Universidad de Colima

FACULTAD DE CIENCIAS MARINAS

Histopatologa branquial asociada a la adaptacin de agua dulce a
concentraciones de 15% 25% y 35% de salinidad en tilapia
roja (hbrida) Oreochromis niloticus (Linnaeus) x Oreochromis
mossambicus (Peters).
T E S I S
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
MAESTRO EN ACUACULTURA
P R E S E N T A
Adrin Tintos Gmez
Asesores
M.V.Z. M. C. Luis Jorge Garca M.
Biol. M. C. Alfredo Mena Herrera
Dr. Enrique Silva Pea
Manzanillo, Col., Mxico, septiembre de 1999
UNIVERSIDAD DE COLIMA
Facultad de Ciencias Marinas
M. en C. Sergio Alberto Lau Cham
Director de la Facultad de Ciencias Marinas
P r e s e n t e .
Los que suscriben, Sinodales de la Comisin nombrada para examinar el
manuscrito de Tesis titulado:
Histopatologa branquial asociada a la adaptacin de agua dulce a
concentraciones de 15%, 25% y 35% de salinidad en tilapia roja (hbrida)
Oreochromis niloticus (Linnaeus) x Oreochromis mossambicus (Peters).
que presenta el candidato al Grado Acadmico de Maestro en Acuacultura, el
C. ADRIN TINTOS GMEZ
Manifiestan su aceptacin a dicho trabajo en virtud de que satisface los
requisitos sealados por las disposiciones reglamentarias y que se han hecho
las correcciones que cada uno en particular consider pertinentes.
A t e n t a m e n t e
Sinodal Propietario
Kilometro 20 / Carretera Manzanillo-Barra de Navidad / A.P. 9-21 / telefax 01 (333) 5 OO 01 / Colima, Mxico / E-mail: facimar@volcan.ucol.mx
rca Mrquez
A la Universidad de Colima por todo lo que me ha dado.
A mi asesor Biol. M. C. Alfredo Mena Herrera, por su contribucin en el
desarrollo del presente trabajo.
Al M. V. Z. M. C. Luis Jorge Garca Mrquez, por su orientacin en el
desarrollo de esta investigacin.
Al Dr. Enrique Silva Pea por su apoyo en la realizacin de este trabajo de
investigacin.
A la Facultad de Ciencias Marinas por mi formacin acadmica y todas las
facilidades otorgadas para el desarrollo del presente trabajo.
A los M. C. Ren Macias, Carlos Lezama C. y Juan Hctor Ortz Lira por su
valiosa participacin en el tratamiento estadstico de los resultados de este trabajo.
Al M. C. Alejandro Rafael Morales Blake por apoyo y orientacin en la
edicin del presente trabajo.
A mi hermana Rosa.
A mi hermano Enrique.
A mis amigos: Jorge, David, Efrn, Elias, Carlos, Emilia, Imelda, Martn,
Cande, Chely, Marcos, Sergio, Gerardo, Victor y Paco.
A Doa Chuy.
AGRADECI MI ENTOS
DEDI CATORI A
Al G :. A.: D.: U .:
A Ludivina
A mi Padre
A mis hermanos, sobrinos y ahijados
A mis amigos
A todos los seres humanos que buscan la luz
A mi Amigo Arturo (+)
I NDI CE
Pgina
1. INTRODUCCIN . . . . . . . . . . . ............................................................... 1
1.1 Regulacin y adaptacin................................................... 3
1.2. Elementos de la anatomofisiologa.................................. 6
II. ANTECEDENTES ................................................................................ 12
III. HIPOTESIS . . . . . ........................................................................................... 14
3.1. Objetivos. . . . . ...................................................................................... 14
IV. MATERIALES Y METODOS . . . . . ................................................................ 15
4.1. Organismos experimentales.......................................... 15
4.2. Fase experimental......................................................... 15
4.3. Calidad del agua .......................................................... 16
4.4. Toma de muestra.......................................................... 17
4.5. Procesado de tejido...................................................... 17
4.6. Parmetros aestudiar .................................................. 18
V. RESULTADOS............................................................................ 20
5.1 Histopatologa................................................................ 20
5.2. Crecimiento y sobrevivencia........ ........................................ 26
VI. DISCUSIN ........................................................................... 31
6.1. Histopatologa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
6.2. Crecimiento. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 5
VII. CONCLUSIONES ..................................................................... 39
VIII. LITERATURA CITADA............................................................ 40
TABLA DE FIGURAS
Nmero Pgina
1 Visin de una branquia al microscopio electrnico de barrido. 7
2 Esquema de la organizacin branquial. 7
3 Equilibrio hidromineral en el pez de agua dulce. 8
4 Equilibrio hidromineral en el pez de agua salada. 9
5 Corte transversal SEMIFINO de laminillas. 9
6 Esquema de corte transversal de laminillas. 10
7 Esquema de localizacin de las glndulas endocrinas en el pez ll
telesteo
TABLA DE CUADROS
Nmero
1 Trastorno circulatorio de congestin de branquias en Oreochromis 20
NILOTICUS x Oreochromis mossambicus, cultivada a distintas
salinidades.
2 Trastorno circulatorio de Telangiectasia en branquia de Oreochroms 21
NILOTICUS x Oreochromis mossambicus.
3 Otros trastornos en tejido de varios rganos de Oreochromis 22
niloticus x Oreochromis mossambicus, cultivada a diferentes
salinidades.
4 Trastorno del crecimiento celular: hiperplasia e/o hipertrofia de 23
clulas mucosas de branquias de Oreochromis niloticus x
Oreochromis mossaambicus, cultivada a diferentes salinidades.
5 Trastorno del crecimiento celular: hiperplasia e/o hipertrofia de 24
lamela secundaria de branquias de Oreochromis niloticus x
Oreochromis mossambicus, cultivada a diferentes salinidades.
6 Trastorno del crecimiento celular: hiperplasia e/o hipertrofia de 25
clulas basales de lamela secundaria de branquias de Oreochromis
niloticus x Oreochromis mossambicus, cultivada a distintas
salinidades.
7 Comparacin entre grupos a travs de la Prueba Q de Cochran "s". 26
Del trastorno del crecimiento celular: hipertrofia e/o hiperplasia de
clulas mucosas, lamela secundaria, clulas epiteliales y basales de
lamela secundaria de branquias Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossabicus, cultivada a distintas salinidades.
Pgi na
8 Incremento en peso de la tilpia roja (hbrida) Oreochromis nilotkus 27
x Oreochromis mossambicus, cultivada en tanques de fibra de vidrio
en agua dulce y en diferentes concentraciones de salinidad.
9 Anlisis de varianza (ANDEVA) de una va, de las variables de 28
crecimiento en longitud de la TILAPIA roja (hbrida) Oreochromis
niloticus x Oreochromis mossambicus, cultivada en tanques de fibra
de vidrio en agua dulce y en diferentes concentraciones de salinidad.
10 Anlisis de varianza (ANDEVA) de una va, de las variables de 28
crecimiento en peso de la Tilapia roja (hbrida) Oreochromis niloticus
x Oreochromis mossambicus, cultivada en tanques de fibra de vidrio
en agua dulce y en diferentes concentraciones de salinidad.
ll Tasa de sobrevivencia de Oreochromis niloticus x Oreochromis 29
mossambicus, cultivadas a distintas salinidades.
12 Rango de valores promedio de la calidad de agua en tanques de 30
fibra de vidrioen el cultivo de tilpaia roja (hbrida) Oreochromis
niloticus x Oreochromis mossambicus.
Histopatologa branquial asociada a la adaptacin de agua dulce a
concentraciones de 15%, 25% y 35%, de salinidad en tilpaia roja
hbrida Oreochromis niloticus (Linnaeus) x Orechromis mossambicus
(Peters).
