
1.1. HSV-Herpes simples (HHV-1; HHV-2);
1.1.1. HSV-1: face, lbios (70%), mas provoca leso em
qualquer local que entrar. Maior disseminao entre
crianas e jovens (30% do HSV neonatal);
- gengivo-estomatite aguda e esofagite em crianas e
jovens adultos;
- febre, mialgia, irritabilidade, mal-estar, adenopatia
cervical, leses no palato duro e mole, herpes labial,
ceratoconjuntivite, encefalite, panarcio herptico.
Infeco primria: por contato (no dura fora do
hospedeiro), viremia curta, no se espalha no
organismo. sintomtica ou no, geralmente demora
8-15 dias para desaparecer. Aps sumir clinicamente,
fica latente no Gnglio do Trigmio.
Reativao ocorre devido imunossupresso (estresse,
imunocorticides). No gnglio, nesse caso, o DNA no
se agrega ao ncleo, somente o gene latente, que a
nica poro que expressa na latncia.
**Encefalite: complicao rara, quando na latncia
migra para o SNC.
1.1.2. HSV-2:
- jovens e adultos;
- dor de cabea, mal estar, mialgias, disria,
linfadenopatia inguinal, descarga uretral e vaginal,
vesculas, pstulas e ulceraes genitais, endometrites,
salpingites, prostatite e proctite.
HERPES NEONATAL
- incidncia varivel (EUA 1/4000 e Ing 1/10000);
- criana usualmente infectada no canal do parto;
- rompimento de membranas fator de risco;
- risco maior quando a me tem leses de infeco
primria, nas recorrentes menor pela quantidade de
vrus e presena de anticorpos.
- latncia nos gnglios lombares e sacrais, pois
normalmente causa herpes genital. *Pode ser
excretado mesmo sem leses.

DIAGNSTICO DE HSVs
- clnico: leses caractersticas;
- laboratorial: replicao rpida no cultivo intracelular
(ICC), geralmente faz-se deteco de anticorpos.

TRATAMENTO DE HSVs
- acyclovir: diminui perodo de excreo, por inibir
replicao do DNA. No elimina vrus, dado que no age
no gnglio (no h replicao em latncia, no ativando
o Sistema Imune).

1.2. HERPES VRUS HUMANO 3 (HVH tipo 3): vrus da
varicela (VZV)
- humanos so os nicos hospedeiros, altamente
contagiosa;
- transmisso por contato direto com leso ou vias
respiratria. Incubao de 8-21 dias;
- duas formas:
a) Varicela (catapora): infeco aguda, associada com
crianas, raramente assintomtica. Sinais clnicos: febre,
desconforto, exantema, leses maculopapulares,
vesculas e crostas com 5-10mm de dimetro,
contaminao secundria pelo prurido, miocardite,
nefrite, leso crnea, artrite, hepatite, encefalite.
b) Zoster: reativao da latncia rara (< 10% dos
infectados). Com erupes cutneas dolorosas, pela
reativao da latncia nos gnglios nervosos da regio
dorsal. localizada, normalmente na regio lombar,
diferente da primria.
- patogenia: via respiratria replicao em tonsilas, p.
ex. (4-6 d) replicao em rgos (14 d) leses na
pele (4 semanas) gnglios.
- diagnstico:
1. clnico: histria clnica e leses;
2. laboratorial:
- efeito citoptico semelhante ao herpes simplex;
- deteco do antgeno: IF-I, ELISA, imunoperoxidases;
- PCR: detecta genoma (DNA).
- profilaxia e tratamento:
Vacina atenuada.
a) varicela: acyclovir e fanciclovir (< eficcia);
b) zoster: acyclovir e faciclovir.

