Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Alimentos
Dpto. Qumica Orgnica
METODOS DE TINCION
TINCION DE GRAM-NICOLE
-Primer colorante: Violeta de Genciana
Solucin A:
Violeta de Genciana ....................................... 1,0 g
Alcohol etlico .............................................. 10,0 ml
Solucin B:
Fenol ............................................................... 1,0 g
Agua destilada ............................................ 100,0 ml
Se mezclan las soluciones A y B
-Mordiente: Solucin de Lugol
Yodo ............................................................... 1,0 g
Yoduro de Potasio .......................................... 2,0 g
Agua destilada ............................................ 300,0 ml
Se disuelve primero el yoduro en poca agua, se agrega luego el yodo y una vez disuelto
se agrega el resto del agua.
-Segundo colorante (de contraste): Fucsina Bsica
Fucsina Bsica ................................................ 0,1 g
Agua destilada ............................................ 100,0 ml
Mtodo:
1- Extender y fijar el material sobre un portaobjetos limpio, desengrasado y seco.
2- Cubrir el preparado durante un minuto con el primer colorante, volcar el colorante y
lavar con agua corriente.
3- Cubrir el preparado con el mordiente, dejarlo actuar por un minuto y volcar el
exceso.
4- Decolorar con alcohol y lavar con agua.
5- Colorear durante 30 segundos con el segundo colorante, lavar con agua y secar.
6- Examinar al microscopio usando objetivo de inmersin.
TINCION NEGATIVA
Es un mtodo muy sencillo y eficaz para poner de manifiesto la forma externa de las
bacterias en un extendido. Las bacterias quedan rodeadas de una fina capa de colorante
negro y aparecen como objetos blancos sobre fondo gris.
Mtodo:
1- Se prepara un extendido muy fino de la forma habitual utilizando un portaobjetos
limpio, desengrasado y seco.
2- Se coloca en un extremo del portaobjetos una gota de solucin de nigrosina al 10%.
3- Se toma otro portaobjetos y se apoya sobre el primero formando un ngulo de 30 y
tocando la gota de nigrosina. Luego se pasa resbalando, arrastrando la gota de
nigrosina, de forma que se extienda por toda la superficie del portaobjetos. De esta
manera, el extendido queda cubierto de una fina pelcula de colorante.
4- Se deja secar el colorante y se examina la preparacin con objetivo de inmersin.
SOLUCIONES Y REACTIVOS
SOLUCION DE CLORURO DE TRIFENILTETRAZOLIO (TTC) AL 1%
Esterilizar 3 ml de agua destilada. Una vez fra, agregarle 30 mg de TTC. Disolver y
guardar en heladera.
SOLUCION DE TETRACICLINA (400 ppm)
Pesar 40 mg de tetraciclina y llevar a 100 ml con agua estril en un matraz aforado.
Disolver y guardar en heladera.
Usar al 10 %. Concentracin final: 40 ppm.
SOLUCION DE TELURITO DE POTASIO (3,5 %)
Se disuelven 350 mg de telurito de potasio en 10 ml de agua estril. Guardar en
heladera.
REACTIVO DE KOVACS
Se disuelven, en bao mara, 5 g de p-dimetilaminobenzaldehdo en 75 ml de alcohol
amlico. Luego aadir lentamente y bajo campana 25 ml de HCl concentrado. Guardar
en frasco oscuro y en heladera.
REACTIVO DE VOGES-PROSKAUER
a) Solucin de KOH al 40 %
Se disuelven 40 g de KOH en 100 ml de agua destilada.
b) Solucin de -naftol al 5 %
Se disuelven 5 g de -naftol en 100 ml de alcohol etlico.
Ambos reactivos deben guardarse en frasco oscuro y en la heladera.
REACTIVO PARA LA PRUEBA DE REDUCCION DE NITRATO
Solucin A:
Se disuelven 8 g de cido sulfanlico en 1000 ml de cido actico 5 N.
Solucin B:
Se disuelven 5 g de -naftol en 1000 ml de cido actico 5 N.
Se agregan 0,5 ml de la solucin A y 4 gotas de la solucin B por 9 ml de medio
sembrado e incubado.
