Guia Lab Bioquim 2014-2 Corregido

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
SAN AGUSTN DE AREQUIPA

FACULTAD DE INGENIERA DE
PROCESOS
ESCUELA PROFESIONAL DE
INGENIERA QUMICA
AUTORES:
Dr. Ing. Ral Omar Gallego
!ara
Ing. Mar"#a !$ana Q$e%$e&ana
'e(regal
Ing. )ar#na Moran Me(#na
GUA DE PR*CTICA
'IOQUMICA APLICADA
PROLOGO
Se ha desarrollado la presente Gua de Prctica con el objeto
de hacer llegar al interesado los alcances actuales de la bioqumica
aplicada en el laboratorio.
Los agigantados pasos del avance del conocimiento humano
tienen como base el desarrollo de la biologa molecular, lo que a su
vez ha generado el desarrollo de la bioqumica como consecuencia
natural.
La aplicacin de los nuevos conocimientos de la bioqumica han
determinado el gran impulso que la bioqumica aplicada ha dado a la
nueva tecnologa de los bioprocesos.
odos los avances de la biotecnologa tienen como sustento el
conocimiento previo de la biologa ! de la bioqumica aplicada.
La presente Gua de Prcticas brinda a los estudiantes de
"ngeniera #umica las destrezas bsicas para el empleo de los
di$erentes instrumentos requeridos para el estudio prctico de la
bioqumica.
Los %utores
NDICE
PROLOGO
1
NDICE
Pgs.
PRCTICA 1 SEPARACIN EN CAPA FINA DE UNA MEZCLA DE AMINOCIDOS..................
PRCTICA 2 DETERMINACIN DE LAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS
PROTENAS...................................................................................................................
PRCTICA 3 DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE PROTENAS........................
PRCTICA 4 CONCENTRACIN DE ETRACTOS PROTEICOS POR DILISIS.......................
PRCTICA ! DETERMINACIN DE PROTENAS POR MICRO"#$ELDA%L..............................
PRCTICA & REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE CAR'O%IDRATOS................................
PRCTICA ( META'OLISMO DE CAR'O%IDRATOS) FERMENTACIN..................................
PRCTICA. * INMO'ILIZACION DE ENZIMAS + CELULAS. PRODUCCION DE
ETANOL POR SACC%AROM+CES ,-.-/0s01- INMO2ILIZADA............................
PRCTICA 3 ETRACCIN DE ENZIMAS 2EGETALES..............................................................
PRACTICA 14 DETERMINACIN DE ACTI2IDAD ENZIMATICA EN UREASA..........................
PRACTICA 11 CINETICA ENZIMATICA EN UREASA......................................................................
PRACTICA 12 ETRACCION DE ADN DE %IGADO DE POLLO....................................................
INSTRUCCIONES
GENERALES
%. &usca los conceptos antecedentes ! reprtalos, previo a
la realizacin de la prctica.
2
&. 'onstru!e la hiptesis de trabajo, antes de solicitar el
material.
'. Lee cuidadosamente los e(perimentos antes de
ejecutarlos.
). *ecurre a tus libros de te(to !+o de consulta para aclarar
dudas ! comprender el porqu, de las operaciones que se
han e$ectuado- o consulta de inmediato al pro$esor
responsable.
.. *ealiza cuidadosamente tus e(perimentos, procurando
entender el porq u, de los hechos acaecidos.
/. %l e$ectuar cada uno de los pasos del desarrollo
e(perimental, observa minuciosamente ! anota los
cambios ocurridos0 1olor, color, gases, liberacin o
absorcin de calor, etc.2, en tu manual o cuaderno.
G. %l concluir el desarrollo e(perimental, resuelve el
cuestionario para su $utura revisin.
3. .labora tus conclusiones.
Ma+er#al ne"ear#o ,ara +ra-a.ar ,or al$mno:
a2 In(#/#($almen+e: 4n a bata de trabajo con manga larga.
b2 Por e%$#,o: Una cinta masking-tape de 5+6 pulgada, un
paquete de toallas de papel, un marcador indeleble, un
lienzo para limpiar la mesa.
3
PRECAUCIONES EN EL DESARROLLO DE CADA
E0PERIMENTO
Las medidas oportunas ! la comprensin de las prcticas a
seguir, har del laboratorio un lugar seguro como cualquier saln
de clases. Para ello debern tenerse en cuenta, en $orma
general, las siguientes precauciones0

5. 7bserva dnde dejas el material caliente, cerciorndote
de que est, $ro antes de tomarlo con la mano.
6. 'uando calientes un tubo de ensa!e, no lo apuntes hacia ti o
hacia tus compa8eros, puede pro!ectarse su contenido.
9. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lvate
inmediatamente con agua abundante ! llama a tu
instructor.
:. ;unca pruebes una sustancia si no se te indica. Puede ser
veneno.
<. %l detectar el olor de un lquido, no pongas la cara sobre la
boca del recipiente. 'on tu mano abanica hacia ti el aroma.
=. %ntes de usar un reactivo, lee dos veces la etiqueta para
estar seguro de su contenido.
>. Los aparatos o recipientes en los que ha!a
desprendimientos gaseosos no deben cerrarse
herm,ticamente, pues las presiones $ormadas en su interior
pueden e(plotarlo.
?. Los tubos de ensa!e no deben calentarse por el $ondo sino
por las paredes, para evitar la e(pulsin de su contenido.
@. ;o arrojes cuerpos slidos en los lavabos, a menos que
est,n pulverizados ! sean $cilmente arrastrables o solubles
en agua. ;o viertas directamente los cidos en los lavabos,
!a que los corroe.
5A. 'uando interrumpas un e(perimento, coloca
etiquetas con le!endas apropiadas a los $rascos ! matraces
que contengan sustancias, as te ser $cil identiBcarlos.
4
55. 'uando trabajes con $uego, mant,n tu cabello
recogido para evitar se incendie.
56. 'uando necesites encender el mechero, nunca lo
hagas con un papel, puede iniciar un incendio.
El ,ro1eor #n(#"ar2 el $o a(e"$a(o 3 la $-#"a"#4n (e la
#n+ala"#one (e ag$a5 l$&5 (rena.e5 ga5 3 o+ra %$e
e6#+en en el la-ora7 +or#o. Se re"om#en(a %$e lo al$mno
real#"en $n "ro%$# (e (#"8a #n+ala"#one 3 ,ra"+#%$en
#m$la"ro (e e/a"$a"#4n (el e(#9"#o.
REGLAMENTO INTERNO DE LA'ORATORIO
:. endrn derecho al acceso ! uso de laboratorio Cnicamente
los alumnos que estn matriculados en el curso respectivo o
las personas debida7 mente autorizadas por la )ireccin.
;. Los alumnos respetarn durante todo el perodo de
prcticas el horario que tengan asignado.
<. Los alumnos se presentarn a la prctica en su horario
asignado acompa8ados de su pro$esor.
=. .n las prcticas de la primera hora 1>0AA a.m.2, habr una
tolerancia m(ima de 5< minutos para ingresar al laboratorio.
>. % partir de las ?0AA a.m., el alumno tendr 5A minutos de
tolerancia para presentarse al laboratorio.
?. ;o se permitir la entrada al laboratorio si el alumno no se
presenta con su bata.
@. .n ningCn caso el alumno podr sustraer del laboratorio,
aparatos o materiales sin la autorizacin respectiva por escrito.
A. .s obligacin de los alumnos conservar en buen estado las
!
instalaciones, materiales ! equipo del laboratorio, as como
mantenerlo aseado, depositando la basura en los cestos que
para tal e$ecto e(isten.
B. .l material ! equipo de laboratorio recibido deber ser
revisado de inmediato ! reportar cualquier anomala o
desper$ecto al responsable de laboratorio.
:C. .s obligacin del alumno entregar al responsable de
laboratorio el material ! equipo usado, limpio ! en buen
estado, < minutos antes del t,rmino de la sesin de prctica
::. .l material o equipo que se deteriore o se pierda ser
repuesto por los responsables en un plazo no ma!or de < das
hbiles, de lo contrario se perder el derecho de uso de
laboratorio.
:;. Sin e(cepcin de persona, est prohibido $umar e ingerir
alimentos ! bebidas en el interior del laboratorio.
:<. Las prcticas realizadas ! reportadas en un curso no son
trans$eribles a otros alumnos.
:=. Si por causas de $uerza ma!or se suspendiera alguna prctica
programada en el curso, ,sta se realizar en la sesin inmediata
sin perjuicio para el alumno.
:>. Las prcticas se evaluarn de acuerdo al criterio del
pro$esor de cada asignatura.
:?. Los alumnos que muestren indisciplina dentro del
laboratorio sern sancionados de acuerdo a la gravedad de su
$alta !a que este tipo de conducta puede originar un accidente.
&
PR*CTICA :
SEPARACIDN EN CAPA FINA
DE UNA MEECLA DE AMINO*CIDOS
(
PR*CTICA :
SEPARACIDN EN CAPA FINA
DE UNA MEECLA DE AMINO*CIDOS
I. O'!ETIVO:
%plicar la t,cnica de cromatogra$a en capa Bna para la
identiBcacin de aminocidos presentes en una muestra biolgica.
II. FUNDAMENTO TEDRICO:
AMINO*CIDOS
Los aminocidos son las unidades estructurales de las protenas.
