Cromatografia

_ tcnica baseada nas diferenas de distribuio dos componentes a separar

entre duas fases: uma fase mvel e uma fase estacionria. Assim, os
componentes duma mistura se separam de acordo com as velocidades s
quais so transportados por uma fm atravs de uma fe.
Utilizao: Identificao de compostos (comparao com padres previamente
existentes), purificao de compostos (separando-se as substncias
indesejveis) e separao de compostos de uma mistura.

Fase mvel (eluente): fase pela qual a amostra ser transportada. Pode ser:
gs, lquido ou fluido supercrtico.

Fase estacionria: fase fixa (quer em coluna quer em superfcie plana) pela
qual a fase mvel ser arrastada. Pode ser: normalmente um slido ativo ou
um lquido depositado num suporte slido inerte.
Eluio: lavagem de uma espcie atravs da coluna por adio contnua de
novos volumes de solvente.

Quanto forma fsica
. coluna - a fase estacionria est confinada num tubo por onde forada
(presso/ gravidade) a passagem da fase mvel





. planar (camada delgada CCD / pape CP) fm avana por capilaridade ou
gravidade
Quanto aos processos de separao
Fsicos
. So processos de soro baseados principalmente em foras eletrostticas
ou dipolares (Van der Waals), incluindo ligaes de hidrognio.
. adsoro - separao baseada nas diferenas de afinidades adsorventes dos
componentes pela superfcie do slido ativo (fe). Processo mais comum em
CCD, CGS, CLS e CSS(supercrtica com fe slida)
. partio (absoro) - separao baseada nas diferenas de solubilidade dos
compostos da amostra na fe; o retorno a fm depende da volatilidade (CG) ou
entre a duas fases (CL). Ocorre na CP, CGL, CLL.
Qumicos
. troca inica - separao baseada nas diferentes tendncias dos
componentes inicos ou ionizados da fm substituio(deslocamento) com
ons da fe
.afinidade (bioafinidade) separao baseada no deslocamento de
substncias complementares da fm por grupos qumicos com especificidade
biolgica(antgenos ; enzimas) da fe.
Mecnicos
.excluso por tamanho molecular a fe tem composio inerte, com
partculas de forma, tamanho e porosidade uniformes; molculas grandes so
excludas dos poros e eluem com fm intersticial, molculas menores penetram
facilmente nos poros e eluem com velocidades variveis.

Quanto natureza da fase mvel:
fase lquida (HPLC)
. Lquida clssica (CLC): fm arrastada pela coluna apenas pela fora da
gravidade;
. Lquida de alta eficincia: utilizam-se fe de partculas menores, sendo
necessrio o uso de uma bomba de alta presso p/ eluio da fm.
fase gasosa Obs: diferena entre as duas esta na coluna
. Gasosa de alta resoluo (CGAR): utilizam-se colunas capilares, nas quais a
fe um filme depositado na mesma.
. Gasosa (CG): utilizam-se de colunas de maior dimetro empacotadas com a
fe
fluido supercrtico (CFS) usa-se um vapor pressurizado acima de sua
temperatura crtica.

Quanto natureza da fase estacionria:
fe lquida: o lquido pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte
slido ou imobilizado sobre ele.
fe slida: slido imobilizado na coluna.
fe quimicamente ligada: Suporte modificado, pois normalmente se
diferencia do suporte slido e da fe lquida em seus mecanismos de
separao.


Cromatografia: processo de separao que exige um equilbrio competitivo
entre a fase estacionria, fase mvel e as molculas da amostra.
Cromatograma: registo da concentrao do soluto vs. tempo (volume) de
eluio.
Cromatgrafo: equipamento constitudo por sistema de injeo, coluna e
detector adequado para a realizao de separao (anlise) e quantificao de
misturas.

Separao dos componentes: separao aumenta com o tempo de eluio
(devido s diferenas de afinidades)
Alargamento dos picos (bandas): os picos tendem a alargar com o tempo de
eluio (diminuio da eficincia de separao)
A eficincia da separao cromatogrfica depende das velocidades relativas de
eluio e, consequentemente, dos respectivos coeficientes de partilha.
Coeficiente de partilha ou constante de distribuio (Kc): razo entre a
concentrao na fase estacionria (CS) e a concentrao na fase mvel (CM);
idealmente, K constante !!. Determina a distribuio da amostra (A) entre a
fm e a fe em um determinado estgio do equilbrio.
Kc= [A]
s
/ [A]
m
ou (N
s
/V
s
) / (N
m
/V
m
) Obs: (A) mais efetivo na fm < tr

Tempo de reteno (tr): tempo gasto desde o ato de injeo at a sada do
ponto mximo do pico no sistema. O tr engloba todo o tempo que o
componente em questo fica no sistema cromatogrfico, quer na fm quer na
fe.
tr=te +tm

Tempo morto (tm): tempo necessrio para eluir um analito no retido (apenas
a fm).

