PRCTICA 6.

DETERMINACIN DE LPIDOS, AMINOCIDOS Y CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS.
1. Distinguir entre substancias lipdicas y no lipdicas usando la prueba de Sudn IV.
2. Distinguir la presencia de aminocidos libres en una solucin mediante su habilidad para reaccionar con el
reactivo de ninhidrina.
3. Identiicar a!"cares reductores usando #eactivo de $enedict.
%. Identiicar polisacridos usando &ugol.
INTRODUCCIN.
&a palabra lpido se reiere a los miembros de un grupo heterog'neo de mol'culas orgnicas (ue son
solubles en solventes no polares tales como cloroormo) pero insolubles en agua. *un(ue los lpidos incluyen
grasas) esteroides y osolpidos) en esta prctica buscaremos principalmente grasas.
&os triglic'ridos) un tema popular de discusin sobre las dietas) son la orma ms com"n de grasas.
+onsisten en tres cidos grasos unidas a una mol'cula de glicerol. &os triglic'ridos se encuentran
predominantemente en te,ido adiposo y almacenan ms energa por gramo (ue cual(uier otro tipo de
compuesto.
* temperatura ambiente) algunos lpidos son slidos -generalmente estos se encuentran en animales. y
nos reerimos a ellos como grasas) mientras (ue otros son l(uidos -generalmente a(uellos encontrados en
plantas. y nos reerimos a ellos como aceites. /l aceite vegetal) una grasa l(uida) es una me!cla de
triglic'ridos.
0uesto (ue tanto los slidos como los l(uidos son no polares) determinaremos su presencia usando
Sudn IV) un colorante no polar (ue se disuelve en sustancias no polares como tales como grasas y aceites)
pero no en sustancias polares como el agua.
&as protenas estn ormadas de uno o ms polip'ptidos) los cuales son cadenas lineales de pe(ue1as
mol'culas llamadas aminocidos. &os aminocidos deben su nombre al grupo carbo2ilo y al grupo amino (ue
poseen. &os polip'ptidos se orman cuando los aminocidos son unidos mediante enlaces peptdicos entre el
grupo amino de un aminocido y el grupo carbo2ilo de otro.
3na de las maneras ms sencillas de detectar la presencia de aminocidos libres es utili!ando el
reactivo de ninhidrina) el cual reacciona con el grupo amino de los aminocidos) pero no con polip'ptidos. /l
reactivo de ninhidrina se torna p"rpura o violeta en presencia de los grupos amino de los aminocidos libres4 sin
embargo) en presencia de prolina se torna amarillo. &a prolina reacciona dierente debido a (ue su grupo amino
no est libre) sino (ue orma parte de un anillo en la mol'cula.
&a unidad estructural bsica de los carbohidratos es el monosacrido -o a!"car simple.. &os
monosacridos se clasiican por el n"mero de carbonos (ue contienen5 por e,emplo) las triosas tienen tres
carbonos) las pentosas cinco y las he2osas seis. 0ueden contener tan pocos como tres o tantos como 16
carbonos.
&os monosacridos se caracteri!an por la presencia de un grupo aldehido terminal. Si grupos aldehido o
cetnicos estn involucrados en el enlace entre unidades de monosacridos -como en la sacarosa.) el
disacrido no reaccionar con el reactivo de $enedict. Si slo un grupo est involucrado en el enlace -como en
la maltosa.) el otro es libre de reaccionar con el reactivo. &os a!"cares con grupos aldehido o cetnicos libres)
sean monosacridos o disacridos) son llamados a!"cares reductores -estos a!"cares son o2idados) es decir
pierden electrones) por el +u
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en el reactivo de $enedict..
&os monosacridos pueden unirse para ormar largas cadenas -polisacridos. (ue pueden ser lineales o
ramiicadas. /l almidn es un e,emplo de un polisacrido ormado por completo de unidades de glucosa. /l
almidn no reacciona con el reactivo de $enedict debido a (ue el n"mero de grupos aldehido libres -presentes
slo en el e2tremo de cada cadena. es pe(ue1o en proporcin con el resto de la mol'cula. 0or lo tanto) se
determinar la presencia de almidn con &ugol -ioduro de iodo8potasio) I29I..