Se determinaron los cambios histopatolgicos del epitelio branquial del
hbrido de tilpia roja como respuesta adaptativa a la salinidad. As tambin se
analizaron los efectos de la salinidad en el crecimiento y sobrevivencia en las
diferentes concentraciones (0%, 15%, 25%, y 35%). Los tratamientos fueron
realizados por duplicado. La densidad de siembra fu de 50 cras y la duracin
del experimento fue de 193 das. Para el estudio histolgico se realizaron 7
muestreos con intervalos de 14 das cada uno. El tejido se trat con la tcnica de
rutina: deshidratacin, hidratacin e impregnacin con parafina y finalmente se
efectu el mtodo de corte y ticin con Hematoxilina-Eosina (H-E). En el
presente estudio se encontraron diferencias significativas, en trastornos
histolgicos de hipertrofia e/o hiperplasia en el epitelio branquial de organismos
cultivados a distintas salinidades. Esto se atribuye al aumento de actividad de las
clulas branquiales para mantener el medio intracelular e intraplasmtico dentro
de los lmites fisiolgicos de osmolaridad. Las tasas de crecimiento de la tilapia
roja (hbrida), demuestran diferencias significativas entre el crecimiento de la
tilapia en agua dulce y en los distintos tratamiento de salinidad experimentados;
con crecimientos diarios de 2.77 g en agua dulce, 2.29 g en salinidad de 15%,
1.63 g en salinidad de 25% y de 1.57 g en salinidad de 35%.
RESUMEN
Branchial histopatology associated to the adaptation of fresh water in
concentrations of 15%, 25% and 35% of salinity in hybrid Oreochromis
niloticus (Linnaeus) X Oreochromis mossam bicus (Peters).
Abstract
It was determined the histopatological changes of branchial ephitel of hybrid of
linden red fish as an adapter answer to the salinity. Therefore it was analyzed the
effects of salinity in the growth and sutvival in the different concentrations (0%,
15%, 25%, and 35% The treatments were performed by duplicity. The density
of sowing was 50 ind/m3 and the period of the experiment was of 193 days. For
the histological study seven samples were taken with intervals of 14 days each
one. The weave was treated with the routine technique; dehydratation,
hydratation and impregnatation with paraffin and finally it was carried out the
method of cutting and tinging with Hematoxilin-Eosin (H-E). In this study
significant differences in histological disturbances of hipertrofy or hiperplasy were
found in the branchial ephitel of organisms cultivated in different salinities. This is
due to the invrease of activity in the branchial cells to maintain the intracell and
intraplasmatic medium inside the phisiological limits of osmolarity. The growth
ranges of linden red fish (hybrid), demostrated significant chamges bettween the
growth of the linden red fish in fresh water and in the different treatments of
experimented salinity. With daily growths of 2.77 g in fresh water, and 2.29, 1.63
and 1.57 g in salinities of 15%, 25% and 35% respectively.
El nombre comn tilapia se refiere a algunos gneros de peces de la
familia Cichlidae, orden Perciformes, originarios de Africa y Asia, estos gneros son
Sarotherodon, Oreochromis y Tilapia (Verdegem et al., 1997) .
Para 1995, FAO reporta que la produccin mundial de tilapia sobrepas las
500 000 toneladas (Verdegem et al., 1997).
Las tilapias son cultivadas en pases tropicales y subtropicales y constituyen
una excelente alternativa de solucin a la fuerte demanda de protena en
numerosos pases en desarrollo (Balarin & Hatton 1979, en Verdegem et al.,
1997).
Las tilapias exhiben excelentes caractersticas de cultivo, tales como una
fcil reproduccin y una alta tolerancia a amplio rango de condiciones ambientales,
eficiente uso de dietas bajas en protenas y alta resistencia al estres e infecciones
(Secretara de Pesca, 1994).
Tradicionalmente, las tilapias fueron cultivadas primeramente en estanques
de agua dulce (Pullin 1998, en Verdegem 1997) o en jaulas en aguas
intercontinentales (Coche 1982, en Verdegem 1997), pero da a da se ha
incrementado el inters de su cultivo en aguas salobres y agua marina (Watanabe,
Wicklund & Olla 1992).
Algunas especies de tilapias, tales como Orechromis MOSSAMBICUS (Peters),
son altamente tolerantes a condiciones salinas, crecen en agua marina (Kuwaye,
Okimoto, Shimoda, Howerton, Lin, Pang & Grau 1993; Ron, Shimoda, Iwama &
I.- INTRODUCCION
Grau 1995, en Verdegem 1997); y tienen preferencia por aguas esturinas (Dial y
Wainright, 1983).
Brock en 1954, reporta varios eventos de desove en agua de mar bajo
condiciones artificiales. La tila pia mossambicus puede desovar en salinidades por
arriba de 30% (30 ups, unidades prcticas de salinidad) y sobrevivir en
salinidades superiores a 40%.
Durante la adaptacin a altas salinidades, los peces eurihalinos toman agua
marina y absorben sales a travs de los intestinos y secretan estos excesos de
sales por las branquias (Zadunaisky et al., 1995). Por ello, ocurren cambios en la
osmolaridad en los lados apical y basolateral. Esta hipertonicidad del plasma
causa disminucin de las clulas cloro activas del epitelio de las branquias y el
transporte de NaCl hacia la membrana apical, lo que hace reducir la concentracin
del plasma (Zadunaisky et al., 1995).
DeWandel (1996) menciona que no han avanzado las investigaciones sobre
la produccin de tilapia en agua salada y por ello se deben implementar y
desarrollar nuevas tecnologas. La importancia de utilizar aguas salobres y marinas
en la produccin de tilapia adquiere relevancia si se considera que una de las
limitantes para la produccin de organismos acuticos en las zonas costeras
tropicales y semitropicales de Mxico, es la escasez de agua dulce. En algunas
zonas del pas, por ejemplo en las costas de los Estados de Nayarit y Sinaloa, se
cuentan con instalaciones destinadas a la camaronicultura, que por diversos
problemas productivos se encuentran ociosas o subutilizadas. Estas instalaciones
utilizan agua salobre y son sitios potencialmente ideales para la engorda de tilapia
(Mena, 1999).
1
1.1. Regulacin y adaptacin
La regulacin fisiolgica en los sistemas vivos, en todos sus niveles, no solo
reaccionan a cambios en su medio sino que tambin regulan y controlan dichas
reacciones. En 1879, el fisilogo francs Claude Bernard propuso que la estabilidad
del medio interno (esto es, el ambiente interno; bsicamente, lquidos corporales
del animal) es un requisito para la supervivencia de los organismos. En 1855
sugiri que todos los rganos liberaban sustancias especializadas en los lquidos
corporales, las cuales determinaban reacciones que estabilizaban el medio interno,
esto represent el precursor de las ideas sobre las hormonas y la regulacin
qumica (Wilson, 1989).
Cannon (1929) ampli esas ideas e introdujo el trmino homeostasis para
referirse a la constancia del medio interno y a los mecanismos fisiolgicos que la
determinan. El medio interno se refiere a los lquidos corporales de un
organismo, en el que viven las clulas: torrente sanguneo, lquido intersticial,
lquido del celoma u otros lquidos del organismo. Los cambios en el medio
interno tienen dos fuentes principales. Primero, las actividades de las clulas
requieren un suministro constante de oxgeno, nutrientes, sales y otros elementos
que obtienen del medio interno y deben ser reemplazados. A partir de la actividad
celular tambin resultan productos de desecho y secreciones tiles que fluyen en
el medio interno. La cambiante actividad celular tiende a modificar el medio
interno. En segundo lugar, los cambios en el medio externo del animal influyen en
el medio interno. Los cambios en el medio interno, cualquiera que sea su causa,
deben ser estabilizados por los mecanismos fisiolgicos de homeostasis
(Wilson, 1989).
Cualquier cambio o respuesta, de parte de un organismo que favorezca su
supervivencia a las modificaciones del medio externo se llama adaptacin
(Prosser, 1958; en Wilson, 1989).
