PORTAOBJETOS / CUBREOBJETOS

Lavar con detergente suave

Secar aire

Sumergir en etanol

Pasar por mechero

Etiquetar

Medio lquido

Necesita dilur para visualizar campo adecuado

En medio slido: Suspender en medio lquido (no agua)

Importante edad cultivo: Flagelos, cpsulas, inclusiones citoplsmicas

Permite visualizar clulas en estado normal

Movilidad flagelar, movimiento browniano



Cubreobjetos:

Bordar periferia con vaselina

Colocar gota de suspensin de microorganismos

Invertir sobre portaobjetos

Borde queda sellado y evita que derrame suspensin

microscopio campo claro o contraste fases
DESVENTAJAS:

Clulas translcidas Difcil visualizar

Corrientes lquido Difcil visualizar una en particular

Molculas de agua: Movimiento Browniano

Motilidad verdadera: Solo por periodo corto.
Oxgeno; cesa movimiento
Difcil visualizar.
Necestias observar por periodo prolongado


Movilidad:
Dificulta observacin

Fijar al vidrio por calor
Se impide movilidad

Suspensin de clulas en medio lquido

Turbidez aparente (cultivo lquido ms turbio por protenas)

La clula se inmoviliza en soporte (cubreobjetos)

Mejor estrategia para observar forma, tamao, agrupacin

1. Asada de cultivo en suspensin (SLIDO: gota agua + asada;
suspender)

2. Extender asada

3. Pasar a flama mechero lento 2 veces (acelera secado; elimina
microorganismos vivos; adherencia a vidrio)

4. Permitir secado a T ambiente sobre rea trabajo
Calentamiento y secado inducen encogimiento y distorcin de bacterias
MICROOORGANISMOS: Translcidos

Necesidad de agregar colorantes

Colorantes no penetran rpidamente

Microorganismos se mueren antes de teir

Asociacin qumica COLORANTE-CLULA

MUERTE MICROORGANISMO FIJACIN AL CALOR


SE CLASIFICAN EN:

SIMPLES Se tien todos los tipos de clulas o su envoltura, sin
diferenciar
Colorantes: cidos o bsicos

SE CLASIFICAN EN:

DIFERENCIALES Se tien las clulas de cierto tipo
Tincin Gram Tincin cido resistencia

SE CLASIFICAN EN:

DIFERENCIALES Se tien las clulas de cierto tipo
Tincin cido resistencia

SE CLASIFICAN EN:

SELECTIVAS O ESTRUCTURALES Tincin especfica de organelo o
compuesto
Flagelos, ncleo, endospora, cpsula, almidn, polifosfato, etc
CMO FUNCIONAN LOS COLORANTES?

Sales que contienen iones orgnicos o inorgnicos

Sal: iones positivos (cationes) y iones negativos (aniones)

COLORANTES EJM:
Cristal violeta: cloruro de cristal violeta
Azul metileno: cloruro de azul de metileno

SE DISOCIAN: CATION ORGNICO CARGADO POSTIVAMENTE
PROPORCIONA EL COLOR



CASI TODOS POSEEN MAS DE 1 ANILLO

PORCIN COLORIDA: CROMFORO: BASE DEL COLORANTE

PORCIN NO COLORIDA: AUXOCROMO

SI LA BASE EST POSITIVAMENTE CARGADA: COLORANTE BSICO

SI LA BASE EST NEGATIVAMENTE CARGADA: COLORANTE CIDO

Dependiendo de carga la base se asocia con un anin o catin


RELACIN TIPO DE COLORANTE Y CARGA CUANDO SE
DISOCIA
SAL COLORANTE
ION ORGNICO
(COLORANTE
BASE;
CROMOFORO)
IN INORGNICO TIPO
COLORANTE
Positivamente
cargado (catin)
Negativamente cargado
(anin)
BASICO
Negativamente
cargado (anin)
Poitivamente cargado
(catin)
CIDO
Colorante con carga positiva (ejm. azul metileno o cristal violeta):
SE ATRAE A CARGA NEGATIVA EN SUPERFICIE DE LAS CLULAS
ALGUNOS INTERACTAN CON COMPONENTES SUPERFICIALES

CLULAS MUERTAS: Colorante penetra envoltura celular
Se enlaza a carga negativa de partes internas
org se observa totalmente teido
Enlaces o interacciones son fuertes: Colorante
al enjuagar NO SE ELIMINA FCILMENTE

COLORANTES BSICOS: Utilizan en tinciones simples, diferenciales y
selectivas
MICROORGANISMOS:
Carga negativa en superficie (CARGA DE SUPERFICIE)

METABOLISMO: Secreta H
+
al exterior

DISMINUYE CARGA NEGATIVA SUPERFICIAL

ENLACE MENOS FUERTE CON COLORANTE BSICO

MICROORGANISMOS CIDFILOS SE TIEN DBIL CON COLORANTE
BSICO

NECESIDAD DE UTILIZAR COLORANTES BSICOS EN SOLUCIONES
ALCALINAS
Ejm. Azul de metileno con potasa AZUL METILENO LOEFFLERs


COLORANTE BASE : CARGA NEGATIVA

SE REPELE CON ENVOLTURA DE CARGA NEGATIVA

NUNCA SE ENLAZA A LA SUPERFICIE O NO PENETRA

SE DENOMINAN COLORANTES CIDOS

USO DIFERENTE A COLORANTES BSICOS

Generalmente se mezclan con gota del cultivo de microorganismos

Se extienden en portaobjetos y se secan

NO SE ENJUAGAN