2. FAMLIA: HERPESVIRIDAE. SUBFAMLIA:
GAMAHERPESVIRINAE. GNERO: GAMAHERPESVRUS.
Herpesvrus humano tipo 4 ou Vrus Epstein-Barr
- forma mais conhecida: mononucleose;
- doena do beijo adolescentes;
- infecta crianas gerando ou no (normalmente
assintomtica) a doena;
- principais sintomas: febre, fadiga, tonsilas
avermelhadas, inchadas e com manchas brancas,
inflamao na garganta, etc;
- linfcitos atpicos**
Consequncias da infeco:
a) latncia;
b) imunocompetente: assintomtica, mononucleose,
reativao viral, infeco crnica ativa pelo EBV
(CAEBV);
c) cncer:
*Linfoma de Burkitt: linfonodos da face/pescoo, na
frica;
*Carcinoma nasofaringeal: principalmente na sia;
*Outros: linfoma de Hodgkin, linfoma no-hodgkin,
doena proliferativa associada ao cromossomo X.
d) imunocomprometidos: leucoplasia pilosa oral,
principalamente intersticial linfoide, desordens
linfoproliferativas, linfo-histocitose, hemofagoctica,
granulomatose linfomatide.
*Patogenia: saliva epitlio da orofaringe e glndulas
salivares disseminao sangunea infecta LB
reao dos linfcitos T (linfocitose atpica) latncia
nos LB.
*Sinais clnicos:
- crianas: maioria assintomtica;
- 70% adolescentes sintomtica;
- incubao 4-6 semanas;
- mononucleose infecciosa: febre, linfadenopatia,
linfocitose atpica.
*Epidemiologia: mundial, o homem o hospedeiro
natural; 90% dos assintomticos transmitem; baixas
condies de vida e higiene.
*Diagnstico:
- mais usado: ELISA: determinar tipo de antgeno;
- anticorpos heterofilos: - no determina ausncia;
- linfcitos atpicos: aspecto estrelado.

3. FAMLIA: HERPESVIRIDAE. SUBFAMLIA:
BETAHERPESVIRINAE. GNERO: BETAHERPESVRUS
3.1. Herpesvrus humano 5 ou citomegalovrus*
a) indivduo saudvel:
- portador assintomtico: 60 % dos indivduos com 40
anos; porm em crianas a maioria assintomtica;
- doena semelhante mononucleose: comum em
jovem e adulto, atinge linfonodos e fgado: febre, mal-
estar, mialgia; Perodo de incubao: 4 semanas;
- hepatite incomum em jovens e adultos.
b) infeco fetal:
- doena de incluso citomeglica;
- congnita (pior): por infeco aguda da me ou
reativao; causa: petquias, ictercia,
hepatoesplenomegalia, microcefalia, coriorrenite,
perda da audio, retardo mental, morte (SNC, olhos,
fgado);
- perinatal: assintomtica.
c) imunossuprimidos:
- doena disseminada (transplantados, AIDS, CA);
- causa: pneumonia, hepatite, coriorrenite, artrite,
doena no SNC (encefalite, mielite).
Outras caractersticas:
- vrus tem mltiplos genes imunomodulares;
- corpsculo de incluso intracelular e
intracitoplasmtico (pequenos);
- transmisso: transplacentria, perinatal, saliva, fezes,
urina, sexual, transfuso sangunea.

*Diagnstico
- citomegalia com corpsculos de incluso (restos do
vrus);
- PCR em tempo real: carga viral.

*Tratamento
- Aciclovir profiltico;
- Ganciclovir.