2
Debido a que la adaptacin tiene varios significados en Biologa, se ha
sugerido que compensacin sera una palabra ms adecuada para referirse a
aquello mecanismos funcionales que favorecen la supervivencia en un medio
cambiante. La homeostasis es uno de tales conjuntos de mecanismos adaptatvos
o compensadores (Wilson, 1989).
La adaptacin incluye la aclimatacin y la aclimatizacin. La aclimatacin
se refiere a aquellos cambios adaptativos que ocurren en condiciones controladas
de laboratorio, en las que slo cambian uno o dos factores ambientales (lo cual
sera muy raro que ocurriera en condiciones naturales). La aclimatizacin se
refiere a los cambios complejos que ocurren usualmente en condiciones naturales
(Wilson, 1989).
Osmoregulacin
Todos los organismos se enfrentan a problemas osmticos, incluso en
medios isosmticos. La osmorregulacin, trmino acuado por Hber en 1902,
refiere a la funcin conjunta de muchos mecanismos usados por los organismos
para controlar el movimiento y los volmenes del agua corporal. Al tratar la
osmorregulacin, se est hablando del mantenimiento homeosttico de los niveles
de un conjunto particular de variables internas: el contenido de agua (volumen de
agua) y el contenido y distribucin de los solutos. Igual que para toda actividad
homeosttica, para mantener una variable a un nivel constante, la entrada debe
ser igual a la salida. Se puede clasificar a los animales acuticos en categoras
basadas en sus capacidades para sobrevivir en diferentes medios osmticos. Los
organismos estenohalinos tienen slo una tolerancia limitada a cambios en las
concentraciones osmticas del medio externo. Los animales eurihalinos pueden
tolerar una gama ms amplia de concentraciones osmticas, aunque el grado de
tolerancia depende del tiempo de exposicin, la edad, la temperatura ambiental y
factores similares. No hay una divisin marcada entre las dos clases. Los
3
telesteos marinos viven en un ambiente hperosmtico y se enfrentan al problema
de prdida de agua por smosis y a la difusin de sales hacia el interior. Todos los
organismos reguladores hipoosmticos parecen ser capaces de beber agua de mar
y absorber el agua y los iones monovalentes de sta. Los telesteos marinos
producen un volumen mnimo de orina, por lo que conservan agua. Aunque
algunos desechos nitrogenados son excretados en orina, la mayor parte son
eliminados en forma de amoniaco a travs de las branquias, reduciendo as la
cantidad de agua que se perdera por orina. Cualquier exceso de iones bivalentes
que entran en el intestino son excretados en la orina. El exceso de Na+ y Cl - que
entran por difusin o al beber el agua se elimina a travs del epitelio branquial.
Los rganos excretores desempean slo una pequea funcin en la regulacin
inica, ya que el volumen de orina es muy pequeo. El transporte activo de Na+ y
Cl- a travs de las clulas branquiales es la principal va para eliminar el exceso de
sales (Wilson, 1989 y Sonoma State Universty, 1999).
Herreid (1997) se refiere a los osmoreguladores a los animales que
mantienen una osnolardad interna diferente a la del medio en el que estn
inmersos. Y se seala a los osmoconformadores a los anmales que no activan
un control de las condiciones osmticas de los fluidos corporales y estn
conformes con la osmolaridad del medio ambiente.
Muchos telesteos eurhalinos son excelentes osmorreguladores que pueden
resstr la transferencia del agua de mar al agua dulce o viceversa. Durante la
adaptacin a altas salinidades los peces eurihalinos tragan agua salada, absorven
sales a travs de los intestinos y excretan estos excesos de sales por las branquias
(Zadunasky et al., 1995).
4
1.2. Elementos de la anatomofisiologa
La branquia y la respiracin
El primer desafo del medio acutico, se hace presente por su baja
concentracin de oxgeno, lo que es puesto en manifiesto por las branquias. Los
rganos respiratorios principales de los peces son las branquias (Wilson, 1989 y
Kinkelin et al., 1991).
Las branquias de los peces no slo sirve como rganos respiratorios, sino
tambin funcionan en la excrecin de los productos de desecho del metabolismo y
en el transporte de sales (Prunet y Bornancin, 1989).
Las branquias de los peces estn sostenidas por arcos branquiales (Fig. 1 y
2) a partir de los cuales se proyectan los filamentos branquiales, cada uno de los
cuales tiene un grupo de laminillas secundarias sobre los lados ventral y dorsal.
Las laminillas secundarias son las superficies de intercambio de gases. El flujo
sanguneo en estas estructuras se produce en sentido inverso al del agua sobre las
branquias, lo que facilita los cambios gaseosos, que se efectan por difusin
simple a partir del medio ms rico hacia el ms pobre, el oxgeno y el gas
carbnico difunden as en sentido inverso el uno del otro. Estas transferencias se
ven favorecidas por el movimiento del agua aspirada, despus comprimida por el
trabajo buco-opercular. Las laminillas secundarias constan de dos capas epiteliales
separadas por clulas pilares (Fig. 1 y 2). Es la estratificacin de los filamentos,
unidos a sus arcos, la que forma una laminilla branquial y da a la branquia el
aspecto macroscpico estriado por el que se le conoce. Dos laminillas implantadas
sobre cada arco forman una branquia (Kinkelin eta/,, 1991).
5
Fig. 1. Visin de conjunto de una branquia al microscopio electrnico de
barrido. Se aprecian las 2 lminas y, sobre la lmina superficial los
filamentos (LI) y las laminillas (LII) Los filamentos estn unidos al arco
branquial (A), cuyas branquioespinas son visibles (Bsp) (foto S.
Chilmonczyk, en Kinkelin, 1991).
La eficacia del funcionamiento del aparato respiratorio, est
ligada al
tamao de las superficies de intercambio. Segn especies, la superficie disponible
vara de 2 a 10 cm2/g de pez (Hughes, 1966, en: Kinkelin et al., 1991).
Fig. 2. Esquema de la organizacin branquial (dibujo M.
Dorson en Kinkelin, 1991)
6
La respiracin branquial puede extraer del agua entre el 50 y el 80% del
oxgeno disuelto, segn las especies (Kinkelin et al., 1991). El ajuste de las
actividades respiratorias a sus necesidades est sometido a control reflejo
neurohormonal y se hace por modificaciones del ritmo buco-opercular y cardaco,
del flujo sanguneo, del suministro o aporte sanguneo, y del calibre de las arterias
aferentes a las laminillas que envan la sangre 0 la mantienen en ellas (Prunet y
Bornancin, 1989).
La unidad branquio-renal y el equilibrio hidromineral
El equilibrio permanente de la entrada o salida pasiva de agua y de sales
entre el medio ambiente y el medio interno del pez est asegurado por la branquia
y el rin, cuyo funcionamiento es complementario y, por lo tanto, difcil de
separar en la prctica. Pueden darse dos situaciones, una en agua dulce (Fig. 3) y
otra en agua salada (Fig. 4) (Kinkelin eta/. 1991 y Wilson, 1989).
No+
Fig. 3. Equilibrio hidromineral en el pez de agua dulce (segn
Wedemeyer et al., 1976, en Kinkelin, 1991); la superficie de las flechas
indica la importancia del cambio. (Flechas claras: fenmenos pasivos;
flechas oscuras: mecanismos activos)
7
Agua
salada
Na+ cl-
Tuba digestivo
Sustancias orgnicas
Fig. 4. Equilibrio hidromineral en el pez de agua salada. (segn Wedemeyer
et al., 1976, en Kinkelin, 1991); la superficie de las flechas indica la
importancia del cambio. (Flechas claras: tenmenos pasivos; flechas oscuras:
mecanismos activos)
En agua dulce, el medio interno del pez est hiperconcentrado con relacin
al agua. El agua penetra en las branquias al mismo que las sales minerales tienden
a difundirse al exterior. La dilucin del medio interno que resulta de esto se
compensa con la emisin de abundante orina diluida (aproximadamente el 0.15 al
0.45% del peso del pez vivo por hora) mientras que las sales prdidas son
reemplazadas por el transporte activo de cloruros que efectan las clulas situadas
en la base de las laminillas branquiales (Fig. 5 y 6), (Kinkelin, 1991 y Sonoma
state University, 1999).
