UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS

ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA







TITULO :
FACTORES FISICOS Y QUIMICOS QUE INFLUENCIAN EN EL CRECIMIENTO
MICROBIANO
N DE PRCTICA: 6
PARTICIPANTE:
GAMARRA RAMOS, CARLOS ALBERTO

DOCENTE
DOC. MARIA TERESA FLORES CORDOVA
SECCION
FECHA
MIRAFLORES, 10 de junio, 2013



OBJETIVO GENERAL


Determinar mediante el anlisis prctico, realizado el laboratorio de
microbiologa, la reaccin de los microorganismos frente a agentes fsicos,
qumicos y biolgicos.

Determinar y reconocer estos agentes que favorecen la velocidad de
crecimiento de los microorganismos, dependiendo del medio al cual es
sometido el cual puede ser favorable o no, para su desarrollo o caso contrario
utilizar el medio como un indicador para su control.


OBJETIVO ESPECIFICO


Conocer como los agentes fsicos, qumicos y biolgicos que encontramos en
nuestro medio, permiten el desarrollo de un microorganismo o su posible
control, el cual podremos utilizarlo para evitar la proliferacin de estos en
ciertos alimentos o materiales que estn al contacto con ello. para una buena
higienizacin en la industria de los alimentos.

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FUNDAMENTO

Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir la
transmisin de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y evitar la
contaminacin tanto en procesos industriales que requieran cultivos puros, como en
laboratorios de diagnstico o investigacin.

Condiciones que influyen en la accin microbiana

Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar agentes
qumicos o fsicos para el control de microorganismos.
Concentracin del agente qumico
Mientras ms concentrado est el agente qumico, ms rpido se destruirn los
organismos.
Intensidad del agente fsico
Cuanto ms intenso es el agente fsico (calor o radiacin ms rpidamente mata a los
microorganismos.
Tiempo de exposicin
A mayor tiempo de exposicin, mayor es el nmero de organismos destruidos.
Temperatura
A mayor temperatura se acelera la destruccin de los organismos.
Nmero de organismos
Mientras mayor sea el nmero de microorganismos, ms tiempo se requiere para
destruirlos.
Clase de organismo
Las clulas vegetativas (las que estn metablicamente activas) son ms susceptibles
que las esporas bacteriales.
Estado fisiolgico de las clulas
Mientras ms viejas sean las clulas, ms rpido se destruyen.
Naturaleza del medio ambiente
Algunos ambientes desfavorecen la destruccin rpida de los microorganismos,
como por ejemplo los medios viscosos


MARCO TEORICO


FACTORES FSICOS EN EL CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO


Temperatura
La temperatura es de suma importancia para el crecimiento de los organismos. A
medida que aumenta est por encima de la temperatura ptima de crecimiento, mayor
es la velocidad de muerte de los microorganismos. Es por ello que altas temperaturas
se usan en el control microbiolgico. Las temperaturas altas pueden aplicarse de dos
formas: calor hmedo (con agua) o calor seco.
El calor hmedo es mucho ms eficiente que el calor seco, ya que este acta
mediante la coagulacin de las protenas celulares, por otro lado el calor seco destruye
la clula por la oxidacin de agentes qumicos de la clula.


Presin osmtica
La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presin osmtica del
medio, pero si la presin osmtica externa es mucha, el organismo puede morir; esto
sucede si las concentraciones de solutos en el medio en que crece el organismo son
extremos. Altas concentraciones de sal interrumpen los procesos de transporte a
travs de la membrana y desnaturalizan las protenas.

pH y crecimiento microbiano
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y
normalmente posee un pH ptimo bien definido. La mayora crece en un margen de
pH de 2- 3 unidades. La mayora de los amientes naturales tiene un valor de pH entre
5 y 9 y los microorganismos con pH optimo de estn orden son los ms comunes.
Los organismos que crecen mejor a bajo pH constituyen un tipo de extremofilos
llamados acilo filos. El grupo de los hongos son ms anisofilos que las bacterias,
muchos hongos crecen en forma ptima a pH 5 o inferior e incluso algunos crecen
bien a pH 2.




FACTORES QUMICOS PARA EL CONTROL DE MICROORGANISMOS

El fenol y sus derivados
El fenol se adhiere a superficies inertes y proporciona lo que se llama una desinfeccin
residual. Su accin se prolonga por varias horas. Los compuestos de fenol pueden
actuar como microbicidas o microbiostticos dependiendo de la concentracin que se
utilice. Los fenoles poseen efecto germicida pues daan la membrana y desnaturalizan
las protenas bacteriales. Uno de los derivados del fenol se llama cresol; stos tienen
un efecto germicida superior al fenol. Los cresoles se usan en jabones lquidos (ej.
lysol es un jabn ms un cresol). Otro derivado del fenol es el hexaclorofeno, el cual
se usa en jabones para las manos (en ciruga y hospitales). Un ejemplo de este ltimo
es el Phisohex. El fenol y sus derivados por lo general no matan esporas.

