Trabajo Final Micro Aminoacidos

| | 23 DE NOVIEMBRE DEL 2009
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN
LICENCIATURA DE QUMICO FARMACUTICO BILOGO

MICROBIOLOGA FARMACUTICA

PROF: SOTO GUEVARA ALBERTO NATAHLIEL

GRUPO: 1906

EQUIPO 7:

MELISSA GARCA BALDERAS
HERNNDEZ PATLN DANIEL
SOLS CRUZ BRUNO
TRABAJO DE
INVESTIGACION
PRODUCCI N INDUSTRIAL DE
AMI NOCI DOS

NDICE

I. INTRODUCCIN

II. AMINOCIDOS

III. PRINCIPALES APLICACIONES DE LOS AMINOCIDOS

IV. APLICACIN DE LOS AMINOCIDOS A NIVEL FARMACUTICO

V. EMPRESAS QUE PRODUCEN O COMERCIALIZAN CON AMINOCIDOS

VI. MTODOS DE PRODUCCIN
Sntesis qumica
Extraccin de aminocidos a partir de hidrolizados de protena
Produccin microbiolgica
Fermentacin directa de aminocidos
Conversin de productos intermediarios
Uso de enzimas o clulas inmovilizadas

VII. PUNTOS CRTICOS DEL PROCESO DE AMINOCIDOS

VIII. CONTROL DEL PROCESO DE FERMENTACIN

IX. CEPAS UTILIZADAS EN LA PRODUCCIN MICROBIOLGICA DE
AMINOCIDOS
Mutantes auxotrofos
Mutantes regulatorios
Recombinacin gentica
Fagos
Plsmidos vectores
Fusin de protoplastos

X. RECUPERACIN DE PRODUCTOS
Extraccin con disolventes
Electrodilisis
Precipitacin

XI. PRUEBAS DE SEGURIDAD DE LOS AMINOCIDOS
Inmunogenicidad

XII. REFERENCIAS Y BIBLIOGRAFA

I. INTRODUCCIN

Las propiedades estimuladoras del sabor del cido glutmico se descubrieron en Japn en
1908, pero no fue sino hasta 1957 que se descubri el cido glutmico como producto en el
medio de cultivo utilizado durante el crecimiento de Corynebacterium glutamicum,
convirtindose este microorganismo en la fuente principal de glutamato sdico e
inmediatamente despus comenz la produccin comercial de glutamato sdico a partir de
hidrolizados cidos de trigo y protena de soja. Este descubrimiento fue un enorme impulso
para la industria de fermentacin en Japn, de tal manera que los procesos fermentativos
para la produccin de aminocidos han sido casi exclusivamente desarrollos japoneses.

Los aminocidos se utilizan habitualmente como materias primas en diversos procesos de la
industria qumica, alimentaria, cosmtica y farmacutica. Aproximadamente el 66% de los
aminocidos producidos se utilizan en la industria de alimentos, el 30% como aditivos de
piensos (forrajes y herbajes) y solamente el 4% restante en medicina y cosmtica as como
material de partida en la industria qumica.

En la industria de alimentos los aminocidos se utilizan solos o en combinacin para
aumentar el sabor. Muchos aminocidos se utilizan en medicina como ingredientes de
soluciones de infusiones en el tratamiento post-operatorio (nutricin enteral). En la
industria qumica los aminocidos son utilizados como material de partida para la
produccin de copolmeros, como son las fibras de polialanina o las resinas de isocianato
de lisina. El cido urnico, utilizado como agente bronceador, se produce por
biotransformacin de la histidina. Otro aminocido, la glicocola, se utiliza como material
de partida para la produccin del herbicida glifoxato.

En general, la produccin industrial de aminocidos se realiza principalmente por
fermentacin microbiana, biosntesis o bien mediante la hidrlisis de protenas. En todos
los casos se obtienen aminocidos a bajas concentraciones en disoluciones acuosas diluidas
y en presencia de un elevado nmero de compuestos qumicos similares, por lo que su
separacin y posterior purificacin utilizando mtodos tradicionales, tales como
intercambio inico, cromatografa, adsorcin, extraccin lquido-lquido o evaporacin es
un proceso muy complejo, cuyo coste puede llegar a alcanzar hasta el 50% del coste total
de produccin.

Actualmente pueden originarse aumentos adicionales en la produccin de aminocidos
debido a las siguientes innovaciones:

El aislamiento de cultivos de produccin mejorada por el aislamiento de cepas
derreprimidas mediante el aporte de tcnicas de DNA recombinante y de fusin de
protoplastos a los mtodos actualmente utilizados de mutacin.
La combinacin de sntesis qumica con procesos microbianos y enzimticos.
La adaptacin de los procesos existentes para la utilizacin de materiales de partida
ms baratos.
La optimizacin de las condiciones de salto de escala.

II. AMINOCIDOS

Los aminocidos, pptidos y protenas, componentes importantes de los alimentos,
proporcionan los elementos necesarios para la sntesis proteica. Las protenas constituyen
uno de los grupos de molculas de mayor transcendencia en los seres vivos, esenciales en
funciones biolgicas de biocatlisis (enzimas), de participacin en mecanismos de defensa
(anticuerpos), genticos (nucleoprotenas) y de neurotransmisin, en procesos de transporte
(hemoglobina, citocromos), en el almacenamiento de molculas o iones (ferritina), y
adems las membranas celulares estn formadas fundamentalmente por agregados de
lpidos y protenas con una organizacin determinada y especfica. Asimismo, las protenas
son fundamentales en la estructura del hueso, el cartlago, la piel y otros tejidos conectivos
en los que el colgeno es la protena ms abundante. Algunas protenas actan como
hormonas y son liberadas por glndulas especficas y la albmina participa en el
mantenimiento del balance hidroelectroltico. Se ha determinado que el cincuenta por cien
del peso seco de las clulas lo constituyen las protenas.

Los aminocidos son los componentes principales de las protenas, aproximadamente
veinte aminocidos constituyen comnmente las protenas. Los aminocidos de las
protenas estn unidos por enlaces covalentes (enlaces peptdicos) en un orden
predeterminado genticamente. Desde el descubrimiento y caracterizacin en 1806 del
primer aminocido, la L-asparagina, tuvieron que pasar ms de cien aos hasta que en 1935
se aisl el vigsimo, la L-treonina, aminocido de elevada importancia nutricional por estar
asociado al crecimiento.

En general, las protenas influyen directamente en las propiedades fsicas de los alimentos
por su alta capacidad para formar o estabilizar geles, espumas, masas, emulsiones y
estructuras fibrilares. Mientras que los aminocidos y pptidos contribuyen directamente en
el sabor de los alimentos y son precursores de los componentes aromticos y las sustancias
coloreadas formadas por reaccin trmica y enzimtica que tienen lugar en la obtencin,
preparacin, maduracin y almacenamiento de los mismos. Adems, se utilizan como
suplemento alimentario para diabticos, hipertensos o pacientes que presentan insuficiencia
digestiva a las protenas (Belitz, 1997).

Tradicionalmente, los aminocidos se obtienen a partir de las protenas, as, por hidrlisis
cida se obtienen los hidroxilados (por ejemplo 4-hidroxiprolina) y los n-metilados (por
ejemplo n-metilhistidina), y en la descarboxilacin espontnea de molculas de protenas
con cido g-carboxiglutmico aparece el L-glutamato (Kirk, 1992).

Los aminocidos son molculas nitrogenadas simples con cadenas hidrocarbonadas de bajo
peso molecular. Todos los aminocidos, a excepcin de la glicina, tienen dos formas
estructurales o estereoismeros: L y D. La frmula general de un -aminocido se puede
escribir como:

Donde el asterisco significa la existencia de un carbono asimtrico y por lo tanto todos los
aminocidos, excepto la glicina, tienen dos ismeros enantimeros pticamente activos
designados por D y L. Los aminocidos de las protenas son todos de la forma L, debido a
que las clulas poseen enzimas estereoespecficas que sintetizan nicamente estos
estereoismeros, eliminndose si existen los estereoismeros D va renal, y evitando as,
una posible sntesis de pptidos txicos. A pesar de todo, en las clulas existe una cierta
cantidad de D-aminocidos aunque nunca formando parte de las protenas.

Otra caracterstica importante es su carcter anfotrico, las molculas de aminocidos
tienen dos cargas elctricas iguales, de signo opuesto debidas al grupo amino y al carboxilo.
La cadena lateral de los aminocidos, R, puede ser desde un protn como en el caso del
aminocido ms sencillo la glicina, hasta un resto aliftico, aromtico o heterocclico
portador de otros grupos funcionales. La cadena lateral es decisiva para las interacciones
intra- e inter-moleculares de las protenas y segn las caractersticas de esta se puede
realizar la siguiente clasificacin:

Los valores nutricionales de una protena estn controlados por el balance cuantitativo y
cualitativo de cada aminocido esencial, estos valores se pueden mejorar agregando los
aminocidos que la protena posea en baja concentracin.

Todos los aminocidos de las protenas estn disponibles comercialmente y su inters
comercial es creciente, principalmente debido a su uso como potenciadores del sabor y
edulcorantes en la industria alimentaria. El desarrollo reciente de nuevos frmacos y
antibiticos ha fomentado el consumo de aminocidos tales como el cido glutmico, cido
asprtico, fenilglicina, etc.

Los aminocidos son molculas nitrogenadas simples con cadenas hidrocarbonadas de bajo
peso molecular. Todos los aminocidos, a excepcin de la glicina, tienen dos formas
estructurales o estereoismeros: L y D. En las protenas animales todos los aminocidos
presentes pertenecen a la serie L. Sin embargo, en ciertos casos el animal dispone de la
capacidad enzimtica precisa para aprovechar la forma D, previa transformacin a la forma
L correspondiente.