Fig. 5. Corte transversal semifino de laminillas (LII) que deja al descubierto el borde del soporte
de las laminillas (Cl) y un vaso sanguneo (LI), las clulas cloro en la base de las laminillas (Cl),
las clulas pilares (P), el epitelio (E), un eritrocito (R) (foto S. Chilmonczyk en Kinkelin, 1991)
8
Epi t el i o br anqui al
\ Cl ul as pilares
Fi l ament o
Fig. 6. Esquema de corte transversal de laminillas (dibujo M. dorson en
Ki nkel i n, 1991)
En agua salada, el pez se deshidrata por los efectos conjuntos de la prdida
del agua por las branquias y la difusin de sales en sentido inverso. El equilibrio se
establece por la ingestin y la absorcin intestinal de agua salada, as como por el
transporte activo branquial de sales hacia el exterior (Prunet y Bornacin, 1989; y
Sonoma State University, 1999).
La regulacin del equilibrio hidromineral est bajo control endocrino. Las
principales hormonas que intervienen son el cortisol, la prolactina y la adrenalina
(Fig. 7). Del mismo modo estn implicadas en esta regulacin la hormona tiroidea,
la de los corpsculos de Stannius, la de la urfisis as como la delos pptidos
neurohipofisiarios. La relacin con el sistema nervioso central, establecida en la
neurohipfisis, se manifiesta en el funcionamiento del eje hipotlamo-hipofiso-
interrenal (Donaldson, 1981; en: Kinkelin, 1991).
9
Tejido cromafino
epifisis
Tejido interrenal
cor pscul os
de Stannius
Tiroldes
/
pncreas
Cuerpos
Mucosa Intestinal
ltimobranqulales tejido intersticial
de las gonadas
Fig. 7. Representacin esquemtica de la localizacin de las
gl ndul as endocri nas en el pez t el est eo (ki nkel i n, 1991)
Cuando la reaccin de alarma o de estrs es susceptible de perturbar la
homeostasis, en los casos en que el animal sufre una agresin, generalmente, con
rapidez, se establece una compensacin; pero en los casos negativos se establece,
por el contrario, un estado patolgico (Kinkelin, 1991).
Otra amenaza para el equilibrio hidromineral viene dada por la constitucin
misma del rin. Este rgano, de origen par, se presenta generalmente como una
masa nica que tapiza la parte superior de la cavidad abdominal, tiene una gran
diversidad morfolgica. La entidad anatmica que forma el rin comprende entre
otros a las nefronas, al tejido intersticial, situado entre las fibras de reticulina, a las
hematopoyticas (eritropoyticas y leucopoyticas) y a los macrfagos; estos
ltimos asociados a los linfocitos, forman una estructura funcional de actividad
anloga a la de los ganglios de los mamferos. As que los agentes de infecciones
generalizadas se concentran en este tejido intersticial el cual, en contacto con las
nefronas, es alterado indefectiblemente en su funcin (Kinkelin, 1991).
10
II ANTECEDENTES
En 1985, Hwang e Hirano encontraron que al transferir hacia agua marina,
larvas originarias de agua dulce, la estructura de las clulas cloro eran
modificadas. Las larvas desarrollaban las caractersticas de clulas cloro marinas,
incluyendo la profundidad de la cavidad apical y principales accesorios celulares.
Slagle en 1986, resume que los cambios asociados con la adaptacin a
medios ambientes marinos o salobres son:
1) Un incremento o decremento en el tamao de las clulas cloro.
2) Un incremento o decremento en la actividad de la Na, K- ATPasa dentro
de la clulas cloro y
3) El desarrollo o degeneracin de interdigitaciones entre las clulas cloro y
las clulas adyacentes.
Ayson et al (1994), experimentando con tilapia encontr que las clulas
cloro cambian en tamao y morfologa cuando las larvas fueron colocadas en
diferentes aguas
Jieli et al., (1995) encontr en peces en estado larvario las branquias
funcionan como organo ion regulador, aunque en esa etapa inicia su funcin
organo intercambiador de gases.
Zadunaisky (1995), encontr en Fundulus h. una disminucin en el
volumen de las clulas cloro en respuesta a la hipertonicidad del lado basolateral
en oprculos adaptados a agua marina, a la vez no encontraron efectos en el lado
apical. En conclusin una rpida seal de adaptacin a altas salinidades es un
11
incremento en la tonicidad del plasma, que induce a un abatimiento de las clulas
cloro.
La mayor diferencia entre las clulas cloro adaptadas a agua dulce y agua
salada es su permeabilidad. En peces adaptados a agua salada, nicamente
cambio en la hipertonicidad sobre el lado basolateral produce cambios en las
clulas cloro. La membrana apical es impermeable al agua hacia adentro y esto
provoca que no ocurran cambio. Mientras, en peces adaptados a agua dulce, un
incremento de hipertonicidad en el lado basolateral o apical causa una disminucin
de clulas (Zadunaisky et al., 1995).
Muchos estudios previos que se han realizado sobre la transicin drstica a
los extremos de agua marina y agua dulce durante su adaptacin, han revelado
que la transicin gradual entre agua marina y agua dulce puede resultar benfico,
por lo que son de suma importancia todos los estudios que se realicen sobre la
adaptacin de peces de agua dulce a agua marina o viceversa, en cualquier grado
de salinidad en la amplia gama de aclimatacin (Zadunaisky et al., 1995).
Por ello el presente estudio pretende conocer si existen cambios
histolgicos del epitelio branquial de la tilapia roja, y si estos posibles cambios
estructurales a nivel macrocpico se presentan en un pez de agua dulce cuando
se adapta a un ambiente salobre y marino.
12
III. HIPOTESIS:
La adaptacin de organismos de agua dulce a agua salada produce
alteraciones histolgicas del epitelio branquial de la tilapa roja (Oreochromis
niloticus x Oreochromis mossambicus) cuando la adaptacin sea gradual de 15, 25
y 35% de salinidad.
3.1 0bjetivos
l.- Describir las lesiones histolgicas a nivel del epitelio branquial del hbrido
de la tila pia (Oreochromis niloticus x Oreochromis mossambicus] asociadas con la
presencia de concentraciones de 15, 25 y 35% de salinidad.
2.- Comparar el tipo y grado de lesin entre los cuatro grupos
experimentales de distinta salinidad.
3.- Contribuir al estudio histopatolgico branquial del hbrido de la tilapia
roja (Oreochromis niloticus x Oreochromis mossambicus) a diferentes
concentraciones de salinidad.
4.- Establecer si existe diferencia en la morfometra del animal, longitud y
peso, as como en la tasa de sobrevivencia en los diferentes grados de salinidad.
13
4.1. Organismos experimentales
Para el presente estudio, se adquirieron 5 000 cras del hbrido de tilapia
niloticus lnea de Israel y la tilapia roja de Florida, mossambicus (Oreochromis
niloticus x Oreochromis mossambicus), (revertidas sexualmente con alfa metil
testosterona) de la Empresa Desarrollo Acucola Potosina, ubicada en el estado de
San Luis Potos, con peso y talla promedio de 0.12 g y 1.92 cm respectivamente,
las cuales fueron trasladadas al Laboratorio de Acuacultura de la Facultad de
Ciencias Marinas (Universidad de Colima), en Manzanillo, Col. Las cras se
transportaron en bolsa de plstico con oxgeno, a una densidad de 2 000
organismos por bolsa y se colocaron en cajas de plstico en las que se les agreg
hielo para bajar la temperatura del agua y a la vez disminuir su metabolismo
durante el transporte. Una vez en el laboratorio las cras se recibieron en dos
estanques de pre-cra de 60 m2 para pre-engorda y posteriormente se pasaron a 8
tinas de fibra de vidrio con capacidad de 2,300 litros. El suministro de agua salada
fue de un pozo construido en la margen de la Laguna de Juluapan, con una bomba
de 2 H. P.