3.2. Herpesvrus humano 6 : Exantema sbito (Roseola
infantum).

3.3. HVH-7

3.4. Herpesvrus humano 8: sarcoma de Kaposi.

HIV (VRUS) E AIDS (SNDROME)
- primeiros casos relatados: 1967-79 com pneumonia
Pneumocistin carinii: todos homossexuais. Dcada de
1980 Sarcoma de Kaposi em homossexuais: 2 doenas
raras causadas por imunossupresso e oportunistas. Em
comum: jovens, brancos, homens, homossexuais:
sugere agente infeccioso, que se confirma por
transmisso em transfuso, drogas EV, hemofilia.
Concluso: vrus armazenado no sangue, com rota
primria de transmisso: sexo.
- hipteses para origem do HIV-1:
a) vrus contaminou vacinas produzidas para plio, nos
anos 50, com clulas de macaco infectado por SIV cpz;
b) transmisso interespcie: contato homem-macaco na
frica central. Inicialmente vrus s na frica, mas se
propagou.
- HIV a causa da AIDS?
a) associao epidemiolgica (est presente carga se
relaciona, drogas anti-HIV funo?);
b) isolamento viral: pode em todo paciente com AIDS;
c) transmisso: infectados e inoculao de HIV e SIV.
- porque HIV deriva de primatas?
HIV-1 do SIV
cpz
: gentico, geografia;
HIV-2 do SIV
sm
: gentico, geografia.
- existem 2 tipos de HIV:
a) Tipo 1: 3 subgrupos;
Grupo M (maior): 90% dos casos, com subgrupos A, B,
C, D, F, G, H, J, K quase espcies que se modificam
muito rpido; B-Amrica (BR: B, C, F); Cada regio
predomina um;
Grupo O (outlier): ndia;
Grupo N (non O, non M);
Grupo P.
b) Tipo 2: s na frica
- time-line: evidncias de que j circulava desde os anos
60, 1984 foi isolado e sequenciado;
- estrutura:
RNA: retrovrus;
Diploide: 2 cpias do material gentico (s ele);
Envelopado: pouco resistente GP 120 e GP41
(protenas do envelope);
Matriz proteica: protena 17;
Capsdeo (enzimas e RNAs) p24 (mtodo diagnstico);
Genoma: 3 regies (do HIV-1):
GAG: estruturais;
POL: enzimas;
ENV: envelope.

MECANISMO DE ENTRADA / FUSO
(Medicamento impede o processo: enfuvirtida, maraviroc).
Protenas GP 120 e GP41 ligam-se ao receptor CD4 da
clula, o qual muda sua conformao, fazendo GP 120 e
GP41 ligarem-se ao receptor Chemokine (CXCR4 ou
CCR5). Muda conformao: fuso envelopemembrana.
2 tipos de receptores de quimocina:
CCR5: HIV-1 M-trpico tem tropismo por ele, infectando
Mo, clula dendrtica, LTCD4+;
CXCR4: HIV-1 T-trpico tem tropismo por ele,
infectando LTCD4+.

CICLO REPLICATIVO
Aps a entrada do vrus, enzimas so ativadas e
comeam a transformar o RNA em DNA
(TRANSCRIPTASE REVERSA). levado para o ncleo e a
INTEGRASE acopla DNA viral ao da clula. Quando h
replicao da clula, o vrus replica e sai por
brotamento. Aps a sada, ainda tem a fase da
maturao, pela ao da PROTEASE (clivagem). Antes
disso, vrus imaturo e no infeccioso (ao de
medicamento).

CLULAS INFECTADAS
Principal: linfcitos T (CCRS e CXCR4) pelo RSHIV e
XR4HIV;
Macrfagos: pelo RSHIV, 2 mecanismos:
1. GP 120 se liga ao CD4 do Mo; ou
2. Vrus opsonizado por anticorpos anti-GP 120 e
poro Fc liga-se ao receptor Fc dos macrfagos.
Clulas Dendrticas:
1. Engloba, mas s processa para apresentar; ou
2. Carreia na superfcie, no processa para apresentar
antgeno, mas leva ao linfonodo onde infecta clulas T.

HIV PATOGENIA
1. Infeco primria de clulas do sangue, mucosa;
2. Estabelecimento da infeco no tecido linfoide, no
linfonodo, p. ex.;
3. Sndrome aguda do HIV, propagao da infeco por
todo o organismo;
4. Resposta imune (anticorpos) controle parcial da
infeco;
5. Latncia clnica;
6. AIDS, outras infeces: muita replicao viral
destruio das clulas CD4
+
.

