UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

QUMICA ANALTICA
INSTRUMENTAL

CURVA DE RINGBOWN. DETERMINACIN DE LA ZONA DE
TRABAJO. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN
PTIMA

PROFESORA:
Mg. Norma Carlos Casas
INTEGRANTES:
Aguilar Puente, Antonio Martin
Campos Salazar, Antony Brayan
Crdenas Toribio, Karen Regina
Chvez Pacheco, Sair Mximo
Colonio Garca, Katia Stephanie
Martinez Cabrejos, Karen Janet
Pizarro Herrera, Vctor Romario
Quevedo Torres, Sergio
Quinteros Espino, Norah Miryam
Torres Chipana, Melissa Mercedes

LIMA-PER
2010









OBJETIVOS

Aprender a graficar la curva de Ringbom.

Conocer la concentracin ptima de un compuesto para que cumpla con la
Ley de Lambert Beer a travs de la curva de Ringbom.

Conocer las limitaciones de la ley de Lambert Beer.


















INTRODUCCIN

En la primera prctica aprendimos la constitucin, el manejo y el cuidado del
espectrofotmetro UV-vis y la importancia que tena dicho instrumento para el
reconocimiento de una sustancia.

Para reconocer una sustancia hallamos su curva espectral la cual despus era comparada
con la curva espectral de una sustancia patrn, otra manera es que debe de cumplir con
la Ley de Lambert Beer pero debemos de saber que esta ley tiene sus limitaciones y que
una de las limitaciones tiene que ver con la concentracin del analito.

En esta prctica se aprender a hallar la concentracin ptima para una mejor lectura en
el espectrofotmetro UV-vis y para que el analito cumpla con la Ley de Lambert - Beer,
esto lo lograremos con el uso de la Curva de Ringbom.

La curva de Ringbom relaciona la absortancia con la concentracin del analito.
Mediremos la absorbancia de diferentes concentraciones de un analito, hallaremos el
porcentaje de transmitancia y con esto la absortancia, luego la relacionaremos sus
concentraciones y de acuerdo a la curva reconoceremos la concentracin ptima en la
cual se cumpla con la Ley de Lambert Beer.



















FUNDAMENTO TERICO

LEY DE LAMBERT Y BEER

Ocurre cuando en el caso de la radiacin monocrmatica, la absorbancia es directamente
proporcional a la longitud b de la trayectoria a travs de un medio y la concentracin c de
la especie absorbente. sta relacin se representa con la siguiente frmula:

A= abc
a : constante de proporcionalidad llamada absortividad
b : longitud (cm)
c : concentracin (g/L)

Cuando la concentracin de la ecuacin se expresa en moles por litro y el largo de la
celda est en centmetros, la absortividad se llama absortividad molar, y se representa
con el smbolo especial . Por tanto, cuando b est en centmetros y c en moles por litro
se tiene:

A = bc

Se han encontrado pocas excepciones a la generalizacin de que la absorbancia est
relacionada en forma lineal con la longitud de la trayectoria. Por otra parte, se ha
encontrado desviaciones frecuentes de la proporcionalidad directa entre la absorbancia
medida y la concentracin cuando b es constante. Para que no ocurran errores durante
nuestro anlisis y hacerlo demanera adecuada hacemos uso de la curva de ringbown.

GRFICA DE RINGBOW

Cuando se realiza un anlisis espectroscpico se debe trabajar, en lo posible, se debe
trabajar, en lo posible, con concentraciones que permitan que se cumpla la ley de Beer,
con el fin de obtener una curva de calibracin que tenga una relacin lineal.

Para obtener el intervalo ptimo de concentraciones primero se construye la curva de
Ringbom, que consiste en construir una grfica de absorbancia (100- %T) vs. lg
Concentracin. Los datos se obtienen preparando una serie de soluciones patrn del
analito, que cubran una variacin de por lo menos dos rdenes de magnitud de
concentracin de este y se miden las transmitancias correspondientes a la longitud de
onda analtica escogida. Para la mayora de los sistemas la curva de Ringbown
corresponde a una curva en forma de S. La parte lineal de esta grfica permite obtener el
intervalo de concentraciones ptimo o el intervalo que presentara una relacin lineal
entre absorbancia y concentracin. En esta grfica, los cruces de la parte recta (la
intermedia), con la parte baja y con la parte alta, pueden servir para determinar un valor
para los lmites de deteccin mnimo y mximo, respectivamente.