4.2. Fase experimental
Los organismos al inicio de esta etapa permanecieron en los dos estanques
de pre-cra de 60 m2, alimentndolos con raciones de peletizado comercial con un
porcentaje de protena del 30%, a razn del 9 al 5% de la biomasa total, hasta
que los organismos alcanzaron un peso de promedio de 63 g.
IV. MATERIALES Y METODOS
14
Posteriormente se sembraron 109 juveniles, de peso promedio de 63 g., en
cada tina de fibra de vidrio con una capacidad de 2,300 litros, la densidad de
siembra fue de aproximadamente 50 organismos/m3
Los organismos se aclimataron a diferentes concentraciones de salinidad,
incrementndose esta en 5% por da hasta llegar a la salinidad de 15% y 20%,
en las tinas respectivas, y a partir de entonces, se incremento la salinidad en
2. 5% por da hasta llegar a salinidades de 25% y 3 5 % a la vez que se dej un
grupo experimental en agua dulce.
La dilucin del agua salada fue con agua dulce y a la concentracin salina
ms alta se le adicion sal de grano, de la Laguna de Cuyutlan, Col. Se realizaron
recambios diarios de agua del 70% al 80% y aireacin continua, con un aireador
de 3.5 H. P. Marca Aquatic System, todos los tratamientos se hicieron por
duplicado.
Los porcentajes de alimentacin en esta etapa experimental fueron del 3%
al 2% de la biomasa total y se suministr alimento en tres ocasiones por da
(9:00, 13:00 y 17:00 horas).
4.3. Calidad del agua
Durante los 193 das que dur el experimento se efectu un registro diario
de la calidad del agua, entre las 8:30 y 9:30 horas.
Los parmetros registrados fueron: pH, temperatura, salinidad, porcentaje
de saturacin de oxgeno y oxgeno disuelto (mg/l). Las mediciones se efectuaron
con un analizador de agua multiparmetros marca YSI-GRANT Mod. 6000.
15
4.4. Toma de muestra
Durante la etapa de aclimatacin, una vez alcanzada la salinidad de 35%
se iniciaron las necropsias realizndose cada 14 das, para ello se tomaron 5
organismos de cada tratamiento, hasta llegar al sptimo muestreo. De cada uno de
los peces se obtuvieron los datos de: longitud total, longitud patrn y altura, con la
ayuda de un ictimetro graduado en mm. El peso mediante una balanza con
presicin de 0.01 g.
A los organismo se le practic la eutanasia a travs de un corte de mdula y
la necropsia se efectu de acuerdo con la tcnica de Reimschuessel y Cols.
Registrndose los cambios macroscpicos aparentes para cada caso. Las
branquias se separaron y se fijaron en formalina al 10 % amortiguada a pH 7.2, se
tomaron muestras de hgado y rin. Las muestras se identificaron con la fecha de
muestreo y el grupo de tratamiento correspondiente.
4.5. Procesado de tejido
Para el estudio histolgico se us la tcnica de rutina: deshidratacin,
aclaramiento, hidratacin e impregnacin con parafina. Finalmente se llev a cabo
el mtodo de corte y tincin con Hematoxilina-Eosina (H-E).
16
4.6. Parmetros a estudiar.
a).- Evaluacin histolgica de las lesiones, los parmetros son:
- Trastornos circulatorios: Presencia de congestin, telangiectasia y
trombosis.
- Trastornos de crecimiento celular:
- Hiperplasia y/o hipertrofia de clulas epiteliales,
- Hiperplasia e/o hipertrofia de clulas mucosas, y
- Hiperplasia e/o hipertrofia del epitelio de lamelas secundarias
Los grados con los cuales fueron evaluadas las lesiones fueron:
a) ausente (-)
b) ligero o leve (+)
c) moderado (++)
d) severo o grave (+++)
b).- Crecimiento (peso y longitud)
Todo lo anterior fue realizado para cada individuo de los cuatro grupos de
estudio.
Para el anlisis estadsticos de los resultados del estudio histolgicos se
realiz una Prueba Q, anlisis de varianza no paramtrica, para evaluar el
efecto de la salinidad en el tejidos del epitelio branquial del hbrido de la ti l api a
roja, cultivada en agua dulce y en varias salinidades.
A fin de identificar la existencia del efecto de la salinidad en el crecimiento
de la tilapia se realiz con los valores del ltimo muestreo morfomtrico un
anlisis de varianza de una va (ANVA). Esta tcnica es un procedimiento que
17
4.6. Parmetros a estudiar.
a).- Evaluacin histolgica de las lesiones, los parmetros son:
- Trastornos circulatorios: Presencia de congestin, telangiectaia y
trombosis.
- Trastornos de crecimiento celular:
- Hiperplasia y/o hipertrofia de clulas epiteliales,
- Hiperplasia e/o hipertrofia de clulas mucosas, y
-q Hiperplasia e/o hipertrofia del epitelio de lamelas secundarias
Los grados con los cuales fueron evaluadas las lesiones fueron:
a) ausente (-)
b) ligero o leve (+)
c) moderado (++)
d) severo o grave (+++)
b).- Crecimiento (peso y longitud)
Todo lo anterior fue realizado para cada individuo de los cuatro grupos de
estudio.
Para el anlisis estadsticos de los resultados del estudio histolgicos se
realiz una Prueba Q, anlisis de varianza no paramtrica, para evaluar el
efecto de la salinidad en el tejidos del epitelio branquial del hbrido de la tilapia
roja, cultivada en agua dulce y en varias salinidades.
A fin de identificar la existencia del efecto de la salinidad en el crecimiento
de la tilapia, se realiz con los valores del ltimo muestreo morfomtrico un
anlisis de varianza de una va (ANVA). Esta tcnica es un procedimiento que
18
descompone la suma de cuadrados o variacin total presente, en un conjunto de
datos en componentes asociados con fuente de variacin conocida, de esta
manera es posible conocer la magnitud de las contribuciones de cada una de stas
fuentes a la variacin total (Steel y Torrie, 1988; Daniel, 1979, en Mena 1999).
19
V. RESULTADOS
5.1. Histopatologa
En el anlisis de los cortes histolgicos se encontraron varios trastornos en
el epitelio branquial de la tilapia sometida a diferentes salinidades. Del total de
muestras analizadas se determin que las lesiones macroscpicas fueron por:
congestin, fusin de lamelas primarias branquiales y moco.
Transtornos circulatorios
Referente a este tipo de trastorno se encontr congestin en el
branquial en todos los cortes histolgicos de cada uno de los muestreos,
determina que no hubo diferencia entre los tratamientos (Cuadro 1).
epitelio
lo cual
Cuadro 1: Trastorno circulatorio de congestin de branquias en
Oreochromis niloticus x Oreochromis mossambicus, cul t i vada a di st i nt as
salinidades.
Grados: a) Ausente (-), b) presente (+)
20
En el Cuadro 2 se aprecian los resultados histolgicos del trastorno
circulatorio de la telangiectasia en branquias de la tilpaia roja, el cual no se
present en las muestras de tejido de los organismos del grupo cultivadas en agua
dulce, siendo positiva su presencia en el muestreo 1 y 4 de los organismos
cultivados en la salinidad de 15%. En cambio para todas las muestras de tejido de
los grupos de 25% y 35% de salinidad fue positiva su presencia.
Cuadro 2: Trastorno circulatorio de Telangiectasia en branquia de
Oreocbromis niloticus x Orechromis mossambicus cultivada a varias salinidades.
