Identificacin de hongos filamentosos

T.M Mara Cristina Diaz J

Profesor Asociado
Programa de Microbiologia y Micologa
ICBM, Facultad de Medicina
Universidad de Chile
mcdiaz @med.uchile.cl
Zigomicosis
Hialohifomicosis
Feohifomicosis
Micelio hialino
no septado
o cenoctico
Micelio hialino
septado
Micelio pigmentado
(negro), septado
Micosis causadas por hongos filamentosos
Alternaria , Cladosporium
Curvularia , Cladophialophora
Exophiala ,Phialophora
Orden Mucorales : Mucor ,
Rhizopus, Absidia
Mucormicosis
Aspergillus
Fusarium sp
Scedosporium sp
Paecilomyces sp
Acremonium sp
Otros.....
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Examen Microscpico Directo
Identificacin
Observacin macro-microscpica de la colonia
Cultivo primario : Agar Sabouraud
Subcultivo : Agar papa dextrosa,
Agar malta , Agar Czapek
Criterios de Interpretacin
Observacin
Microscpica
IDENTIFICACION !!!!!!!
COLONIA
1.- Observacin a travs de las paredes
del tubo: estructuras reproductivas .
2.- Montajes directos
Lactofenol (con o sin colorante )
azul de lactofenol
Cinta adhesiva
transparente
Examen Microscpico : Procedimientos
3.- Microcultivos o cultivos en lmina .
Hifas: hialinas septadas
hialinas aseptadas
(cenocticas)
hifas pigmentadas(dematiceas),
Caractersticas micromorfolgicas
Asexual: Conidiforos
Clulas conidigenas
Conidios
Esporangios, etc.
Sexual: Ascosporas
Basidiosporas
Zigosporas
Otras estructuras : sinemas, esporodoquios
Conidios:
Morfologa y tamao de las estructuras
reproductivas.
Conidiognesis
Blstica
Tlica
Entero-
Fialdica
Fialdica
Aneldica
Aneldica
Sincrnica
Sincrnica
Holo-
Simpodial
Simpodial
Holo-
Holotlica
Holotlica
-artrica
Holortrica
Holortrica
Enterortrica
Enterortrica
IDENTIFICACIN DE HONGOS FILAMENTOSOS
AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA
OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA
MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO
COLONIAS GRISES A NEGRAS
OBSERVAR AL MICROSCOPIO:
HIFAS SEPTADAS
PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS
CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL
Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS
Alternaria
Mucor,Rhizopus,Absidia
CONIDIOS SEPTADOS,
TRANSVERSALMENTE
Curvularia, Bipolaris
CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMRFICOS
Cladosporium Trichophyton Histoplasma
Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides
Epidermophyton
CONIDIFOROS QUE CONIDIFOROS CONIDIOS CONIDIOS
TERMINAN EN VESCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO
Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium
Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium
Colonias :crecimiento muy rpido , invasoras
Identificacin : gneros del orden Mucorales
Absidia : Colonia algodonosa blanca-
griscea
Mucor : al principio blanca y al madurar gris o
amarilla, la superficie se cubre con manchas
oscuras cuando se desarrollan los esporangios.
Rhizopus: Al principio es blanca y al madurar
es gris a caf, Sal y pimienta
reverso incoloro o crema.
Apfisis
hinchamiento
apical del
esporangi
foro)
Columela
(prolongacin
estril del
esporangiforo)
Esporangiosporas ( conidios asexuales )
Esporangiforos
( hifa frtil )
Esporangio( saco)
Hifas aseptadas
Estoln (hifas
areas que conectan
los rizoides)
Rizoides
( semejante a una raiz)
apfisis
esporangio
Esporangiosporas amarillas o caf,
ovales o elipsoides.
Ausencia de rizoides.
Posee rizoides
Esporangio redondo,
hialino con base
aplanada
- Apfisis y columela.
Columela en forma de cono
con proyeccin en el pice.
Apfisis con collarete.
Mucor
RHIZOPUS
Absidia
IDENTIFICACIN DE HONGOS FILAMENTOSOS
AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA
OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA
MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO
COLONIAS GRISES A NEGRAS
OBSERVAR AL MICROSCOPIO:
HIFAS SEPTADAS
PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS
CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL
Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS
Alternaria
Mucor,Rhizopus,Absidia
CONIDIOS SEPTADOS,
TRANSVERSALMENTE
Curvularia, Bipolaris
CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMRFICOS
Cladosporium Trichophyton Histoplasma
Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides
Epidermophyton
CONIDIFOROS QUE CONIDIFOROS CONIDIOS CONIDIOS
TERMINAN EN VESCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO
Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium
Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium
ASPERGILLUS
CULTIVO : Crecimiento rpido ( 3-6 dias ) .25 a 37C.