Acido glutmico

Es el aminocido de mayor consumo a nivel mundial; la sal sdica del acido glutmico, el
glutamato monosdico (GMC) se usa como aditivo alimentario. Se producen
aproximadamente por fermentacin 370 000 toneladas anuales.

El acido L-glutmico se produce por fermentacin; para obtener la sal, el acido se
neutraliza con hidrxido de sodio. Se obtienen 87 g/Lt de acido glutmico, lo que da un
rendimiento de conversin azcar-acido glutmico de 42.3 %, en tanto la conversin de
acido glutmico a glutamato monosdico (GMS) es de 92%.

L-treonina

La L-treonina se obtiene preferentemente mediante un proceso fermentativo por
microorganismos. Tambin puede obtenerse por aislamiento a partir de hidrolizados de
protena para uso farmacutico.

Metionina

Este aminocido se usa principalmente en la formulacin de alimentos balanceados
tpicamente en dietas de maz y soya que tienen bajas concentraciones de Metionina y
lisina. Para este fin, es utilizada la mezcla racmica D, L-metionina obtenida por sntesis
qumica.

Triptfano

El triptfano es el segundo aminocido limitante del maz y el tercero en los alimentos
balanceados de cerdos y pollos, pero debido a su alto costo su uso ha sido restringido. Sin
embargo, los avances en el proceso de fermentacin y en el desarrollo de rutas de
produccin alternativas, permiten suponer que su precio baje.

L-lisina

La produccin de L-lisina se inicia simultneamente a la de DL-metionina; por efecto de la
devaluacin e inflacin creciente hubo, a partir de 1976, un desfasamiento en las
inversiones y consecuentemente en la produccin. La unidad diseada para producir 3 000
toneladas por ao logro satisfacer las necesidades del mercado durante los dos aos
siguientes al inicio de su operacin comercial. En 1991 se estim que se alcanzo 15 000
toneladas, exportndose 30% de la produccin. Su principal mercado es en alimentos
balanceados consumindose 70 000 toneladas anuales de grado alimenticio.

La fabricacin de L-lisina por fermentacin es un proceso tpicamente biotecnolgico, este
se inicia en el laboratorio, en donde se desarrolla el cultivo a partir de un liofilizado de
Corynebacterium glutamicum. La bacteria se resiembra varias veces para preparar el
inoculo que se enva a la planta, en donde es transferido a diferentes unidades hasta llegar
al fermentados de 120 000 Lt de capacidad. El caldo de fermentado que contiene 90 g/Lt de
L-lisina se acidifica y se pasa a travs de resina de intercambio inico. La lisina se eluye,
concentra y neutraliza con HCl para obtener el monoclorhidrato, y se cristaliza. Los
cristales se lavan, secan y pulverizan. En este proceso se tiene un rendimiento del 33% en
relacin con la fuente de carbono utilizada (mieles incristalizables de caa de azcar).

L-leucina

La l-leucina es otro aminocido que se produce en el pas y que se utiliza como materia
prima en la elaboracin de L-lisina; se adiciona al medio de cultivo en una proporcin de
20 Kg/Lt de L-lisina este proceso tambin se lleva a cabo por fermentacin y el
rendimiento de conversin de azcar a L-leucina es de 14-16 %, obtenindose 21 g/Lt de

medio de cultivo. El mtodo de produccin es similar al de L-lisina, de hecho se usa el
mismo equipo.

En la fabricacin de L-lisina, la leucina se utiliza tal como viene de los procesos de
fermentacin, no requiere de purificacin; el medio de cultivo se alimenta directamente
despus de su esterilizacin. La capacidad de produccin de L-leucina es, actualmente de
120 ton/ao. Existen posibilidades de un mercado mayor en la medida en que aumente la
produccin de L-lisina. Este aminocido solo se produce en Japn, EUA y Mxico. Su
potencial de desarrollo estriba en la exportacin, los problemas tcnicos por resolver son,
principalmente, la separacin y la cristalizacin, operaciones necesarias para lograr la
forma en que deber llegar al mercado. Las expectativas en la demanda de leucina por el
mercado externo pueden alcanzar volmenes de 500 y 600 ton/ao, siendo factible duplicar
este consume en corto plazo.

III. PRINCIPALES APLICACIONES DE LOS AMINOCIDOS

Los aminocidos tienen amplias aplicaciones industriales. Los aminocidos se utilizan
como materias primas en la industria alimentaria, farmacutica, qumica y cosmtica.
Aproximadamente el 66% de los aminocidos producidos se utilizan en la industria de los
alimentos, el 31% como aditivos de piensos (alimento elaborado para animales) y
solamente el 4% en medicina y cosmtica, adems de material de partida para la industria
qumica.

En la industria alimentaria se han utilizado los aminocidos y sus derivados para edulcorar,
salar, modificar o aumentar el sabor de los alimentos. Cada aminocido y derivados tiene
un sabor caracterstico: dulce, amargo, agrio, salado. El D-glutamato es inspido y los
steres de metil o etil glicina poseen un sabor muy salado. La glicina y L-alanina son
dbilmente dulces pero el aspartame (ster de metil L-aspartil-L-fenilalanina) es 200 veces
ms dulce que la sacarosa, utilizndose como edulcorante artificial. Recientemente ha
aumentado el consumo de L-fenilalanina y cido L-asprtico como materias primas para la
sntesis de este ster. Tambin la D-alanina junto con el cido asprtico forma un
edulcorante 12 veces ms dulce que el aspartame. Adems, muchos piensos domsticos no
contienen los aminocidos esenciales necesarios para el crecimiento equilibrado de los
animales, y normalmente, es necesario introducir en la dieta suplementos alimenticios que
contengan los aminocidos esenciales, los ms frecuentes son: DLmetionina, L-lisina, L-
treonina.

En la industria de cosmticos, los aminocidos y sus derivados se utilizan para controlar o
neutralizar las variaciones de pH en la piel y los efectos bacterianos. Por ejemplo, la serina
se utiliza en cremas o lociones faciales y el glutamato de glucosa se emplea en champs y
cremas como compuesto humectante del pelo y de la piel (Kirk, 1992).

En la industria qumica los aminocidos se emplean en campos muy diversos. Actualmente
en relacin a la proteccin del medioambiente, se presta especial atencin a los poli
aminocidos, que son polmeros biodegradables. Entre otras utilidades estos polmeros se
utilizan en la produccin del cuero sinttico y los polmeros biodegradables poli-(L-cido
asprtico-co-PEG) con aplicacin en el campo de la biomedicina. Algunos derivados de
aminocidos se emplean como agentes de limpieza por ejemplo en la eliminacin de aceites
de efluentes industriales se est empleando un derivado del cido glutmico.

Los aminocidos estn teniendo una creciente demanda en la industria qumica. A medida
que sus precios bajan, su uso es ms diversificado, en la manufactura de polmeros sirven
como materias primas, tal es el caso de las fibras de polialanina o bien las resinas de
isocianato de lisina; el poli-gama-metilglutamato es usado como una capa superficial de la
piel sisntetica, la glicina es la materia prima inicial para la produccin del herbicida
glifosato y la treonina para el aztreonam (antibitico).

La produccin comercial de aminocidos se resume en la siguiente tabla. Se han
desarrollado procesos de fermentacin para todos los aminocidos a excepcin de glicina y
L-cistena.

Produccin mundial de aminocidos. Procesos de produccin y aplicaciones.

Aminocido
Produccin anual
(toneladas
mtricas)

Mtodos de produccin

Aplicacin
D, L-alanina 130
- Uso de enzimas o clulas inmovilizadas
- Extraccin de hidrolizados de protenas
Potenciador del sabor
L-alanina 700 - Sntesis qumica
(Produccin de bebidas)
L-arginina

1000
- Fermentacin directa
Infusiones
Terapia (enfermedades
del hgado)
Cosmticos
cido L-asprtico

4000
Terapia
Produccin de aspartame
L-asparagina 50
- Sntesis qumica
Terapia
L-cistena

700
Produccin de pan
Antioxidante
Terapia (bronquitis)
cido L-
glutmico
370000 - Uso de enzimas o clulas inmovilizadas Potenciador del sabor
L-glutamina 500 - Uso de enzimas o clulas inmovilizadas Terapia (ulcera)
Glicina 5000-6000 - Sntesis qumica
Componente de los
edulcorantes
L-histidina 200
Terapia (ulcera)
L-isoleucina 150 - Fermentacin directa Infusiones
L-leucina 150
Infusiones
L-lisina 70000
Aditivo de piensos
Infusiones
D, L-metionina 7000 - Sntesis qumica Aditivo de piensos
L-metionina 150 - Uso de enzimas o clulas inmovilizadas Terapia
L-ornitina 50
Terapia del hgado
L-fenilalanina 3000
Infusiones
Produccin de aspartame
L-prolina 100 - Fermentacin directa Infusiones
L-serina

50
- Transformacin microbiana de
precursores
Cosmticos
L-treonina 160 - Fermentacin directa Aditivo de piensos
L-triptfano 200
Infusiones
L-tirosina 100
Infusiones
Precursor de la sntesis
de L-DOPA
L-valina 150
Infusiones

IV. APLICACIN DE LOS AMINOCIDOS A NIVEL FARMACUTICO

Los aminocidos pticamente puros, compuestos que presentan una pureza del cien por
cien de una de sus variedades D L, poseen una elevada importancia biomdica debido a
sus numerosas posibilidades. Entre sus mbitos de aplicacin destaca la industria
farmacutica, ya que estn ligados a la fabricacin de sueros, aditivos alimentarios,
antibiticos, antitumorales y reactivos de aplicacin en la sntesis orgnica, entre otros
compuestos.