En el Cuadro 3 se observa que el trastorno de trombosis branquial
nicamente se encontr en las muestras de tejido del muestreo uno, del grupo de
con salinidad de 35%. A la vez se aprecia carcinoma epidermoide en orofaringe
de los organismos cultivados en salinidad 25 y 35%, en el muestreo dos y cinco,
as como en los organismos de salinidad de 35% en el tercer muestreo. Tambin
se present la infiltracin glucognica en hgado en el grupo de salinidad de 35%
21
Grados: a) Ausente (-), b) presente (+).
en el muestreo cuatro, asimismo se encontr hgado graso y calcificacin de rin
en la totalidad de las muestras de tejido.
22
Transtornos del crecimiento celular
En el Cuadro 7 se presenta los resultados de la prueba Q de Cochran s de
anlisis de varianza de dos factores, para datos dicotmicos aleatorizados,
tomando como base los datos cualitativos (Cuadro 4, 5 y 6). Con una 0.1< P <
0.25.
Cuadro 4: Trastorno del crecimiento celular: hiperplasia e/o hipertrofia de
clulas mucosas de branquias de Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossambicus, cultivada a diferentes salinidades.
Grados: a) Ausente (-), b) Ligero (+,)
c) Moderado (++), d) Severo (+++)
23
Cuadro 5: Trastorno del crecimiento celular: hiperplasia e/o hipertrofia de
lamela secundaria de branquias de Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossambicus, cultivada a diferentes salinidades.
2 + ++ +++
3 + ++ +++
,
4 + + ++ +++
5 + + + + + + +
6 + ++ +++
+++
Grados: a) Ausente (-) b) Ligero (+),
c) Moderado (++), d) Severo (+++)
+
Tratamiento 0% 15% 25% 35%
Muestreo
1 - + ++ +++
++
-
7
24
Cuadro 6: Trastorno del crecimiento celular: hiperplasia E/O hipertrofia de
clulas basales de LAMELA secundaria de branquias de oRECHOROMIS NILOTICUS X
Oreochromis mossambicus, cultivada a distintas salinidades.
Grados: a) Ausente (-), b) Ligero (+),
c) Moderado (++), d) Severo (+++)m,
En el Cuadro 7 se compara la hipertrofia e/o hiperplasia de clulas
caliciformes, de lamela secundaria y basales de lamela secundaria del tejido de
tilapia roja hbrida (monosexo) Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossambicus cultivada a distintas salinidades. A travs de la prueba de
comparacin Q de Cochran "s" para datos dicotmicos aleatorizados, para una
0.1< P < 0.25, resulta que la Qc (calculada) es mayor que la X (0.05, 4) , lo que
implica que se rechaza la hiptesis nula:
Ho: La proporcin de tejido afectado por las distintas concentraciones de
salinidad es igual para los cuatro tratamientos de cultivo.
Y se acepta hiptesis alternativa:
25
Ha: La proporcin de tejido afectado por la salinidad no es igual para las
cuatro salinidades probadas en el experimento.
Cuadro 7: Comparacin entre grupos a travs de la Prueba Q de
Cochran "s" Del trastorno del crecimiento celular: hipertrofia e/o hiperplasia de
clulas mucosas, lamela secundaria, clulas epiteliales y basales de lamela
secundaria de branquias Orechromis niloticus x Orechromis mossabicus
cutil lda a distintas salinidades.
Tejido Clulas lamela
mucosas secundar-i
a
Val orQ 90 150
calculado
Clulas
basales
185
Valor Q
Tabla (0.05,4)
0.1< p < 0.25
7.815
5.2. Crecimiento y sobrevivencia
En el Cuadro 8, se enlistan las ganancias en peso para cada uno de los
tratamientos, a lo largo de 193 das de cultivo. En donde se muestran los pesos
finales promedio y el peso ganado en gramos por da en cada una de las
salinidades probadas. Los organismos cultivados en agua dulce alcanzaron un
peso mximo de 596.26 gramos (g) y el peso ganado por da fue 2.77 g. En la
salinidad de 15, 25 y 3 5 % los organismos cultivados en cada una de estas
salinidades, lograron un peso mximo y un peso ganado promedio de: 502.82 g y
2.29 g, 379.36 g y 1.58 g y 358.58 y 1.53 g, respectivamente. Al comparar estos
resultados, peso final promedio y peso ganado por da, con los alcanzados por los
organismos cultivados en agua dulce, se encuentra un decremento de: 15.67% y
17.32%, 36.37% y 42.96% y 39.86% y 44. 76%, respectivamente en la salinidad
26
de 15, 25 y 35 % % . En el tanque duplicado de salinidad de 35% el tiempo de
cultivo fue de 86 das, debido a que los organismos se murieron, por infeccin
bacteriana ocasionando una dermatitis ulcerativa aislndose Aeromonas spp., en
un lapso de tres das despus de haberse
realizado el noveno muestreo
morfomtrico.
Cuadro 8: Incremento en peso de la tilapia roja (hbrida) Oreochromis
niloticus x Oreochromis mossambicus, cultivada en tanques de fibra de vidrio en
agua dulce y en diferentes concentraciones de salinidad.
Tratamiento Fecha de Fecha de Das de Pes o Pes o Pes o Pes o Pes o
(Salinidad) siembra cosecha cultivo inicial acumulado ganado ganado/ ganado/
(1997) (1997)
(g) (g) (g)
da (g) da (%)
Agua dulce 22/04 31/10 193 50.30 553.88 503.58 2.61 4. 27
Agua dulce " # " " 193 60.92 596.26 535.34 2.77
15 %
A los valores del ltimo muestreo morfomtrico, de crecimiento en peso y
longitud del cultivo de la tilapia roja hbrida (monosexo) Oreochromis niloticus x
Oreochromis mossambicus, se sometieron a un anlisis de varianza (ANDEVA), en
los cuales se encontr una diferencia significativa entre los tratamientos (Cuadros
9 y 10).
27
Cuadro 9:Anlisis de varianza (ANEDVA) de una va, de las variables de
crecimiento en longitud de la ti l pi a roja (hbrida) Oreochromis niloticus x
Oreochromis mossambicus, cultivada en tanques de fibra de vidrio en agua dulce y
en diferentes concentraciones de salinidad.
Origen de las Suma de Grados Cuadrado F. calculada Valor
variaciones cuadrados de medio crtico
libertad para F
Entre grupos 403.0733106 3 134.3577702 25.26757022 2.6385365
Dentro de
1414.428319 2 6 6 5.317399696
los grupos
Total
1817.50163 2 6 9
Cuadro 10:Anlisis de varianza (ANDEVA) de una va, de las variables de
crecimiento en peso de la tilapia roja (hbrida) Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossambicus, cultivada en tanques de fibra de vidrio en agua dulce y en
diferentes concentraciones de salinidad,
Origen de las Suma de Grados Cuadrado F. calculada Valor crtico
variaciones
cuadraos de medio para F
libertad
Ent r e gr upos 2092710.022 3 697570.0073 38.27928569 2.6385365
Dentro de los 4847363.753 2 6 6 18223.172
grupos
Total
6940073.775 2 6 9
28
El Cuadro ll, se refiere a la tasa de sobrevivencia en cada una de las
salinidades en que se cultivaron las tilapias, las cuales se calcularon en base al
diseo experimental. En el tratamiento de salinidad de 35%, en una de las tinas
(duplicado) los peces se murieron a los 86 das del estudio.
Cuadro ll: Tasa de sobrevivencia de Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossaambicus cultivadas a distintas salinidades.
Tratamiento Organismos Organismos Tasa de Sobrevivencia
Salinidad al inicio Muestreados Sobrevvenca Promedio
0 % 109 49 0.9633 0.9357
0 % 109 49 0.9266
15% 109 49 0.9082 0.8715
1 5 % 109 49 0.8348
2 5 % 109 49 0.6788 0.7560
2 5 % 109 49 0.8348
3 5 % 109 49 0.6972 0.5819
3 5 % 109 49 0.4660
En el Cuadro 12, se describen los valores promedio de los parmetros de
calidad de agua, registradas en el experimento, el rango de temperatura fluctu de
27.69 C a 29.83 C. La concentracin de oxgeno disuelto promedio permaneci
sobre 5.00 mg/l. La saturacin de oxgeno se mantuvo en promedio en 82.02%. Y
el pH se encontr en promedio en 7.83.