MATERIALES Y REACTIVOS.
> 0or grupo5
2: m& de sudn IV Sudn III -preparado el 6.2; en etanol y acetona 151.
2: m& de reactivo de ninhidrina -preparado al 1; en acetona.
2: m& de solucin 6.:; de histidina -u otro aminocido.
2: m& de solucin 6.:; de cido asprtico -u otro aminocido.
2: m& de solucin 6.:; de aspartame
266 m& de #eactivo de $enedict
36 m& de &ugol
166 m& de ,ugo de papa
166 m& de ,ugo de cebolla
:6 m& de aceite de cocina
:6 m& de solucin de agua ,abonosa
366 m& de almidn al 1;
366 m& de glucosa al 1;
366 m& de maltosa al 1;
366 m& de sacarosa al 1;
> 0or e(uipo5
1< tubos 132166 con gradilla
1 pi!eta de agua destilada
1 peda!o de papel iltro.
> Individual5
guantes (uir"rgicos de lte2.
METODOLOGA
0arte *. Determinacin de lpidos.
1. /ti(uete % tubos en secuencia del 1 al %. *1ada 1 m& de cada una de las sustancias listadas en la tabla 1 al
tubo correspondiente. *1ada tres gotas de sudan IV a cada tubo. =e!cle y a1ada 2 m& de agua a cada
tubo. Si hay grasas o aceites presentes aparecern como gotas ro,as (ue lotan o como una capa ro,a
lotadora. #egistre en la tabla 1 las reacciones (ue ocurren en cada uno de los tubos.
>abla 1.
Sustancias #eaccin de solubilidad Sudan IV
1. *ceite comestible
2. *gua destilada
3. Solucin de alg"n aminocido
%. Solucin ,abonosa
0arte $. Determinacin de aminocidos.
1. ?btenga un peda!o de papel iltro y divdalo en cuatro cuadrante con lpi!. =ar(ue los cuadrantes como *.
$) +) y D.
2. +olo(ue una gota de cada solucin se1alada en la tabla 2 -eti(uetadas *) $) + y D. sobre el papel iltro en
el cuadrante (ue corresponda. De,e secar las gotas.
3. *pli(ue una gota de ninhidrina a cada mancha. 0recaucin4 la ninhidrina es venenosa) evite el contacto con
la piel.. De,e secar el papel a temperatura ambiente durante 26 a 36 minutos.
%. Indi(ue en la tabla 2 el contenido de cada solucin y mar(ue los cambios en coloracin.
>abla 2.
Solucin +olor inal con ninhidrina >ipo de mol'cula en solucin
*. *gua destilada
$. @cido asprtico
+. *spartame
D. Aistidina
0arte +. Determinacin de a!"cares reductores.
+uando el reactivo de $enedict es calentado con a!"cares tales como la glucosa o la maltosa) el color
del reactivo cambia de a!ul a verde a amarillo a naran,aBro,i!o) dependiendo de la cantidad de a!"car presente.
/& anaran,ado y el ro,o indican la proporcin ms alta de estos a!"cares. /l reactivo de $enedict dar positivo
para el almidn slo si 'ste se ha roto en maltosa o glucosa por el e2ceso de calor.
1. =ar(ue C tubos del 1 al C. *1ada a cada tubo 2 m& de las soluciones listadas en la tabla 3) marcando cada
n"mero con el n"mero del tubo.
2. *1ada apro2imadamente 2 m& de reactivo de $enedict a cada tubo. *gite y me!cle bien. #egistre el color
original de cada tubo en la columna de la tabla 3 D0rueba de $enedictE.
>abla 3.