AO INFECTAR LINFCITOS T:
1. Se o linfcito estiver desativado, vrus fica no
citoplasma: latncia;
2. Quando LT se ativa, ele se integra ao DNA e o vrus
ativado (o LT ativado quando h produo de
citocinas pela presena de antgenos);
3. LTCD4+ como morrem? 3 formas:
I. morte pela replicao viral (efeito citoptico);
II. induo da apoptose;
III. expresso de protenas virais no LTCD4
+
provoca
morte das clulas infectadas por vrus especficos CTLs
(HIV-specific CTL).

LATNCIA DO HIV
- latncia de pr-integrao: ao infectar LT em reparo, a
transcriptase reversa no completa;
- latncia aps integrao: quando ocorre integrao e
a maior parte dos LT morre com a infeco produtiva.
Porm, uma parte escapa da lise e volta ao repouso
com pr-vrus de memria integrado. Por isso, pode ser
impossvel curar paciente com HIV, mesmo que a
terapia combinada pare a replicao do HIV.

PROGNSTICO DE EVOLUO DA DOENA EM
RELAO CARGA VIRAL PARA HIV-1
Carga (RNA/ml) Prognstico
< 10000 baixo risco de progresso
10-100000 risco moderado de progresso
> 100000 alto risco de progresso

SINAIS CLNICOS
1. Sndrome aguda: neurolgicos, dermato, etc.
soroconverso: 3-12 semanas (50-70%).
- assintomtica/subclnica: faringite, linfadenopatia,
febre, anorexia, cefaleia, mialgia, eritema
maculopapular, ulceraes cutneas, leucopenia, etc.
2. Fase assintomtica: 2-10 anos. Vrus detectado e
eliminado. Faz-se monitoramento constante de
linfcitos e carga viral. Terapia prolonga essa fase.
3. Fase sintomtica: AIDS, taxa de manifestao de 5-7%
ano. Perodo varivel. Complexo ARC: febre crnica,
fadiga, sudorese noturna, diarreia. Queda de peso,
infeco por HSV, VZV, candidase oral (frequncia e
severidade de oportunistas elevada). Diminui contagem
de LTCD4
+
.

RESPOSTA IMUNE AO HIV
- Anticorpos ligam-se ao vrus e impedem fixao aos
receptores nas clulas;
- LTCD8
+
: mata clulas infectadas via MHC-I;
- LTCD4
+
: liberao de citosinas e proliferao no
contexto do MHC-II;
- NK: lise direta de clulas infectadas por reconhecer
alterao na clula (falta de receptores MHC-I).

TRANSMISSO
- Sexual: smen, secreo vaginal, oral, leses maiores;
- Sangue e derivados;
- Materno-fetal: 90% das crianas; > 50% no 1/3 final ou
parto; amamentao.

EPIDEMIOLOGIA
- Local de maior prevalncia: sul da frica;
- Nmero de novas infeces e de mortes por AIDS vem
diminuindo e o nmero de tratados.

DIAGNSTICO
1. Deteco de anticorpos: ELISA, IF-I, etc;
2. Deteco de antgenos: ELISA para protena p24;
3. Cultivo do vrus: laboratrios BSL III;
4. Carga viral: PCR e PCR em tempo real: determinao
do nmero de LTCD4.

CURSO DA INFECO: DEPENDE DA CARGA VIRAL E DO
ESTADO IMUNE DO PACIENTE














ANTIVIRAIS
1. Inibidores da transcriptase reversa:
Semelhantes a nucleosdeos: AZT, 3TC, ddI, d4T, ABC;
Semelhantes a nucleotdeos: tenofovir;
No anlogos de nucleosdeos: nevirapina, efavirenze.
2. Inibidores de protease: saquinavir, indiravin, etc.
3. Inibidores da fuso/entrada: enfuvirtida, maraviroc.
lymphadenopathy,
oral lesions, shingles,
headache, condyloma
200-500 CD4+ T-cells
per l
Asymptomatic phase (sporadic
fatigue, mild weight loss, thrush)
Flu-like or mononucleosis-like
syndrome (lymphoadenopathy)