Estructura y Funcin del ADN

cido desoxirribonucleico (ADN)

El ADN es el que contiene el mensaje gentico para toda la funcin y organizacin celular. Es, en
definitiva, la molcula que controla todos los procesos vitales para los seres vivos, adems de ser el
principal constituyente de los cromosomas celulares.
Material gentico de todos los organismos
celulares y casi todos los virus. El ADN lleva la
informacin necesaria para dirigir la sntesis de
protenas y la replicacin. Se llama sntesis de
protenas a la produccin de las protenas que
necesita la clula o el virus para realizar sus
actividades y desarrollarse. La replicacin es el
conjunto de reacciones por medio de las cuales el
ADN se copia a s mismo cada vez que una clula
o un virus se reproduce y transmite a la
descendencia la informacin que contiene. En casi
todos los organismos celulares el ADN est organizado en forma de cromosomas, situados en el
ncleo de la clula.
Estructura
Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas formadas por un elevado nmero
de compuestos qumicos llamados nucletidos. Estas cadenas forman una especie de escalera
retorcida que se llama doble hlice. Cada nucletido est formado por tres unidades: una molcula
de azcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos
nitrogenados llamados bases: adenina (abreviada como A), guanina (G), timina (T) y citosina (C). La
molcula de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y est flanqueada por un grupo fosfato a un
lado y una base al otro. El grupo fosfato est a su vez unido a la desoxirribosa del nucletido
adyacente de la cadena. Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la
escalera; las bases estn enfrentadas por parejas, mirando hacia el interior, y forman los travesaos.
Los nucletidos de cada una de las dos cadenas que forman el ADN establecen una asociacin
especfica con los correspondientes de la otra cadena. Debido a la afinidad qumica entre las bases,
los nucletidos que contienen adenina se acoplan siempre con los que contienen timina, y los que
contienen citosina con los que contienen guanina. Las bases complementarias se unen entre s por
enlaces qumicos dbiles llamados enlaces de hidrgeno.
En 1953, el bioqumico estadounidense James Watson y el biofsico britnico Francis Crick
publicaron la primera descripcin de la estructura del ADN. Su modelo adquiri tal importancia para
comprender la sntesis proteica, la replicacin del ADN y las mutaciones, que los cientficos
obtuvieron en 1962 el Premio Nobel de Medicina por su trabajo.

Replicacin, Transcripcin y Traduccin

Dogma Central de la Biologa
El dogma central de la biologa, definido en 1957 por Francis Crick, establece que la informacin
gentica fluye en el siguiente sentido: ADN ARN protenas. Esto es verdad en la mayora de
los casos; sin embargo, el material gentico de algunos virus est formado por RNA que luego es
usado como molde para producir ADN.