Por lo tanto, si a una determinada protena se le somete a una
hidrlisis !a sea cida o alcalina- ,ste proceso rendir una mezcla
de sus aminocidos constitu!entes, los cuales pueden ser
susceptibles de ser analizados o identiBcados por m,todos
cromatogrBcos.
odas las protenas son polmeros ! los monmeros
que se cambian para $ormarlos son los a
Daminocidos.
Los di$erentes aminocidos se di$erencian por sus
cadenas laterales.
"n vivo el p3 Bsiolgico es pr(imo a la neutralidad.
.l pEa de los grupos carbo(lo ! amino de los al$a
Daminocidos es apro(imadamente 6 ! 5A
respectivamente.
Por lo tanto, en la pro(imidad del p3 neutro, el
grupo carbo(ilato habr perdido un protn ! el
grupo amino habr captado un protn para dar la
$orma FG".*"7;.
.n los genes, de todos los organismos estn
codiBcados 6A aminocidos que se incorporan a las
protenas.
odos los aminocidos son enantimeros 1L2
.(isten otros aminocidos 1no proteicos2 ! tambi,n
ha! aminocidos modiBcados que se hallan en las
protenas.
*
La variedad de las cadenas laterales 1hidro$licas,
hidr$obas, cidas, bsicas, neutras2 permite una
gran complejidad $uncional en las protenas.
CROMATOGRAFA
H,todo de Separacin
Permite separar, aislar e identiBcar componentes
estrechamente relacionados presentes en mezclas
complejas.
.n estos m,todos se emplea0
D /ase estacionaria 0 Slido+lquido
D /ase mvil 0 liquido+gas
ILos componentes de una mezcla se transportan a
trav,s de una $ase estacionaria por medio de una
$ase mvil que Ju!eK.
Las separaciones se basan en las di$erencias de
velocidad de migracin entre los componentes de la
muestra.
Croma+ogra1Fa en Ca,a F#na
iene 6 partes0 /ase mvil ! /ase estacionaria.
.l soporte o /ase .stacionaria.
.s un slido poroso capaz de retener solvente ! slido
pueden ser.
.l soporte poroso est adherido a la base, est pegado gracias
a la presencia de S7
:
'a que a!uda a pagar el soporte.
.n las le!endas de las placas de slica se encuentran como0
3
.l FnS bajo luz 4L la placa de silica gel se torna verde ! si ha!
alguna marcha de la migracin de muestra o estndares esta
marcha !a no es verde sino violeta.
III. PROCEDIMIENTO:
Pr#mer Pro"eo0 Sem-ra(o (e la m$e+ra
Se siembra los estndares ! la muestra con un
capilar bastante Bno.
ener precaucin de que en el sembrado se intenta
tener una mancha entre 5 ! 6 mm de dimetro.
La distancia entre las siembras puede ser no menor
de =D>mm apro(imadamente.
Seg$n(o Pro"eo: El$#4n
4na vez sembrada la muestra se procede a la $ase
mvil con la a!uda de un solvente de elusin.
Para ello se coloca dentro de una cmara de elusin
14
I.l solvente debe estar por debajo del sembrado de la
muestraK.
.l solvente comienza a subir por capilaridad.
Las muestras se comportan di$erente segCn el
solvente utilizado ! sus componentes algunos
migrarn rpidamente otros no.
Ter"er Pro"eo0 V#$al#&a"#4n o Re/ela(o
.l producto puede verse0
Por s mismo porque tiene color.
Por incidencia de 4L 16<: nm+9=< nm2 porque no se ve a simple
vista.
4tilizando vapores de iodo, el iodo se impregna dnde est la
mancha dando coloraciones amarillas pro$undas.
4sando m,todos qumicos, usando una sustancia qumica como
revelado, 1 en este caso ninhidrina en butanol2
11
C$ar+o Pro"eo0 *eporte de los *esultados
Se describe la tra!ectoria de un soluto particular en $uncin de su
$actor de retardo *
/
que se deBne como0
La distancia recorrida por un soluto se compara $recuentemente
con la de una sustancia patrn en id,nticas condiciones.
ILa razn de estas distancias se designa por *
$
K
IV. PARTE E0PERIMENTAL:
Sembrado de estndares de aminocidos ! muestras
'orrida cromatogrBca. .lusin
Hezcla solvente entre $enol0 agua 1><06<2
apar herm,ticamente ! dejar que proceda el desarrollo de la
separacin cromatogrBca, hasta que el solvente ha!a
alcanzado el $rente trazado en la parte superior de la placa.
*evelado del cromatograma
" 4na vez que ha!a alcanzado el $rente del solvente.
" )estapar la cmara ! retirar con cuidado la placa de vidrio. D
Secar la placa con a!uda de una secadora de cabello.
12
" 'on la a!uda de un spra! aplicar ;inhidrina A.5M en butanol
sobre la placa. Secar la placa con una secadora.
"dentiBcacin
Luego proceder a identiBcar las manchas e(istentes que
debern corresponder a aminocidos para ello se debern hacer
los clculos de los *$de los estndares ! luego los *$
correspondientes a las manchas de las muestras.
*(. ;inhidrina es la reaccin que identiBca aminocidos a
trav,s de una coloracin azul violeta.
V. CUESTIONARIO:
<.5. 3aga un esquema de los resultados observados.
<.6. 'alcular los *$ de los estndares ! muestras.
<.9. "dentiBcar que aminocidos estn presentes en las muestras
problemas.
<.:.
13
<.<. #u, es la cromatogra$a de e(clusin molecular ! la
cromatogra$a de intercambio inico ! cules son sus
aplicaciones.
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
NNNNNNNNNNNNNN
<.=. #u, m,todos e(isten para el anlisis de aminocidos de las
protenas.
<.>. "ndicar tipos de solventes de elusin para la $ase mvil tanto
para silica ! alCmina.
<.?. 3aga el mecanismo de reaccin de la ;inhidrina con los
aminocidos.
<.@. La cromatogra$a en capa Bna separa las sustancias segCn su
peso molecular.O /undamente.
14
1!
VI. O'SERVACIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VII. CONCLUSIONES
VIII. 'I'LIOGRAFA
1&
PR*CTICA ;
DETERMINACIDN DE LAS PROPIEDADES QUMICAS
DE LAS PROTENAS
1(
PR*CTICA ;
DETERMINACIDN DE LAS
PROPIEDADES QUMICAS DE LAS
PROTENAS
I. O'!ETIVOS:
%l t,rmino de esta prctica, el alumno ser capaz de describir !
demostrar de manera cualitativa las propiedades qumicas de las
protenas en base a los siguientes aspectos0
Solubilidad de las protenas.
Las propiedades electroqumicas de las protenas.
.l e$ecto cidoDbsico en la solubilidad de las protenas.
II. PRERREQUISITOS:
5. Salting "n ! Salting 7ut.
6. %gentes precipitantes de protenas.
9. Propiedades Bsicoqumicas del agua.
:. .cuacin de 3endersonD3asselbach.
III. INTRODUCCIDN:
Se considera a las protenas como polmeros biolgicos de
aminocidos. .n las protenas e(isten 6A tipos de aminocidos
di$erentes los cuales estn en un nCmero ! secuencia
determinados por el cdigo gen,tico.
'on respecto a su tama8o, las protenas van desde un peso
molecular de =AAA )alton hasta varios millones de )alton con una
considerable variacin de $ormas ! estructuras. Para su estudio se
consideran cuatro niveles de complejidad estructural- siendo la
ms simple la estructura primaria ! la ms compleja la estructura
cuaternaria cu!a con$ormacin depende de di$erentes $uerzas
qumicas de atraccin ! repulsin que son ejercidas sobre la
estructura molecular de la protena ! por lo tanto son
responsables de su estabilidad.
Por convencin se acepta dividir a las protenas en dos grupos0
protenas simples ! conjugadas, las cuales presentan di$erencias
en sus propiedades qumicas ! $sicas. Sin embargo, para los Bnes
que se persiguen en esta prctica se les mencionara en $orma
general.
Los $actores que pueden a$ectar la solubilidad de una protena
son0 La $uerza inica del medio, el p3. la temperatura ! la
constante diel,ctrica del solvente. 'uando ha! un cambio de
cualquiera de estos $actores, la protena responde con una
intensidad proporcional al cambio, esto es, que puede a$ectar la
estructura proteica de una manera superBcial o lo hace tan
drsticamente que desnaturaliza a la protena. Por $ortuna, en
nuestro organismo, la variacin de tales $actores es mnima por lo
que son imperceptibles los cambios en la protena.
1*
IV. MATERIAL:
59 tubos de ensa!e de 5A P 5<A mm
5 pipeta de 5A ml
< pipetas de < ml
5 pipeta de < ml
5 gradilla
V. METODOLOGA:
.n esta prctica se trata de provocar cambios de solubilidad en
protenas que se encuentran en el organismo, mediante la
modiBcacin las propiedades de los solventes, para establecer
una relacin con los e$ectos que se pueden presentar en el
organismo.
F$n(amen+o Q$Fm#"o0
Las protenas poseen cargas positivas ! negativas dependiendo
del p3 de la solucin en la cual se encuentran- cuando se
neutralizan, se presenta precipitacin proteica.