A partir de esta grfica podemos obtener otros datos como:

Lmite de deteccin mnimo: Es la cantidad o concentracin mnima de sustancia que
puede ser detectada con fiabilidad por un mtodo analtico determinado. Intuitivamente
sera la concentracin mnima obtenida a partir de la medida de una muestra (que
contiene el analito) que seramos capaces de discriminar de la concentracin obtenida a
partir de la medida de un blanco, es decir, de una muestra sin analito presente.

Sera la cantidad o concentracin ms pequea del analito que produce una seal XL
significativamente diferente de la seal del ruido de fondo Xb.


El criterio utilizado para que la concentracin mnima detectable sea distinguible con
certeza del ruido de fondo es que la diferencia entre la seal del analito, de
concentracin muy baja, y la seal de los blancos sea igual a tres veces la desviacin
estndar de la seal de los blancos, utilizados para medir el ruido de fondo. Es decir que:

En donde XL es la seal lmite, obtenida para la concentracin mnima detectable de
analito, Xb es la seal promedio de los blancos, y sb es la desviacin estndar de las
lecturas del blanco.


Lmite de deteccin mximo:

Vendra a ser la mxima concentracin de un analito que se puede analizar. Esto se debe
a que las soluciones se hacen tan concentradas, que en el caso de los mtodos
espectrofotomtricos, toda la luz es atrapada por el analito y tenemos una situacin
equivalente al ajuste del 0 % de transmitancia. En este caso, el detector no diferencia dos
soluciones de concentraciones altas.La determinacin queda limitada a concentraciones
menores del valor de lmite de deteccin mximo, pero en este caso, a diferencia del
lmite de deteccin mnimo, el problema se soluciona fcilmente mediante una dilucin
adecuada. En el caso del lmite de deteccin mnimo, las soluciones deben concentrar la
muestra o usar otra tcnica con lmite de deteccin menor.

El lmite de deteccin mximo, se puede obtener de la parte superior de la curva de
Ringbown.

TRANSICIONES ELECTRNICAS EN MOLCULAS ORGNICAS

Clasificacin:

Las bandas de absorcin en las regiones Ultravioleta y Visible que presentan los
compuestos orgnicos se asocian con transiciones electrnicas en la capa de valencia. Los
electrones involucrados en dichas transiciones corresponden a aquellos mas dbilmente
atrados por el conjunto de ncleos atmicos que componen la molcula y cuyos estados
pueden ser descritos a travs de orbitales moleculares que se expresan como
combinaciones lineales de orbitales atmicos de la capa de valencia. Las transiciones
electrnicas a orbitales moleculares ms externos dan lugar a las denominadas
transiciones Rydberg presentes en el Ultravioleta de Vaco. Por otra parte las transiciones
electrnicas que involucran a los electrones de las capas internas son muy energticas y
se presentan en la regin de los rayos X del espectro electromagntico. Nuestro anlisis
se reducir a las transiciones electrnicas en la capa de valencia. A estos efectos resulta
conveniente recordar la clasificacin convencional de los orbitales moleculares en la capa
de valencia de los compuestos orgnicos.

Orbitales y *. Son orbitales moleculares localizados a lo largo del eje de unin de los
tomos. Los orbitales generan una densidad electrnica elevada en la regin
internuclear teniendo un carcter fuertemente enlazante.

Los orbitales *, como todos los orbitales antienlazantes, presentan un plano nodal
perpendicular al eje del enlace en la regin internuclear y tienen un acentuado carcter
antienlazante.

Orbitales y *. Estos orbitales se emplean en la descripcin de los enlaces mltiples. Las
regiones de mayor densidad electrnica correspondiente a los mismos son aquellas
colaterales al eje del enlace. El carcter enlazante o antienlazante de estos orbitales es
menos acentuado que el de los orbitales .

Orbitales n. Estos orbitales moleculares tienen un acentuado carcter local y describen
pares electrnicos libres asociados con heterotomos (O, S, N, Hal). Energticamente
tienen carcter no-enlazante.




Figura.1 se representan esquemticamente la distribucin energtica de los orbitales
moleculares antes tratados.