En medicina, en pre- y post-operatorios, se estn utilizado transfusiones de aminocidos
para mantener el nivel de nitrgeno necesario para el funcionamiento metablico. Adems,
se han desarrollado distintas mezclas de aminocidos especiales para el tratamiento de
muchas enfermedades (Kirk, 1992).
En la industria farmacutica se utilizan con distintos fines. La L-glutamina y sus derivados
se utilizan como remedio en lceras de estmago o duodenales, el L-DOPA (L-3-(3,4-
dihidroxifenil) alanina) es una droga muy efectiva en el tratamiento del Parkinson, el L-
triptfano y el 5-hidroxi-L-triptfano se emplean como antidepresivos, el aspartato de
potasio se utiliza para mejorar el equilibrio salino del metabolismo y el aspartato de calcio
para suplir las deficiencias de calcio en el organismo. La p-hidroxi-D-fenilglicina,
Dfenilglicina, D-cisteina y el cido D-asprtico son importantes como precursores de
antibiticos de las familias de penicilinas o cefalosporinas (Kirk, 1992). En concreto el
aminocido -fenilglicina se emplea como precursor en la sntesis de antibiticos -
lactmicos, como las cefalosporinas. Estos antibiticos son, dentro de los productos
farmacuticos, uno de los grupos con mayor volumen de produccin.

Tabla 1. Produccin en cultivos sumergidos de aminocidos de inters farmacutico

Aminocido Inters a nivel farmacutico
L-arginina
Alivio de hiperamonemia (aumento agudo o crnico del amonio sanguneo) y trastornos hepticos
mediante la estimulacin de la arginasa
Estimula secrecin de insulina
L-citrulina
Alivio de hiperamonemia y trastornos hepticos mediante la estimulacin de la arginasa
L-ornitina
Alivio de hiperamonemia y trastornos hepticos mediante la estimulacin de la arginasa
L-histidina Deficiencia vitamnica B
6
en el embarazo
L-homoserina Enfermedades carenciales
L-glutamina
Deficiencia vitamnica B
6
en el embarazo
Tratamiento de ulceras gstricas
L-isoleucina Enfermedades carenciales
L-leucina Enfermedades carenciales
L-fenilalanina Enfermedades carenciales
L-prolina Enfermedades carenciales
L-treonina Tratamiento del sobrepeso
L-valina Enfermedades carenciales
L-cistena Tratamiento de bronquitis e inyeccin intravenosa post-operatoria

Uno de los mayores problemas reside en su produccin. El mtodo empleado con mayor
eficiencia, denominado proceso de la hidantoinasa, se reduce a la sntesis de tan slo dos
compuestos, la D-fenilglicina y D-parahidroxifenilglicina, que permiten la elaboracin de
los antibiticos ampicilina y amoxicilina, respectivamente.

Con el objetivo de mejorar la produccin de aminocidos, actualmente se ha adaptado este
limitado proceso a la fabricacin de cualquier D-aminocido pticamente puro. El aspecto
ms innovador del descubrimiento reside en el desarrollo de un nuevo organismo
recombinante capaz de producir las tres enzimas necesarias en la sntesis de cualquier D-
aminocido pticamente puro con una eficacia del 100%.

El proceso consiste en introducir en la bacteria Escherichia coli un ADN plasmdico
(material gentico extracromosmico procedente de la bacteria parasitaria de plantas
Agrobacterium tumefaciens) con el objetivo de incorporar los genes responsables de
producir las enzimas (Martnez, 2009).

En el ao 2002, ya se haba logrado producir cualquier D-aminocido pticamente puro con
una eficiencia similar a la actual. Pero su elaboracin precisaba de tres organismos, cada
uno de ellos responsable de aportar una enzima, y cuatro biorreactores. Tres de ellos eran
empleados en la obtencin de las clulas productoras de las enzimas perseguidas; luego,
stas eran mezcladas en un cuarto reactor donde se aada el sustrato necesario para la
reaccin y se obtenan los compuestos deseados. Gracias al desarrollo de este nuevo
mtodo que se ha patentado, se ha conseguido reducir el costo, tanto material como tiempo,
de la fabricacin de D-aminocidos pticamente puros al ser necesario un nico organismo
y, por tanto, un solo biorreactor.

Actualmente este sistema de coexpresin enzimtica para la produccin de D-aminocidos
se utiliza para la obtencin de D-aminocidos, pero se tiene la intencin de adaptarlo a la
fabricacin de otros dos tipos (los L- y pticamente puros). Entre otras aplicaciones,
estos ltimos destacan por su ya reconocido efecto antitumoral.

Este descubrimiento tiene una gran importancia a nivel farmacutico ya que este sistema,
similar para la produccin de -aminocidos, puede aplicarse en el desarrollo de
precursores de medicamentos antitumorales o en el tratamiento del Parkinson. Esto es
debido a que la creacin de un sistema enzimtico capaz de producir un nmero ms o
menos amplio de este tipo de -aminocidos es muy interesante para la biomedicina. Una
de las enzimas que se ha caracterizado, y que forma parte del sistema para la produccin de
-aminocidos, es la amidohidrolasa N-carbamoilbeta-alanina. Se ha publicado en Applied
and Envirionmental Microbiology, que la -alanina se distribuye de forma significativa en
el sistema nervioso y acta como anlogo de diferentes inhibidores de neurotransmisores,
por lo que podra estar vinculada a la transmisin sinptica.

V. EMPRESAS QUE PRODUCEN O COMERCIALIZAN CON
AMINOACIDOS

En Mxico existe una gran tradicin en cuanto a la utilizacin de los seres vivos, sus
productos o sus partes para la produccin de satisfactores sociales y tambin en cuanto a la
investigacin de los sistemas biolgicos. Un anlisis general revel que las empresas
biotecnolgicas identificadas presentan las siguientes caractersticas:

Tienen una dependencia tecnolgica casi total del extranjero y, en particular, a lo
que se refiere a la infraestructura de investigacin y desarrollo.

En su mayora son empresas identificadas dentro de la industria de alimentos,
particularmente en la elaboracin de productos lcteos, levadura para panificacin y
bebidas fermentadas. Los procesos que utilizan estas empresas son en su mayora de
fermentacin o enzimticos. La investigacin y desarrollo que se realiza est
asociado en gran medida al control de calidad de sus productos.

Un grupo importante de empresas son las ubicadas en la industria qumico-
farmacutica, entre las que predominan las productoras de antibiticos. Los
procesos utilizados son fermentativos y/o enzimticos; destacan en esta industria,
empresas mexicanas como Cibiosa, S.A. de C.V. Sin embargo, en la industria
farmacutica la mayor parte de las empresas son transnacionales que realizan su
investigacin fundamental y desarrollo en su casa matriz (Upjohn, Abbott
Laboratories de Mxico, S.A. de C.V., etctera).

Productos como las enzimas son elaborados por empresas como: Enmex, S.A.,
Quimorgan, Efensa, S.A. de C.V., entre las ms importantes; su actividad en
investigacin es realizada con sus socios en el extranjero.

Tambin hay empresas productoras de aminocidos tales como Fermentaciones
Mexicanas, S.A. de C.V. y Enzimloga; esta ltima produce aspartame bajo licencia
de Searle; sus actividades de I-D estn relacionadas con el desarrollo de
innovaciones en productos y/o procesos.

Sinbiotik Internacional
Aminas y Derivados
Bioteksa
Box de Mxico
Laboratorios Pisa
Danamart Chemicals de Mxico
Qumica Foliar
Alltech y Aplied Science para
Mxico
Productos Tecnoqumicos
Dorubiel Rosales
America Alimentos
Canamex Especialidades
Qumicas
Laboratorios Avilab
Baja-Ital
Bio-Zoo
Difac
Global Health Care International
Cyanamid de Mxico

VI. MTODOS DE PRODUCCIN

Entre los productos obtenidos por fermentacin destaca el mercado que ocupan los
aminocidos. Se han desarrollado procesos de fermentacin para todos los aminocidos
excepto para glicocola, L-cistena y L-cistina, pero no todos estos procesos de fermentacin
se encuentran en uso a nivel comercial. En la fabricacin comercial de aminocidos existen
tres procesos:

1. Sntesis qumica. La produccin de glicocola, D, L-alanina, D, L-metionina y D, L-
triptfano siempre implica sntesis qumica. La sntesis qumica es ms barata que la
produccin microbiana pero el producto qumico es la mezcla pticamente inactiva
de los ismeros D y L. Por ello se han establecidos procesos enzimticos para la
resolucin ptica. La aminoacilasa es la enzima que presenta mayores ventajas en la
obtencin de L-aminocidos, ya que se cataliza la siguiente reaccin:

2. Extraccin de aminocidos a partir de hidrolizados de protena. Este mtodo se
utiliza para obtener L-cistena, L-cistina, L-leucina, L-asparragina y L-tirosina.

3. Produccin microbiolgica. Dentro de esta existen tres enfoques:

a. Fermentacin directa de aminocidos utilizando diferentes fuentes de carbono, como
glucosa, fructosa, melazas, hidrolizados de almidn, n-alcanos, etanol, glicerol, acetato,
propionato, obtenindose altos rendimientos.

