UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ

DEPARTAMENTO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS

CET677- MTODOS DE SEPARAO EM QUMICA




CROMATOGRAFIA PLANAR



Fernando Faustino de Oliveira
Geisa Pereira Figueredo, Anal Rocha Costa e Thacilla Ingrid de Menezes

________________________
1- Professor da disciplina de Mtodos de Separao em Qumica
2- Alunas do Curso de Bacharelado em Qumica





ILHUS
JULHO/2014



UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ
DEPARTAMENTO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS
CET677- MTODOS DE SEPARAO EM QUMICA




CROMATOGRAFIA PLANAR





Relatrio apresentado como
requisito parcial para avaliao da
disciplina de mtodos de separao em
qumica ministrada pelo professor Dr.
Fernando Faustino de Oliveira,
entregue pelas alunas Geisa Pereira
Figueredo, Anal Rocha Costa e
Thacilla Ingrid de Menezes.


ILHUS
JULHO/2014

INTRODUO
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos
componentes de uma mistura, realizada atravs da distribuio destes
componentes entre duas fases, que esto em contato ntimo. Uma das fases
permanece estacionria enquanto a outra se move atravs dela. Durante a
passagem da fase mvel sobre a fase estacionaria, os componentes da mistura
so distribudos entre duas fases, de tal forma que cada um dos componentes
seletivamente retido pela fase estacionaria, resultando em migraes
diferenciais destes componentes. (COLLINS,1994)
A relao entre as velocidades de movimento da substncia frente ao
solvente pode ser denominada de Rf, e calculada atravs da razo entre a
distncia percorrida pela substancia a partir do ponto de aplicao at o meio
da mancha, e a distncia percorrida pelo solvente a partir do ponto de
aplicao. Na prtica, os valores de Rf obtidos em uma placa raramente se
repetem em, devido a fatores particulares tais como, tamanho da partcula do
adsorvente, composio do solvente, ativao, condies de estocagem das
placas, espessura da camada do adsorvente e etc.
A cromatografia pode ser classificada pelo tipo de interao entre a
fase mvel e a estacionaria, pela natureza das fases ou quanto ao fluxo da fase
mvel empregado. Quanto ao fenmeno principal responsvel pela separao
possvel classifica-los como: adsoro, troca inica, excluso e partio.
Quanto ao estado fsico da fase mvel empregada cromatografia pode ser
classificada em gasosa e liquida. (DIAS, 2004)
Existem diversos tipos de cromatografia, as principais so: cromatografia
em papel, cromatografia de camada delgada, cromatografia em coluna,
cromatografia gasosa e cromatografia lquida de alta eficincia. (DIAS, 2004)
processo cromatogrfico adequado depender do tipo de equilbrio
estabelecido entre as fases estacionria e mvel e a mistura que se quer
separar, deste modo a seleo do tipo de cromatografia a ser utilizada
depender do material a ser isolado, sendo que diversos mtodos
cromatogrficos podem ser usados sequencialmente para se obter um
composto puro. (DIAS, 2004)
Na Cromatografia em Camada Delgada (CCD), a fase estacionria
uma camada fina formada por um slido granulado, normalmente utiliza-se a
slica, depositada sobre uma placa de vidro, a qual se aplica pequenas gotas
de soluo das amostras a serem analisada em um ponto prximo ao extremo
inferior da placa, e ento, coloca-se a mesma em um recipiente contendo a
fase mvel, a qual pode ser um solvente ou mistura de solventes. Neste tipo de
cromatografia a polaridade do solvente dever ser de acordo com a substncia
que se deseja separar, esta tcnica baseia-se na interao superficial ou seja
na adsoro. (RADLER, 2003).
A cromatografia em papel (CP) uma das tcnicas mais simples e que
requer menos instrumentos para sua realizao, porm, a que apresenta as
maiores restries para sua utilizao em termos analticos.
Neste tipo de cromatografia, uma amostra lquida flui por uma tira de
papel adsorvente disposto verticalmente, sendo que o papel composto por
molculas de celulose que possuem uma forte afinidade pela gua presente na
mistura de solvente, e pouca afinidade pela fase orgnica, atuando como
suporte inerte contendo a fase estacionria aquosa que por sua vez polar. A
medida que o solvente contendo o soluto flui atravs do papel, uma partio
deste composto ocorre entre a fase mvel orgnica que pouco polar e a fase
estacionria aquosa. Desta forma, parte do soluto deixa o papel e passa a
fazer parte da fase mvel (PEREZ, 2002).