REACTIVO PARA DETERMINAR DIACETILO EN JUGO DE FRUTA
a) Solucin de KOH 40 % con creatinina
Disolver 40 g de KOH en 100 ml de agua destilada. Agregar 0,3 g de creatinina en el
5
MEDIOS DE CULTIVO
Instrucciones generales para su preparacin
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ALMIDON AGAR
Extracto de carne ............................................ 3,0 g
Peptona ........................................................... 5,0 g
Almidn soluble ............................................. 2,0 g
Agar-agar ...................................................... 15,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Disolver los ingredientes en el agua destilada, llevar a ebullicin agitando regularmente,
calentar 3 - 4 minutos hasta disolucin. Enfriar a 5060C. Esterilizar en autoclave.
Este medio se utiliza para identificar microorganismos que degradan el almidn.
La hidrlisis del almidn se evidencia cubriendo la placa con una solucin de Lugol (I2
- KI). Se forma un complejo color azul con el almidn, ausente en las zonas donde hubo
hidrlisis. Si las colonias son almidn positivas, aparece un halo transparente alrededor
de las mismas.
11
Indicador de Andrade
Fucsina cida..0,25 ml
NaOH 0,1N................................................... 16,0 ml
Agua destilada ............................................ 100,0 ml
Indicador Azul de Timol
Azul de timol .................................................. 1,6 ml
NaOH 0,1N................................................... 34,4 ml
Agua destilada ............................................ 100,0 ml
Este medio se utiliza para diferenciar entre otras bacterias, E. coli, Enterobacter,
Proteus, Salmonella, Shigella, Klebsiella y Citrobacter.
El medio de cultivo se coloca en tubos pequeos de 3 a 4 ml por tubo. Es semislido y
de color pajizo.
La siembra se realiza por puncin con ansa recta, a partir de cultivos puros.
Este medio permite revelar:
a) La hidrlisis de urea con produccin de lcali, que se evidencia por el viraje al azul
del indicador bsico Azul de Timol.
b) La fermentacin de lactosa con formacin de cido, con o sin formacin de gas. El
cido producido se evidencia por el viraje al rojo del indicador cido de Andrade.
c) La produccin de indol a partir de triptofano. Se evidencia a travs de la reaccin de
Kovacs.
El procedimiento consiste en introducir una tirilla de papel de filtro estril en el
interior del tubo ya sembrado, sujetndola con el tapn de algodn.
Luego de la incubacin, se retira el papel y se agrega una gota del reactivo de
Kovacs; un color rojizo indica un cultivo positivo, un color amarillo, negativo.
d) La produccin de sulfhdrico a partir de peptonas.
Se evidencia por la formacin de PbS negro en una tirilla de papel de filtro embebida
en acetato de plomo.
Luego de la incubacin, un ennegrecimiento indica un cultivo productor de
sulfhdrico.
e) Apreciacin directa de la movilidad.
Se evidencia por un crecimiento difuso a partir de la zona de siembra.
Los resultados son observados a las 24, 48 y 72 horas de incubacin.
12
Salmonella
Shigella
Proteus rettgeri
Proteus mirabilis
Proteus morganii
Proteus vulgaris
Enterobacter
Escherichia
Klebsiella (x)
Klebsiella pneumoniae
movilidad
indol
H2S
gas
+ (-)
-
- (+)
+ (-)
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+ (-)
-
+
-
+
+
+
CASEINA AGAR
Peptona de carne............................................. 5,0 g
Extracto de carne ............................................ 3,0 g
NaCl................................................................ 5,0 g
Casena ........................................................... 2,5 g
CaCl2.............................................................0,05 g
Agar-agar ...................................................... 13,5 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Suspender los ingredientes, calentar a bao mara hasta disolucin y mantener 10
minutos. Esterilizar en autoclave, fraccionar en placas.
pH = 7,2
Se pueden agregar 5 - 10 g de leche descremada para reforzar turbidez.
Este medio se utiliza para la investigacin de microorganismos proteolticos. Estos son
capaces de degradar la casena, y aparecen con un halo transparente alrededor de las
colonias. Si el halo no es muy visible, agregar cido actico 1N, que refuerza la
opacidad del medio por desnaturalizacin de la casena, y se destaca el halo de
degradacin.
CASOY CALDO
Peptona de casena........................................ 17,0 g
Peptona de harina de soja ............................... 3,0 g
13
14
CETRIMIDA AGAR
Peptona de casena........................................ 20,0 g
MgCl2 ............................................................. 1,4 g
K2SO4 ........................................................... 10,0 g
bromuro de cetiltrimetilamonio (cetrimida) ... 0,3 g
Agar-agar ...................................................... 13,6 g
Glicerol ......................................................... 10,0 ml
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,2
Este medio se utiliza para aislamiento e identificacin de Pseudomonas aeruginosa, a
partir de diversos materiales. La cetrimida es un potente inhibidor de la flora
acompaante. Las colonias de P. aeruginosa forman en este medio un pigmento verde
azulado (piocianina), y son fluorescentes a la luz U.V.