Como ya se menciono, prcticamente existen para todos los aminocidos procesos de
fermentacin desarrollados, pero en todos los casos se producen comercialmente por esa
va.
Acido L-glutmico

La produccin de L-glutmico se realiza principalmente por fermentacin. Se conocen
numerosos microorganismos capaces de producirlo a partir de diferentes fuentes de
carbono. La ruta biosinttica para la obtencin del acido glutmico es conocida, a partir de
glucosa como fuente de carbono utilizando la ruta metablica Embden-Meyerhof y el ciclo
pentosa-fosfato se canalizan al ciclo de cidos tricarboxilicos. Las cepas comerciales son
mutantes en el ciclo tricarboxilico, con un bloqueo de la alfacetoglutarato deshidrogenas, lo
cual permite acumulacin de acido glutmico. La estequiometria de la reaccin con base a
glucosa es de 1 mol de aminocidos por 1 mol de glucosa.

Un proceso de fermentacin tpico de esta fermentacin se presenta a continuacin. En
estos casos se logra que la bacteria convierte del 50 al 60 % de la fuente de carbono a acido
L-glutmico, alcanzndose concentraciones de ms de 100 g/Lt, con una productividad del
orden de 20 toneladas por metro cubico de fermentacin por ao.

Acido L-asprtico

El acido L-asprtico se produce industrialmente a partir de acido fumrico y amonio por los
mtodos de fermentacin o enzimtico, empleando la reaccin de la aspartasa:

Inicialmente se utiliz aspartasa de E. coli inmovilizadas para operar un proceso continuo;
sin embargo, debido a que el precio del acido asprtico es bajo se buscaron otros mtodos
alternativos. Como resultado de estas investigaciones se inmovilizaron clulas de E. coli
con alta actividad de aspartasa en gel de poliacrilamida. Este proceso se comercializ
operando en continuo con columnas empacadas de clulas inmovilizadas. Desde un punto
de vista econmico este proceso es ms barato que la fermentacin y los procesos
enzimticos en lote. Posteriormente la poliacrilamida fue sustituida por la K-carragenina
como material de inmovilizacin de las clulas.

I nhibicin por retroalimentacin en la biosntesis de lisina y treonina

L-alanina

Este aminocido se produjo en su inicio en un proceso lote a partir de acido L-asprtico
usando la enzima L-aspartato 4-descarboxilasa de Pseudomona dacunhae.

Posteriormente las clulas de P. dacunhae fueron inmovilizadas en K-carragenina
pudindose tener un proceso continuo ms eficiente. Con propsito de aumentar la
productividad del sistema se inmovilizaron conjuntamente clulas E. coli con actividad de
aspartasa y de P. dacunhae con actividad de 4-descarboxilasa alimentando como sustrato al
reactor una solucin de fumarato de amonio. Las clulas contienen la enzima L-aspartato -
descarboxilasa y el reactor se opera a alta presin con el objeto que se disminuya la
liberacin del CO2 que se forma como subproducto. En una columna de 1 metro cubico se
pueden obtener 5.1 toneladas mensuales de L-alanina y 9.5 de acido D-asprtico. Esta
productividad del acido D-asprtico es 6 veces ms alta que la de un reactor con
aminoacilasa inmovilizada.

L-serina

La enzima serina hidroximetiltransferasa convierte reversiblemente la glicina y el
formaldehido en L-serina en presencia del cofactor, acido tetrahidrofbico, de acuerdo con
la siguiente reaccin:

Con el objeto de tener una cepa hiperproductora de la enzima se tradujeron copias mltiples
del gene de la enzima de E. coli en Klebsiella aerogenes, logrndose que 10 % de la
protena total de la bacteria fuese la enzima. La produccin de la enzima alcanzo los valores
ms altos de actividad especfica cuando la fermentacin se realizo manteniendo bajas
concentraciones de oxigeno disuelto. El biocatalizador se prepara con clulas completas
permeabilizadas o bien con lisados celulares. Se obtuvo una productividad de 10 g de L-
serina por litro de biorreactor por hora con una conversin molar de 80 % de glicina a L-
serina. La relacin en concentraciones finales entre L-serina y la glicina residual es de 12:1,
permitiendo la recuperacin de la L-serina por cristalizacin fraccionada y reciclando la
glicina al reactor. Alternativamente el efluente del reactor puede ser usado como sustrato en
la produccin de L-triptofano.

L-triptfano

El aminocido esencial triptfano puede ser producido por sntesis qumica, fermentacin a
partir de azucares y mtodos enzimticos usando la triptofanasa o la triptfano sintetasa. La
mayor parte de los mtodos qumicos producen mezclas D-L triptfano y aun cuando hay
resolucin enzimtica se requieren pasos adicionales de proceso que incrementaba los
costos.

Se han descrito numerosas fermentaciones microbianas para la biosntesis de triptfano
incluyendo el uso de cepas modificadas por ingeniera gentica. Por esta tcnica se ha
incrementado la productividad de la fermentacin, pero la concentracin al final de la
fermentacin continua siendo baja, 15 a 17 g/Lt.

Produccin enzimtica de aminocidos.

Aminocido Enzima
Microorganismo
productor de la
enzima
Reaccin
Rendimiento
(g/Lt)
Eficiencia
(%)
L-alanina
Aspartato
descarboxilasa
Pseudomonas
dacunhae
L-asp L-ala + CO
2
600 100
cido L-asprtico Aspartasa E. coli
Fumarato + NH
4
+

cido L-asprtico
560 99

L-cistena
Cistena
desulfidrasa

Bacillus sphaericus
-Clor-L-alanina + Na
2
S
L-cistena + NaCl +
NaOH

70

80-85
L-DOPA (L-3,4
Dihidroxifenilalan
ina)

Tirosinasa

Erwinia herbicola
Pirocatecol + Piruvato +
NH
4
+
L-DOPA + H
2
O

59

95
L-leucina
L-leucina
deshidrogenasa

Bacillus sphaericus
cido -cetoisocaproico +
NH
4
+
+ NADH L-
leucina + H
2
O + NAD
+

42 Mx. 99.7
L-lisina
D-amino
caprolactama
racemasa
Achromobacter
obae
D,L aminocaprolactama +
H
2
O L-lisina
100

100

L-amino
caprolactama
hidrolasa
Cryptococcus
laurentii
L-fenilalanina
L-fenilalanina
deshidrogenasa
Brevibacterium sp.
Fenilpiruvato + NH
4
+

L-fenilalanina + H
2
O
37
Acetamidocinna
mato amido
hidrolasa

Bacillus sphaericus
cido acetamidocinamico
L-fenilalanina
8 94
Fenilalanina
amonio liasa
Rhodotorula
glutinis
cido Trans-cinmico +
NH
4
+
L-fenilalanina

18

70
Aspartato
fenilalanina
transaminasa
E. coli
L-aspartato +
Fenilpiruvato L-
fenilalanina + Oxalacetato
30 98
D-
hidroxicaproato
deshidrogenasa

Lactobacillus casei
D,L Fenillactato
Fenilpiruvato
- -
L-
hidroxicaproato
deshidrogenasa
Lactobacillus
confusus

L-fenilalanina
deshidrogenasa
Rhodococcus sp.
Fenilpiruvato + NH
4
+

L-fenilalanina + H
2
O
28 -
L-serina
Serinhidroximet
il transferasa
Klebsiella
aerogenes
Glicina + HCHO L-
serina
450 88
L-triptfano
Serinhidroximet
il transferasa
Klebsiella
aerogenes
Glicina + HCHO L-
serina
200
95 basado en
indol
Triptofanasa E. coli
L-serina + Indol L-
triptfano + H
2
O
L-tirosina
Serinhidroximet
il transferasa
Klebsiella
aerogenes
Glicina + HCO L-serina
26
61 basado en
glicina
-tirosinasa Erwinia herbicola
L-serina + Fenol L-
tirosina + H
2
O

b. Conversin de productos intermediarios baratos, va biosntesis. Por ejemplo, la
glicocola que es barata, puede ser convertida en L-serina.

c. Uso de enzimas o clulas inmovilizadas, a veces en procesos continuos que implican
reactores de enzimas unidas a membranas para la separacin de una mezcla racmica. En la
siguiente tabla se muestran varios de los principales sistemas inmovilizados (enzimas o
clulas) utilizados en la produccin de aminocidos.

Las ms comunes reacciones de este tipo son:

- La utilizacin de amino acilasas especificas de Aspergillus oryzae para cortar
selectivamente un D, L aminocido sintetizado qumicamente, que haba sido
qumicamente acetilado. De esta forma la forma L del aminocido es liberada
selectivamente.

- Pueden producirse L--aminocidos a partir de -cetocidos utilizando aminocidos
deshidrogenasas. La deshidrogenasa ms utilizada es una enzima de cepas de
Bacillus, como B. megaterium que requiere NADH como coenzima.

- La D, L-5-hidantoinas monosustituidas que son producidas qumicamente con
facilidad pueden ser convertidas mediante cortes enzimticos estereoespecficos en
aminocidos Do L pticamente activos. El corte de hidantoina por Do L-
hidantoinasa conduce a la produccin de D o L-N-carbamoilaminocidos. El
residuo carbamoilo es eliminado qumica o enzimticamente con la carbamoilasa
correspondiente. Las L-hidantoinasas han sido encontradas solamente en unas pocas
bacterias, por ejemplo, Flavobacterium ammoniagenes, mientras que las D-
hidantoinasas se encuentran en numerosas bacteritas, actinomicetos, levaduras y
algunas cepas de Aspergillus.

Adems del uso de este enfoque para la produccin de L-aminocidos puede
tambin ser utilizado para la fabricacin de D-N-carbamoil aminocidos y D-
aminocidos que tienen un papel importante como precursores para la produccin
de penicilinas y cefalosporinas.