La adicin de una sal a una solucin proteica modiBca la
constante diel,ctrica del solvente permitiendo una ma!or
solubilidad de la protena. Sin embargo, cuando se a8ade e(ceso
de una sal, se neutralizan las cargas de la protena ! ,sta tiende a
precipitar. .ste mismo e$ecto ocurre al a8adir sales metlicas
cargadas electropositivamente. 'on la adicin de un cido o una
base a una solucin proteica se alcanza un estado en que ha! el
mismo nCmero de aniones que de cationes. .ste e$ecto, neutraliza
la carga de la protena ! tiende a precipitar. .l p3 que determina
el nCmero igual de cargas de signos opuestos se denomina punto
isoel,ctrico.
E6,er#men+o No. :
De+erm#na"#4n (el ,$n+o IoelG"+r#"o (e la "aeFna ,or a(#"#4n
(e $n 2"#(o.
Preparar una solucin de caseinato de sodio, tomando 6<A mg de
casena, 6A ml de agua destilada ! < ml de ;a73 5;. 'uando la
solucin sea per$ecta, se agregan < ml de cido ac,tico 5 ;.
Hezclar bien, diluir a <A ml con agua destilada. Si la solucin no
est suBcientemente clara, se puede Bltrar.
Q Preparar los siguientes tubos como se indica a continuacin
T$-
o
,
H
Ag$a
(e+#la(
a
A".
A"G+#"o
C.C:N
A".
A"G+#"o
C.:
A".
A"G+#"o
:.CN
Cae#n
a+o (e
So(#o
: A.<A C.?; C C :.C
; @.@> :.;> C C :.C
13
< A.@> C C.;> C :.C
= A.> C C.> C :.C
> A.C C :.C C :.C
? @.C C ;.C C :.C
@ >.C C =.C C :.C
A :.C C A.C C :.C
B @.= C C :.? :.C
:C >.A C C <.; :.C
Hezclar bien , esperar 9A minutos ! observar los cambios que
presente la solubilidad de la casena en cada tubo. *eportar el
punto isoel,ctrico correspondiente al tubo donde se presenta la
ma!or precipitacin.
'alcular el p3 de cada tubo utilizando la ecuacin de 3endersosnD
3asselbach.
E6,er#men+o No. :
De+erm#na"#4n (el ,$n+o IoelG"+r#"o (e la "aeFna ,or a(#"#4n
(e $n 2"#(o.
T$-o ,H Sol$-#l#(a(
:
;
<
=
>
?
@
A
B
'ul es el punto isoel,ctrico de la protena O
VI. CUESTIONARIO:
=.5. )e qu, $actores depende la solubilidad de una protena en el
agua.
=.6. .(plique en t,rminos Bsicoqumicos el e$ecto que provoca la
adicin de un cido o una base $uerte.
24
21
=.9. .(plique cmo a$ecta un cambio en la constante diel,ctrica
del agua a la solubilidad de una protena.
=.:. #u, es el Salting in ! qu, tipo de compuestos pueden
promoverlo.
=.<. #u, es el Saltingout ! qu, tipo de compuestos pueden
promoverlo.
=.=. #u, relacin e(iste entre el punto isoel,ctrico ! la solubilidad
de una protena.
=.>. #u, es la ecuacin de 3endersonD3asselbach ! en que casos
est indicado utilizarse.
22
=.?. Hencione que propiedades Bsicoqumicas de la albCmina le
permiten interaccionar ! transportar cualquier compuesto
inclu!endo hidro$bicos a trav,s de un medio acuoso.
VII. O'SERVACIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VIII. CONCLUSIONES
23
I0. 'I'LIOGRAFA
24
PR*CTICA <
DETERMINACIDN ESPECTROFOTOMITRICA DE
PROTENAS
2!
PR*CTICA <
DETERMINACIDN
ESPECTROFOTOMITRICA DE
PROTENAS
I. O'!ETIVO
)eterminar la concentracin de una solucin de protenas
mediante la reaccin de &iuret ! el espectro$otmetro.
II. FUNDAMENTO:
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar
mediante la reaccin del &iuret. .l reactivo &iuret contiene
'uS7: en solucin alcalina. La reaccin se basa en la
$ormacin de un compuesto de color violeta, debido a la
$ormacin de un complejo de coordinacin entre los iones 'u
1R62 ! los pares de electrones no compartidos del nitrgeno
que $orma parte de los enlaces peptdicos.
Los compuestos que contienen 6 o ms enlaces peptdicos
producen un color violeta
caracterstico con soluciones diluidas de sul$ato de cobre
1'uS7:2 en solucin alcalina.
2&
.l color se debe al compuesto de coordinacin $ormado al
e(istir enlaces qumicos entre los pares de electrones libres
del tomo de nitrgeno presente en los enlaces peptdicos de
las cadenas proteicas con el ion cobre.
Los espectros de absorcin de los complejos entre los iones de
'uR6 ! las di$erentes protenas son similares pero no id,nticas
por lo tanto, se puede utilizar una protena como patrn de
calibracin. La curva de calibracin obtenida por este m,todo,
se har utilizando como patrn solucin de e(tracto de
levadura, cu!a concentracin es de ? mg+ml preparada con
agua destilada.
E,e"+ro1o+ome+rFa. Pr#n"#,#o -2#"o
La reaccin de biuret es cuantiBcable, es decir a ma!or
concentracin de protenas, ma!or intensidad de color violeta,
estas reacciones en las que el color $ormado es proporcional a
la cantidad de sustancia se llaman reacciones colorim,tricas.
Hidiendo la intensidad de color se podra conocer la
concentracin de la sustancia que lo produce. Para ello se
aplican t,cnicas $otom,tricas, empleando un aparato llamado
colormetro 1si mide slo un determinado color2 o
espectro$otmetro 1si realiza una medida de todo el espectro
de colores2.
La luz es parte de la radiacin electromagn,tica, que se
propaga de $orma ondulatoria. Las distintas radiaciones
luminosas se di$erencian unas de otras por sus longitudes de
onda que se mide en nm. La luz visible engloba las radiaciones
comprendidas entre 9?AD><A nm, que corresponden a los
colores del arcoris, de tal $orma que cada color corresponde a
una radiacin con una longitud de onda especBca. .l
espectro$otmetro dispone de una lmpara que emite luz
monocromtica, de una longitud de onda determinada, que
incide ! atraviesa la muestra coloreada a medir, ! de un
detector, que medir la cantidad de luz que no es absorbida
por la muestra. Para cada sustancia determinada, se utilizar
la radiacin de longitud de onda a la que absorba ms cantidad
de luz 1 a la longitud de onda de m(ima absorbancia2.
2(
Su $uncionamiento se basa en la le! de &eerDLambert0 la
$raccin de luz incidente que es absorbida por una solucin es
proporcional a la concentracin de soluto ! al espesor de la
sustancia atravesada por la luz. La relacin entre luz incidente
1"o2 ! la reJejada 1"2 dar una idea de la cantidad de radiacin
que ha sido absdorbida por la muestra. .sto es lo que se
denomina A-or-an"#a JA-K4Den#(aO,+#"a JDOK
Lale! de &eerDLambert se $ormula como0
A- JDOK Le 6 C 6 :
Siendo e el coeBciente de e(tincin molar 1especBco para
cada sustancia a una longitud de onda ! en unas condiciones
determinadas 1HD5, cmD52, ' es la concentracin de la muestra
a medir 1H2, 5 el espesor de la muestra. La ma!ora de los
espectro$otmetros utilizan cubetas para la muestra de 5 cm
de espesor, por lo que 5 se puede ignorar. %s la concentracin
desconocida de la sustancia ser0
C L A- Me
2*
III. MATERIALES N EQUIPO
.spectro$otmetro
Gradilla para tubos de ensa!o
ubos de ensa!o
Lasos de precipitado
Probetas, Pipetas
Hateriales0 e(tracto de levadura, reactivo biuret
IV. PROCEDIMIENTO
Real#&a"#4n (e $na "$r/a ,a+r4n: 'omo se desconoce el
coeBciente de e(tincin molar 1S2 de las protenas coloreadas con
el reactivo biuret, se proceder a construir una curva patrn,
midiendo la absorbancia de soluciones con concentraciones
conocidas de protena, para sobre ella interpolar el valor de %bs
de la solucin problema ! determinar su concentracin
grBcamente ! tambi,n por regresin lineal. Para ello se dispone
de una solucin de 5A mg+ml de protena 1e(tracto de levadura2 a
partir de ella se realizan diluciones conocidas aplicando la
$rmula0
'i ( Li T '$ ( L$
)nde0
'i T concentracin de la solucin madre inicial
Li T volumen a tomar de la solucin madre inicial
'$T concentracin Bnal de la solucin a preparar
L$T volumen total Bnal de la solucin a preparar
.n ? tubos de ensa!o se preparan, a partir de la solucin madre
1'iT5A mg+ml2 las soluciones de la tabla.
23
Con".
F#nal. Sol.
a
,re,arar
Vol$me
n Sol.
Ma(re
#n#"#al
Vol$m
en
ag$a
Vol$me
n R6.
'#$re+
Vol$m
en
F#nal
A-.