La transmisin de informacin gentica tiene como principio rector las reglas de apareamiento de
bases (Watson-Crick), y es lo que posibilita una transmisin de ida y vuelta de la informacin entre
ADN a ARN. De ARN a protenas, no obstante, la va de transmisin es unvoca.
La replicacin es el modo de perpetuar la informacin gentica, y asegurar una copia fiel de la
informacin en cada una de las clulas producidas por divisin. En lo referente a la transmisin de la
informacin dentro de la clula, los pasos fundamentales son dos.
El primer paso, la transcripcin, consiste en la copia exacta de una de las hebras de ADN a ARN; la
secuencia de ARN ser exactamente igual a la del ADN copiado, excepto por la presencia de uracilo
(U) en vez de timina (T).
El segundo paso, la traduccin, implica la sntesis de protenas haciendo uso del cdigo gentico,
que identifica aminocidos especficos a partir de un conjunto de tres bases.
Los tres procesos mencionados son procesos de polimerizacin, que pueden dividirse en tres
etapas: Iniciacin, elongacin y terminacin, definidas en cada caso por eventos concretos.
Entre la transcripcin y la traduccin, hay en ciertos casos un procesamiento de los transcriptos a fin
de obtener ARN mensajero (ARNm) maduro. Los productos de la traduccin tambin son
procesados. En cada caso hay en juego elementos de sealizacin en la molcula que porta la
informacin (ADN, ARN o protena) para dar lugar a un copiado o procesamiento correcto.
Control de la expresin gentica
La regulacin gentica comprende todos aquellos procesos que afectan la accin de un gen a nivel
de traduccin o transcripcin, regulando sus productos funcionales. El proceso se puede dividir en
modificaciones qumicas y estructurales del ADN y la cromatina, modificaciones postranscripcionales
y modificaciones postraduccionales.
Modificacin qumica y estructural del ADN o la cromatina
Todas estas modificaciones a nivel del genoma tienen en comn que su mecanismo de accin se
basa en un control del acceso que tienen las ARN polimerasas al ADN. Este tipo de control de la
expresin gnica es conocido tambin como control epigentico.
Descondensacin de la cromatina
Para que las enzimas encargadas de la transcripcin puedan realizar su funcin sobre unos genes,
es necesario que la cromatina est descondensada y los promotores de estos genes no se
encuentren embebidos en una superestructura cromatnica. Las evidencias de que el ADN que est
siendo transcrito activamente se encuentra descondensado nos las provee un experimento en el que
el ADN de un ncleo es digerido con bajas concentraciones de DNasa I. Podemos comprobar
mediante esta digestin, que las regiones degradadas en distintos tipos celulares no coinciden,
debido a que los distintos tipos celulares expresan genes distintos, es decir, presentarn genes que
expresan en comn, y genes que slo expresa uno de los dos tipos celulares. Adems, la metilacin
de ADN juega un importante papel en la impronta genmica
Metilacin del ADN
La metilacin del ADN consiste en la adicin de un grupo metilo a molculas de citosina, y est
relacionada con la silenciacin de genes. Este fenmeno tiene una gran importancia en la regulacin
de la expresin gnica en la mayora de los vertebrados. Los residuos de citosina metilados tienden
a acumularse en regiones cercanas al extremo 5 de los genes, donde se suelen situar las regiones
promotoras. La metilacin de bases puede conllevar que se impida el reconocimiento de los
promotores por las polimerasas, o que induzca la unin de enzimas encargados de la condensacin
de esa regin de la cromatina, lo que puede traducirse en una silenciacin de un gen concreto, o de
toda una regin de ADN. Las protenas metiltransferasas metilan citosinas que suelen estar situadas
en secuencias 5-CG-3. Tambin se encuentran metiladas las secuencias complementarias a estas
3-GC-5. Adems, tras la replicacin, el DNA de la cadena de nueva sntesis, es metilado segn los
patrones de metilacin de la cadena molde. De esta forma, las modificaciones a nivel de la expresin
gnica pueden ser transmitidas de una generacin celular a la siguiente. Se ha comprobado con
gemelos idnticos, que los patrones de metilacin no se transmiten slo por herencia, sino que el
medio tambin influye en esto.
Modificaciones en histonas y protenas asociadas al ADN
Las molculas de Histonas presentan una regin que sobresale de la estructura, y que es usada
como objetivo para la adicin de grupos metilo, acetilo o fosfato. Las distintas combinaciones de
grupos aadidos a las histonas, son ledas de diferente manera por otras protenas, que se encargan
de condensar o descondensar la estructura hasta el nivel de empaquetamiento necesario. Esto es lo
que se conoce como Cdigo de histonas.