Tempo de reteno ajustado ou relativo (tr`): tempo que o analito
permanece na fe.
tr=tr - tm obs: tr= te


Coeficiente de reteno (Rr): razo entre a velocidade mdia do soluto e a
velocidade mdia do eluente

Fator de reteno (k) tempo que o soluto permanece na fe em relao a
fm. um parmetro utilizado para comparar as velocidades de migrao de
solutos em uma determinada coluna e fm.
k=t
r
t
m
/ t
m

Obs: k<1: t
r
pequeno (eluio prximo a t
m
)
k>1: t
r
muito longo (mais tempo prximo a fe)
1<k<10: t
r
ideal para o analito em uma mistura

Volume de reteno (Vr): volume de eluente introduzido desde a injeco at
meia eluio

Velocidade mdia de eluio:
Factor de capacidade (k):
_ descreve a velocidade com que dado composto migra ao longo da coluna
_ valores tpicos esto entre 1 e 5
_ em GC, k varia mudando a temperatura e o enchimento da coluna
_ em LC, k varia alterando a composio da fase mvel e da fase estacionria

Fator de seletividade ():
_ razo entre as constantes de distribuio do soluto mais retido pelo menos
retido, que por sua vez, so relacionados aos tempos de reteno corrigidos.
_ medida da separao de dois solutos
_ sempre superior a 1
Pode ser determinado atravs das constantes de distribuio Kc:
= K
B
/K
A
obs: quando >1 A e B co-eluem
Pode ser determinado atravs dos fatores de reteno k:
= k
B
/k
A

Pode ser determinado atravs de valores experimentais:
= (tr)
b
/(tr)
a



Forma dos picos
_ tipicamente gaussianos (simtricos)
_ alargamento resulta das variaes de velocidade das molculas de soluto ao
longo da coluna - o tempo de residncia em cada fase no constante

Modelos que descrevem a separao cromatogrfica
_ Modelo de equilibrio modelo dos pratos tericos: considera
transferncias sucessivas entre as quais se estabelece equilbrio
termodinmico, em vez de considerar o avano real da fase mvel. Cada
volume assim definido um prato terico.
_ N = L / H em que L - comprimento da coluna e H (HETP) - altura do prato
terico
_ A eficincia de uma coluna aumenta com o nmero de pratos (ou > a H do
prato terico), podendo variar de algumas centenas (HPLC) a vrias centenas
de milhar (CG)
. Considerando uma distribuio aproximadamente gaussiana, N pode ser
obtido por:
N = 16 (tr/)2 ou N = 5,54(tr/
a largura do pico na base (considerando tratar-se de um tringulo)
a largura a meia altura do pico
. A largura do pico representa uma boa medida da eficincia da coluna
(permitindo a comparao entre colunas)
. Apesar do modelo no caracterizar os vrios parmetros que
influenciam a separao, a sua simplicidade favorece a utilizao

_ Modelo dinmico modelo cintico: a separao cromatogrfica um
fenmeno cintico e no esttico. A deformao dos picos est associada ao
fluxo da fase mvel e pode ter vrias origens:
existncia de vrios trajetos possveis (anisotropia)
difuso molecular longitudinal
resistncia transferncia de massa









Formulrio(cromatografia):

Coeficiente de partilha ou Constante de distribuio (Kc):
Kc= [A]
s
/ [A]
m
ou (N
s
/V
s
) / (N
m
/V
m
)


Tempo de reteno (tr):
tr=te +tm

Tempo de reteno ajustado ou relativo (tr`):
tr=tr - tm

Fator de reteno (k):
k=t
r
t
m
/ k

=t
e
/t
m


Fator de seletividade ():
= K
B
/K
A
ou = k
B
/k
A
ou = (tr)
b
/(tr)
a


Nmero de pratos tericos(N):
N = L / H ou N = 16 (tr/W)
2
W= 4 ou N = 5,54(tr/W
h

W
h
= 2,355

Velocidade linear mdia de migrao do soluto pela fm:
v= L/t
r

Velocidade linear da fm:
= L/ t
m
ou = (F L)/ (V
m
)

Relao entre tempo de reteno e constante de distribuio:
v= . 1/ (1+ Kc Vs/Vm)

Eficincia de uma coluna:
H=
2
/ L