>@Cn
m
T$-o MgMml ml ml ml ml
'lan"
o
C C5C =5C = A
: C5> <5> = A
; :5C <5C = A
< :5> ;5> = A
= ;5C ;5C = A
> ;5> :5> = A
? <5C :5C = A
@ <5> C5> = A
A =5C C5C = A
M$e+
ra
=5C C5C = A
%l a8adir el reactivo biuret dejar reposar 5A minutos ! leer la
absorbancia.
Hedicin de la absorbancia en el espectro$otmetro0
a2 Seleccionar la longitud de onda, <>A nm 1 longitud de m(ima
absorbancia para la reaccin del biuret2
b2 Poner en la cubeta del espectro$otmetro el contenido del tubo
blanco, secarla ! limpiarla bien por $uera e introducirla en el
espectro$otmetro.
c2 %justar la lectura a 5AA de transmitancia ! A de absorbancia.
d2 Se devuelve el contenido al tubo original ! se mide la
absorbancia de las soluciones de los otros tubos, comenzando
por el de menor concentracin.
e2 Limpiar con agua la cubeta, secarla por $uera ! medir la %bs
del tubo muestra.
$2 'on las medidas obtenidas de los tubos 5 al ? ! el blanco
1%bsTA2, se constru!e una recta en papel milimetrado,
34
representando las concentraciones en el eje de abscisas ! las
%bs. en las ordenadas.
g2 "nterpolar la %bs de la protena problema en la grBca !
calcular su concentracin.
h2 'onsiderando que la absorbancia es directamente proporcional
a la concentracin ! que la relacin es lineal0 U T a R b P
1U T % R & ( 'onc.2. 4tilizando regresin lineal se obtiene
el valor de los coeBcientes % ! & ! se puede despejar
concentracin que en este caso es de la muestra desconocida.
31
V. CUESTIONARIO
<.5 V'ul es la concentracin de protenas de la muestraO
<.6 VSe podra determinar la concentracin de cualquier
muestra de protenas con esta curva patrnO
<.9 VLos aminocidos ! los dip,ptidos daran positiva la
reaccin del &iuretO
<.: "nvestigue si e(iste alguna protena en la que no est,
presente ninguna aminocido con anillo benc,nico en su
cadena lateral, e indique que consecuencias tendra sobre la
determinacin espectro$otom,trica
32
33
VI. O'SERVACIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VII. CONCLUSIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VIII. 'I'LIOGRAFA
34
3!
PR*CTICA =
CONCENTRACIDN DE E0TRACTOS
PROTEICOS POR DI*LISIS
3&
PR*CTICA =
CONCENTRACIDN DE E0TRACTOS
PROTEICOS POR DI*LISIS
I. O'!ETIVO
%umentar la concentracin de las protenas en un e(tracto o
solucin que las contenga.
II. FUNDAMENTO
La dilisis es una t,cnica que separa las mol,culas de acuerdo a
su tama8o usando membranas semipermeables que contienen
poros de dimensiones menores que las macromol,culas que se
deseen separar como las protenas, los poros permiten la di$usin
de las mol,culas de solventes, sales ! otras mol,culas peque8as,
pero bloquean el paso de protenas por su gran tama8o.
Se usan membranas de celo$n 1acetato de celulosa2,
nitrocelulosa, colodin, u otras de naturaleza semipermeable.
Los mecanismos de transporte son0 osmosis, ! di$usin por
di$erencia de concentracin.
III. MATERIALES N EQUIPOS
A5 pliego de papel celo$n.
5Eg de azCcar.
Solucin de e(tracto proteico al A.<M.
Pipeta de 5A ml.
Laso de precipitados.
Piceta.
IV. MITODO
Preparar una bolsa con el papel celo$n, de modo que no se
presenten $ugas al llenarla con una solucin.
Preparar en el vaso de precipitados <A ml de una solucin de
protena al A.<M.
'omprobar la concentracin de protena con el
espectro$otmetro a 6?A nm.
Llenar la bolsa de celo$n con <A ml de solucin proteica,
usando para tal Bn la pipeta de 5A ml., ! sellar luego la bolsa
de modo que no presente $ugas.
Preparar un tazn con azCcar, ! colocar all la bolsa de celo$n
conteniendo la solucin proteica.
4ntar toda la bolsa de celo$n, con el azCcar, cubri,ndola por
completo.
.sperar 5< a 9A min ! retirar la bolsa del azCcar, observando
los cambios ocurridos.
3(
Hedir el volumen de lquido que qued en la bolsa de celo$n
! comparar con el volumen inicial.
Hediar nuevamente la concentracin de protenas en el
espectro$otmetro a 6?A nm.
V. CUESTIONARIO
Se8ale las principales t,cnicas de separacin de solutos por
membrana, ! las principales aplicaciones de cada una de
ellas.
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
NNNNNNNNNNNN
"nvestigue la composicin qumica de la membrana utilizada !
e(plicar las razones de su porosidad.
NNNNNNNNNNNN
.$ectCe los clculos de variacin en el volumen ! la
concentracin de la protena en solucin.
"ndique el principio ! la ecuacin bsica del transporte de
solventes por osmosis.
3*
"ndique el principio ! la ecuacin bsica del transporte de solutos
por di$usin debida a di$erencias de concentracin.
VI. O'SERVACIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VII. CONCLUSIONES
VIII. 'I'LIOGRAFA
33
44
PR*CTICA >
DETERMINACIDN DE PROTENAS POR MICRO7
)!ELDAHL
41
PR*CTICA >
DETERMINACIDN DE PROTENAS
POR MICRO7)!ELDAHL
I. O'!ETIVO.
)eterminar indirectamente el contenido de protenas totales en
una muestra desconocida.
II. FUNDAMENTO
.l m,todo de microDWjeldahl es una simpliBcacin hecha por
3%'3 en el proceso Ejeldahl tradicional. *ealizando el mismo
anlisis en un tiempo corto ! con peque8as muestras.
Se $unda en la trans$ormacin del nitrgeno presente en las
protenas a nitrgeno inorgnico. Para ello se siguen tres etapas
claramente di$erenciadas
5. .n la primera, se digiere el material por accin del cido
sul$Crico en presencia de o(idantes $uertes 1per(ido de
hidrgeno2, de esta manera todo el carbono presente se libera
como '76 ! nitrgeno como ;39, luego este se combina con
el e(ceso de cido sul$Crico para dar sul$ato de amonio.
6. .n la segunda se destila el amonio, previamente liberado por la
accin de un lcali $uerte ;a1732, el amoniaco liberado se
recibe en una solucin de cido d,bil en presencia de
colorante indicador.
9. .n la tercera se titula la solucin con un cido $uerte
cuantiBcando el nitrgeno presente.
Luego se aplica la relacin siguiente0
M; T ml.;.$c.meq.5AA
peso de muestra
dnde0 ml.;.$c.meq T peso de nitrgeno en la muestra
ml T gasto de cido sul$Crico en la titulacin 1ml2
;. normalidad del cido
/c. /actor de correccin del cido
meq.T peso del miliequivalente del nitrgeno
Suponiendo que la muestra solo contiene protenas simples
con 5=M de ;, el porcentaje de protenas ser0
Protena T =.6<(;
III. PROCEDIMIENTO
.l proceso de determinacin se hace en tres etapas0
DIGESTIDN.
Hedir : ml de muestra liquida 1o A.6< g si es slido2 !
colocar en el matraz de digestin
%gregar : ml de cido sul$Crico concentrado al matraz
42
LeriBcar que el control automtico del digestor este en
::AX' ! que ha!a succin en la columna de
$raccionamiento.
)igerir la muestra por : min despu,s de haber alcanzado
la temperatura indicada.
%8adir 5A ml de per(ido de hidrgeno al <AM a la
muestra a trav,s de un embudo de la columna de
$raccionamiento. Si el digesto no se torna incoloro, a8adir
porciones adicionales de < ml hasta que el digesto se
aclare.
*etirar el matraz del calentador ! dejarlo en$riar. #uitar
la columna de $raccionamiento, ! colocar el matraz sobre
un bloque ! tapar hasta que se ha!a en$riado.
)iluir el digesto con <A ml de agua destilada.
DESTILACIDN
.l digesto obtenido ! diluido a <A ml se traslada a un
baln de destilacin.
Preparar un vaso de 5AA ml que contenga 56.< ml de
cido borrico al :M 1 en volumen2 adicionndole indicador
azul de metileno ! rojo de metilo, dando una coloracin
violeta.
.l baln de destilacin que contiene el digesto se a8ade
59 a 5< ml de hidr(ido de sodio al <AM v+v ! 6 a 9
granallas de zinc.
'onectar el equipo de destilacin ! destilar el digesto
durante unos 5A a 6A min 1hasta que el vaso receptor
tenga una coloracin verdusca ! su volumen sea ms o
menos 9 veces del volumen inicial2
TITILACIDN.
Preparar una solucin de cido sul$Crico A.5 ; !
valorizarla.
itular el contenido del matraz receptor hasta que vire de
verde a violeta
IV. CUESTIONARIO
.(plique la di$erencia entre protenas simples ! conjugadas.
43
NNNNNNNN
"ndique ejemplos ! estructuras primarias de dos protenas
simples ! dos protenas conjugadas
.scriba las ecuaciones de las reacciones de cada una de las
etapas durante el proceso de determinacin del nitrgeno
.$ectu, los clculos ! determine el contenido de protenas en la
muestra
"ndique que tipo de enlaces de una protena se rompen durante
la etapa de digestin
.(plique el objetivo de la etapa de destilacin.