Modificacin del genoma por delecin y amplificacin
A pesar de que las evidencias de los primeros experimentos mostraron que todas las clulas de un
organismo eucariota pluricelular presentaban el mismo genoma, existen excepciones en las que
diferentes tipos celulares presentan diferente genoma.
Uno de ellos, el ms conocido, es el caso de los eritrocitos (glbulos rojos) de mamfero, que al
llegar a una cierta concentracin de hemoglobina en su interior, expulsan su ncleo completo. Otro
ejemplo de deleciones en el genoma de un organismo segn el tipo celular, es el de los coppodos.
En el desarrollo embrionario de este grupo de invertebrados, las clulas eliminan regiones de su
genoma que no van a utilizar al diferenciarse. Esto sucede en la mayora de las clulas de estos
organismos, excepto en aquellas que estn destinadas a llegar a ser gametos.
Reorganizacin del genoma
Se trata de un mecanismo poco frecuente en el que segmentos del genoma cambian de localizacin
en el genoma. Uno de los ejemplos de este tipo de regulacin epigentica lo encontramos en la
creacin de anticuerpos por parte de los linfocitos de vertebrados. En los vertebrados se produce
gran cantidad de tipos de anticuerpos. Esto se consigue, gracias a una reordenacin, durante el
desarrollo de los linfocitos, de los segmentos del ADN que codifican para alguna subunidad de los
anticuerpos. Por ejemplo, en el caso de las cadenas pesadas de los anticuerpos, stas estn
formadas por un segmento variable V, otro D y otro J, adems de un segmento C que es siempre
constante. En el ADN genmico, existen genes para varios tipos de segmentos V, D y J. Durante su
desarrollo hasta linfocitos, estas regiones se reorganizarn aleatoriamente, de forma que quedarn
agrupados un V, un D y un J, dando lugar a la cadena pesada en cuestin. Gracias a esto se pueden
producir unas 24 000 cadenas pesadas de anticuerpo diferentes. Si a esto aadimos que la cadena
ligera presenta una variabilidad ligeramente menor, nos encontramos con una cantidad enorme de
anticuerpos diferentes.
Modificacin postranscripcional
La modificacin postranscripcional sucede cuando un precursor ARNm madura en ARNm durante la
sntesis de protenas. Ocurre en 3 pasos: en el primero es el precursor con una gran variedad de
protenas y se modifica por poliadenilacion; en el segundo paso se le agrega a la cadena de
precursor un fragmento de cadena que promueve la asociacin de protenas; en el tercer paso se
retiran los intrones (partes no tiles para la sntesis proteica), dejando los exones (fragmentos
activos para la sntesis proteica) para formar la molcula de ARNm.
1. Procedimiento del pre-ARNm eucarionte: Las clulas eucariontes convierten el transcripto primario
inicial sintetizado por la ARN polimerasa II en un ARNm funcional. Tres eventos principales tienen
lugar durante el proceso:
Formacin del casquete 5: Las molculas de ARN nacientes producidas por el ARN pol II alcanzan
una longitud de 25-30 nucletidos, se aaden a sus extremos 5 la 7-metilguanosina. En este paso,
el ARN es catalizado por una enzima dimrica formadora del casquete, la cual se asocia con el
dominio carboxilo terminal (CTD) de la ARN pol II. Por dicha enzima formadora del casquete no se
une el ARN con la pol I o pol III que no contienen un CTD, con lo que la formacin del casquete es
especfica de los transcriptos producidos por la ARN pol II.
Corte / poliadenilacin 3: El corte y poliadenilacin 3 de los pre-ARNm estn estrechamente
acoplados. El ensamblaje del gran complejo corte/ poliadenilacin multiproteico alrededor de la seal
poli (A) rica en AU en un pre-ARNm es anlogo en muchos aspectos a la formacin del complejo de
preiniciacin de la transcripcin en la caja TATA rica en AT de una molcula de ADN molde. Los
complejos multiproteicos se ensamblan cooperativamente a travs de una red de interacciones de
cido nucleico-protena y protena-protena.
Corte y empalme del ARN: El corte y empalme del ARN se produce en secuencias conservadas
cortas de los pre-ARNm mediante dos reacciones de transesterificacin. El proceso tiene lugar en el
ncleo a medida que el precursor del ARNm naciente se transcribe y el ARNm funcional producido
es transportado al citoplasma.
Modificacin postraduccional
Es la modificacin qumica de una protena despus de su traduccin. Se puede transformar la
estructura de la protena, adicionndole un grupo funcional (acetato, lpido, carbohidrato, fosfato) o
cambiar la naturaleza de sus aminocidos, o cambiar su estructura por puentes bisulfuro, o romperla
en dos por accin de una enzima. Existen otras formas para modificar una protena, como la
fosforilacin, que sirven para controlar el comportamiento de una protena (como activar o inhibir una
enzima).