El medio basal se prepara por suspensin de las siguientes sustancias en 748 ml de agua
estril: multipeptona, extracto de levadura, manitol, cido pirvico (sal sdica), NaCl,
MgSO4 y agar. La solucin es calentada a ebullicin hasta disolucin completa del agar.
La solucin es enfriada luego hasta 80 - 85C y se agregan 10 ml de solucin de Irgasan
DP300 (2,4,4 - tricloro - 2 - hidroxidifenilter, Ciba - Geigy) con agitacin vigorosa
para eliminar el etanol. Entonces se enfra a 47C en bao de agua. Las sales biliares son
suspendidas en 200 ml de agua estril y disueltas por calentamiento a ebullicin con
agitacin. Enfriadas a 47C, se agregan a la solucin anterior. Se agregan luego las
soluciones de NaOH, rojo neutro, Cristal Violeta, Cefsulodin y Novobiocina. Las
soluciones de antibiticos son conservadas a -70C y descongeladas antes de ser usadas.
El medio es entonces colocado en agitacin y son agregados 10 ml de la solucin de
SrCl2 con agitacin constante.
El pH final es ajustado a 7,4 con NaOH 5N.
16
CUENTAGERMENES AGAR
Peptona de casena........................................ 15,0 g
Extracto de carne ............................................ 3,0 g
Extracto de levadura ....................................... 5,0 g
Glucosa ........................................................... 1,0 g
Agar-agar ...................................................... 11,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Este medio se siembra casi siempre por el procedimiento de vertido en placas. Se utiliza
para determinacin de nmero de grmenes.
17
ENDO AGAR
Peptona .........................................................10,0 g
Hidrogenofosfato dipotsico...........................2,5 g
Sulfito sdico (anh.) .......................................3,3 g
Pararrosanilina (Fucsina)................................0,3 g
Agar ..............................................................12,5 g
Agua destilada ....................................................1 l
pH:7,4
Este es un medio selectivo que se utiliza para el aislamiento de E. coli fecal y
coliformes en diversos materiales. El sulfito sdico y la fucsina inhiben las bacterias
Gram positivas. E. coli y coliformes consumen lactosa formando aldehdo y cido. Por
otra parte, el aldehdo libera fucsina a partir de la combinacin fucsina-sulfito, lo cual
da lugar a la coloracin roja de las colonias. En el caso de E. coli, esta reaccin es tan
intensa que la fucsina llega a cristalizar dando a las colonias un brillo metlico estable,
de reflejo verde tpico.
19
20
La degradacin de distintos azcares por distintas vas metablicas produce cido o gas.
El cido se detecta por el viraje al amarillo del indicador rojo fenol, y el gas por la
formacin de burbujas que quedan atrapadas en la campanita.
Prueba positiva: color amarillo con o sin gas.
Prueba negativa: color rojo con ausencia de gas.
grmenes productores de sulfuro de hidrgeno, las colonias tienen precipitado negroparduzco de sulfuro de hierro. Esta caracterstica es muy importante para diferenciar
Proteus mirabilis de Escherichia coli O157:H7. El MUG sirve para evidenciar las
cepas beta glucuronidasa positivas ya que son fluorescentes a la radiacin con luz UV
de larga longitud de onda. La mayora de las cepas de Escherichia coli dan positivo,
mientras que Escherichia coli O157:H7 da negativa.
FRASER CALDO
Peptona Proteosa ............................................ 5,0 g
Triptona .......................................................... 5,0 g
Lab Lemco Polvo ........................................ 5,0 g
Extracto de levadura ....................................... 5,0 g
NaCl.............................................................. 20,0 g
KH2PO4 ........................................................1,35 g
Na2HPO4 .................................................................................... 12,0 g
Esculina ......................................................... 1,0 g
LiCl ................................................................ 3,0 g
Acido Nalidxico (2% en 0,1 M NaOH)......... 1,0 ml
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Autoclavar a 121C, 15 minutos. No volver a calentar. Agregar en el momento 0,1 ml
de solucin 2,5 mg/ml de acriflavina y 0,1 ml de solucin stock de citrato de amonio
frrico 5%, ambas esterilizadas por filtracin, a cada tubo de 10,0 ml.