Las principales transiciones electrnicas que se consideran para muchas especies
moleculares son: , n *, *, n *.
A continuacin se presentan algunas de las transiciones ms importantes en molculas
orgnicas:
a. La transicin es la que requiere mayor energa para que se lleve a cabo,
este tipo de transiciones generalmente ocurre en el ultravioleta al vaco en
longitudes de onda menores que 150 nm. Entre los enlaces tpicos que presentan
esta transicin se encuentran C-H con absorcin cercana a 125 nm y el enlace C-C
con absorcin cercana a 135 nm. As, compuestos orgnicos como los
hidrocarburos saturados y cadenas saturadas - enlaces sigma- presentarn
absorcin solamente en el ultravioleta lejano y por tanto son transparentes en el
UV cercano.

b. La transicin n generalmente requiere menos energa que la transicin s s
* Estas transiciones generalmente se presentan entre 150 y 220 nm. Muchas de
estas transiciones se observan en molculas orgnicas que contienen un
heterotomo: N,O,S,Cl,Br,I, como haluros de alquilo, aminas, teres, tioles, etc.
-1cm-
1. Se considera para este tipo de transicin que un electrn que se encuentra en
el orbital p del heterotomo - u orbital n de la molcula es excitado al orbital s
de la molcula.

c. Las transiciones implican que el cromofro debe poseer al menos una
insaturacin para proveer el orbital molecular pi antienlazante *, molculas con
dobles o triples enlaces frecuentemente presentan absorcin entre 160 y 220 nm
para cromforos aislados es decir separados por ms de un enlace sencillo. En el
caso de molculas con grupos cromofros que entren en conjugacin como
dienos, enonas, o con anillos aromticos la absorcin se encuentra generalmente
entre 200 y 360 nm, en el UV cercano y puede presentarse en el visible 360-700 si
el sistema conjugado es grande.Las transiciones * presentan coeficientes de
absortividad e altos que oscilan entre 1000 y 15000 M
-1
cm
-1


Las bandas atribuidas a las transiciones * de sistemas conjugados como el
butadieno polienos, enonas, el benceno o molculas aromticas que poseen
sustituyentes que a su vez son cromforos (como el estireno, benzaldehido, o
acetofenona) se denominan bandas K (del alemn konjugierte).

Estas transiciones p p *, bandas K, se caracterizan por absortividades molares
altas e
mx
>10
4
y sufren desplazamiento batocromico cuando hay aumento en la
polaridad del solvente.

d. Las transiciones n implican que el cromofro debe poseer una insaturacin
(para proveer el orbital molecular *) con un heterotomo que contenga un par
de electrones no compartido, electrones n, por ejemplo cromforos como C = O, N
= N, NO, NO
2
, entre otros, presentan absorcin entre 200 y 350nm para
cromforos aislados. Se considera que uno de los electrones del orbital molecular
no enlazante, n, ( o que uno de los electrones de un orbital tomico no enlazante
del heterotomo ) es excitado al orbital antienlazante asociado con el doble o
triple enlace.

Las transiciones n *presentan coeficientes de absortividad e bajos, que oscilan entre
10 y 10
2
M
-1
cm
-1
, son prohibidas y estos valores permiten distinguirlas de las transiciones
*.

Las transiciones n *tambin son llamadas bandas R (del alemn radikalartig). Se
caracterizan adems de sus bajos coeficientes de absortividad por el efecto hipsocrmico
que se observa con el incremento en la polaridad del solvente.

CLCULO DE ERRORES: ERROR ABSOLUTO, ERROR RELATIVO

Bien sea una medida directa (la que da el aparato) o indirecta (utilizando una frmula)
existe un tratamiento de los errores de medida. Podemos distinguir dos tipos de errores
que se utilizan en los clculos:

Error absoluto. Es la diferencia entre el valor de la medida y el valor tomado como
exacta. Puede ser positivo o negativo, segn si la medida es superior al valor real o
inferior (la resta sale positiva o negativa). Tiene unidades, las mismas que las de la
medida.

Error relativo. Es el cociente (la divisin) entre el error absoluto y el valor exacto. Si se
multiplica por 100 se obtiene el tanto por ciento (%) de error. Al igual que el error
absoluto puede ser positivo o negativo (segn lo sea el error absoluto) porque puede ser
por exceso o por defecto. No tiene unidades.
Parte Experimental

MATERIALES, EQUIPOS Y
REACTIVOS
Equipo:
- UV-2100 Spectrophotometer
Materiales:
- Matraz Aforado (100, 50, 25 y 10ml)
- Pipeta volumtrica (15,10,5,2,1)
- Matraz simple (250, 100ml)
- Tubos de ensayo
- Vaso precipitado (250, 100 ml)
Reactivos:
- Aseptil Rojo (Azosulfamida 5%)
- Permanganato de potasio
- Anaranjado de metilo
- Agua destilada
Espectrofotometra: Absorbancia y %T entre una sustancia
inorgnica y una orgnica

Tomaremos a continuacin los datos ledos en el espectrofotmetro. Lo que buscamos es
determinar la longitud ptima analtica y comparar la naturaleza de dos sustancias
diferentes: Una es orgnica (heliantina) y la otra, inorgnica (permanganato de potasio).