En la siguiente tabla se muestra un resumen de los metodos industriales para la obtencion
de aminoacidos.

Tecnologa
Proceso
Fecha de
Aplicacin
Fundamento
Tcnico-cientfico
Materias
Primas
Utilizadas
Productos
Obtenidos
Observaciones
Ventajas /
Inconvenientes
Hidrlisis cida
de protenas
animales
Mediados del
siglo XIX
Ataque de las protenas
con cidos fuertes
descomponindolas en
pptidos y aminocidos.
Residuos de
mataderos.
Subproductos
industrias lcteas.
Pptidos y
aminocidos.
Alto contenido
de impurezas
procedentes de
los cidos.
Baratos.
Uso muy limitado.
Tecnologa
Rudimentaria.
Hidrlisis
enzimtica de
protenas
vegetales
En la dcada
de 1970
Desintegracin de las
protenas por medio de
enzimas.
Residuos
Vegetales.
Protenas
Vegetales.
Pptidos y
aminocidos
derivados.
Difcil control
del proceso y
de los
productos.
Relativamente
baratos.
Peligro de
alteraciones en las
clulas.
Sntesis
Microbiana
Cultivo de
microorganismos
manipulados
genticamente
1960 Activacin de
microorganismos
capaces de sintetizar
aminocidos.
Tecnologa japonesa.
Microorganismos.
- Brevibacterium.
- Corinobacterium
manipulados
genticamente.
Solo nueve
aminocidos.
Difcil
eliminacin de
toxinas del
caldo de
cultivo.
Aminocidos
baratos para
alimentacin
ganadera.
No apto para uso
agrcola o mdico.
Sntesis qumica 1850 (A.
Strecker
1956)
Reacciones qumicas.
Unin de los elementos
qumicos.
Diversos
componentes
qumicos.
Se obtienen
aminocidos
puros no
biolgicamente
activos en
cantidades
pequeas, gran
pureza y muy
caros.
Uso como
patrones en
cromatografa.
Su elevado coste
impide su uso en
otras reas.
Ingeniera
biolgica
1982
Proceso
INAGROSA
Rutas biosintticas
celulares.
Qumica del estado
slido.
Cromatografa HPLC.
Similares a las de
pre sntesis celular
(piruvatos).
Todos los
aminocidos
fundamentales.
Muy puros y
biolgicamente
activos.
Oligopptidos
similar a los
Factores de
Transcripcin
Celular.
Muy puros,
biolgicamente
activos y estables.
Uso Universal:
agricultura,
medicina,
cosmtica, etc.
Precio
Competitivo.

VII. CONTROL DEL PROCESO DE FERMENTACIN

La produccin de aminocidos se lleva a cabo en procesos discontinuos durante 2-4 das en
fermentadores que contienen hasta 450 m
3
. Se han desarrollado mtodos que utilizan
procesos continuos pero no han sido todava implementados en plantas comerciales.

Debido a la alta velocidad de degradacin de los azcares y a la alta actividad respiratoria
durante la fermentacin se produce un gran requerimiento de oxigeno. Las velocidades
ptimas de aireacin para cada proceso individual dependen de las cepas, el sustrato y la
va biosinttica.

El exceso de calor debe ser disipado simultneamente ya que el proceso que se lleva a cabo
a temperaturas de entre 28 y 38C.

El pH se mantiene constante entre 6.8 y 8.0, dependiendo del proceso; frecuentemente se
utiliza NH
3
gaseoso para el control del pH y se metaboliza simultneamente como fuente de
nitrgeno.

Durante el proceso de fermentacin de aminocidos los parmetros crticos como la
velocidad de aireacin, la temperatura, el pH y la dosis de antiespumante son todos
regulados automticamente y en unos pocos casos estn bajo el control de un ordenador
(Crueger, 1993). Se han desarrollado biosensores que permiten la medida continua de la
concentracin de aminocidos en el fermentador. Por ejemplo, se ha preparado un sensor de
cido glutmico utilizando como enzima glutamina sintetasa obtenida de la bacteria
termfila Bacillus stearothermophilus.

Se han desarrollado varios mtodos para la evaluacin de los aminocidos en el caldo de
cultivo. Estos mtodos incluyen el anlisis qumico, cromatografa en papel, anlisis
colorimtricos, cromatografa gas-lquido, espectrometra de masas, espectroscopia de
infrarrojo de intercambio inico y la cromatografa lquida de alta resolucin. Tambin se
han descrito mtodos de cromatografa en papel utilizando un sistema disolventes
compuesto por n-butanol, cido actico y agua en una proporcin de 2:1:1.

VIII. PUNTOS CRTICOS DEL PROCESO DE PRODUCCIN DE
AMINOCIDOS PORM FERMENTACIN

Un proceso industrial se desarrolla con xito cuando se pasa de manera adecuada desde la
idea original, que se prueba a nivel de laboratorio, hasta el proceso a gran escala. Ello no
consiste, simplemente en aumentar la cantidad de materia calculada para el proceso
original, sino que se debe de tener en cuenta otros parmetros que consideren los problemas
que surgen al trabajar a gran escala. Ello lleva consigo que las tcnicas y materiales que se
utilizan el proceso industrial son bastante diferentes de los utilizados en el sistema original
a pequea escala. Los fenmenos biolgicos, por su parte, ofrecen un problema por s solos,
ya que operan a concentraciones muy diluidas tanto de los sustratos como de los productos
aun despus de intensificar el proceso.

Para el desarrollo de los procesos biolgicos el trabajo se centra principalmente en tres
reas: el desarrollo del organismo, el desarrollo del medio y la ingeniera de la
fermentacin. La ingeniera de la fermentacin es la rama de la tecnologa que estudia el
desarrollo, construccin y operacin de la planta y el equipo utilizado en los procesos
biolgicos a escala industrial. Las condiciones ambientales existentes dentro de un
fermentador puede considerarse bajo tres aspectos diferentes: biolgicas, qumicas y fsicas.

El medio biolgico es favorable para un proceso biolgico cuando nicamente los
organismos que contribuyen al proceso en cuestin se encuentran presentes, mientras que
los no productivos, destructivos o no deseados se encuentran excluidos llevan consigo lo
llevan tambin consigo que los organismos deseados se encuentran presentes en cantidades
suficientes para llevar a cabo el proceso deseado a un ritmo que sea rentable, aunque se
asume normalmente que ello de deriva, simplemente, de mantener unas condiciones
ambientales adecuadas.

Un sistema que contenga solamente el organismo deseado se dice que es asptico. La
asepsia se consigue en la prctica eliminando todos los organismos vivos, es decir,
esterilizando, e introduciendo despus el organismo deseado. Alcanzar las condiciones
aspticas es caro, lo mismo que es mantenerlas, por lo que el diseo, construccin y
operacin de la planta no deber de ser ms riguroso de lo que sea estrictamente
indispensable. Se deber de tener en cuenta, por tanto, el riesgo de contaminacin del
proceso as como los costos que la contaminacin trae consigo y el de prevencin de la
contaminacin para obtener el balance ms adecuado.

La infeccin debida a bacterifagos puede causar prdidas considerables en la produccin.
Para evitar la infeccin fgica pueden ser utilizados mutantes resistentes a fagos y agentes
qumicos que inhiben la reproduccin de fagos. Una investigacin intensa sobre el
mantenimiento de cultivos puros (esterilizacin del equipo, medio y aire) se sta llevando a
cabo; la esterilizacin de las soluciones de nutrientes tiene lugar generalmente en forma
continua.

El medio fsico se refiere fundamentalmente a la temperatura del sistema que hace que su
control se tenga muy en cuenta cuando se disea un fermentador. Este requerimiento y la

necesidad de mantener la uniformidad de las condiciones a lo largo del fermentador, lleva
consigo la necesidad de una buena agitacin, lo que a su vez provoca la ruptura de los
organismos y sus agregados. Debe sealarse que cuando se mantiene un ambiente
favorable, los parmetros ambientales no tienen que parecer constantes a lo largo del
tiempo. La fermentacin por cargas pasa por diferentes fases de crecimiento que tienen
diferentes condiciones optimas, de modo que la fermentacin parece estar programada de
acuerdo con la disponibilidad de los nutrientes, que cambian a lo largo del tiempo, el pH o
la temperatura, para que aparezcan, de acuerdo con estos cambios las sucesivas fases de
crecimiento.

Dentro del fermentador se deben de mantener un ambiente controlado y debidamente
cerrado, al mismo tiempo que se mantenga una estrada y salida asptica tanto para el medio
del nutriente como para el aire y los fluidos de control, as como para los sistemas de
calefaccin, enfriamiento y agitacin.

Las reglas bsicas para el diseo y construccin de plantas de funcionamiento asptico se
basan en el principio de que los microorganismo son muy pequeos, de un tamao mucha
menor que las tolerancias normales en ingeniera. Ello quiere decir que lo que se considera
un cierre hermtico en un sistema no biolgico, puede permitir el paso libre de
microorganismos. La aplicacin estricta de las normas para el trabajo asptico repercute en
el costo y en la dificultad de construccin, operacin y mantenimiento de la planta y deber
aplicarse solamente despus de un estudio realista de los riesgos y costos resultantes en la
contaminacin.