Relacin de la Clula con su ambiente

La relacin de la clula con su ambiente se basa en la sensibilidad, o capacidad de recibir estmulos
del exterior, y en la emisin de respuestas ante esos estmulos. Los estmulos son las variaciones
del medio ambiente capaces de provocar en la clula algn tipo de respuesta. Hay muchos tipos de
estmulos, entre otros los estmulos trmicos, los qumicos, los elctricos, los gravitatorios, etc.
El ambiente celular es bsicamente la matriz extracelular (MEC), sta es el conjunto de materiales
extracelulares que forman parte de un tejido. La MEC es un medio de integracin fisiolgico, de
naturaleza bioqumica compleja, en el que estn inmersas las clulas. As la MEC es la sustancia
del medio intersticial (intercelular). La MEC es un componente de vida importante. Los animales con
clulas se distinguen por su capacidad de interconectarse una morfognesis compleja que implica
asociaciones celulares cooperativas para formar tejidos. Ah es donde es importante y distintiva la
MEC como componente cohesivo y medio logstico de integracin de las diferentes unidades
funcionales celulares.
Uno de los mecanismos que utiliza la clula es la adherencia celular o adhesin celular, que es la
capacidad que tienen las clulas tanto en los seres unicelulares como pluricelulares de unirse a
elementos del medio externo o a otras clulas. La adhesin celular se produce tanto por fuerzas
electrostticas y otras interacciones inespecficas como por molculas de adhesin celular, que son
especficas. La adherencia celular est relacionada con mltiples funciones celulares como son: El
desarrollo embrionario, La migracin celular, La inflamacin, La comunicacin celular, La
diferenciacin celular, El desarrollo del cncer.
Para poder realizar todos los procesos mencionados anteriormente requiere del citoesqueleto, ste
es un orgnulo y tambin es un entramado tridimensional de protenas que provee soporte interno
en las clulas, organiza las estructuras internas e interviene en los fenmenos de transporte, trfico
y divisin celular. En las clulas eucariotas, consta de filamentos de actina, filamentos intermedios,
microtbulos y septinas, mientras que en las procariotas est constituido principalmente por las
protenas estructurales FtsZ y MreB. Las septinas se consideran el cuarto componente del
citoesqueleto. El citoesqueleto es una estructura dinmica que mantiene la forma de la clula, facilita
la movilidad celular (usando estructuras como los cilios y los flagelos), y desempea un importante
papel tanto en el trfico intracelular (por ejemplo, los movimientos de vesculas y orgnulos) y en la
divisin celular.