GLUCOSA CALDO
Peptona de casena........................................ 10,0 g
Extracto de carne ............................................ 3,0 g
23
NaCl................................................................ 5,0 g
Glucosa ......................................................... 10,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,3 0,1
Este medio de cultivo se utiliza para el crecimiento y multiplicacin de diversos
microorganismos. Como no contiene ms hidratos de carbono que la glucosa, el medio
es adecuado para la demostracin de fermentacin de glucosa cuando se agrega
previamente un indicador de pH.
KF STREPTOCOCCUS AGAR
Proteosa peptona........................................... 10,0
Extracto de levadura ..................................... 10,0
NaCl................................................................ 5,0
Glicerolfosfato de sodio................................ 10,0
Maltosa ......................................................... 20,0
Lactosa............................................................ 1,0
Azida sdica ................................................... 0,4
Prpura de bromocresol...............................0,015
Agar-agar ...................................................... 20,0
Agua destilada ................................................ 1,0
pH = 7,2
g
g
g
g
g
g
g
g
g
l
K.G. AGAR
Peptona ........................................................... 1,0 g
Extracto de levadura ....................................... 0,5 g
Rojo fenol ....................................................0,025 g
Agar-agar ...................................................... 18,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Disolver los ingredientes en agua, ajustar el pH a 6,8. Esterilizar en autoclave. Enfriar a
50C y agregar 100 ml de suspensin yema de huevo y 1 ml de solucin de sulfato de
polimixina B (10 mg/ml) estril. Distribuir en placas. Este medio se utiliza para el
aislamiento y la identificacin de B. cereus en alimentos. El Rojo fenol y la Polimixina
27
LACTOSA CALDO
Peptona de gelatina......................................... 5,0 g
Extracto de carne ............................................ 3,0 g
Lactosa............................................................ 5,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
El medio se utiliza para ensayos orientativos de bacterias coliformes, especialmente E.
coli; no contiene sustancias inhibidoras.
La utilizacin de la lactosa se demuestra por produccin de gas, que se recoge en
campanitas de Durham. El medio se utiliza tambin como caldo de enriquecimiento no
selectivo para Salmonelas. En presencia de una flora mixta, la fermentacin de lactosa
provoca una disminucin del pH, con lo que se inhibe la flora competitiva,
especialmente coliformes. El crecimiento de Salmonelas no se ve afectado por el
descenso de pH; esto permite su recuperacin sin prdidas al cabo de hasta una semana.
Incubacin: 24 horas a 37C.
28
29
Microorganismos
Superficie inclinada
Violeta
Violeta
Amarillo
Amarillo
Amarillo
Amarillo
Amarillo
Amarillo
Amarillo
Violeta
Amarillo
Violeta
Violeta
Pardo-rojizo
Pardo-rojizo
Pardo-rojizo
Pardo-rojizo
Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
Arizona
Salmonella *
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Morganella morganii
Providencia
Citrobacter
Escherichia coli
Shigella
Klebsiella
Yersinia
Produccin de H2S
+
+
+
+
+
-
LECHE AGAR
Peptona ........................................................... 5,0 g
Extracto de levadura ....................................... 3,0 g
Leche en polvo descremada............................ 1,0 g
Agar-agar ...................................................... 12,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,2 0,2
Esterilizar por tindalizacin 30 minutos. Este medio se utiliza para la demostracin de la
hidrlisis de la casena por microorganismos aerobios. El medio es blanquecino opaco.
La protelisis se evidencia por halos claros transparentes alrededor de las colonias
(debidos a la degradacin de la casena).
LECHE TORNASOLADA
Leche descremada en polvo........................ 100,0 g
Clorhidrato de cistena.................................... 0,3 g
Agar-agar ........................................................ 0,5 g
Tornasol (Litmus) .........................................0,75 g
Agua destilada ................................................1,0 l
Disolver la leche en el agua tibia, agregar los otros ingredientes y calentar a bao mara.
Fraccionar en tubos con tapa de rosca. Esterilizar por tindalizacin (30 minutos a
100C, tres das consecutivos).
pH = 6,8
Este medio se utiliza para determinar varias funciones metablicas:
30
Prpura de bromocresol................................0,01 g
Bilis de buey ...................................................5,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,3
Este es un medio selectivo, orientativo para coliformes o Escherichia coli en leche y
agua. El caldo contiene lactosa, cuya degradacin a cido con formacin de gases
sealan, por definicin, la presencia de coliformes.