Cuando se opera de una forma estrictamente anaerbica debe de mantenerse la integridad
mecnica de la planta. Los puntos de entrada a las zonas aspticas de la planta, tales como
las uniones de cierre mecnicos de los ejes de los agitadores y bombas, los cierres de las
vlvulas, los puntos de entrada para la toma de muestra, constituyen posibles puntos de
contaminacin y deber de limitarse su nmero lo ms posible. La estructura deber
sellarse en su totalidad sin cierres mecnicos tales como los cierres apretados o con
tornillos que deben de sustituirse por uniones soldadas. Los problemas de mantenimiento
que resultan de este tipo de instalaciones, en donde quitar o reemplazar un componente
exige cortar y volver a soldar se justifican con los menores riesgos de contaminacin
debido a que las juntas mecnicas se sueltan por la vibracin, o la expansin y contraccin
trmica que acompaa a los ciclos de esterilizacin. Cuando estos sierres no puedan
sustituirse se debe rodear por una camisa de vapor. Todas las conexiones con la zona
asptica de la plata deben estar protegidas con vapor, lo que incluye a los vstagos de la
vlvula utilizadas para controlar el flujo del lquido en las tuberas y el flujo de vapor que
va a los sistemas de salida de vapor, de la misma manera que no deben existir conexiones
directas entre la zona estril y no estril de la planta.

Las tuberas se deben de mantener bajo presin de vapor cuando no se usen y deben
construirse con una pendiente que las haga verter sobre un determinado punto, de manera
que no se acomode el lquido en su interior. El vapor se introduce en la parte superior de la
pendiente de manera que la condensacin se pueda drenar al final de la tubera. En algunas
operaciones el drenaje se mantiene abierto para que fluya continuamente, aunque este vapor
pueda crear una atmosfera enrarecida en la planta. El diseo de la plata en general debe

evitar zonas de estanco, espacios muertos, bolsas, ramificaciones en las tuberas y ranuras
que, no solo recolecten lquido estancado y microorganismos, sino tambin dificultan el
proceso de fermentacin aumentando tambin el riesgo de correccin.

El material que se utiliza para la construccin de los fermentadores de gran tamao es el
acero inoxidable de la calidad adecuada. Dependiendo de su formulacin, el acero
inoxidable posee diferentes propiedades mecnicas, de resistencia a la corrosin, facilidad
de fabricacin, disponibilidad y costo.

Las vlvulas se requieren para regular el flujo lquido y debe resistir lquidos calientes y
fros que contengan partculas solidas en suspensin y vapor de agua. Puesto que estas son
puntos de unin o cierre mecnico representan un cierto grado de infeccin y/o
contaminacin. Las vlvulas de diafragma se emplean ampliamente en la fermentacin
mientras que, para las condiciones estrictamente aspticas, se emplean las vlvulas de
pistn con vstago sellado al vapor.

Las bombas deben evitarse, en lo posible, debido a que implica componentes mviles que
aumentan el riesgo de contaminacin, aunque puede limitarse el riesgo interponiendo un
punto de esterilizacin entre la bomba y la zona estril. El movimiento del fluido debe
realizarse mediante gravedad o por presin de gas estril. Las bombas centrifugas se
emplean en la industria biolgica siendo la unin del eje mvil el punto de mayor riesgo,
por lo que en los casos de condiciones estrictamente aspticas se deben utilizar bombas de
pistn cerradas al vapor.

Para facilitar la operacin, las diferentes secciones de la planta deben esterilizarse
independientemente, aunque estn conectadas a travs de una vlvula de presin para
impedir que la zona no estril de la planta entre en contacto con la estril. Las vlvulas se
protegen mediante vapor que pasa a travs de los vstagos, mientras que las tuberas que
unen las unidades y se mantienen estriles pasando vapor a travs de las vlvulas y
disponiendo de una salida para que salga el lquido procedente del vapor condensado. Una
planta de gran tamao puede tener un nmero elevado de sistemas de cierre de este tipo, de
manera que la esterilizacin de las distintas unidades y la transferencia de material a travs

de la planta implican cientos de operaciones con vlvulas, instrumentos y bombas. Las
condiciones de asepsia estricta se controlan continuamente, lo mismo que se controla el
estado fsico de la planta, las secuencia de operaciones, el grado de preparacin de
operador, los riesgos de la planta y la integridad tcnica de estar mediante un sistema de
choque continuo. Ello implica comprobaciones de los cierres estriles, perdidas en los
cierres, vlvulas y soldaduras, sumidero de vapor, registro de temperatura, anlisis de los
riesgos de la esterilidad y mantenimiento.

Esterilizacin del aire. La esterilizacin del aire que proporciona el oxigeno en un proceso
aerbico, adems de ser vital, representa una demanda de energa muy importante. Un
fermentador tpico necesita varias toneladas de aire que deben, en principio, estar libre de
microorganismos. Aunque durante la compresin del aire se produce una esterilizacin
parcial, el mtodo ms utilizado es la filtracin, en el que el aire pasa a travs de una
almohadilla de material fibroso. El efecto del espesor de la almohadilla es logartmico con
respecto a la eliminacin de partculas ya que cada unidad de espesor del filtro elimina la
misma proporcin de partculas que pasan a travs de l. Esto quiere decir que, aunque los
filtros ms espesos eliminan ms partculas, se necesitara un espesor infinito para eliminar
todas las partculas del aire. El filtro se esteriliza normalmente pasando a travs de l una
corriente de vapor o bien calentndolo elctricamente. Para conseguir una esterilizacin
absoluta de aire habra que pasarlo a travs de filtros con poros o aperturas suficientemente
pequeas para que impidan el paso de partculas tan pequeas como una fraccin de una
micra, que atrapara a las esporas microbianas o a las partculas de virus. No obstante, tales
filtros son caros, se obstruyen fcilmente y requieren ser sustituidos con frecuencia, lo que
provoca una fuerte cada de presin. Los materiales que se utilizan para los filtros de esta
naturaleza son el papel, la cermica no viriada y el papel de parafina o los tapones de
plstico poroso.

IX. CEPAS UTILIZADAS EN LA PRODUCCIN MICROBIOLGICA DE
AMINOCIDOS

En 1908 se aisl el cido glutmico de un alimento autctono oriental por lo que se empez
a producir comercialmente a partir de la hidrlisis de protenas. En 1957 se asla una cepa
microbiana capaz de producir y secretar al medio aproximadamente 1 g/ Lt de cido
glutmico. Desde entonces se aislaron muchas cepas capaces de acumular ms de 30 g/Lt
del aminocido.

Se utiliza un cierto nmero de bacterias Gram positivas, dependientes de biotina, de los
gneros Corynebacterium, Brevibacterium, Arthhrobacterium y Microbacterium. Estos
gneros no esporulados, inmviles y con forma de coco o cocobacilo estn
taxonmicamente relacionados (contenido en guanosinacitosina del DNA 51.2 54.4
moles %) y se conocen como bacterias de cido glutmico. Pueden emplear glucosa,
acetato o etanol como fuentes de carbono. No crecen en metanol pero algunas cepas lo
hacen en alcanos (Wiseman, 1986).

Las cepas productoras de cido glutmico se caracterizan por:
Su requerimiento de biotina (auxotrofas)
Por poseer una muy baja actividad de la enzima -ceto glutarato deshidrogenasa.
Predominio de las vas anapleroticas

Cuando se cultivan estas bacterias dependientes de biotina en un medio limitante de biotina
en biotina tiene lugar un descenso en el contenido de fosfolpidos de la membrana celular.
La disminucin que se produce en la permeabilidad de la membrana facilita la secrecin de
cido glutmico. La permeabilidad puede aumentarse mediante la adicin de penicilina y
agentes surfactantes al medio, hasta el extremo de que a veces la produccin puede tener
lugar en presencia de un exceso de biotina.

Regulacin de la sntesis de lisina en Brevibacterium flavumn y Corynebacterium glutamicum.
La represin impide la biosntesis de la enzima, mientras que la retroinhibicin interrumpe la
actividad de la enzima.

Corynebacterium glutamicum es una bacteria Gram-positiva del suelo que ha sido
modificada para producir grandes cantidades de aminocidos. Desde hace varias dcadas,
esta bacteria se utiliza en los procesos de fermentacin industrial y proporcionar la totalidad
de L-glutamato y L-lisina, de la produccin mundial (cerca de 1.45 x 10
6
toneladas por ao)
(Bayan, 2003). C. glutamicum tambin se utiliza para producir otros aminocidos de menor
importancia industrial. C. glutamicum pertenece al suborden de las Corynebacterineae, un
suborden de los actinobacterias que incluye micobacterias, corinebacterias, nocardia y
rhodococcus.

Aunque los microorganismos que excretan cido glutmico se encuentran fcilmente en la
naturaleza ha sido ms difcil obtener aislados naturales que excreten otros aminocidos
para la produccin a gran escala. Se ha llevado a cabo una intensa bsqueda para el
aislamiento de solamente unas pocas cepas que excreten D, L-alanina y D-valina. Los
microorganismos aislados naturalmente rara vez excretan estos aminocidos, ya que el
metabolismo celular regula su produccin.

En el desarrollo de cepas existen varios mtodos para eliminar el control por regulacin:

a. El uso de mutantes auxotrofos que ya no pueden formar efectores o co-represores
(generalmente productos finales) y excretan los intermediarios de la va biosinttica
que se encuentran justo por delante del bloqueo.

b. El uso de mutantes regulatorios. Por ejemplo, si se produce un exceso de producto
al final de una va biosinttica ramificada pueden ser seleccionados mutantes con
una enzima clave insensible a la autorregulacin, bien a partir de cepas resistentes a
antimetabolitos o a partir de una poblacin de revertientes procedentes de
auxotrofos.

c. El uso de recombinacin gentica para combinar mutantes auxotrofos o
regulatorios a partir de diferentes cepas en una cepa hibrida nica. Estas cepas
mutantes pueden obtenerse:

Usando fagos

Si dos fagos infectan a una misma bacteria, se dan las
condiciones propicias para poder obtener
entrecruzamientos y recombinacin en el genoma
vrico. Este fenmeno suele denominarse
coinfeccin. Se obtienen en la progenie virus que
poseern el fenotipo parental y otros individuos que
sern recombinantes. Cuando ocurre la coinfeccin,
si los genomas no mantienen contacto, entonces no
podr darse entrecruzamiento. Se pueden hacer
mapas segn los datos de recombinantes que se
obtengan.