Comunicacin celular

La comunicacin celular es la capacidad que tienen todas las clulas, de intercambiar informacin
fisicoqumica con el medio ambiente y con otras clulas. La comunicacin celular es un mecanismo
homeosttico, porque tiene como objetivo mantener las condiciones fisicoqumicas internas
adecuadas para la vida frente a los cambios externos.
La existencia de organismos multicelulares, en los que cada una de las clulas individuales debe
cumplir con sus actividades de acuerdo con los requerimientos del organismo como un todo, exige
que las clulas posean un sistema de generacin, transmisin, recepcin y respuesta de una
multitud de seales que las comuniquen e interrelacionen funcionalmente entre s. Estas seales
que permiten que unas clulas influyan en el comportamiento de otras son fundamentalmente
qumicas.
Comunicacin endocrina
En la comunicacin endocrina, las molculas sealizadoras (hormonas) son secretadas por clulas
endocrinas especializadas y se transportan por el sistema vascular sanguneo o linftico, actuando
sobre clulas diana localizadas en lugares alejados del organismo. En los animales se producen
ms de 50 hormonas distintas por las glndulas endocrinas. La comunicacin endocrina se lleva a
cabo en las clulas somticas.
Comunicacin paracrina.
La comunicacin paracrina es la que se produce entre clulas que se encuentran relativamente
cercanas (clulas vecinas), sin que para ello exista una estructura especializada como es la sinapsis,
siendo una comunicacin local. La comunicacin paracrina se realiza por determinados mensajeros
qumicos peptdicos como citocinas, factores de crecimiento, neurotrofinas o derivados del cido
araquidnico como prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos. Tambin por histamina y otros
coipos.
Comunicacin autocrina.
La comunicacin autocrina o autocomunicacin es la que establece una clula consigo misma. Este
tipo de comunicacin es la que establece la neurona presinptica al captar ella misma en sus
receptores celulares, los neurotransmisores que ha vertido en la sinapsis, para as dejar de
secretarlos o recaptarlos para reutilizarlos. Muchas clulas en crecimiento como las clulas del
embrin o las clulas cancerosas producen factores de crecimiento y los receptores para esos
mismos factores de crecimiento y as perpetuar su proliferacin, controlada en el caso del embrin y
descontrolada en el caso del cncer.
Comunicacin yuxtacrina.
Es la comunicacin por contacto con otras clulas o con la matriz extracelular, mediante molculas
de adhesin celular. La adhesin entre clulas homlogas es fundamental para el control del
crecimiento celular y la formacin de los tejidos, entre clulas heterlogas es muy importante para el
reconocimiento que realiza el sistema inmune. La comunicacin yuxtacrina se realiza entre otros
mecanismos por medio de las uniones celulares como las uniones gap.
Comunicacin nerviosa.
La comunicacin nerviosa o neurotransmisin es un tipo especial de comunicacin celular
electroqumica, que se realiza entre las clulas nerviosas. En la neurotransmisin el flujo de
informacin elctrica recorre la dendrita y axn de las neuronas en una sola direccin, hasta
alcanzar la sinapsis, donde en esa hendidura que separa ambas neuronas, la neurona presinptica
segrega unas sustancias qumicas llamadas neurotransmisores que son captadas por receptores de
membrana de la neurona postsinptica, que transmite y responde a la informacin. Existen otras dos
variedades de comunicacin nerviosa que son:
La neurosecrecin o comunicacin neuroendocrina, donde una neurona vierte una hormona a la
circulacin sangunea para alcanzar a un rgano blanco distante.
La comunicacin neuromuscular, donde las neuronas motoras transmiten el impulso nervioso de
contraccin a las clulas musculares a travs de una estructura semejante a la sinapsis llamada
placa motora.
Comunicacin por molculas gaseosas
Es la comunicacin en la que intervienen como mensajeros qumicos sustancias gaseosas como el
xido ntrico y el monxido de carbono. Se considera un tipo de comunicacin paracrina, sin
embargo, hay que destacar que la accin de las dos molculas gaseosas es distinta, el xido ntrico
es fundamental en los sistemas nervioso, inmune y circulatorio y es capaz de difundir libremente a
travs de las membranas plasmticas de las clulas diana en las que acta. El monxido de carbono
tambin funciona como molcula sealizadora en el sistema nervioso y est muy ligada al xido
ntrico, ambas molculas gaseosas a diferencia de las hormonas esteroideas (que tambin pueden
difundir la membrana) no actan como factores de transcripcin sino que lo hacen modificando la
actividad de enzimas diana intracelulares.

Mecanismos de comunicacin celular
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La comunicacin celular involucra las siguientes etapas:
1) Ante un estmulo, una determinada clula (clula emisora) sintetiza y/o libera una molcula seal
o mensajero qumico;
2) El mensajero qumico difunde o se transporta por la sangre u otro fluido extracelular a la clula
blanco (clula receptora);
3) En la clula blanco o clula receptora, el mensajero qumico se une a un receptor (de membrana
o intracelular);
4) La unin del mensajero qumico a su receptor desencadena una respuesta que puede ser el
cambio en alguna funcin, en el metabolismo o en el desarrollo en la clula receptora;
5) La seal cesa y la respuesta termina
Los mecanismos que se utilizan en la comunicacin celular son:
Transduccin de seales por receptores intracelulares y de membrana plasmtica.
Adaptacin de la clula diana.
TLR y mecanismos de transduccin de seales