.(plique porque la titilacin se hace con cido sul$Crico ! no con
un lcali.
44
V. O'SERVACIONES
VI. CONCLUSIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNN
VII. 'I'LIOGRAFA
4!
4&
PR*CTICA ?
REACCIONES DE IDENTIFICACIDN DE CAR'OHIDRATOS
4(
PR*CTICA ?
REACCIONES DE IDENTIFICACIDN
DE CAR'OHIDRATOS
I. O'!ETIVOS:
*econocer los principios inmediatos de los carbohidratos.
)i$erenciar e(perimentalmente monosacridos, disacridos !
polisacridos.
/amiliarizarse con la clasiBcacin de los hidratos de carbono
en reductores ! no reductores.
.studiar las propiedades del almidn.
II. FUNDAMENTO TEDRICO:
Se denominan carbohidratos o glucsidos los derivados
aldehdicos cetnicos, reales o potenciales de alcoholes
polivalentes o sus productos de condensacin segCn la cantidad
de glucsidos o azCcares sencillos que se obtengan por hidrlisis
de los policarbohidratos.
Se les clasiBca como0
Polisacridos 1celulosa, almidn2
risacridos 1raBnosa2
)isacridos 1sacarosa, lactosa, maltosa2, !
Honosacridos
Los monosacridos por el grupo carbonilco pueden ser aldosas o
cetosas por el. nCmero de tomos de o(igeno, pueden ser
he(oaas 1glucosa, galactona, manosa, $ructosa2, pentosa
1arabinosa, (ilosa, ribosa, li(osa2, terrosas 1treosa ! eritrosa2.
Los carbohidratos poseen algunas propiedades de las $unciones
carbonilo ! o(hidrilo !, adems, algunas especBcas. odos son
ptimamente activos. Por el calor ! la accin de cidos $uertes se
deshidratan, dando en algunos casos derivados del $ur$ural.
Los hidratos de carbono ms abundantes de la bis$era estn
constituidos por el almidn ! celulosa que son polmeros de
glucosa presentes en plantas.
.l almidn est distribuido ampliamente en las plantas que lo
almacenan en granos ! en tub,rculos como reserva alimenticia
para el momento de la germinacin. odos los tipos de almidn
producen un color azul con el !odo, lo cual sirve de indicador
cualitativo sensible, tanto para ensa!ar el !odo como el almidn.
La hidrlisis del almidn catalizada por cidos lo convierte en
varias clases de de(trinas, en maltosa ! por Cltimo en ) 1R2
glucosa.
.l ensa!o con !odo se utiliza para seguir la marcha de la
hidrlisis puesto que la coloracin va cambiando de azul a rojo a
medida que decrece el peso molecular delcompuesto orgnico.
Los grupos $uncionales e(istentes en el almidn ! en la celulosa
son los grupos hidro(ilo ! acetal. .stos polisacridos tienen
di$erente conBguracin, siendo el almidn un glucsido ! la
4*
celulosa un $ Dglucsido. ambi,n diBeren en el tama8o teniendo
lacelulosa un peso molecular medio mucho ma!or que el del
almidn.
III. MATERIALES N REACTIVOS
*eactivo Holisch
*eactivo /ehling
*eactivo ollens
*eactivo SeliYanoZ
*eactivo &ar$oed
Sol. glucosa 5M
Sol. $ructuosa 5M
Sol. sacarosa 5
Sol. lactosa 5M
Sol. almidn 5M
Sol. sacarosa <M
Sol. 3'l 5AM
Sol. ;a73 5AM
Sol. !odo D !odurado
ubos de ensa!o
Pipetas
&a8o de agua hirviente
Pinzas
&a8o hirviente
Laso de precipitados
Luna de reloj
IV. PROCEDIMIENTO:
Rea""#one genGr#"a (e lo "ar-o8#(ra+o
Rea""#4n (e Mol#"8
.n = tubos de ensa!o ponga respectivamente 5 ml. de una
solucin de glucosa al5M, 5 ml. de solucin de $ructuosa o
levulosa al 5M, 5 ml. de una solucin de sacarosa al 5M, 5 ml.
de una solucin de lactosa al 5M, 5 ml. de una solucin de
almidn al 5M ! en el Cltimo 5 ml. de agua 1testigo2. % cada
una agr,guele 6 gotas
de reactivo de Holisch- inclinando el tubo, deje resbalar por
las paredes 6 ml. de cido sul$Crico concentrado.
7bserve el color violceo del anillo $ormado en la inter$ase
entre los dos lquidos. %note aquellas soluciones que den
positiva la prueba.
Rea""#one E,e"F9"a
Rea""#one (e Fe8l#ng
.n < tubos de ensa!o mezclar en cada uno A.< ml. de solucin
% de /ehling con A.< ml. de la solucin & de /ehling,
43
agr,gueles 5 ml. de la solucin de los carbohidratos utilizados
en el e(perimento anterior.
"ntroducir los tubos en un ba8o hirviente, observe si ha!
cambios de color, $ormacin de precipitados.
Rea""#4n (e Tollen
.n < tubos de ensa!o colocar a cada uno 5. ml. de *eactivo de
ollens recientemente preparado, a8adir a cada uno 6 ml. de
las soluciones de carbohidratos utilizados anteriormente.
"ntroducir los tubos en un ba8o hirviente, observe si ha!
$ormacin de espejo de plata ! cuales carbohidratos dan
negativa esta reaccin.
*ealice una comparacin de estos resultados con los de la
prueba de /ehling.
Rea""#4n (e Sel#OanoP
.n < tubos de ensa!o coloque 5 ml. del reactivo SeliYanoZ,
luego a8ada 9 gotas de solucin de los carbohidratos
utilizados anteriormente, luego lleve los tubos a ba8o
hirviente. %note el tiempo en que se colorea cadaa tubo ! el
color adquirido.
Rea""#4n (e 'ar1oe(
.n < tubos de ensa!o coloque 5 ml. del reactivo &artoed luego
a8ada 5 ml. de solucin de los carbohidratos utilizados
anteriormente, luego llevar los tubos a ba8o hirviente !
observar la $ormacin de un precipitado de color rojo ladrillo,
lo que indicar la presencia de monosacridos.
Los disacridos tambi,n precipitan (ido cuproso, pero mu!
lentamente.
H#(r4l## (e la Sa"aroa
.n 9 tubos de ensa!o coloque < ml. de solucin de sacarosa al
<M, ll,velos a ba8o hirviente ! a cada tubo a8ada volCmenes
iguales de agua para el primer tubo, cido clorhdrico al 5AM
en el segundo tubo, e hidr(ido sdico acuoso al 5AM en el
tercero.
'alentar los tubos durante cinco minutos ! ensa!e a
continuacin la reaccin de una porcin de cada mezcla con la
solucin de /ehling. V#u, conclusiones deduceO
Ena3o (el Alm#(4n 1ren+e al Io(o
.n un tubo de ensa!o coloque = ml de solucin de almidn al
5M, a8ada una gota de solucin de "odo D lodurada, observe el
color de la solucin. Luego caliente la solucin coloreada a
ebullicin ! observe el e$ecto, observe tambi,n qu, e$ecto
produce el en$riamiento de la solucin.
!4
H#(r4l## (el Alm#(4n
.n un vaso de precipitados coloque <A ml de solucin de
almidn al 5M, a8ada 5 ml de cido dorhdrico concentrado.
3ierva la solucin ! retire muestras de U ml. a intervalos
pr(imos, ensa!ando su reaccin $rente al iodo. %note el color
en los di$erentes ensa!os.
'uando la solucin !a no produzca coloracin con el iodo,
neutralcela ! ensa!e la reaccin de una muestra $rente al
/ehling. /ormule estructuralmente los productos Bnales de la
hidrlisis del almidn 1un disacrido ! un monosacrido2.
V. CUESTIONARIO:
<.5. "ndique la composicin de los reactivos utilizados en la
prctica 1*. Holish, *. SeliYanoZ, * &ar$oed, * /ehling2.
<.6. .labore un diagrama de Jujos del proceso de produccin de
la glucosa a nivel industrial.
<.9. V% qu, se debe la coloracin azul del iodo sobre las muestras
de almidnO
!1
NNNNNNNNNNNN
<.:. V'mo se utiliza el ensa!o del iodo para seguir la hidrlisis
del almidnO
NNNNNNNNNNNN
VI. O'SERVACIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VII. CONCLUSIONES
!2
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VIII. 'I'LIOGRAFA
NNNNNNNNNNNN
!3
P*['"'% >
H.%&7L"SH7 ). '%*&73")*%7S0 /.*H.;%'"\;.
!4
PR*CTICA @
META'OLISMO DE
CAR'OHIDRATOS:
FERMENTACIDN.
I. O'!ETIVOS
52 7bservar e(perimentalmente los $enmenos de respiracin
celular anaerbica 1$ermentacin2 en levaduras.
62 'omprobar el e$ecto de inhibidores de la gliclisis ! de la
respiracin celular.
92 %plicar los conceptos de sustrato, inhibidores competitivos,
inhibidores no competitivos, o(idoDreduccin, modiBcacin de
p3 e inhibidores en la interpretacin de sus resultados.
II. ACTIVIDADES
/ermentacin alcohlica en levaduras
1Saccharom!cescerevisiae2.
