Unidad I. Tema N 4.

VARI ACI ONES GENTI CAS EN PROCARI ONTES

1. Bases fsicas de la herencia

La herencia est determinada por el genoma o genotipo, el cual en
procariotas est constituido todas aquellas caractersticas codificadas en el
cromosoma bacteriano y en los plsmidos; informacin sta que est organizada en
genes integrados por DNA. El cromosoma bacteriano es la clsica doble hlice de
DNA descrita por el modelo de Watson y Crick, pero circular y continua de
aproximadamente 1 mm de largo. Esta masa se encuentra fuertemente enrollada
alrededor de un pequeo segmento de RNA, formando una masa compacta de PM.
aproximado de 2 3 x 10
9
constituida por 4 x 10
6
pares de bases.

2. Genoma en procariontes.

El genoma Procarionte est contenido en los genes del cromosoma
bacteriano y en los genes extracromosomales de los plsmidos; a diferencia del
genoma Eucariotico, cuyo genoma incluye: los cromosomas nucleares, el DNA
mitocondrial, el DNA de los cloroplastos (en los microorganismos fotoauttrofos) y
el DNA de los plsmidos.

3. Fenmenos bsicos de la herencia.
La herencia est determinada por dos fenmenos bsicos:

3.1. Herencia o estabilidad de tipo: Esta presupone que durante la
replicacin del cromosoma bacteriano no ocurra ningn cambio en la
secuencia de nucletidos y estructura del DNA, el cual en consecuencia,
determine cambios en el genoma; por tanto ste permanece estable y as es
reproducido en la prxima generacin.

UCLA
3 deFebr er o de1964



UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL
LISANDRO ALVARADO
DECANATO DE CIENCIAS VETERINARIAS
DEPARTAMENTO DE SALUD PBLICA
REA DE AREA DE MICROBIOLOGA E INMUNOLOGA
3.2.Variaciones hereditarias: Aqu se establecen cambios en secuencia y/o
estructura del DNA, los cuales producen cambios en el genoma
bacteriano, que a su vez, se traducen en una progenie de bacterias
diferentes a aquellas que les dieron origen y; si este genoma mutado es
estable y viable, se reproduce en las futuras generaciones. Las
variaciones hereditarias en procariontes son producidas a consecuencia
de mutaciones (espontneas e inducidas) y a travs de mecanismos de
transferencia y recombinacin gentica en bacterias.

4. Estructura bioqumica de la molcula de DNA (Modelo de Watson y Crick)

Es una doble hlice formada por dos tiras de polinucletidos
complementarios de bases pricas y pirimdicas dispuestas a lo largo de un espinazo
de grupos alternantes de desoxirribosa fosfato. Las dos tiras se mantienen unidas por
puentes de hidrgeno entre bases vecinas; la esteroqumica revela que los puentes de
hidrgeno se forman solo entre: Adenina y Timina y; Citosina y Guanina.
Aproximadamente cada diez residuos se completa una vuelta completa de la doble
hlice de DNA.
Las bases pricas son, Adenina y Guanina; y las pirimdicas son, Citosina,
Timina y Uracilo.















5. Replicacin del DNA

En virus, procariontes y eucariontes, el mecanismo bsico de replicacin del
ADN es similar. ste se replica por un mecanismo semiconservativo, en el cual las
dos tiras complementarias se separan, para formar el pivote u horquilla de
replicacin, actuando cada una como un molde, templete o plantilla, sobre cada
una de las cuales, las polimerasas, ensamblan una tira complementaria por
polimerizacin enzimatica de subunidades de nucletidos. El orden de las bases es
dictado estrictamente por las posibilidades de formacin de puentes de hidrgeno
entre pares de bases complementarias, formndose al final, dos nuevas dobles
hlices; cada una idntica a la original que le sirvi de molde. Esta replicacin se
lleva a cabo a la asombrosa velocidad de aproximadamente 750 pares de
bases/seg/horquilla de replicacin.