Los alcoholes
Los alcoholes daan la membrana, desnaturalizan las protenas, disuelven lpidos y
deshidratan la clula. La concentracin ms efectiva de alcohol es el 70% y los ms
utilizados son el alcohol etlico e isoproplico.

Halgenos

Los halgenos actan sobre los microorganismos oxidando las protenass y enzimas
esenciales. No matan las esporas. Los halgenos ms comunmente usados son el
cloro y el iodo.
1. El cloro Es uno de los desinfectantes ms usados y es microbicida contra la
mayora de los microorganismos. Se usa para limpiar las aguas contaminadas y se
aplica en agua potable.
2. El iodo Se utiliza comnmente como un antisptico y es uno de los mejores que
hay para la piel. Se aplica principalmente como tintura de iodo. Es microbicida para la
mayora de los organismos. El iodo tambin se emplea como iodforo (compuesto de
iodo con otros agentes). Los iodforos no manchan ni irritan, un ejemplo es el
betadine.




Jabones y detergentes
Un jabn es una sal de sodio o de potasio de un cido graso. Los agentes que
reducen la tensin superficial del agua (surfactantes) y que se emplean principalmente
para la limpieza de superficies se llaman detergentes (el jabn es un ejemplo de un
detergente). Los detergentes se clasifican en catinicos, aninicos y no-inicos. Los
detergentes catinicos son mejores desinfectantes que los dems. Otro nombre con
que se conocen a los detergentes catinicos son cuaternarios de amonio. Estos son
bacteriostticos a bajas concentraciones y bactericidas a concentraciones mayores.

cidos
Hay una serie de cidos orgnicos que se usan como conservantes en muchos
alimentos como el cido actico, cido benzoico, cido lctico, cido propinico y
cido srbico. El cido baja el pH y esto desnaturaliza las protenas. No matan las
esporas






















PROCESO EXPERIMENTAL (practica de laboratorio)

5. INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO:
Las altas concentraciones de solutos hacen que el agua disponible de los medios de
cultivo sea menos asequible a los microorganismos. La mayora de los
microorganismos de la naturaleza prefieren los ambientes de alta humedad (alto aw).
Existen microorganismos que prefieren los ambientes con alta concentracin de
solutos y crecen mejor en ambientes fuertemente osmticos.
Aunque existen muchos factores que influyen para probar las necesidades de aw de los
microorganismos, uno de los factores ms importantes es el tipo de soluto la influencia
de cloruro de sodio, o sal comn, para determinar el halofilismo; y por otro lado se
puede determinar la influencia de la glucosa, u otro azcar, para probar la osmofilia de
loa microorganismos.
a) Determinacin del halofilismo :

Siembra un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, prepara
do con deferentes concentraciones de cloruro de sodio: 5%, 10% ,15%, de
CLNa.
Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37c por
3, 5, 8,15, das.
Leer el crecimiento microbiano en las estras de siembra
b) Determinacin de osmofilia :

Siembra un microorganismo en placas con medio de cultivo favorable, prepara
do con deferentes concentraciones de glucosa: 10%, 20% ,30%,

Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37c por
5, 10,15, das.
Leer el crecimiento en la superficie del agar.

PROCESO DE LABOARTORIO
a) Determinacin del halofilismo :

Siembra un microorganismo (Staphylococcus aureus) en placas con medio
de cultivo favorable, prepara do con deferentes concentraciones de cloruro de
sodio: 5%, 10% ,15%, de CLNa.


Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37c por
3, 5, 8,15, das.

Leer el crecimiento microbiano en las estras de siembra



PROCESO DE LABOARTORIO
a) Determinacin de osmofilia :

Siembra un microorganismo (Staphylococcus aureus) en placas con medio
de cultivo favorable, prepara do con deferentes concentraciones de glucosa:
10%, 20% ,30%,


Incubar por un tiempo suficientemente largo a temperatura optima de 37c por
5, 10,15, das.

Leer el crecimiento microbiano en las estras de siembra



6. DETERMINACIN DE LA ACCIN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES
QUMICOS:

La accin germicida de algunos compuestos qumicos se determina ponindole en
contacto el microorganismo son una solucin del agente qumico y despus de un
periodo de tiempo se controla la viabilidad del microorganismo, sembrndolo en un
medio de cultivo adecuado.
Los factores influyentes, que se deben controlar en esta prueba, son la concentracin
del compuesto qumico, la temperatura y el tiempo de contacto.