0rueba de $enedict 0rueba de &ugol
>ubo +olor original
antes de calentar
+olor inal
despu's de
calentar
+olor original
antes de a1adir
&ugol
+olor inal
despu's de a1adir
&ugol
1. *gua
2. *lmidn
3. Flucosa
%. =altosa
:. Sacarosa
G. Hugo de cebolla
C. Hugo de papa
3. +aliente los tubos a ba1o =ara por 3 minutos. #egistre cada cambio de color en la columna de la tabla 3
D0rueba de $enedictE.
0arte D. Determinacin de *lmidn
/l lugol cambia de ca' o amarillo a a!ul oscuro cuando el almidn est presente) pero no cambia de
color en presencia de disacridos o monosacridos.
1. 0repare otros C tubos como se indic en la parte +. *1ada a cada tubo 1 m& de las soluciones listadas en la
tabla 3) marcando cada n"mero al n"mero del tubo.
2. #egistre el color original de cada tubo en la columna de a tabla 3 D0rueba de &ugolE.
3. *1ada 1: gotas de lugol a cada tubo) me!cle e inmediatamente registre en la tabla 1 si tiene lugar cual(uier
cambio de color. Io caliente los tubos en esta prueba.
ACTIVIDADES.
1. /2pli(ue las limitaciones de la prueba de $enedict para determinar si un a!"car en particular est o no
presente en un determinado producto alimenticio. J0or (u' todos los monosacridos) pero slo algunos
disacridos) reaccionan con el reactivo de $enedictK
2. Varias muestras desconocidas son e2aminadas para determinar el tipo de mol'culas presentes. Dada la
siguiente tabla indi(ue si las sustancias desconocidas del 1 al : son protenas) a!"cares reductores)
almidn) lpidos o aminocidos libres.
=uestra $enedict &ugol Iinhidrina Sudn IV #espuesta
1 B B B B
2 7 B B B
3 B 7 B B
% B B 7 B
: B B B 7
3. =uestras desconocidas son e2aminadas con varios reactivos colorim'tricos. Dados los resultados de la
siguiente tabla) determine cul de las cuatro opciones listadas aba,o describe me,or el contenido de cada
tubo -7L resultado positivo..
=uestra $enedict &ugol Iinhidrina Sudn IV
1 B B 7 B
2 7 B B 7
3 7 7 B 7
a. >ubo 15 a!"cares reductores
>ubo 25 &pidos y aminocidos libres
>ubo 35 *lmidn) a!"cares reductores y lpidos
b. >ubo 15 *minocidos libres
>ubo 25 *lmidn y lpidos
>ubo 35 *minocidos libres y almidn
c. >ubo 15 *minocidos libres
>ubo 25 &pidos y a!"cares reductores
>ubo 35 &pidos) a!"cares reductores y almidn
d. >ubo 15 *minocidos libres y lpidos
>ubo 25 &pidos) almidn y aminocidos libres
>ubo 35 *lmidn) aminocidos libres y a!"cares reductores
%. 3sted e2amin varias muestras y obtuvo los siguientes resultados5
Solucin &ugol $enedict Iinhidrina
I *marillo *!ul Violeta
II *marillo *naran,ado +ristalino
III Iegro *!ul +ristalino
IV +a' +eleste *marillo
V *marillo *!ul +ristalino
a. J+ul solucin contiene almidnK
b. J+ul solucin es ms parecida a la glucosaK
c. J+ul solucin contiene un aminocido dierente de prolinaK
:. J0uede la t'cnica de la ninhidrina utili!arse para determinar) adems de la presencia de un aminocido) su
concentracinK /2pli(ue.
Iota5 0reparacin del reactivo de $enedict -1666 m&..
B Disolver al calor 1C3 g de citrato de sodio y 166 g de carbonato de sodio anhidro en M66 m& de agua
destilada. Niltrar y diluir a M:6 m&.
B Disolver 1C.3 g de +uS?% en 166 m& de agua destilada. Verter esta solucin en la de citratoBcarbonato
agitando constantemente. *orar a 1666 m&.