6. Replicacin del cromosoma bacteriano (Modelo de J acob y Brenner).

El cromosoma bacteriano se replica de manera secuencial a lo largo de toda
la estructura, principiando por el origen de la replicacin uni o bidireccionalmente.
El punto de origen de la replicacin se adhiere a un sitio especfico del Mesosoma
en la membrana celular. La replicacin comienza y el cromosoma se va moviendo
mas delante del sitio de adherencia, en la membrana, replicndose conforme avanza
en sentido contrario a las agujas del reloj, hasta completar una vuelta completa de
360. La separacin de los dos cromosomas originados se realiza por sistesis


localizada de membrana; luego se forma la pared transversal entre los sitios de
adherencia del DNA. En la siguiente imagen se pueden apreciar mejor esta
secuencia de eventos, segn el modelo de Jacob y Brenner:





7. Cdigo gentico
8. Trascripcin
9. Traduccin
10. Sntesis proteica y sus fases: I niciacin, elongacin y terminacin.
11. Definicin de mutaciones y tipos:
11.1. Mutaciones espontneas y ejm.
11.2. Mutaciones puntuales, base molecular, consecuencias y ejm.
11.3. Mutaciones de desplazamiento de la pauta de lectura
11.4. Grandes delecciones o borraduras
11.5. I nversiones y translocaciones
11.6. Duplicaciones en tndem
11.7. Mutaciones originadas por elementos genticos transponibles
11.8. Agentes mutagnicos e induccin de mutaciones
11.8.1. Agentes fsicos
11.8.2. Agentes qumicos


MECANI SMOS DE TRANSFERENCI A Y RECOMBI NACI N
I NTRACELULARES EN LA GENTI CA BACTERI ANA.

Es muy comn la transferencia de material gentico entre cepas procariotas y contribuye
en forma importante a la notable diversidad gentica de las bacterias.
El intercambio gentico bacteriano se caracteriza por la transferencia de un fragmento
relativamente pequeo, del genoma de un donador a una clula receptora.
La recombinacin gentica entre bacterias no ocurre igual que la fusin de cigotos de
las clulas Eucariotas, en donde dos clulas haploides (gametos) se fusionan
completamente para originar un Cigoto (diploide).
En procariotas no hay fusin real, en su lugar, hay transferencia de parte del material
gentico de una clula donante a una receptora. El ADN del donador, el cual no
contiene la informacin para su propia replicacin, debe recombinarse con el ADN del
receptor para establecerse en una clula receptora. El segmento transferido se llama
Exogenoto ; a su complemento en la clula receptora, se le llama Endogenoto; y al
cromosoma recombinante, se le denomina Merocigoto.
El Endogenoto y el Exogenoto se recombinan despus de la transferencia, por rotura y
reunin de los genotos, y el Merocigoto o cromosoma recombinante se transmite por
replicacin del ADN y fisin binaria a futuras generaciones bacterianas.
Los 3 mecanismos mediante los cuales ocurre la recombinacin difieren bsicamente en
la forma de transferencia del material gentico. Estos mecanismos son:
1. Transformacin
2. Transduccin
3. Conjugacin











1. Transformacin: Es la captacin del ADN del donador (exogenoto) por una
clula receptora (endogenoto), mediante la intervencin de Protenas de
Competencia; originando un cromosoma recombinante y; si hay integracin del DNA
donado, el merocigoto se reproducir por fisin binaria en la prxima generacin
hetero-duplex recombinante.
La clula donadora y receptora deben estar ntimamente relacionadas, pues se requiere
homologa estructural en la secuencia de nucletidos del ADN para permitir el
apareamiento del endogenoto y el exogenoto.
1.1. Etapas del mecanismo de transformacin:
1.1.1. Fijacin: Comprende la unin o adherencia del ADN de gran peso molecular a la
superficie de la clula receptora.
1.1.2. Captacin: Es la penetracin del ADN ligado, a la membrana celular de la clula
receptora.
1.1.3. Integracin: Comporta la unin del ADN del donador al genoma de la clula
receptora.

En la transformacin por plsmidos, nicamente se suceden la fijacin y captacin, y
el plsmido se establece en la clula receptora como un replicador autnomo.
Mecanismos de transferencia y recombinacin gentica en bacterias


Este proceso implica la participacin de protenas de especficas (Protenas de
Competencia) cuya funcin es encargarse de fijar el ADN donado, al cido -
hidroxibutirato a la membrana de la clula receptora.