Las curvas espectrales -Absorbancia vs Longitud de onda y %T vs Longitud de onda- sern
graficadas al final del presente informe.



Procedimiento

400 83.9 0.0762
400 42.1 0.3757
410 85.2 0.0695
420 85.5 0.0680 410 37.9 0.4213
430 85.7 0.0670 420 34.8 0.4584
440 85.4 0.0685
430 32.2 0.4921
450 84.9 0.0660
460 83.7 0.0773 440 30.2 0.5199
470 81.7 0.0873 450 28.3 0.5482
480 78.7 0.1040
460 27.9 0.5543
490 75.1 0.1243
500 70.4 0.1524 470 29.3 0.5331
510 68.2 0.1662 480 32.7 0.4854
520 64.1 0.1931
490 38.7 0.4122
530 65.1 0.1864
540 65.9 0.1837 500 47.6 0.3223
550 67.7 0.1694 510 58.2 0.2350
560 75.6 0.1214
520 80.2 0.0958
570 77.4 0.1112
580 85.7 0.0670 530 87.7 0.0570
590 90.2 0.0447 540 87.7 0.0570
600 91.5 0.0385
550 92.4 0.0343
610 92.1 0.0357
620 92.6 0.0333 560 93.3 0.0301
630 92.9 0.0319

640 93.4 0.0296
Realizamos dos tipos de anlisis:
1. Determinacin de la longitud ptima
de onda para poder graficar las curvas
espectrales Absorbancia vs Longitud
de onda respectivas del
permanganato y la heliantina
(Inorgnica vs Orgnica)
2. Determinacin de la concentracin
ptima de la muestra (verificar del
mismo modo la zona de trabajo).
Permite graficar la curva de
Ringbown.
Lectura del espectrofotmetro: Longitud ptima de la onda y %
Transmitancia

Lectura del espectrofotmetro: % Transmitancia


1Para poder comparar la forma de las curvas espectrales entre
dos sustancias de naturaleza distinta: Inorgnica vs Orgnica. El
procedimiento a seguir fue el desarrollado en la primera prctica:
La sustancia es colocada, junto a un patrn Agua; en el
espectrofotmetro medimos la transmitancia conforme
aumentamos la longitud de onda. El punto en el cual la
transmitancia sea la ms baja posible ser nuestra absorbancia
ms alta, es decir: La longitud ptima de la onda nos otorga la
absorbancia ms alta posible de la sustancia problema.
2 Si deseamos graficar la curva de Ringbown (la que nos permite
formar nuestra curva de calibracin) primero debemos realizar las
disolucin. Prepararemos soluciones de una concentracin (C)
desde 0.1 ug/ml, 0.2 ug/ml, 1 ug/ml, 2 ug/ml, 5 ug/ml, 10 ug/ml,
15 ug/ml, 20 ug/ml, 30 ug/ml, 200 ug/ml hasta 500 ug/ml a partir
de la solucin estndar de aseptil rojo (Azosulfamida 5%).
Con las diluciones ya hechas, procedemos a realizar las lecturas
en el espectrofotmetro. Las lecturas sern del % Transmitancia,
nuestra labor consiste en determinar la absortancia:
Para luego graficar nuestra curva
Longitud ptima de
Azosulfamida:
530 nm
Longitud ptima de
Anaranjado de metilo: 460
nm
Longitud ptima de
Permanganato:
520 nm

Absortancia vs Log (C).



Una vez que ya tenemos nuestras diluciones preparadas, podemos comenzar con las lecturas de la transmitancia.
La longitud de onda a utilizar ser: La longitud ptima de cada sustancia, 530nm para la azosulfamida y 460nm
para la heliantina. Iremos aadiendo en las cubetas del espectrofotmetro cada dilucin unitariamente. El anlisis
de la transmitancia ser llevado a cabo en la longitud ptima. Nuestros datos sern acoplados en las posteriores
tablas.

A partir de la transmitancia leda estaremos en la facultad de poder graficar la Curva de Ringbown (Absortancia vs
Log [C]).
Preparamos cada concentracin a partir de la
muestra estndar de aseptil rojo. La forma en
cmo se procedi con las diluciones est
explicada en el presente informe.
Curva de Ringbown: Absortancia vs Concentracin ~
Azosulfamida y Heliantina

En esta parte desarrollaremos la curva de Ringbown, la cual nos permite encontrar la
zona de trabajo y lo ms importante: La concentracin ptima de la muestra.