Usando plsmidos vectores

Los plsmidos son molculas de ADN circulares, presentes en
el citoplasma de las bacterias que pueden extraerse de las
mismas e incorporarse a otras, a travs del proceso de
transformacin. Los plsmidos han sido modificados para ser
empleados como vectores. As, el gen de inters puede
insertarse en el plsmido-vector e incorporarse a una nueva
clula. Para seleccionar las bacterias que reciben el plsmido,
ste lleva, adems del gen de inters (el gen para la
produccin de un aminocido especfico), un gen marcador de
seleccin (por ejemplo resistencia a un antibitico), que le
otorga a la bacteria que lo lleva la capacidad de sobrevivir en
un medio de cultivo selectivo (medio con antibitico, en este ejemplo). Las clulas que
sobreviven se dividen y generan colonias, formadas por bacterias idnticas. Estas bacterias
se denominan recombinantes o genticamente modificadas. El plsmido recombinante
puede aislarse de estas colonias y transferirse a otras clulas.

Usando fusin de protoplastos para combinar cepas con caractersticas deseables
(Genome shuffling)

La tcnica de fusin de protoplastos surge como especialidad o aplicacin a partir de las
tcnicas de aislamiento y cultivo de protoplastos, que permiten la obtencin de clulas
desprovistas de pared celular gracias a la accin de enzimas lticos (celulasas, pectinasas)
obtenidos de microorganismos (Aspergillus sp.; Trichoderma viride; Rhizopus sp.), y su
posterior crecimiento (divisin celular, formacin de microcallos y regeneracin de
plntulas por va organognica o embriognica).

Una de las principales dificultades para lograr la sobreproduccin de aminocidos por
fermentacin es que los aminocidos son productos de vas multienzimticas, por lo tanto,
es preciso tener un gran conocimiento de la regulacin de la va para identificar la enzima
que debe clonarse (Garca, 2004). Los experimentos inciales se llevaron a cabo en E. coli.

La siguiente etapa del desarrollo de metodologas recombinantes para hiperproduccin de
aminocidos es para lela al desarrollo de los sistemas de clonacin en corinebacterias.
Inicialmente, se introdujeron genes de E. coli para tratar de incrementar el nmero de
copias. Por otra parte, el desarrollo de vectores propios y de sistemas de transformacin de
protoplastos ha logrado hasta triplicar la produccin de aminocidos en Brevibacterium.

Fusin de protoplastos para cepas que pueden recombinar en forma mittica.

En la siguiente tabla se presenta una lista de cepas que se utilizan para la produccin
microbiana de aminocidos, sus caractersticas genticas y los rendimientos obtenidos.

Produccin de aminocidos por fermentacin
Aminocido Cepa utilizada
Caractersticas
genticas
Rendimiento
(g/Lt)
Fuente de
carbono
D, L-alanina
Microbacterium
ammoniaphilum
Arginina hidroxamato 60 Glucosa
L-alanina Pseudomonas Nr. 483 Cepa silvestre 17.5 Glucosa
L-arginina
Serratia marcescens AT
428 (aru argR2 argA2)
Transduccin

50 Glucosa
cido L-
asprtico
Escherichia coli Ki-
1023*
Canavanina 56 cido fumrico
cido L-
glutmico
Corynebacterium
glutamicum
Cepa silvestre
100 Glucosa
Brevibacterium flavum 98 Acetato
Arhrobacter paraffineus 82 n-alcanos
L-glutamina

Corynebacterium
glutamicum
Cepa silvestre 58
Glucosa, con
alta biotina y
contenido en
NH
4
Cl
L-histidina
Serratia marcescens
L120 (pSH 368)
rDNA 40 Sacarosa
L-isoleucina Brevibacterium flavum Etionina 30 Acetato
L-leucina
Brevibacterium
lactofermentum
Isoleucina
Metionina
2-tiazolalanina

28

Glucosa
L-lisina
B. lactofermentum AJ
11204
S-(-aminoacetil)-L-
cistena
Alanina
70 Glucosa
B. flavum
Homoserina
Treonina
75 Acetato
L-metionina C. glutamicum KY 9276
Treonina
Etionina
Metionina hidroxamato
2 Glucosa
L-ornitina C. glutamicum Arginina 26 Glucosa
L-fenilalanina B. lactofermentum
5-metiltriptfano
p-fluorofenilalanina
Decoyinina
Tirosina
Metionina
25 Glucosa
L-prolina C. acetoacidophilum Mutante no caracterizado 108
Glucosa + cido
glutmico
L-serina B. lactofermentum Sulfaguanina 4.5 Glucosa
L-treonina E. coli VL344 (pYN7) rDNA 55 Sacarosa
L-triptfano E. coli JP4114 rDNA 23.5 Glucosa
L-tirosina C. glutamicum Pr-20
p-fluorofenilalanina
p-aminofenilalanina
p-aminotirosina
Tirosina hidroximato
18 Glucosa
L-valina B. lactofermentu Nr. 487 2-tiazolalanina 31 Glucosa
*Mtodo utilizado para la produccin de cido L-asprtico entre 1960-1973.

X. RECUPERACIN DE PRODUCTOS

Los aminocidos se encuentran presentes en caldos de fermentacin o en corrientes de
procesado en baja concentracin y en presencia de otros compuestos qumicos similares. Su
separacin y purificacin son etapas cruciales en la optimizacin del proceso productivo de
las industrias biotecnolgicas.

El nmero de etapas necesario para la recuperacin de aminocidos y bioproductos depende
de la materia prima utilizada, de la concentracin y propiedades fsico-qumicas del
producto y del grado de purificacin necesario (Blanch, 1996). Las operaciones unitarias de
recuperacin de aminocidos pueden agruparse en las siguientes categoras:

Etapas inciales. Se realiza la separacin de materiales insolubles tales como la
biomasa celular, las protenas agregadas y los nutrientes insolubles, empleando
como operaciones de separacin la sedimentacin, centrifugacin y filtracin.

Etapas intermedias. Hacen referencia al aislamiento del producto de inters,
eliminando las impurezas. En esta categora se emplean operaciones de extraccin,
ultrafiltracin, intercambio inico, cromatografa, dilisis y electrodilisis.

Purificacin final. Los productos farmacuticos, teraputicos y alimentarios
requieren una pureza elevada. En esta etapa se requieren operaciones de
cristalizacin y precipitacin, llevadas a cabo por modificacin del pH del medio,
adicin de sales o de disolventes orgnicos, que producen una variacin drstica de
la solubilidad del aminocido. El proceso de purificacin finaliza con el secado del
producto.

A continuacin se describen brevemente alguna de las tcnicas ms utilizadas para la
separacin y purificacin de aminocidos:

1. Extraccin con Disolventes

La extraccin es una tcnica muy utilizada en la separacin de aminocidos. La extraccin
reactiva de aminocidos con disolventes conlleva la transferencia desde los caldos de
fermentacin o corrientes de procesado hacia una fase orgnica, que contiene generalmente
un extractante selectivo, seguida de la reextraccin y concentracin del producto en una
fase acuosa de reextraccin, donde se obtiene el producto concentrado. La recuperacin
final normalmente se lleva a cabo mediante precipitacin, cristalizacin o evaporacin
(Escalante, 1998).

Otra aplicacin de la extraccin con disolventes es la extraccin mediante micelas inversas.
Las micelas inversas son micro gotas de disolucin acuosa, dispersas en una fase orgnica
continua y estabilizada por un surfactante. Esta tecnologa ha sido aplicada a la extraccin
de protenas y de aminocidos (Dzygiel, 2000).

Las unidades de proceso donde se realiza convencionalmente la extraccin son bateras de
mezcladores-sedimentadores o torres de extraccin. Uno de los requisitos necesarios en
estos equipos es la existencia de una diferencia de densidades entre las fases en contacto
para que se produzca la separacin de las mismas.

La extraccin con disolventes por contacto directo de las fases presenta la limitacin de la
formacin de emulsiones estables que evitan la posterior separacin de las fases,
provocando la prdida del producto de inters en la formacin de terceras fases. En las
torres de extraccin, adems, existen problemas relacionados con la inundacin de la torre
y la formacin de caminos preferentes.

Como alternativa a los procesos convencionales se pueden utilizar procesos hbridos de
extraccin con membranas con diferentes tecnologas:

Microfiltracin / Ultrafiltracin de emulsiones y soluciones coloidales

Se fundamenta en la accin de tamizado impuesta por la membrana para separar el
permeado, formado por la fase de refinado, del retenido, formado principalmente por la fase
de extracto. En el caso de la microfiltracin se utilizan membranas de estructura simtrica,
con tamao de poro comprendido entre 0,05 m y 10 m, y la diferencia de presin
intermembranal suele ser inferior a 2 bar. Las membranas de ultrafiltracin son asimtricas,
con tamao de poro entre 0,05 m y 1 nm. La diferencia de presin transmembranal suele
ser inferior a 5 bar. Las tcnicas de filtracin con membranas tienen como principales
inconvenientes el ensuciamiento de la membrana y la polarizacin por concentracin.