1.2. Transformacin en bacterias Gram positivas.

Comienza con la excrecin de protenas de bajo peso molecular (Protenas de
Competencia) durante la fase exponencial de crecimiento.
stas protenas de competencia inducen a otras bacterias del cultivo en fase
exponencial, a producir otras 8 10 protenas de competencia; una de las cuales es una
autolisina, la cual desenmascara o descubre a la protena fijadora de ADN unida a la
membrana.
Las bacterias Gram positivas fijan ADN homlogo y heterlogo por medio de una
endonucleasa, la cual es capaz de hendir, mellar o romper ADN a intervalo de 6 a 8
Kilobases para fijarse (Fase de Fijacin) a la protena receptora de ADN.
Posteriormente se inicia el acceso del ADN (Fase de Captacin) y se hacen muescas o
mellas que separan las dos tiras de ADN. Al final si existe homologa estructural en (la
secuencia de nucletidos, entre el ADN de la clula donadora Exogenoto) y el ADN de
la clula receptora (Endogenoto), se cumple la ltima fase (Fase de integracin) de la
transformacin para originar el Merocigoto o un cromosoma bacteriano heteroduplex
recombinante.

1.3. Transformacin en bacterias Gram negativas.
Difiere de la anterior en los siguientes aspectos:
El ADN homlogo es captado a una velocidad mayor que el ADN heterlogo.
TRANSFORMACI N





El ADN de doble banda queda secuestrado en estructuras de la superficie
membranosa llamados transformasomas, y la transferencia de ellos al interior de la
clula se acompaa de la degradacin de una de las bandas de ADN; continuandose a
partir de aqu con la misma secuencia de eventos que en el caso de las bacterias Gram
positivas.
2. Transduccin.
Consiste en la transferencia de un fragmento de ADN (Exogenoto) de una
bacteria donante, el cual es acarreado o transferido a la bacteria receptora por un
bacterifago, producido en la clula donadora. Luego, al igual que en el caso de la
transformacin, el acople por homologa estructural del Exogenoto y su complemento
en la clula receptora (Endogenoto), originar el Merocigoto o cromosoma
recombinante.
Con la finalidad de poder comprender este mecanismo de transferencia y
recombinacin gentica en bacterias, es necesario hacer a continuacin un aparte para
conocer que es un bacterifago y su ciclo de replicacin.
Un fago o bacterifago es un virus que ataca bacterias. Los virus son parsitos
estrictos, es decir no cuentan con autonoma para poder replicarse, por tanto, necesitan
una clula hospedera (Bacteria, en este caso) para utilizar su aparato sintetizador de
protenas y cidos nucleicos, con la finalidad de sintetizar y ensamblar los diferentes
componentes del fago, y as reproducirse en el interior de la bacteria y liberar las
partculas virales por lisis bacteriana.




El bacterifago consta de una estructura bsica, muy elemental compuesta de:
Cabeza o cpside viral de forma icosaedrica, constituida por unidades estructurales
llamadas capsmeros; el material gentico (ADN) contenido en l; un cuello o vaina; y
la cola, constituida por la placa basal, las fibras de la cola y espculas.









El ciclo de infeccin de un fago comprende dos variantes; el ciclo ltico y lisognico










Cuando durante la infeccin viral, el fago induce la produccin las protenas represoras
en la bacteria, el bacterifago entra en un ciclo particular llamado ciclo lisognico, el
cual comprende las siguientes fases o etapas:
Adsorcin o fijacin
Inyeccin del material gentico.
Profago integrado
Bacteria lisgena.
Durante este ciclo el fago no se replica en el interior de la bacteria, sino que permanece
en forma de profago integrado al cromosoma bacteriano y ser reproducido durante
cada ciclo de replicacin del cromosoma bacteriano cada vez que la bacteria se
reproduzca por fisin binaria, originando toda una progenie de bacterias lisgenas
infectadas con el fago. Cuando cesa la produccin de la protena represora, el fago
integrado sufre una excisin, separndose del cromosoma bacteriano, se recirculariza y
puede entrar a su ciclo vegetativo o Ciclo Ltico, durante el cual el bacterifago


CI CLO LI SOGNI CO EN FAGOS:

Adsorcin Fijacin
Inyeccin del material gentico
Profago integrado
Bacteria Lisognica





Partes de un Fago:

Cabeza (Cpside)
Cuello (Vaina)
Cola:
Fibras de la cola
Placa basal
Espculas

replica su DNA, sintetiza cada una de sus partes y las ensambla, para reproducirse en el
interior de la bacteria y liberarse por lisis bacteriana.
No es necesario que el bacterifago pase previamente por un ciclo lisgnico para entrar
en su ciclo ltico, este fenmeno est condicionado por la produccin o no de la protena
represora, por tanto, el fago puede inmediatamente despus de la infeccin viral, entrar
en ciclo ltico, sino se produce la protena represora.