Ambas cromatografias em camada delgada e papel so tidas como
cromatografia planar e podem ser utilizadas efetivamente para promover a
separao de substncias naturais tais como carotenoides, que possuem cor
intensa devido ao grande nmero de instauraes conjugadas presentes na
molcula, estes compostos podem ser encontrados na natureza em uma gama
de em alimentos tais como, urucum, tomate pimento e aafro dentre outros.
A pratica realizada teve por objetivo separa e identificar carotenoides
com base nas suas interaes com as fases mvel, estacionaria e seus
respectivos Rf.

MATERIAIS E MTODOS

Reagentes
Acetona
Hexano

Vidrarias
Erlenmeyer
Bquer
Funil de separao
Basto de vidro
Placas cromatogrficas
Tubos capilares
Proveta

Diversos
Manta de aquecimento
Suporte universal
Estufa
Suporte para preparo de placas cromatogrficas.


Mtodos

Preparo do material para anlise cromatogrfica
Foram cortados pimentes de trs coloraes diferentes amarelo,
vermelho e verde em um erlenmeyer e adicionou-se a fim de promover a
extrao uma mistura de hexano acetona 5:1 e deixou-se em repouso como
segue a figura 01:




Figura 01: Amostra dos pimentes deixados em repouso
Em seguida promoveu-se a macerao dos mesmos com um basto de vidro

Preparo de placas cromatogrficas
Pesou-se cerca de 7 g de slica e depositou-a em um erlenmeyer
adicionando-se posteriormente 14,00 mL de gua destilada. Promoveu-se a
homogeneizao do material por cerca de um minuto depositando o
posteriormente na superfcie de placas devidamente limpas e desengorduradas
apoiadas no suporte para preparao das mesmas, em seguida as placas
foram postas em estufa durante trinta minutos para que houvesse sua ativao.

Aplicao de spots das amostras em placas cromatogrficas
Aps serem retiradas da estufa as placas cromatogrficas foram
resfriadas e aplicou-se spots dos compostos de colorao verde, vermelho e
amarelo. Deixou-se evaporar o solvente e em seguida, transferiu-se a placa para uma
cuba de vidro contendo uma mistura hexano/acetona 5%. A cuba foi tampada at o
final da eluio, conforme mostrado na Figura 02.




Figura 02: a) aplicao de um spot; b) insero do papel de filtro na coluna cromatogrfica.

Aplicao de spots das amostras em papel
O processo citado cima foi repetido para cromatografia em papel
exceto as etapas de preparao onde o papel foi simplesmente cortado e a de
ativao desnecessria nesta tcnica.

RESULTADOS E DISCUSSO
A extrao dos pimentes com a mistura hexano/acetona possibilitou a
retirada dos principais pigmentos tais como caroteno, criptoxantina,
capsantinas e capsorubina dos mesmos. Durante a realizao das
cromatografias planar foi notrio o surgimento de trs regies em cada
cromatograma proveniente dos pigmentos extrados, notando-se tambm que o
cromatograma do pigmento verde apresenta principalmente criptoxantinas e
outras xantofilas de menor polaridade; o cromatograma do pigmento amarelo
apresenta principalmente capsantinas, capsorubina e outras xantofilas de maior
polaridade; o cromatograma do pimento vermelho apresenta trs regies
intensas, indicando a presena de carotenos, criptoxantinas, capsantinas,
capsorubina e outras xantofilas mais polares. Na figura 1 encontra-se os
cromatogramas obtido na cromatografia em camada delgada e em papel.