La $ermentacin alcohlica en levaduras ocurre de acuerdo a la
reaccin0
'
=
3
56
7
=
6'7
6
6 '
6
3
<
73 1etanol2
.l etanol se acumula en el medio ! el '7
6
es liberado como gas,
por lo que se puede medir la $ermentacin por la produccin de
'7
6
.
III. PROCEDIMIENTOS.
9.5. 'omplete la siguiente batera de tubos0
T$-o : ; < =
S$,en#4n
(e le/a($ra
@Q
5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
Sol.
Gl$"oa
A 5 ml 5 ml 5 ml
Sol. NaF A A 5 ml A
Ag$a
(e+#la(aJ=
<RCK
6 ml 5 ml A A
Sol.Ro.o
Ne$+ro
A A A 5 ml
%gitar por inversin para homogenizar el contenido de cada
tubo.
9.6. apar cada tubo con un $rasco de penicilina invertido,
presionndolo girar rpidamente de manera que el tubo
quede invertido dentro del $rasco. Harcar el nivel de la
burbuja en la parte superior del tubo ! amarrando con un
!!
elstico los : $rascos, ponerlos a incubar en un ba8o de agua
a :9]'.
9.9. %l cabo de 9A min. Harque el nivel Bnal de la solucin en el
tubo ! mida el volumen de gas producido con una pipeta con
agua.
9.:. 'ul es el objetivo del tubo :O LeriBque el p3 en el tubo 6
con papel p3.
9.<. %note ! discuta sus resultados.
Sol$"#one:
5 Solucin de levadura0 disolver a homogeneidad > g de
levadura en 5A ml de agua destilada a :9]' ! completar a 5AA
ml con agua destilada a :9]'.
6 Solucin de glucosa A,5 H
9 Solucin de ;a/A,5 H
: Solucin rojo neutro A,A6 H
Papel p3.
IV. O'SERVACIONES
!&
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
V. CONCLUSIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VI. 'I'LIOGRAFA
!(
P*['"'%. ?
";H7&"L"F%'"7; ). .;F"H%S U '.L4L%S. P*7)4''"7; ).
.%;7L P7* S%''3%*7HU'.S cerevisiae ";H7L"L"F%)%.
!*
PR*CTICA. A
INMO'ILIEACION DE ENEIMAS N
CELULAS. PRODUCCION DE ETANOL
POR SACCHAROMNCES "ere/##ae
INMOVILIEADA.
I.7 O'!ETIVOS
5 "nmovilizar S. cerevisiae en soporte de agarD agar.
6 7btener etanol a partir de levaduras inmovilizadas.
9 .valuar por re$ractometra el grado alcohlico del producto
de la $ermentacin
II.7 ACTIVIDADES
/ermentacin alcohlica en levaduras
1Saccharom!cescerevisiae2.
La $ermentacin alcohlica en levaduras ocurre de acuerdo a la
reaccin0
'
=
3
56
7
=
6'7
6
6 '
6
3
<
73 1etanol2
.l etanol se acumula en el medio ! el '7
6
es liberado como gas,
por lo que se puede medir la $ermentacin por la produccin de
'7
6
! por la concentracin del producto $ormado o por la
disminucin de la concentracin del sustrato 1en grados &ri(2
III.7 MATERIALES.
D Haterial biolgico0 Levadura S. cerevisiae, mosto de uvas
D *eactivos0 %garDagar, solucin de glucosa <M
D Haterial0 balones, probetas, pipetas, baguetas, hipod,rmicas de
6Acc, esptulas, picetas, papel toalla.
D .quipos0 &alanza, re$ractmetro, ba8o mara.
IV.7 PROCEDIMIENTO
A"on(#"#onam#en+o (e ma+er#ale:
Solubilizar la levadura comercial de paniBcacin en <A ml de agua
destilada.
.n un matraz disolver <g de agarDagar en 6<A ml de agua destilada,
con calentamiento ! agitacin constante.
'alibrar el ba8o de mara a :A^', para mantener dentro del agar
licuado.
'olocar en una probeta de 5AAml, <Aml de aceite vegetal ! ponerla
en re$rigeracin 1apro(imadamente :^'2, por 9A minutos.
Inmo/#l#&a"#4n (e la en&#ma:
Hezclar <A ml de la suspensin de levaduras ! <A ml de agar agar
licuado ! homogenizar.
omar con una hipod,rmica de 6A ml un volumen de la mezcla !
dejar caer gota a gota en la probeta que contiene el aceite vegetal
re$rigerado.
*epetir el paso anterior hasta agotar la mezcla.
)ecantar los pellets ! lavarlos tres veces con agua destilada con
movimientos rotatorios suaves.
Secar los pellets en papel toalla.
!3
O-+en"#4n (el mo+o (e $/a:
7btener por prensado <Aml de mosto de uva.
/iltrar con una gasa el jugo obtenido.
omar una alcuota ! leer los grados bri( o porcentaje de azCcar en
el re$ractmetro.
O-+en"#4n (e e+anol:
'olocar los pellets en un vaso de precipitados con <Aml de mosto de
uva, 1o <Aml de una solucin de glucosa al <M2. oAmar una alcuota,
considerando la muestra a tiempo cero ! leer los grados bri( o
porcentaje de azCcar en el re$ractmetro.
%gitar la mezcla por :< minutos. omar alcuotas cada 5< minutos.
Leer los grados bri( en el re$ractmetro para cada alcuota.
V .7 CUESTIONARIO.
5.D"ndique la importancia de la inmovilizacin de enzimas !+o c,lulas.
SSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSSS
6D 'ul es el $undamento de la inmovilizacin de levaduras en agarO.
9.D .(plique las caractersticas coagulantes del agarDagar.
:.D 'omo e(plica que la glucosa llegue a tener contacto con las
c,lulas de levadura, si estas estn atrapadas en la matriz de agarD
agar.
<D Presente al menos un caso detallado de aplicacin de la
inmovilizacin de enzimas.
&4
=D #u, otros m,todos para la inmovilizacin se utilizanO
VI.7 O'SERVACIONES N COMENTARIOS
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VI.7 CONCLUSIONES
VIII.7 'I'LIOGRAFA
&1
&2
PR*CTICA B
E0TRACCIDN DE ENEIMAS VEGETALES
&3
PR*CTICA B
E0TRACCIDN DE ENEIMAS
VEGETALES
I. O'!ETIVO.
.(traer la enzima 4reasa de la cscara de $rejol ! comprobar su
actividad cataltica.
II. FUNDAMENTO.
Las enzimas son protenas con accin cataltica.
Las protenas se encuentran en el interior de las c,lulas en un
estatus particular, a p3 Bsiolgico, ! con estructura nativa
estabilizada por diversas mezclas de sustancias.
La e(traccin de enzimas debe realizarse de modo que conserven
las caractersticas estructurales ! las propiedades $uncionales de
las mismas.
Las leguminosas son conocidas por su alta actividad uresica,
debido a la enzima ureasa presente en la cscara.
La enzima ureasa al actuar sobre el sustrato Crea provoca la
hidrlisis de esta con la consiguiente liberacin de amoniaco !
anhdrido carbnico, segCn la siguiente reaccin.
;3
6
7T' R 3
6
7 DDDDDDDDDD 6;3
9
R '7
6
;3
6
La actividad uresica se puede comprobar haciendo reaccionar
el amoniaco liberado con el *eactivo de ;essler 1E
6
3g
5:
2. .ste
reactivo es el Uoduro doble de Hercurio ! Potasio, que al
reaccionar con el amoniaco en medio alcalino da productos de
color amarilloDanaranjado 1complejo cu!a $rmula se supone sea
3g7;3
6
"2, cu!a intensidad de color puede medirse a longitudes
de onda de :A< a :6A nm.
5<A gr. )e cubierta de $rejol, solucin de CreaA.9 H, agua
destilada
&uZer $os$ato A.AA< H de p3T>.:, reactivo ;essler.
.spectro$otmetro, &a8o Hara, &alanza, .quipo de
Bltracin, papel Bltro, Gradilla de tubos, A6 Bolas de 5AAml,A:
tubos de ensa!o de 5A ml. &aln de <AAml. Laso de
precipitados de <AA ml.
"L. PROCEDIMIENTO.
E6+ra""#4n (e la En&#ma.
*emojar 6AA gr. )e $rejol en <AAml de agua destilada o
1agua hervida $ra2 , despu,s de 6: horas remover la
cscara por $riccin, ! proceder a escurrir el agua.
&4
Preparar 6AA ml. )e buZer $os$ato de sodio A.AA< H.
1 P7
:
3;a
6
2 , ! 6AAml. )e solucin .)% A.AA5 H. 4sando
en ambos casos agua destilada $ra, mezclar ambas
soluciones, ! en$riar a :X'. .n un baln de <AA ml.
Pesar 6A gr de cscara de $rejol ! colocarlo en un vaso de
precipitados de <AA ml.
%gregar @A ml. )e buZer $os$ato previamente preparado,
! licuar cuidando se mantenga baja la temperatura.
/iltrar la mezcla con una gasa ! enjuagar con 5A ml. )e
agua destilada.
'entri$ugar la suspensin a 5:,AAA g. Por 5A min. o pasar
la solucin por un Bltro rpido ! enjuagar el papel Bltro
con 5A ml. )e agua destilada.