2.1 Tipos de transduccin.

2.1.1. Transduccin generalizada.

Este mecanismo de transferencia y recombinacin gentica en bacterias ocurre
durante el ciclo ltico de un bacterifago y, especficamente mientras ocurre la fase de
ensamblaje del virus. En esta fase, no se requiere una secuencia especfica de ADN para
llevarse a cabo el llenado de la cpside del fago; por tanto durante la fase de ensamblaje
del virus, cualquier secuencia de ADN (inclusive el de la bacteria parasitada) puede
introducirse en la cpside viral. De esta manera, se liberan partculas fgicas portadoras
de parte del ADN de la bacteria.
Es as como parte del ADN de la bacteria hospedadora del fago (ahora bacteria
donadora de ADN) es acarreado por el fago al infectar otra bacteria, la cual acta como
receptora del ADN perteneciente a la primera bacteria infectada por el fago.



















Luego, si existe homologa estructural en la secuencia de nucletidos entre el
ADN acarreado por el fago desde la bacteria donante (Exogenoto) y en su complemento
en el cromosoma bacteriano de la receptora (Endogenoto), ambos se combinarn para
originar un cromosoma heteroduplex recombinante.

Fijacin del fago a la clula

Inyeccin del material gentico viral

Degradacin del DNA bacteriano y
replicacin del genoma viral

Sntesis de las cpsides y
empaquetamiento del material gentico y
viral

Lisis celular y liberacin de partculas

2.1.2. Transduccin restringida o especializada.
Ocurre cuando durante el ciclo lisognico de fagos, no hay una escisin o
separacin exacta del profago integrado. Durante esta fase hay una separacin anormal
en la que parte del ADN bacteriano adyacente al fago es captada a expensas de una
fraccin del ADN fgico.
Es una separacin aberrante en la que el fago arrastra su ADN y parte del ADN
de la bacteria; ya estas partculas virales son fagos defectivos, los cuales no pueden
iniciar un proceso de infeccin normal por cambios en el genoma de la partcula fgica
liberada, al haber perdido parte de del genoma fgico, el cual puede codificar la parte
estructural de cabeza, cuello, cola etc.
A diferencia de la transduccin generalizada, la cpside viral contiene ADN,
tanto del fago, como de la bacteria que actu como donadora de parte de su genoma u
ste ltimo se vuelve parte estable del genoma viral.


























Aclaratoria: A veces sucede que durante la transduccin, el segmento de ADN
transportado, no se integra al cromosoma de la clula receptora (endogenoto) por falta
de homologa estructural del ADN (complementaridad de las bases nitrogenadas) o
porque el fragmento sigue siendo bicatenario. En este caso particular, no se producen
cambios en el genoma de la clula receptora; y por lo tanto, tampoco cambios
fenotpicos.
Tambin puede que el exogenoto transferido aun siendo bicatenario, se integre al
cromosoma bacteriano (endogenoto), y s se produzcan cambios del genoma de la clula
receptora, los cuales expresen cambios fenotpicos, pero sta no puede transmitirlos a
Transduccin restringida o especializada.




Clula lisognica: el DNA del fago se
encuentra insertado en el DNA bacteriano


Circularizacin y escisin del DNA del
fago


Escisin anormal que produce la
prdida de algunos genes del fago, los
que se mantienen insertados en el
cromosoma bacteriano. En cambio,
algunos genes bacterianos han sido
tomados junto al DNA del fago



Degradacin del DNA bacteriano y
replicacin del genoma viral




Sntesis de las cpsides y
empaquetamiento del material
gentico y viral









su progenie, puesto que el ADN bicatenario no se replica. En todos los casos anteriores
se produce una Transduccin Abortada.