*Cabe resaltar que nuestro grupo trabaj con las diluciones de la azosulfamida























[ ]
0.1 98.6 1.4
0.2 97.8 2.2
0.4 96.7 3.3
0.6 96.0 4.0
0.8 94.4 5.6
1.0 93.0 7.0
1.5 84.7 15.3
2.0 85.1 14.9
2.5 84.2 15.8
3.0 78.8 21.2
3.5 75.1 24.6
4.0 75.6 24.4
5.0 71.9 28.1
6.0 66.1 33.9
8.0 57.7 42.3
10.0 50.7 49.3
15 38.7 61.3
20 27.5 72.5
30 11.5 88.5
40 6.4 93.6
60 0.1 99.9
80 0.0 100
100 0.0 100
200 0.0 100


[ ]
0.2 74.4 25.6
0.3 95.7 4.3
0.6 69.7 30.3
0.8 69.7 30.3
1.5 90.8 9.2
3.0 35.4 64.6
3.5 30.7 60.3
4 12.2 87.8
5 5.5 94.5
6 3.1 96.9
10 0.0 100
15 0 100
20 0 100

Azosulfamida: Sustancia estudiada

1. Tabla completa: Absortancia, Log C y % Transmitancia.

Azosulfamida
g/mL mg/mL log C % T Absortancia
0.1 100 2 98.6 1.4
0.2 200 2.30103 97.8 2.2
0.1 100 2 96.7 3.3
0.6 600 2.7781513 96 4
0.8 800 2.90309 94.4 5.6
1 1000 3 93 7
1.5 1500 3.1760913 88.3 11.7
2 2000 3.30103 85.1 14.9
2.5 2500 3.39794 84.2 15.8
3.5 3500 3.544068 75.5 24.5
4 4000 3.60206 75.6 24.4
5 5000 3.69897 71.9 28.1
6 6000 3.7781513 66.1 33.9
8 8000 3.90309 57.7 42.3
10 10000 4 50.7 49.3
15 15000 4.1760913 38.7 61.3
20 20000 4.30103 27.5 72.5
30 30000 4.4771213 11.5 88.5
40 40000 4.60206 6.4 93.6
60 60000 4.7781513 0.001 99.999





DISCUSIN DE RESULTADOS

CURVA DE RINGBOWN: AZOSULFAMIDA




Para obtener el intervalo ptimo y adecuado de concentraciones con el menor error por
lectura primero se construye la curva de Ringbown que consiste en construir una grfica
de absortancia (100%-T) vs la concentracin.

La zona lineal corresponde al intervalo de concentraciones de mnimo error, C/C, por
lectura y el punto de inflexin corresponde al valor de:

100%-%T= 49.3; T=50.7; que corresponde al valor de mnimo error.

Para la mayora de los sistemas la curva de Ringbom corresponde a una curva en forma
de S. La parte lineal de esta grfica permite obtener el intervalo de concentraciones
ptimo o el intervalo que presentara una relacin lineal entre absorbancia y
concentracin.

En esta grfica, los cruces de la parte recta (la intermedia), con la parte baja y con la
parte alta, pueden servir para determinar un valor para los lmites de deteccin mnimo y
mximo, respectivamente.

En la curva de Ringboom para la azosulfamida resulto como concentracin optima el
valor de 6.4565 g/mL as como la concentracin mnima cuantificada a 3.715 g/mL y la
concentracin mxima cuantificada a 11.2 g/mL.




0
20
40
60
80
100
120
0 1 2 3 4 5 6
A
b
s
o
r
t
a
n
c
i
a

log C
Series1

CURVA DE RINGBOWN: ANARANJADO DE METILO

La curva de Ringbom del Anaranjado de Metilo presenta una zona de trabajo de concentraciones
1 a 5 ug/ml con las absortancias respectivas de 26.8 y 94.5 respectivamente. Adems la
concentracin ptima es de 2.2 ug/ml. No pudiendo comparar estos datos debido a que no
encontramos informacin bibliogrfica sobre el tema.






















































BIBLIOGRAFIA

Skoog Douglas, Principios de anlisis instrumental. 6ta edicin. 2007

Qumica analtica instrumental I Precisin en espectrofotometra. 2007. URL:
http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/Documento_de_Apoyo:_Precisi
on_en_espectrofotometria_2598.pdf

Universidad Nacional de Colombia. Establecimiento de un mtodo
espectrofotomtrico.URL:http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/200
1184/lecciones/Cap10/01_01_01.htm