Membranas lquidas

Las membranas lquidas consisten en una pelcula lquida que separa dos fases entre s.
Estas fases pueden ser bien lquidas o gaseosas. La fuerza impulsora del transporte es un
gradiente de potencial qumico. La separacin de los distintos componentes se va a producir
debido a diferencias de solubilidad y difusividad en la membrana lquida (Mulder M.,
1991).

2. Electrodilisis

En este proceso se utilizan membranas intercambiadoras de iones para eliminar solutos
cargados de disoluciones acuosas. Entre el nodo y el ctodo se colocan de forma alterna un
nmero determinado de membranas intercambiadoras de aniones y de cationes. Estos
sistemas utilizan una corriente elctrica para transportar los iones a travs de la membrana.

La electrodilisis se aplica a la separacin de aminocidos debido a su carcter anfotrico, a
pH alto los aminocidos tienen carga negativa y migrarn hacia el nodo y a pH bajo los
aminocidos cargados positivamente migrarn hacia el ctodo. Si el pH es igual al punto
isoelctrico del aminocido, el aminocido no migrar. As los diferentes aminocidos
pueden ser separados ajustando el pH de la disolucin que los contiene.

Esta tecnologa ha sido aplicada a la separacin de cido glutmico, metionina y L-lisina
utilizando dos tipos de membranas cargadas inicamente (Kikuchi, 1995).

El principal inconveniente de la electrodilisis es que las membranas tienden a presentar
problemas de hinchamiento permitiendo, as, el paso de solutos a travs de las membranas
por mecanismos de difusin. Otro problema habitual es el inherente a la electrolisis del
agua, disminuyendo la eficacia de la separacin. Adems las membranas deben tener
elevada conductividad elctrica junto con una buena resistencia mecnica, lo que eleva los
costos del proceso.

3. Precipitacin

La precipitacin es una tcnica comnmente utilizada en la purificacin de protenas,
aminocidos, antibiticos y biopolmeros. La tendencia de los aminocidos y protenas a
precipitar depende de varios factores, como son el disolvente, concentracin de sal,
constante dielctrica, pH, la temperatura, la forma, tamao y carga de la protena (Blanch,
1996).

Una de las estrategias ms comunes de producir la precipitacin de aminocidos y protenas
es alterando las propiedades del disolvente. Los mtodos de precipitacin ms comunes se
describen a continuacin:

Variacin del pH del medio

El pH del medio es un factor decisivo en la solubilidad. Para valores de pH superiores o
inferiores al punto isoelctrico, la molcula de aminocido se encuentra cargada y las
molculas de agua reaccionan con estas cargas favoreciendo la solubilizacin. Cuando el
pH del medio se encuentra prximo al punto isoelctrico las interacciones con el agua y sus
cargas netas son mnimas, pudiendo conducir a su precipitacin. La etapa final de
recuperacin de aminocidos puede llevarse a cabo por precipitacin, llevando la
disolucin a pHs cercanos al punto isoelctrico, donde la solubilidad es mnima, y el
aminocido precipita.

Salting-out

La adicin de sales a disoluciones de protenas tiene un efecto significativo sobre la
solubilidad de las protenas. A bajas concentraciones la solubilidad aumenta por efecto
salting-in y disminuye para elevadas concentraciones, por efecto salting-out. Las sales
neutras tienen, en general una doble influencia sobre la solubilidad. A concentraciones
bajas actan disminuyendo las interacciones electrostticas aminocido-aminocido y
aumentado la solubilidad. A concentraciones ms altas, las sales neutras disminuyen la
solubilidad de los aminocidos y protenas como consecuencia de la tendencia de los iones
salinos a la hidratacin. Al igual que las protenas, la solubilidad de los aminocidos es
funcin de la concentracin.

Reduccin de la constante dielctrica del medio

Uno de los mtodos de precipitar aminocidos y protenas ha sido mediante adicin de
disolventes orgnicos, como etanol y acetona, los cuales disminuyen su solubilidad. La
capacidad del etanol para precipitar aminocidos y protenas se debe a los cambios que
produce en la constante dielctrica del medio, aumentando las interacciones electrostticas
al disminuir la constante dielctrica debido a la adicin de etanol (Cohn, 1943). Este
aumento de las interacciones electrostticas se ha relacionado con el aumento de las
interacciones aminocido-aminocido, lo que conduce a su precipitacin

XI. PRUEBAS DE SEGURIDAD DE LOS AMINOCIDOS

Los aminocidos obtenidos por fermentacin microbiana no son otra cosa que productos
biolgicos. A estos productos se les llama de esta manera porque han sido elaborado con
materiales de partida de origen biolgico, tales como microorganismos, rganos y tejidos
de origen vegetal o animal, clulas o fluidos de origen humano o animal y diseos celulares
(sustratos celulares, sean o no recombinantes - incluidas las clulas primarias) as como
otros de origen biotecnolgico que se obtienen a partir de una protena o cido nucleico por
tecnologa de ADN recombinante.

Este tipo de productos biolgicos son extremadamente ms complejos que la mayora de
los medicamentos convencionales ya que tienen un peso molecular mucho ms alto y una
complejidad mayor; pueden ser mezclas de muchas especies moleculares que tienen
perfiles de impureza nicos, los cuales invariablemente dependen del proceso de
manufactura.

Por otro lado, la respuesta de los productos biolgicos depende de los materiales con los
que se haya comenzado su produccin; stos estn hechos a partir de sistemas vivos que
inherentemente son variables. Cualquier cambio en el proceso de manufactura por menor
que sea, conlleva a cambios en el producto que no necesariamente son detectables por la
tecnologa actual, pero pueden tener impacto potencial en la calidad, seguridad, y/o eficacia
del producto.

Para asegurar la consistencia en las caractersticas de los productos finales as como en los
perfiles de seguridad y eficacia, tanto la fuente del material como los procesos de
manufactura, la formulacin y las condiciones de almacenaje deben ser cuidadosamente
seguidos y controlados de acuerdo a las especificaciones que se necesitan para su
aprobacin regulatoria.

Como ya vimos, los aminocidos que deben de tener un control sobre su seguridad ms
riguroso son aquellos cuyo propsito es ayudar a restablecer la salud de los seres humanos
a partir de terapias deficitarias.

Por los motivos descritos en los prrafos anteriores, se puede inferir que para efectuar el
registro de productos biolgicos/biotecnolgicos no deberan aplicarse los criterios
estndares de cualquier medicamento comn o suplementos alimenticios, tal como se lo
conoce en la normativa actual de diferentes pases; dichos criterios deben limitarse a los
productos obtenidos por sntesis qumica. Sin embargo, este tipo de productos deben
cumplir en criterios tanto de calidad, como de seguridad y eficacia tanto a niveles clnicos
como no clnicos.

Aunque la principal preocupacin en los productos biolgicos es la seguridad, es
importante que tanto en los estudios clnicos como en el seguimiento de frmaco vigilancia
post-comercializacin se observen problemas potenciales como la inmunogenicidad y
posterior falta de eficacia.

Para establecer con un razonable nivel de certeza, que las diferencias en los procesos de
produccin del producto no afectarn la seguridad y/o eficacia del producto para los
pacientes, no es suficiente tener slo la experiencia en la elaboracin de dicho producto
sino que se requieren los siguientes controles:

Control durante el proceso de produccin.
Estudios de toxicidad.
Estudios de inmunogenicidad, ya que pequeas variaciones en la molcula pueden
generar reacciones alrgicas severas y de consecuencias imprevisibles.
Lo ms importante: estudios clnicos que demuestren la eficacia.

I nmunogenicidad

Los problemas de inmunogenicidad son quiz, las razones ms convincentes para la
imposicin de pruebas clnicas humanas. (Salinas, 2007). Todas las protenas tienen un
potencial inmunognico; esto implica la posible aparicin de anticuerpos dirigidos contra
las molculas biolgicas con el fin de desactivarlas incluso, la produccin de anticuerpos
que atacan el producto biolgico original. De igual forma, es posible la aparicin de una
enfermedad autoinmune.

La ruta de administracin, es un factor potencial en la provocacin de anticuerpos: la va
intravenosa produce menos inmunogenicidad que la ruta subcutnea intramuscular. An
el mismo producto elaborado en diferentes lugares, ocasiona considerables diferencias en la
inmunogenicidad - sin mostrar diferencias en las caractersticas fsico-qumicas. La calidad
del bioproducto influencia la inmunogenicidad: un producto con grumos induce a que las
clulas B produzcan anticuerpos, mientras que un producto soluble de alta calidad mantiene
la tolerancia.

Los factores que afectan la inmunogenicidad estn bsicamente relacionados con el
producto y son principalmente: la secuencia de aminocidos, glicosilacin, pureza,
excipientes, estabilidad, dosis y vas de administracin, intervalo de dosis, sistema inmune
del husped y el almacenaje. Se ha demostrado, por ejemplo, que impurezas y
contaminantes son la causa principal de la inmunogenicidad en la hormona de crecimiento
humano y en la insulina.

La importancia de la inmunogenicidad

La inmunogenicidad se refiere al proceso mediante el cual, el cuerpo humano se encarga de
generar una respuesta a la introduccin de una protena u otra sustancia extraa. La
respuesta humana en estos casos, es producir anticuerpos que se ligan a las protenas
extraas, desactivndolas y formando un complejo antgeno-anticuerpo que puede llevar a
serias complicaciones y efectos adversos (Salinas, 2007). La inmunogenicidad representa la
preocupacin actual de seguridad ms importante relacionada con los productos biolgicos;
principalmente se asume que es imposible de caracterizar, en ausencia de pruebas clnicas
en humanos.

XII. REFERENCIAS Y BIBLIOGRAFA CONSULTADA

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