El gas producido es recogido en campanitas de Durham y la formacin de cido se
comprueba mediante el viraje a amarillo del indicador Prpura de bromocresol.
La bilis de buey favorece el crecimiento de bacterias intestinales y es inhibitoria para
microorganismos no intestinales.
Incubacin: 48 horas a 37C.
Produccin de cido y gas: sospecha de presencia de E. coli y coliformes.
Produccin de cido sin gas: sospecha de presencia de coliformes, sin E. coli.
32
NITRATO CALDO
Extracto de carne ............................................ 3,0 g
Peptona ........................................................... 5,0 g
35
36
PALCAM AGAR
Peptona .........................................................23,0 g
Almidn ..........................................................1,0 g
NaCl................................................................5,0 g
Agar-agar ......................................................13,0 g
Manitol .........................................................10,0 g
Citrato de hierro y amonio..............................0,5 g
Esculina ..........................................................0,8 g
Dextrosa .........................................................0,5 g
LiCl ..............................................................15,0 g
Rojo fenol ....................................................0,08 g
pH: 7,2 + 0,1.
Autoclavar 121C, 15 minutos. Enfriar a 51C y agregar el suplemento.
Suplemento (para 500 ml de medio)
Polimixina....................................................... 5,0 mg
Ceftazidin ..................................................... 10,0 mg
Acriflavina ...................................................... 2,5 mg
Disolver el suplemento previamente en agua estril.
PE2 MEDIO
Peptona ......................................................... 20,0 g
Extracto de levadura ....................................... 5,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Prpura de bromocresol 1 % .......................... 4,0 ml
Arvejas.......................................................... 6 por tubo
37
Disolver los ingredientes, fraccionar en tubos con tapa de rosca, agregar 6 arvejas por
tubo.
Esterilizar en autoclave.
Agregar 1 ml de solucin de Carbencilina (2,4 mg/l) en forma estril.
Este medio se utiliza para el aislamiento de Yersinia a partir de alimentos.
El Verde de Malaquita y el MgCl2 inhiben notablemente el crecimiento de la flora
intestinal normal, en tanto que Yersinia se multiplica sin obstculos.
Se incuba 16 - 18 horas a 28C.
B) MgCl2.........400,0 g
Agua dest. ......1,0 l
C) Oxalato de Verde
de Malaquita....... 4,0 g
Agua dest............ 1,0 l
SALMONELLA-SHIGELLA AGAR
Extracto de carne ............................................5,0 g
Proteosa peptona.............................................5,0 g
Lactosa..........................................................10,0 g
Sales biliares ...................................................8,5 g
Citrato de sodio...............................................8,5 g
39
COLONIAS
MICROORGANISMOS
SELENITO CALDO
Triptona .......................................................... 5,0 g
Lactosa............................................................ 4,0 g
Na2HPO4 ....................................................... 10,0 g
Selenito de sodio............................................. 4,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,0
Esterilizar en vapor fluente durante 30 minutos. No autoclavar.
Este medio se utiliza para el enriquecimiento selectivo de Salmonella y, eventualmente,
Shigella sonnei a partir de alimentos, agua, heces y orina. El medio inhibe el
crecimiento de bacterias intestinales coliformes y enterococos. Salmonella y Proteus
son inhibidos en menor grado por el selenito de sodio.
Incubacin: 24 horas a 37C o 6-12 horas a 43C.
40
S. P. S. AGAR
Peptona de casena........................................15,0 g
Extracto de levadura .....................................10,0 g
Citrato frrico .................................................0,5 g
Na2SO3 ............................................................0,5 g
Sulfato de Polimixina B................................0,01 g
Sulfadiazina sdica .......................................0,12 g
Agar-agar ...................................................... 14,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,0
El medio de cultivo posee antibiticos que inhiben el crecimiento de la flora
acompaante de Clostridium perfringens, incluso otros reductores de sulfito. El sulfito
es reducido a sulfuro, que reacciona con el hierro para dar sulfuro de hierro negro en las
colonias. Para la identificacin de C. perfringens se deben hacer pruebas
complementarias.
41
TIOGLICOLATO CALDO
Extracto de levadura ....................................... 5,0 g
Peptona ......................................................... 15,0 g
Glucosa ........................................................... 5,5 g
Cistina............................................................. 0,5 g
NaCl................................................................ 2,5 g
Na2S2O3 .......................................................... 0,5 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,1 0,2
Fraccionar en tubos con tapa de rosca, dejando poco espacio libre. Esterilizar en
autoclave.