Colonia aterciopelada a granular.
Color inicial blanco, luego verde, amarillenta, gris, caf o
negra.
Reverso : blanco o puede observarse pigmento amarillo o
marfil.
Agar extracto de malta estimula conidiognesis
Agar Czapek estimula pigmentacin.
Hifas relativamente anchas, ramificacin dicotmica en 45.
Conidiforos rectos, no ramificados, de tamao variable.
Vescula apical redonda, hemiesfrica, elipsoides.
Filides nacen directamente de la vescula (uni o biseriada).
Conidios forman cadenas de disposicin columnar o radiada.
Micromorfologa
Principales Especies de Aspergillus
Colonia Micromorfologa
A. fumigatus Verde azulada Vesculas subesfrica, filides
a gris uniseriada y conidios columnar.
A. flavus Amarillo Vesculas pequeas-achatadas y
verdoso grandes-redondas, filides uni o
biseriadas y conidios columnar
y radiados.
A. niger Negra Vesculas grandes y redondas,
filides biseriada, conidios
radiados
A terreus Canela a caf Vesculas subesfricas, filides
biseriadas y conidios columnar.
Fusarium
La identificacin de las especies es bastante compleja .
De Hoog y Guarro :
Caracteristicas macromorfolgicas :aspecto, textura,
color de las colonias, velocidad de crecimiento.
Caracteristicas micromorfolgicos
de los cultivos :
- Forma y tamao de los
macroconidios
- Forma, cantidad y
modo de formacin de
microconidios
- Naturaleza de la clula
conidigena
- Presencia o ausencia
de clamidoconidios.
FUSARIUM
Cultivo
Crecimiento rpido, entre 25 a
30C.
3 a 6 das, colonia inicial vellosa a
algodonosa.
Micelio areo inicialmente blanco
con el tiempo pasa a rosado, rojo,
violeta, prpura, etc. sobre todo en
la parte central, por la produccin
de pigmento.
Periferia del micelio persiste de
color blanco.
Micromorfologa
Micelio hialino, septado, con
conidiforos ramificados o no, a
veces agrupados en esporodoquios.
Filides nacen directamente de la
hifa (ausencia de conidiforo).
Macroconidios : aislados o en
grupos; hialinos, alargados,
fusiformes, curvos con extremo
aguzados , multiseptados,( 2-7
clulas ) Microconidios :
unicelulares, cilndricos, nicos o
en cadena o racimos por una
sustancia mucoide.
Clamidoconidios terminales.
Micromorfologa
Fusarium solani
Colonia : lisa y algodonoso,
color blanco grisceo, crema, ocre o
rosa prpura. Reverso no coloreado o
crema plido.
Micromorfologia : Conidiforos largos.
Macroconidios : 3-5 septos , forma de media luna con
clula apical corta y redondeada y clula basal
redondeada o con forma de pie, nacen de conidiforos
cortos y ramificados - esporodoquios.
Microconidios :abundantes ,pequeos,ovales a
reniformes, producidas en monofilides alargadas y
finas.
Clamidoconidios : frecuentes, con una pared lisa o
rugosa,aisladas o en parejas, terminales o intercalares .
Fusarium oxysporum
Colonia : lisa y algodonosa,y con el tiempo
un aspecto de fieltro, blanco o salmn
plido, prpura en el centro. Reverso :
prpura.
Conidiforos : cortos, nicos o ramificados.
Microconidios : abundantes, pequeos
,ovales a reniformes, ocasionalmente, con
uno o dos tabiques , pueden formar masas
pero nunca cadenas;
Macroconidios : 1- 5 septos , fusiformes,
puntiagudos, ligeramente curvados, de
paredes finas y delicadas,
Clamidoconidios : abundantes, grandes,
hialinas, pared lisa o rugosa ,aisladas o en
parejas, intercalares o terminales.
F. verticillioides
Colonia: algodonosa, blanco a melocotn
o rosa salmn a azulado o prpura
.Reverso: crema a lila, vino tinto o
prpura
Conidiforos : nacen lateralmente de la
hifa , escasamente ramificados.
Clulas conidigenas: monofilides,
habitualmente delgadas y largas,
Microconidios : abundante , ovales o en
forma de maza con base truncada,con 1-2
septos, algunos forma cadenas.
Macroconidias :3-7 septos , ligeramente
fusiformes, casi rectas, con superficies
dorsal y ventral casi paralelas, de pared
fina y delicada. Las clulas basal y apical
son alargadas y ligeramente curvadas.