29
Cuadro 12: Rango de valores promedio de la calidad de agua en tanques de fibra
de vidrio en el cultivo de tilapia roja (hbrida) Oreochromis niloticus x Oreochromis
mossambicus.
Tratamiento Temper at ur a % Sat. OD OD mg/l
pH
Agua dulce 27.69 a 29.83 73.08 a 86.88 5.59 a 6.82 7.84 a 7.99
Salinidad 15 % 27.97 a 29.46 77.10 a 88.39 5.32 a 6.36 7.67 a 7.79
sal i ni da 25 % 27.81 a 29.24 85.02 a 90.97 5.71 a 6.22 7.84 a 7.90
Salinidad 35 % 27.34 a 29.00 83.91 a 90.71 5.35 a 5.97 7.77 a 7.84
30
VI. DISCUSION
6.1. Histopatologa
La tilapia como pez eurihalino desarrolla mecanismos f i s i o l g i a para
adaptarse y vivir en agua salobre. Es factible aceptar que la adaptacin implica un
cambio estructural y funcional en las branquias, dando como resultado tasas de
incremento en los flujos branquiales de Na+ y Cl-, incrementndose la actividad
de la Na-K-ATPasa (enzima que interviene en el transporte de sodio y potasio) en
los tejidos de las branquias (Suresh, 1992; en Mena, 1999) y el de clulas plidas
de secrecin salina (Roberts, 1981; en Mena, 1999). El epitelio branquial de los
peces es un importante rgano osmorregulador (Schmidt-Neilsen, 1994). El tipo de
clulas en el proceso del ion-regulacin en agua dulce como en agua salada son
las clulas cloro (Heijden et al., 1994). Las branquias son los rganos respiratorios
de los peces, y estn en contacto ntimo con el medio externo, el epitelio branquial
es responsable de muchas funciones complejas, incluyendo la respiracin, la
excrecin, los mecanismos de regulacin cido-base y la regulacin osmtica
(Heisler, 1984, citado por Stagg, 1989). Esto significa que las clulas branquiales
estn constantemente expuestas al medio y a los cambios fsicos de ste (Mena,
1999). El epitelio de las branquias, adems de asegurar la funcin respiratoria es
responsable de la regulacin de los intercambios de sales y agua (Wilson, 1989, en
Mena , 1999).
De los cambios histolgicos encontrados en los tejidos de las branquias de
O. niloticus x O. mossambcus, cultivada en agua dulce y en las salinidades de
1 5 % 25% y 35%OO, concuerdan con lo reportado por Slagle (1988) y sealan
que la adaptacin a distintas salinidades implican cambios en la estructura y
funcionamiento de las branquias. De lo que se infiere que el pez adopta estos
mecanismos para mantener su equilibrio osmtico. Esto se muestra en el Cuadro
31
2, en donde el trastorno circulatorio telangiectasia, se presenta al incrementarse la
concentracin de la salinidad. Este trastorno circulatorio consiste de una dilatacin
vascular de la lamela secundaria, como un cambio estructural de la branquia, en el
que aumenta su volumen y se incrementa a la vez su superficie de intercambio
gaseoso y as poder captar ms oxgeno que le permita conservar la homeostasis
(Garca, 1999).
En el Cuadro 3 se seala la presencia de trombosis (coagulos de sangre) en
branquias de peces de salinidad de 35%|OO. A la vez se aprecia que se encontr
carcinoma epidermoide en orofaringe en los organismos cultivados en salinidad de
25% y 35% As como la degeneracin glucognica en hgado en organismos
cultivados en salinidad de 35% lo que propicia inferir que el pez desarrolla
mecanismos estructurales a nivel histolgico en estos rganos como una respuesta
adaptativa a las salinidades de 25% y 3 5 %
Los trastornos de crecimiento celular de hiperplasia e/o hipertrofia de:
clulas mucosas, de lamela secundaria, se presentan al incrementarse las
concentraciones de salinidad en los tratamientos / 15%, 25% y 3 5 % en
cambio la hipertrofia e/o hiperplasia de clulas basales de lamela secundaria se
encontr nicamente en el grupo de 35%00, lo que permite inferir que se presenta
un aumento en la actividad de la branquias para mantener su homeostasis.
Esto resultados sugieren que la tilapia roja sufri algunos de estos
trastornos como un mecanismo adaptativo, a nivel de estructura y funcionamiento
del epitelio branquial, en respuesta a las concentraciones de salinidad,
coincidiendo estas observaciones a los encontrados por Hwang e Hirano (1985) y
Ayson et al., (1984) que reportan cambios estructurales en el epitelio branquial,
a nivel de clulas cloro, en el proceso de adaptacin de larvas dulceacucolas a
condiciones salinas; de igual forma se infiere, que al no haberse realizado este
estudio histolgico con un micrscopio electrnico que definiera con mayor
32
exactitud los cambios en las branquias, por ello se determina una similitud a los
resultados obtenidos por Zadunaisky (1995) quien reporta en Fundulus h. una
disminucin en el volumen de las clulas cloro, en respuesta a la hipertonicidad del
lado basolateral en oprculos adaptados a agua marina.
De la comparacin entre grupos a travs de la prueba de Q de Cochran "s"
del trastorno del crecimiento celular: hipertrofia e/o hiperplasia de clulas
mucosas, lamela secundaria, clulas epiteliales y basales de lamelaq secundaria de
la tilapia roja, cultivada a diferentes salinidades y al aceptarse la hipotesis
alternativa donde:
Ha: La proporcin de tejido afectado por la salinidad no es igual para las
cuatro salinidades experimentales (0%, 1 5 % 25% y 35%).
Esto de acuerdo con Zar (1984) en cuanto al procedimiento y el resultado
obtenido, se puede concluir que la salinidad en las distintas concentraciones en
que se cultiv la tilapia roja hbrida provocan trastornos histolgicos no
observados en organismos cultivados en agua dulce, lo que demuestra que el pez
siendo eurihalino, adapta mecanismos que le permiten conservar su homeostasis y
sobrevivir y crecer en un ambiente marino; lo que concuerda con Mena (1999),
quien seala que a medida que se incrementa el contenido salino en los fluidos del
cuerpo, las clulas branquiales aumentan su actividad para mantener el medio
intracelular e intraplasmtico dentro de rangos fisiolgicos de osmolaridad, dando
por consecuencia las hiperplasia e/o hipertrofias celulares.
Aunque no fue posible corroborar los resultados de los cortes histolgicos
en un microscopio electrnico, los datos obtenidos por Slagle en 1986, quien
resume que los cambios asociados con la adaptacin a medios ambientes marinos
o salobres son:
33
1) Un incremento o decremento en el tamao de las clulas cloro.
2) Un incremento o decremento en la actividad de la Na, K- ATPasa dentro
de la clulas cloro y
3) El desarrollo o degeneracin de interdigitaciones entre las clulas cloro y
las clulas adyacentes.
Entonces esto hace suponer que los cambios asociados con la adaptacin a
medios ambientes marinos o salobres se dan a nivel estructural y funcional de la
branquia de los peces.
En lo referente a la presencia de hgado graso y calcicificacin del rion en
la totalidad de las muestras de tejido de organismos cultivados en las distintas
salinidades, descarta la posibilidad de que estos trastornos sean provocados por la
salinidad. La presencia de hgado graso se atribuye a factores tales como la
nutricin, calidad del alimento y a su hbito alimenticio omnvoro (Garca, 1999).