Figura 1. Dados da cromatografia em camada delgada e em papel (eluio com
hexano/acetona 5%)
A razo de fracionamento (Rf) pode ento ser calculada pela equao
01, neste caso a fim de confirmar qual composto apresentou maior ou menor
interao com as fases estacionarias e mvel

equao 01

Tabela 1. Dados das substncias obtidas pela cromatografia em camada delgada
Substncia R
f
Frmula qumica do carotenoide

Amarelo
0,87

C
40
H
56
(licopeno)

Verde
0,98

C
40
H
56
(-caroteno/-caroteno)


Vermelha

0,86
0,40
0,60
0,93


Gama-caroteno
alfa-criptoxantina
capsatina
capsorubina

Tabela 2. Dados das substncias obtidas pela cromatografia em papel
Substncia R
f
Frmula qumica do carotenoide
Amarelo 0,77 C
40
H
56
(licopeno)
Verde 0,81
0,29
C
40
H
56
(-caroteno/-caroteno)
Gama-caroteno

Vermelha 0,77
0,60
0,29
alfa-criptoxantina
capsatina
capsorubina

Como observado nas tabela 1 e 2 acima os compostos que possuem
maior carater polar ficaro mais fortemente adsorvidos na fase estacionaria
neste caso silica gel que possue em sua estrutura grupos OH prontos para
fazer ligao de hidrogenio dentre outras interaes tornando estes compostos
mais retidos, migrando mais lentamente apresentando portanto menor Rf, em
contrapartida os compostos que apresentaram-se mais soluveis na fase movel
que por sua vez teve um carater menos polar tiveram uma corrida maior
apresentando portanto maior Rf.
A mudana na polaridade do eluente foi feita reduzindo-se a mesma
com a finalidade de efetivar a separao dos compostos, onde a mesma
passou a ter uma quantidade maior de hexano correspondendo a 10%. Os Rf
obtidos encontram-se relacionados na tabela 03:
Tabela 2. Dados das substncias obtidas pela cromatografia em camada delgada
com eluio 10%
Substncia R
f
Frmula qumica do carotenoide

Amarelo
0,74 C
40
H
56
(licopeno)

Verde
0,96
0,29

C
40
H
56
(-caroteno/-caroteno)


Vermelha
0,30
0,75
0,61
0,30

Gama-caroteno
alfa-criptoxantina
capsatina
capsorubina

Com a mudana da proporo dos solventes, verificou-se que houve
uma melhor separao das substncias contida no pigmento vermelho.

CONCLUSO
Com o experimento realizado observou-se a importncia da polaridade
do solvente o que implica diretamente na separao dos constituintes
presentes nos pigmentos dos pimentes em estudo. Com a analise das
estruturas dos carotenoides percebeu-se que no extrato do pigmento verde as
criptozantrinas estavam presentes, no amarelo as capsantinas e capsorubinas
e no vermelho apresentou as substncias presente no extrato amarelo e verde
e outros carotenos visto que nesse extrato houve uma maior quantidade de
substncia separada.

REFERNCIAS
COLLINS, C.H.; Braga, G.L.; Bonato, P. Introduo a Mtodos Cromatogrficos, 5
ed., Campinas:Unicamp, 1993, 279P.
DIAS, A. G.; COSTA, M. A. da; GUIMARES, P. I . C. Guia Prtico de Qumica
Orgnica, v. 1. Rio de Janeiro: Intercincia, 2004, 183p.
PEREZ, T. B. Noes bsicas de cromatografia. Biolgico, So Paulo, v.64, n.2,
p.227-229, jul./dez., 2002.