No forma clamidoconidios.
Acremonium
Cultivo
Crecen entre 25 a 37C, siendo 30C la ptima.
A los 4 o 5 das, colonia membranosa o
aterciopelada.
Color : blanco a gris rosa con reverso beige
o rosado suave.
Colonia de A. falciforme es gris-violeta y pigmento
violeta-prpura.
Micromorfologa: Hifas delgadas y delicadas.
Conidiforos : filides finas, solitarios y se forman
directamente de la hifa en posicin
perpendicular.
Conidios :unicelulares,lisos, elipsoides, se producen
individualmente, pero se mantienen unidas por
una sustancia mucosa formando racimos
esfricos.
PENICILLIUM
Cultivo
Colonia aterciopelada a pulverulenta,
verde azulada con periferia blanca.
Algunos pueden ser amarillo, verde, caf
y rojo.
Algunos producen pigmentos que difunde
al medio.
Micromorfologa
Hifas relativamente delgadas que dan
origen a conidiforos rectos y septados.
Pueden ser nicos (monoverticilados) o
estar ramificados (bi o terverticilados)
Tpicamente tiene un penicilio con
mtulas y filides que generan conidios.
Conidios ovoides a elipsoides,
unicelulares ,en cadena. rugosas.
Paecilomyces sp
P lilacinus- colonias lanosas a
pulverulentas , rosa plido a lila.
Conidiforos rugosos, ramificados,
en su extremo se desarrollan
grupos de filides de base ancha y
cuello largo
Conidios :unicelulares, lisos
,elipsoides , en largas cadenas
divergentes.
P variotti: colonias de color
amarillo verdoso o amarillo
parduzco .
Conidiforos lisos - conidios
elpticos
SCOPULARIOPSIS
Cultivo
Colonia inicial aterciopelada, luego pulverulenta.
Color inicial blanco, luego beige.
Micromorfologa
Conidiforos :generalmente cortos pero ramificados,
con ms de una clula conidiognica(anlide) por
rama.
Conidios: unicelulares en largas cadenas, globosos
a piriforme ( limn), rugosos con una base
plana por el lado proximal(base
truncada),conidios distales son de mayor
tamao y equinulados..
Scedosporium
S. apiospermum: colonias blancas y
algodonosas, luego de color gris o
gris parduzco.
Conidiforos escasamente
ramificados. Clulas conidigenas
( anlides ) cilindricos.
Conidios ovales , solitarios o en
masas mucosas.
S.prolificans: colonias verde
griscea, gris a negra.
Anlide corta con base hinchada y
angosta.
Conidios : redondos a ovales.
IDENTIFICACIN DE HONGOS FILAMENTOSOS
AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA
OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA
MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO
COLONIAS GRISES A NEGRAS
OBSERVAR AL MICROSCOPIO:
HIFAS SEPTADAS
PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS
CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL
Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS
Alternaria
Mucor,Rhizopus,Absidia
CONIDIOS SEPTADOS,
TRANSVERSALMENTE
Curvularia, Bipolaris
CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMRFICOS
Cladosporium Trichophyton Histoplasma
Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides
Epidermophyton
CONIDIFOROS QUE CONIDIFOROS CONIDIOS CONIDIOS
TERMINAN EN VESCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO
Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium
Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium
ALTERNARIA
Cultivo : colonia algodonosa, caf
oscuro a verde oliva oscuro con una
franja blanca alrededor de la colonia.
Pigmento negro.
Micromorfologa
Conidiforos septados,pigmentados
simples o ramificados
Conidios: oscuros, con septos
transversales y longitudinales,,
pared lisa o rugosa, pueden estar
solos o en cadenas.
CURVULARIA
Cultivo
Colonia aterciopelada, caf oscuro o
negro a verde oliva oscuro.
Reverso : caf o negro.
Micromorfologa
Conidiforos septados, simples o
ramificados, con pigmento oscuro y
geniculados.
Conidios: curvado, con septos
transversales con 3 a 5 clulas ,
oscuros, la 3ra clula es asimtrica
y ms oscura que las otras.
Cladosporium
Colonias aterciopeladas a
pulverulentas , verde oliva a verde
oscuro.
Conidiforos ramificados , conidios
en cadenas y ramificados con
cicatrices prominentes y ms
oscuras.- Ramoconidios
Cladophialophora :
Colonias aterciopeladas,
pulverulentas, gris olivceo.( 42C).
Conidios unicelulares en cadenas
poco ramificadas, pigmentadas.
Chile :C.bantiana ( absceso
cerebral ).