Separar el sobrenadante ! medir el volumen Bnal del
e(tracto obtenido, llevar a re$rigeracin.
Preparar un cuadro de resultados.
'%S'%*% &4//.* %G4% .P*%'7 /";%L 1ml2
De+erm#na"#4n (e ,reen"#a (e ,ro+eFna en el e6+ra"+o
,or e,e"+ro1o+ome+rFa.
Preparar tubo blanco0 tomar :ml de agua destilada ! : ml de
reactivo biuret.
Preparar tubo muestra0 tomar 9 ml de e(tracto decantado, 5
ml de agua ! : ml de reactivo biuret.
'alibrar el espectro$otmetro ! leer la absorbancia a <>A
nm. Para comprobar la presencia de protenas.
%notar la lectura de %bsorbancia.
Com,ro-a"#4n (e La a"+#/#(a( en&#m2+#"a.
Preparar dos tubos de ensa!o ! rotular uno como tubo
muestra ! el otro como tubo de blanco.
.n ambos tubos agregar A.6 ml de solucin de Crea al A.9
H ! 5.< ml de buZer $os$ato.
Llevar ambos tubos a preDincubacin a 9>X' por 9 min.
%gregar al tubo muestra 5.A ml. del e(tracto ! :.? ml de
agua, al tubo blanco <.? ml de agua, agitar suavemente,
para lograr mezclar.
Llevar ambos tubos a incubacin en ba8o mara a 9>X'
por 5< min.
&!
)espu,s de incubar los tubos, adicionar el *eactivo
;essler a los tubos- 1A.< ml a cada tubo. Lolumen total ?
ml.
)ejar reposar por : min. Para atemperar al medio
ambiente.
'alibrar el espectro$otmetro a :6A nm.
Hedir la absorbancia. La muestra de e(tracto dar
coloracin ! un alta absorbancia por el amoniaco liberado.
V. CUESTIONARIO.
.(plique por qu, es necesario licuar la cscara durante la
e(traccin de la enzima ureasa.
)iga que pruebas se tienen de haber e(trado realmente enzimas
vegetales.
3aga los clculos de reactivos para las soluciones que se
prepararon.
.(plique el papel que juegan en la e(traccin el buZer $os$ato !
la re$rigeracin.
&&
NNNNNNNNNNNN
3aga un diagrama de Jujo cuantitativo del proceso de e(traccin
utilizado en laboratorio.
VI. O'SERVACIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN
VII. CONCLUSIONES
NNNNNNNNNNNNNNNNNN
VIII. 'I'LIOGRAFA
&(
NNNNNNNNNN
&*
PRACTICA :C
DETERMINACIDN DE ACTIVIDAD ENEIMATICA EN
UREASA
&3
PRACTICA :C
DETERMINACIDN DE ACTIVIDAD
ENEIMATICA EN UREASA
I. O'!ETIVO
)eterminar la capacidad cataltica o actividad enzimtica de la
enzima ureasa.1enz. 4reaDamidohidrolasa .'.9.<.5.<2
II. FUNDAMENTO.
La actividad enzimtica 142 es la e(presin del poder cataltico
de la enzima ! se obtiene midiendo la velocidad de la reaccin
que cataliza.
La actividad enzimtica 142 se deBne como la cantidad de enzima
contenida en 5 ml de solucin que trans$orma o produce 5 mg de
sustrato producto por minuto medidas en las condiciones
optimas de operacin de la enzima.
La ureasa es una enzima que se encuentra en diversos
organismos vivos, mas no en el organismo humano. %lgunas
$uentes comunes son las bacterias, o la cscara de $rejol.
La ureasa cataliza la descomposicin de la Crea segCn la
reaccin0
;3
6
'7 R 3
6
7 6;3
9
R '7
6
;3
6
La velocidad de una reaccin enzimtica como la velocidad de
cualquier reaccin puede ser determinada midiendo0
5 la cantidad de sustrato trans$ormado en un determinado
tiempo de reaccin
6 la cantidad de productos $ormados. 'ualquiera de ellos.
Para el caso de la reaccin catalizada por ureasa se puede hacer
el ensa!o midiendo la cantidad de urea en el tiempo, o midiendo
cualquiera de los productos 1'7
6
;3
9
2 producidos en un
tiempo determinado.
Por $acilidad se medir la cantidad de amoniaco $ormado, lo cual
se hace por medios espectro$otom,tricos utilizando el reactivo
;essler que es un ioduro doble de mercurio ! potasio que al
reaccionar con el amoniaco en medio alcalino $orma un complejo
de color anaranjado casta8o.
6E
6
3g"
:
R ;3
9
R 9E73 3g7;3
6
" R >E" R 63
6
7
La intensidad del color $ormado ser directamente proporcional
a la cantidad de amoniaco presente en cada tubo ! se medir la
absorbancia de cada tubo a :6A nm 1Bltro morado2.
III. DESARROLLO E0PERIMENTAL.
Ma+er#ale.
Preparar <A ml de solucin de urea A.9 H.
(4
Preparar 5AA ml buZer $os$ato A.A<H de p3T>.:, con
.)% A.AA5H
*eactivo ;essler.
<A ml de solucin de ureasa A.= mg+ml en buZer $os$ato
p3, >.: 1 a :X'2
5AA ml de solucin de sul$ato de amonio al <(5AD: H
1<(5AD:milimoles+ml2
Ma+er#al (e /#(r#o.
A6 Bolas de <A ml.
A6 Bola de 5AAml.
A? tubos de ensa!o.
A5 gradilla para tubos.
A5 espectro$otmetro.
ba8o de hielo.
"ncubadora a ba8o mara.
De+erm#na"#4n (e la "$r/a (e "al#-ra"#4n.
Se preparan en los tubos de ensa!o soluciones de sul$ato de
amonio segCn la tabla siguiente0
Patr
n
;X
'oncentra
cin 1;3
9
2
mol+ml
S7
:
1;3
9
2
6
nmol+ml
ml de
S7
:
1;3
9
2
6
&uZ
er
1ml2
;essl
er
1ml 2
Lolum
en
Bnal
ml
%bsorban
cia
:6A nm.
&lan
co
AA A.A A.A >.<A A.< ?.A
5 <.A A.A5 >.:@ A.< ?.A
6 5A A.A6 >.:? A.< ?.A
9 5< A.A9 >.:> A.< ?.A
: 6A A.A: >.:= A.< ?.A
< 6< A.A< >.:< A.< ?.A
= 9A A.A= >.:: A.< ?.A
'on los datos obtenidos se constru!e la curva de
equivalencia o curva de calibracin.
Me(#(a (e la a"+#/#(a( $rea#"a.
Preparar dos tubos de ensa!o ! rotular uno como tubo
muestra ! el otro como tubo de blanco.
(1
.n ambos tubos agregar A.6 ml de solucin de Crea al A.9 H
! 5.< ml de buZer $os$ato.
Llevar ambos tubos a preDincubacin a 9>X' por 9 min.
%gregar al tubo muestra 5.A ml. de solucin de ureasa ! :.?
ml de agua, al tubo blanco <.? ml de agua, agitar
suavemente, para lograr mezclar.
Llevar ambos tubos a incubacin en ba8o mara a 9>X' por
5< min.
)espu,s de incubar los tubos,Sacar el tubo de incubacin e
introducir en ba8o de hielo para detener la reaccin.
%dicionar el *eactivo ;essler a los tubos- 1A.< ml a cada
tubo2. Lolumen total ? ml, agitar.
)ejar reposar por : min. Para atemperar al medio ambiente.
Leer la absorbancia a :6A nm.
IV. CUESTIONARIO
5.D .$ectCe los clculos para completar los datos de la tabla.
6.D 'alcule la cantidad de ;39 producido en la reaccin enzimtica.
9.D 'alcule la actividad enzimtica de la solucin de ureasa en nmol
de ;39 producido+min.
:.D .(plique por qu, durante la reaccin debe incubarse a 9>X'
(2
<.D *ealizar los clculos de micromoles de sul$ato, amoniaco, !
urea para cada tubo patrn usados en la construccin de la
curva de calibracin.
=.D .ncontrar la equivalencia por el clculo del $actor de
equivalencia ! por la determinacin analtica de la ecuacin
de la curva.
>.D )iga si la curva de calibracin obtenida obedece a la le! de
&eer. .(plique por qu,.
?.D .(plique por qu, es necesario contar con un blanco en las
determinaciones de actividad enzimtica.
@.D .(plique la di$erencia entre actividad enzimtica ! actividad
especBca.
(3
V. O'SERVACIONES
VI. CONCLUSIONES
VII. 'I'LIOGRAFA
(4
PRACTICA ::
CINETICA ENEIMATICA EN UREASA
(!
PRACTICA ::
CINETICA ENEIMATICA EN UREASA
I. O'!ETIVO.
LeriBcar la variacin de la velocidad de las reacciones
enzimticas con la concentracin del sustrato.
II. FUNDAMENTO.
La Crea puede descomponerse por accin de la enzima 4reasa,
para $ormarse amoniaco ! bi(ido de carbono segCn la
siguiente ecuacin.
;36
'7 R 3
6
7 6;3
9
R '7
6
;36
Luego el %moniaco liberado puede ser cuantiBcado por
espectro$otometra a T :6A nm, si previamente se le
compleja con reactivo ;essler.