Determinacin de la accin desinfectante del fenol al 0.5%:


Colocar 0.5 ml de inoculo de cultivo fresco en 5ml de solucin de fenol al 0.5%
Agitar y dejar actuar durante 1 minuto
Tomar una asada de la mezcla y sembrara a un tubo de caldo nutritivo,
marcado convenientemente.
A los 2.5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con
caldo nutritivo, marcado convenientemente.
A los 5 minutos procedes igual que el paso anterior
A los 10 minutos realizar una ltima siembra semejante
Incubar todos los tubos a la temperatura optim de crecimiento , de 37C ,de 24
a 48 horas
Leer la turbidez que aparecen en los tubos , y considerar como resistentes a los
desinfectantes si presenta crecimiento en el tubo








PROCESO DE LABOARTORIO


Colocar 0.5 ml de inoculo de cultivo fresco en 5ml de solucin de fenol al 0.5%
Agitar y dejar actuar durante 1 minuto



Tomar una asada de la mezcla y sembrara a un tubo de caldo nutritivo,
marcado convenientemente.
A los 2.5 minutos de realizar la mezcla, repicar nuevamente a otro tubo con
caldo nutritivo, marcado convenientemente.
A los 5 minutos procedes igual que el paso anterior
A los 10 minutos realizar una ltima siembra semejante
Incubar todos los tubos a la temperatura optim de crecimiento , de 37C ,de 24
a 48 horas




7. DETERMINACIN DE LA ACCIN DE LOS ANTIBIOTICOS.
El antibiograma o prueba de sensibilidad de una microorganismo, frente a varios
antibiticos .colocar varios discos de papel con antibiticos diferentes e incubar a la
temperatura ms favorable para el crecimiento microbiano, la falta de crecimiento en
zona alrededor del disco significa que el antibitico tiene un efecto letal o inhibidor
hacia el microorganismo.

Metodologa:

Siembra por extensin en superficie 0.1 m. de inoculo de una cepa joven,
distribuyndolo uniformemente.
Aplicar inmediatamente los discos con antibiticos a una distancia superior a
1.5 cm. entre uno y otro.
Incubar las placas a la temperatura optima de crecimiento , a 35c por 24 horas
Leer la zona de inhibicin que rodea al disco, midiendo en milmetros el
dimetro del halo de inhibicin.

PROCESO DE LABOARTORIO
RESULTADOS



Medida de la zona alrededor del disco = 13 mm

RESULTADOS Y CONCLUSIONES
CUADRO N1

INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO

Determinacin del halofilismo


CONCENTRACIONES DE ( ClNa)/con
Staphylococcus aureus


5%

10%

15%

INCUBACIN A 37C



A una concentracin del 5% podemos determinar no hubo presencia de m.o.
A una concentracin del 10% podemos determinar poco crecimiento
A una concentracin del 15% podemos determinar no hubo presencia de m.o.
En conclusin el Staphylococcus aureus en dichas concentraciones es
inhibido su crecimiento
CUADRO N2

INFLUENCIA DE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE SOLUTO

Determinacin de osmofilia


CONCENTRACIONES DE
GLUCOSA/con Staphylococcus aureus


10%

20%

30%

INCUBACIN A 37C



A una concentracin del 10% podemos determinar hubo presencia de m.o.
A una concentracin del 20% podemos determinar hubo presencia de m.o.
A una concentracin del 30% podemos determinar hubo presencia de m.o.
En conclusin el Staphylococcus aureus en dichas concentraciones favorece
en su velocidad de crecimiento.


CUADRO N3

DETERMINACIN DE LA ACCIN GERMICIDA DE ALGUNOS AGENTES QUMICOS

Determinacin de la accin desinfectante del fenol al 0.5%:


TIEMPOS


2.5 MINUTOS

5 MINUTOS

10 MINUTOS

INCUBACIN A 37C/24
HORAS



A un tiempo del 2.5 minutos podemos determinar hubo poca presencia de
turbidez y no presenta crecimiento de m.o.
A un tiempo del 5 minutos podemos determinar hubo presencia de turbidez u
y no presenta crecimiento de m.o.
A un tiempo del 10 minutos podemos determinar hubo presencia de turbidez y
presenta crecimiento de m.o.
En conclusin el Staphylococcus aureus en dichas tiempos favorece en su
velocidad de crecimiento.
CUADRO N4

DETERMINACIN DE LA ACCIN DE LOS ANTIBIOTICOS

Reaccin a los antibiticos

INCUBACIN A 37C/24 horas


Radio alrededor del disco = 13 mm

La reaccin a los antibiticos podemos determinar que existe una zona de
inhibicin alrededor del disco y esta media de dimetro en milmetros =13 mm
En conclusin el Staphylococcus aureus existe una mayor resistencia al m.o.







BIBLIOGRAFIA


DOMNGUEZ M.; GARCA C.; ARIAS MICROBIOLOGA EN LOS
ALIMENTOS, PAGI.214.
FREEMAN, BOB A; MICROBIOLOGA DE BURROWS 22A EDICIN,
EDITORIAL INTERAMERICANA, ESPAA 1986. PAGS. 57-62.