3. Conjugacin.

Este mecanismo de transferencia y recombinacin gentica es mediado por
plsmidos, los cuales son fragmentos genticos extracromosomales que transportan
genes que codifican para determinados caracteres. Ejm: resistencia a los medicamentos
antimicrobianos, produccin de toxinas, etc.
El ADN plasmdico es de replicacin autnoma, uni, bidireccional y puede
replicarse hasta en estado superenrrollado.
El mecanismo de conjugacin se lleva a cabo nicamente en bacterias Gram
negativas mediante la transferencia del material gentico del plsmido a travs una
fimbria especializada, llamada Pili sexual, producido por una clula bacteriana
masculina portadora de los genes F
+
, los cuales codifican sta hebra proteica.
El extremo libre del pili sexual se adhiere a un receptor especfico (Protena
OmpA) de la pared de bacterias Gram negativas, las cuales actan como una clula
femenina (F
-
); establecindose un contacto directo de pared bacteria donante a pared de
bacteria receptora por retraccin del pelo sexual. Luego el plsmido sufre un tipo
especial de replicacin llamada replicacin por transferencia, pasando una sola de las
tiras de ADN (exogenoto) del plsmido de la bacteria donante a la bacteria receptora; a
su vez, a partir de ambas tiras o plantillas de ADN (la de la clula donante y la de la
receptora) se sintetizan sus respectivas tiras complementarias y son circularizadas por
una ligasa, completndose la transferencia de la informacin gentica y las clulas
copulantes se separan resultando dos clulas con plsmidos iguales. Ver secuencia de
imgenes a continuacin:





























Existen plsmidos con la capacidad potencial de entrecruzarse e integrarse al
cromosoma (endogenoto) de la clula receptora, dependiendo de la homologa de la
secuencia de bases entre los genotos; stos plsmidos son llamados Episomas.
El factor de fertilidad (F
+
), el cual contiene el grupo de genes que codifican el
pili sexual, son transferidos a la clula receptora o femenina (F
-
), simultneamente con
la transferencia del ADN plasmdico. Cuando esta clula receptora (F
-
) recibe el factor
F
+
de la clula donante, sta masculiniza a la primera, la cual ahora est en capacidad
potencial de producir el pili sexual; y por tanto conjugarse con otras clulas receptoras.

3.1. Propiedades fenotpicas transmitidas por los plsmidos:

3.1.1 Resistencia a drogas antimicrobianas: Los plsmidos conocidos como
Factores R de resistencia, son transferidos por diversas bacterias a travs de la


Clula conjugativa (F+), con su
pelo sexual, y otra no conjugativa
(F-)

Contacto entre las dos clulas por
medio del pelo sexual

Contraccin del pelo sexual y
contacto clula-clula. Se forma un
poro por donde pasa el DNA simple
cadena desde la clula dadora a la
receptora

Sntesis de las cadenas de DNA
conjugativo: continua en la clula
dadora y discontinua en la
receptora

Sellado de los poros y separacin
de las clulas. Cada una de ellas
contiene una copia del Factor F

conjugacin; estos plsmidos contienen la informacin gentica para inactivar
antibiticos (neomicina, kanamicina, estreptomicina, penicilina, cloranfenicol, y
sulfonamidas) mediante la inactivacin enzimtica del medicamento por acetilacin y
fosforilacin (Plsmidos no conjugativos). Los plsmidos conjugativos median la
sntesis de enzimas que causan cambios estructurales y funcionales, inactivando el
medicamento. Ejm: las Lactamasas (penicilinasas y cefalosporinasas).
La conjugacin plasmdica reviste especial importancia durante las infecciones
bacterianas, al representar el mecanismo a travs del cual, al aparecer una pequea
poblacin bacteriana resistente al antibitico de tratamiento, puede rpidamente
extenderse este carcter de resistencia a toda la poblacin mediante la transferencia del
factor R o de resistencia a ese antibitico, a travs del mecanismo de conjugacin
bacteriana.

3.1.2. Resistencia a metales pesados (por ejemplo, resistencia a mercurio).
3.1.3. Plsmidos de virulencia: produccin de toxinas, factores de penetracin
en tejidos, adherencia a tejidos del hospedador, etc., en ciertas bacterias
patgenas.
3.1.4. Produccin de bacteriocinas (protenas txicas producidas por bacterias
que matan a otras de la misma especie).
3.1.5. Produccin de siderforos (quelatos para secuestrar iones Fe
3+
).
3.1.6. Utilizacin de determinados azcares.
3.1.7. Utilizacin de hidrocarburos, incluyendo algunos cclicos recalcitrantes
(degradacin de tolueno, xileno, alcanfor, etc.) en Pseudomonas.



Consulta recomendada: www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/16mutacion.htm - 196k