Si el medio no es utilizado inmediatamente, calentar a ebullicin 15 minutos y enfriar
43
44
Interpretacin
MICROORGANISMOS
Salmonella typhi
Salmonella paratyphi A
Salmonella choleraesuis
Salmonella paratyphi B
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Escherichia coli
Citrobacter
Klebsiella
Proteus vulgaris
Proteus mirabilis
Morganella morganii
Proteus rettgeri
Klebsiella pneumoniae
Pseudomonas aeruginosa
Al. faecalis
MEDIO DE CULTIVO
FORMACION DE H2S
Columna Superficie
vertical
inclinada
S
OA
+ solamente en la parte superior de
la columna vertical, frecuentemente
formacin de anillo, eventualmente
slo a las 48 horas.
SG
OA
SG
OA
SG
OA
+ columna vertical
SG
OA
+ columna vertical
S
OA
SG
S
SG
S
SG
S
SG
S
+
SG
S
SG**
S
+ verde negruzco
SG**
A/S
+ verde negruzco
SG**
OA
S (A)
OA
S/SG
OA
OA
OA*
OA
OA
-
TRIBUTIRINA AGAR
Extracto de levadura ....................................... 3,0 g
Peptona ........................................................... 5,0 g
Tributirina..................................................... 10,0 g
Agar-agar ...................................................... 15,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,5
45
T.S.C. AGAR
Triptona ........................................................ 15,0 g
Peptona de soja ............................................... 5,0 g
Extracto de levadura ....................................... 5,0 g
NaHSO3 .......................................................... 1,0 g
Citrato de amonio y hierro III......................... 1,0 g
Agar-agar ...................................................... 15,0 g
Agua destilada ................................................ 1,0 l
Luego de esterilizar se agrega 10 ml de cicloserina al 5% esterilizada por filtracin.
La cicloserina inhibe la flora acompaante de C. perfringens cuyas colonias aparecen
negras debido a la reduccin del sulfito y formacin de sulfuro ferroso negro. El medio
46
UREA CALDO
Extracto de levadura .......................................0,1 g
Dihidrogenofosfato potsico ..........................9,1 g
Hidrogenofosfato disdico .............................9,5 g
Urea ..............................................................20,0 g
Rojo fenol .....................................................0,01 g
En este medio de cultivo slo crecen aquellos microorganismos que pueden utilizar urea
como nica fuente de carbono. Los grmenes que utilizan urea producen un viraje del
indicador hacia el rojo y turbidez del medio de cultivo.
UVM CALDO
Peptona Proteosa ............................................ 5,0 g
Triptona .......................................................... 5,0 g
Lab Lemco Polvo ........................................ 5,0 g
Extracto de levadura ....................................... 5,0 g
NaCl.............................................................. 20,0 g
KH2PO4..1,35 g
Na2HPO4 ...................................................... 12,0 g
Esculina .......................................................... 1,0 g
Acido Nalidxico (2% en 0,1 M NaOH)......... 1,0 ml
Clorhidrato de acriflavina............................. 12,0 mg
Agua destilada ................................................ 1,0 l
pH = 7,2
Autoclavar a 12C, 15 minutos Este medio se utiliza para el enriquecimiento selectivo
de Listeria.
La combinacin de diferentes peptonas, extractos, sales y sustancias tampn permite un
buen crecimiento de Listeria. La selectividad del medio viene dada por el cido
nalidxico y el clorhidrato de acriflavina, que son sustancias inhibidoras del crecimiento.
pH = 6,9
Este medio se utiliza para el aislamiento de Salmonelas. Contiene Verde Brillante como
agente selectivo, que inhibe el crecimiento de bacterias Gram(+), permitiendo el
desarrollo sin restricciones de coliformes. El rojo fenol vira al rojo en medio alcalino y
al amarillo en medio cido, lo que lleva a distinguir las colonias fermentadoras de las no
fermentadoras de lactosa. Las colonias de Salmonelas son pequeas translcidas o
incoloras y el medio a su alrededor vira al rojo debido a que no fermentan lactosa. Las
colonias de coliformes aparecen grandes, cremosas y de color amarillo; el medio vira al
amarillo verdoso.
COLONIAS
MICROORGANISMOS
50