Por ello la calcificacin en rin se relaciona con aspecto fisiolgicos en respuesta
a la calidad del agua y al contenido qumico que bien pudiera ser la dureza y la
alcalinidad.
Esto concuerda con Mena (1995) quien seala que la importancia de la
pureza de la raza de la tilapia, calidad y tipo de alimento, as como la calidad de las
condiciones ambientales, son aspectos que se consideran en la adaptacin de la
tilapia roja a distintas salinidades, como lo reportan Wright y Wood, (1985) y Groot
et al., (1995).
Debido al importante funcin del rin, en la excrecin iones calcio en agua
salobre, va la orina (Krayushkina et al., 1994) y de las branquias, en el intercambio
y/o eliminacin de iones monovalentes, en el aseguramiento de la permanencia de
la homeostasis entre el medio ambiente y el medio interno del pez (Kinkelin et al.,
1991 y Wilson, 1989), se recomienda analizar los cortes histolgicos del rin en
34
microscopio electrnico de barrido, ya que en el anlisis de los cortes histolgicos
realizado no se detectaron cambios estructurales. en el rin, durante la adaptacin
de la tuilapia roja hbrida a distintas salinidades. Sin embargo, de los resultados
obtenidos por Mena (1999) en la gasometra sangunea de tilapia roja hbrida
adaptada a diferentes salinidades, se pueden inferir posibles cambios estructurales
en el rin, como lo sugieren el incremento de los valores de concentracin de
bicarbonato (HCO3) , (exceso de base del fluido extracelular, bicarbonato estandar
y exceso de base), conjuntamente con el incremento en la salinidad, lo que hace
pensar que el pez establece un sistema de amortiguamiento para compensar la
acidosis metablica a la que se somete el organismo con el aumento de la
salinidad, lo que requiere un notable gasto de energa (Oorschot y Boon, 1993, en
Mena, 1999).
6.2. Crecimiento
Entre las integraciones fisiolgicas complejas se encuentra el crecimiento de
los organismos, el cual de acuerdo con Beamish y Trippel (1990) es una actividad
controlada a nivel celular. El crecimiento refleja mltiples procesos que se llevan a
cabo en el medio interno y es un indicador global de la adecuacin del organismo
al ambiente. Si sta es favorable el organismo crece pero cuando est sujeto a
variables causantes de estrs del medio, el crecimiento se detiene. El crecimiento
se describe a travs de la tasa de crecimiento, es decir el cambio en peso o en
longitud del animal en un lapso determinado. Varios factores influyen en la tasa de
crecimiento; obviamente destacan el estado de desarrollo, la actividad, la
disponibilidad de alimento, el fotoperiodo, la salinidad y la temperatura. Cabe
sealar que la relacin entre el crecimiento y la tasa de ingestin no es
simplemente lineal; en los estudios sobre el efecto de los factores ambientales en
el crecimiento, es fundamental considerar este fenmeno (Jobling, 1994; citado
por Espina y Vanegas 1996). En virtud de ello, los peces obtienen su potencial
35
mximo de crecimiento fisiolgico por una serie de condiciones: composicin
qumica del agua (calidad del agua), temperatura del agua, caractersticas
genticas y estado fisiolgico (Hepher, 1985; en Mena, 1999).
De acuerdo con los resultados obtenidos en este experimento, la tasa de
crecimiento de la tilapia roja (hbrida) O: niloticus x O. mossambicus fue mayor en
agua dulce (Cuadro 3), esto confirma que si existe diferencia entre el crecimiento
de la tilapia en agua dulce y en varias concentraciones de salinidad; resultados que
no concuerdan con los reportados por Canagaratnam (1996; en Suresh et al.,
1992) quien observ que la O. mossambicus, creci mejor en salinidad media que
en agua dulce y tambin que el mejor crecimiento ocurre al 50% de la salinidad de
mar; a la vez los resultados del presente estudio no coinciden con los observados
por liao y Chang (1983; en Suresh et al., 1992), para la tilapia roja hbrida (roja O.
mossambcus x normal O. niloticus), quienes mencionan que ste hbrido creci
ms rpido en salinidad de 17% que en agua dulce. Las diferencias sealadas en
el crecimiento de la tilapia entre ensayos, se puede deber a las condiciones
imponderables propias de cada cultivo; pero principalmente a la adaptacin de la
especie desde el punto de vista fisiolgico, aunado a la pureza de la raza de la
tilapia densidades de siembra, sistema de manejo y duracin del tiempo de
cultivo, calidad y tipo de alimento y condiciones ambientales (Mena, 1995).
En contraste, los resultados de crecimiento obtenidos en el presente
estudio, coinciden con los reportados por Verdegem et al., en 1997, para la
misma especie (O. niloticus x O. mossambcus, hbrido rojo). En ellos la tasa de
crecimiento de la tilapia es mayor en agua dulce.
Las implicaciones que tiene la medicin de las diferentes tasas y su
integracin en el balance energtico son esenciales para la fisiologa. La energtica
fisiolgica proporciona un marco a la relacin causa-efecto comn a todos los
organismos y por tanto da cuenta del efecto biolgico producido por los factores
ambientales (Espina et al., 1996; en Mena, 1999).
36
En este caso, los diferentes grados de salinidad probados en el experimento
proporcionaron informacin sobre procesos claves de adquisicin de energa para
crecimiento somtico, lo cual se demuestra en las diferencias significativas tanto
en incremento en peso, como en crecimiento en longitud de la tilapia (Mena,
1999).
Si comparamos la tasa de crecimiento obtenida en el presente estudio en
los diferentes grados de salinidad: 15% (2.29 y 2.18 g/da). 25% (1.63 y 1.58
g/da) y 35% (1.57 y 1.49) con la tasa de crecimiento reportadas por Surech
(1992) para la tilapia roja O. niloticus x O mossambicus, en varias salinidades;
tenemos que: en estanques de plsticos y cultivo exterior con salinidad de 37%
encontr una tasa de crecimiento de 2.7 y 3.6 g/da con suministro de alimento ad
libitum y cuando se cultiv en jaulas con salinidad de 34% a 41% y de 34% y
39%; las tasas de crecimientos fueron de 1.7 y 1.99 g/dag/da respectivamente. Las
diferencias en los resultados se pueden atribuir al proceso de aclimatacin, el
estado de desarrollo del organismo, al sistema de cultivo, cantidad y tipo de
alimento y consecuentemente a las condiciones de manejo, de acuerdo con Mena
(1999).
Al analizar los valores de la tasa de sobrevivencia de la tilapia hbrida roja O.
niloticus x 0. mossambicus, se denota una correlacin negativa entre sta y la
salinidad, es decir al aumentar la salinidad disminuye la tasa de sobrevivencia.
Adems, de que en uno de los tanques (duplicado) de salinidad de 35% el tiempo
de cultivo fue de 86 das, debido a que las tilapias se murieron en un lapso de tres
das despus de haberse realizado el muestreo 9, esto se atribuye al manejo, lo
cual propici estrs por la alta concentracin de salinidad y el pez sufri de
infeccin bacteriana por Aeromonas spp. Lo cual confirma lo demostrado por
Surech et al., (1992) y Mena (1999), quienes sealan que las tilapias criadas en
aguas salinas son ms sensibles al estrs por el manejo, debido a los altos costos
37
de regulacin y en consecuencia son ms propensas a infecciones secundarias por
virus, bacterias, helmintos y hongos.
38
Existen procesos adaptativos en el epitelio branquial de las tilapias
correlacionados con el incremento en la salinidad del medio en el que viven.
Los procesos adaptativos implican cambio estructural y funcional en las
branquias, representado por los cambios estructurales de hipertrofia e/o
hiperplasia en el epitelio branquial.
Existe una correlacin positiva entre la salinidad y la aparicin de trastornos
histolgicos.
Se presenta una correlacin negativa entre crecimiento y salinidad, as como
tambin entre salinidad y sobrevivencia.
39
VII CONCLUSIONES
VIII. LITERATURA CITADA
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