'in,tica de HichaelisHenten.
La velocidad de las reacciones enzimticas varan con la
concentracin del sustrato segCn una cin,tica autosaturante
que se describa por la .c. )eHichaelisDHenten.
L T Lma(. _S`
Es R _S`
La representacin grBca de tal ecuacin tiene la $orma0
La ecuacin de HichaelisDHenten se puede resolver
haciendo uso de la Linearizacin de LineYeaverD&urW, en
cu!o caso toma la $orma.
)onde los parmetros anteriores se relacionan por la
ecuacin de una recta.
5 T 5 R _S`
(&
LLma(Es
Hateriales.
6A ml de solucin de sul$ato de amonio al <(5A
D:
H
<A ml de solucin de ureasa A.= mg+l. .n buZer $os$ato de
p3T>.:, con .)%, A.< nH.
%gua destilada.
reactivo ;essler.
&a8o de hielo.
.quipos ! material de vidrio.
Bolas de <A ! 5AA ml.
A> tubos de ensa!o de 5A ml.
A6 matraz de 5AA ml.
pipetas de 5, 6, <, ! 5A ml.
.quipo de ba8o mara.
A5 espectro$otmetro .spectronic 6A)R
A5 termmetro de AD 5AA X'
IV. PROCEDIMIENTO.
Pre,ara"#4n (e m$e+ra.
3acer los clculos ! preparar la solucin patrn de
sul$ato de amonio al <(5A
D:
H
3acer los clculos ! preparar la solucin de urea A.9 H
Cal#-ra"#4n (el E,e"+ro1o+4me+ro.
% Bn de trans$ormar los valores de intensidad de color en
valores de concentracin del producto $ormado 1;3
9
2, ! por
tanto de actividad de la enzima se trazar una curva de
equivalencia de )ensidad \ptica 1%bs2 vs. 'oncentracin.
'on ese Bn se preparan soluciones de amoniaco de
concentracin conocida, las que se neutralizan con reactivo
;essler, para obtener diversas intensidades de color. Por la
diBcultad del uso del ;39 se usar soluciones de sul$ato de
amonio.
Preparar solucin madre de S71;3
:
2
6
, al <(5A
D:
H
((
Preparar = muestras que contengan de < a 9A nanomoles
de Sul$ato de %monio, calcular las nmol de ;39 que
liberan cada una ! su equivalencia con nmol de Crea.
'ompletar la siguiente tabla.
(*
abla ;X 5
P%*7; nX Sol. de
sul$ato1ml2
'ontenido
nmol de
sul$ato
'ontenido
nmol de
;39
.quivalencia
en nmol de
Crea
5 <A
6 5AA
9 5<A
: 6AA
< 6<A
= 9AA
4tilizar los datos obtenidos de la curva de calibracin de
la prctica anterior.
'ompletar la siguiente tabla.
abla ;X 6
Huestra ;X Lolumen de
sul$ato tomado 1
ml2
;39 en la
muestra
1nmol2
%bsorbancia
&lanco
5
6
9
:
<
=
'onstruir la curva de equivalencia ! encontrar la ecuacin
que relaciona )7 vs
_;39`, haciendo los tratamientos estadsticos que sean
necesarios.
Pr$e-a "#nG+#"a.
% partir de la muestra madre de urea A.9 H. preparar =
muestras ! un blanco para completar la tabla 9 como se
muestra.
Preparar solucin madre de ureasa =gr+l en buZer $os$ato
(3
abla ;X 9
ubo 4re
a
aH
ol
4re
a
o.9
H
ml
&uZe
r
$os$a
to ml
"ncub
ar
9>]'
9
min
4rea
sa
ml
"ncub
ar
9>]'
5<
min
&a8
o
hiel
o
;essl
er
ml
*epos
ar
<
min.
Lolum
en
Bnal
ml
%b
s
:6
A
nm
.
&lan
co
A A >.A A.< A.< ?
5 =A A.6 =.? A.< A.< ?
6 56A A.: =.= A.< A.< ?
9 5?A A.= =.: A.< A.< ?
: 6:A A.? =.6 A.< A.< ?
< 9AA 5.A =.A A.< A.< ?
= 9=A 5.6 <.? A.< A.< ?
'alcular la cantidad de ;39 $ormado ! de urea que
reacciona 1 de la curva de calibracin2, ! completar la
tabla :
abla ;X :
Huestra _urea` en
nmol+ml (5A
D
6
)ensidad
ptica
1%bs2
;mol de
;3
9
producidos
;mol de
urea que
reaccionan
5 A.5
6 5.A
9 9.A
: :.A
< <.A
= =.A
&lanco D
Tra+am#en+o (e (a+o.
Para cada muestra calcular la velocidad de reaccin
mediante la relacin v T P+t, donde 1p2 es nmol de ;39
producidos, ! 1t2 es el tiempo de reaccin enzimtica 1 5<
min.2 ! completar la siguiente tabla.
*4
abla <
Huestra _S` nmol+ml. 5+_S` L1nmol+min.2 5+v
5
6
9
:
<
=
GraBcar v vs. _S`, ! ajustar a una curva autosaturante.
.stimar el valor de Lma(.
GraBcar 5+v vs. _S` ! ajustar a una lnea recta.
)eterminar grBcamente los valores de Lma(. U Es.
.scribir la ecuacin que representa a esta reaccin
enzimtica.
*1
V. O'SERVACIONES
VI. CONCLUSIONES
VII. 'I'LIOGRAFA
*2
PRACTICA :;
E0TRACCION DE ADN DE HIGADO DE
POLLO
*3
PRACTICA :;
E0TRACCION DE ADN DE
HIGADO DE POLLO
I. O'!ETIVO
.(traer %); de un tejido animal
II. MARCO TEORICO
.l %); ! %*; son biomol,culas que intervienen en el
almacenamiento ! la trans$erencia de la in$ormacin gen,tica.
Son componentes $undamentales de la c,lula ! constitu!en en
conjunto, entre el < ! el 5AM del peso seco.
;ormalmente no se encuentran solos sino que se hallan
$ormando nCcleo protenas, !a que suelen unirse a
determinados tipos de estas, como las histonas.
.l %*; se localiza tanto en el citoplasma celular como en el
nCcleo , mitocondrias ! cloroplastos, mientras que el %); se
sitCa $undamentalmente en el nCcleo de la c,lula ! tambi,n
cloroplastos ! mitocondrias en peque8as cantidades.
Poseen una importancia maniBesta por el hecho de que ellos
dirigen ! llevan a cabo la sntesis de protenas, ! por tanto de
las enzimas necesarias para el $uncionamiento celular.
Por otra parte el %); es el vehculo de la herencia que se
transmite de padres a hijos de generacin en generacin.
III. FUNDAMENTO:
.l %); se puede aislar mediante una t,cnica relativamente
sencilla, consiste en primer lugar en romper las membranas
celulares para liberar los nCcleos, para ello se tritura el hgado
de pollo en un mortero.
%l a8adir una solucin hipertnica, como el ;a'l 6H, se
produce el estallido de los nCcleos, el detergente $orma un
complejo con las protenas ! las separa del %);, .l alcohol
tiene como $uncin precipitar el %); que se va agrupando
para dar lugar a la $ormacin de unas Bbras blancas visibles a
simple vista, que se pueden colorear mediante un colorante
selectivo para %); como el anaranjado de acridina.
*4
IV. MATERIALES
3gado de pollo 5A gr
'loruro de sodio 6H
.tanol @=b]
S)S 6AM
%rena
Larilla de vidrio
vasos de precipitados
Hortero
.mbudo
Pipetas
Probetas
Gasa
V. METODOLOGA
5.D riturar 5A gr de hgado de pollo, dentro de un mortero,
con la adicin de <gr de arena lavada, para promover el
rompimiento de las membranas celulares.
6.D %8adir al triturado de hgado <A ml de agua destilada hasta
obtener una papilla.
9.D /iltrar varias veces, en una probeta de 5AA ml, logrando
separar los restos de tejido que quedaron sin romper
membranas.
:.D Hedir el volumen del Bltrado Bnal.
<.D %8adir al Bltrado un volumen igual de ;a'l 6H., verterlo
todo a un vaso de precipitados.
*!
=.D %8adir 5 ml de S)S 6AM.
>.D %8adir mediante una pipeta 6< a <A ml de etanol $ro, por
las paredes, logrando se $ormen dos capas, en la inter$ace
precipita el %);.
?.D 'on la a!uda de una varilla de vidrio, ir removiendo en la
misma direccin tratando de hilar las Bbras de %);- sobre
la varilla se van adhiriendo unas Bbras blancas de %);
visibles a simple vista, que es el resultado de la agrupacin
de muchas Bbras de %);.
*&
VI. CUESTIONARIO
5. V)e qu, est $ormada la cromatinaO
6. )urante la e(traccin del %); V'ul es la razn de triturar el
hgadoO, Vpara qu, a8adimos arena al trituradoO
9. VPor qu, crees que estallan los nCcleos al a8adir ;a'l 6HO
:. V#u, accin tiene el %); sobre la cromatinaO
<. )urante la e(traccin del %); se utiliza un detergente !
etanol, con que Bnalidad
VIII. O'SERVACIONES
I0. CONCLUSIONES
0. 'I'LIOGRAFA
*(

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