ioseguridad
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La Bioseguridad se define como un conjunto de normas o medidas preventivas, cuyo objetivo es
mantener el control de factores de riesgo procedentes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos,
logrando la previsin de impactos nocivos frente a riesgos propios de su actividad diaria, asegurando
que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la seguridad del
personal, animales, visitantes y el medio ambiente.
Estas normas se puntualizan en protocolos que describen detalladamente cada actividad a realizar
en el laboratorio, desde la extraccin o colecta del material hasta la emisin del resultado final,
incluyendo utilizacin de equipos, procedimientos tcnicos, procedimientos y cuidados de
bioseguridad y conductas a ser adoptadas en caso de accidentes. A continuacin encontrar la gua
correspondiente.
Extraccin de ADN
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El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN, es un cido nucleico que
contiene instrucciones genticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos
vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisin hereditaria. El papel principal de
la molcula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de informacin. Los segmentos de ADN que
llevan esta informacin gentica son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN tienen
propsitos estructurales o toman parte en la regulacin del uso de esta informacin gentica. Desde
el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un poli nucletido o
polmero. Las unidades de ste polmero se le llaman nucletidos que estn formados a su vez de
un azucar Desoxirribosa, un grupo fosfato y una base nitrogenada (A, G, C y T). En las clulas
eucariotas se encuentra en los nucleos y en los procariontes esta ubicado en el citoplasma.
Las funciones biolgicas del ADN incluyen el almacenamiento de informacin (genes y genoma), la
codificacin de protenas (transcripcin y traduccin) y su auto duplicacin (replicacin del ADN)
para asegurar la transmisin de la informacin a las clulas hijas durante la divisin celular. Para
poder estudiar su estructura y funcin es primordial extraer esta molcula, por tanto el laboratorio
que se realizara tiene como objetivo obtener ADN de buena calidad. A continuacin encontrar la
guia correspondiente:

Separacin por gradientes de densidad
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La tecnica de Ficoll hypaque es una tecnica de centrifugacion por gradiente de densidad para separar Clulas
Mononucleares de Sangre Perifrica (CMSP) de otras celulas de la sangre. Durante la centrifugacion se van formando
varias capas, el sedimento que esta formado principalmente por granulocitos y eritrocitos ha migrado a traves de la
gradiente de densidad que es mayor al del ficoll hypaque, encima estariaotra capa que seria el ficoll hypaque que es menos
denso, y encima estaria otra capa fina opalecente que serian las CMSP, finalmente sobre esa capa estaria las plaquetas y el
plasma que con futuros lavados se estarian removiendo para tratar de obtener solo los linfocitos.

Extraccin de ARN
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El cido ribonucleico (ARN) es un cido nucleico formado por una cadenade ribonucletidos. Est presente tanto en las
clulas procariotas como en las eucariotas, y es el nico material gentico deciertos virus (virus ARN). El ARN celular es
lineal y de hebra sencilla, pero en el genoma de algunos virus es de doble hebra. La forma de extraerlo de la clula
eficientemente es mediante la utilizacin de TRIzol, es un reactivo listo para utilizarse en el aislamiento de ARN de
clulas y tejidos, es una solucin mono-fsica de fenol e isocianato de guanidina que durante la homogenizacin o lisis de
la muestra mantiene la integridad del ARN, al mismo tiempo que altera la estabilidad de las clulas y disuelve los
componentes celulares, ha demostrado estabilidad hasta por 12 meses a temperatura ambiente sin embargo se recomienda
almacenarlo a temperatura de 2-8c para un optimo rendimiento.
GUIA DE LABORATORIO:
Cuantificacin de cidos Nucleicos
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Una vez obtenido tanto el ADN como el ARN se procede a evaluar su cantidad como su calidad, para esto utilizamos una
serie de tcnicas, pero la ms utilizada y la que realizaremos es la Espectrofotometra. La espectrofotometra es el mtodo
de anlisis ptico ms usado hoy da, las ventajas sobre otros mtodos de laboratorio diversas; son rpidas, verstiles y
fciles de usar. La espectrofotometra es usada para identificar compuestos por su espectro de absorcin y conocer la
concentracin de un material o sustancia, esto ltimo nos permite conocer la concentracin de compuestos, seguir el curso
de reacciones qumicas y enzimticas as como determinar enzima y protenas incluso cidos nucleicos.
Como ya sabemos un espectrofotmetro es un equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por medio de
una longitud de onda especfica. La cantidad de luz absorbida por un medio es proporcional a la concentracin del soluto
presente, es entonces as que la concentracin de un soluto colorido en solucin puede ser determinada en el laboratorio
mediante la medicin de su absorcin de luz a una longitud de onda especfica. Las muestras en estos equipos se utilizan
en estado lquido y se colocan en el compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes tamaos y
materiales.


Enzimas de restriccin
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Un enzima de restriccin (o endonucleasas de restriccin) es aquella que puede reconocer una secuencia caracterstica de
nucletidos dentro de una molcula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto, llamado sitio o diana de
restriccin, o en un sitio no muy lejano a ste. Los sitios de restriccin cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, con las
que son reconocidos.
El mecanismo de corte de DNA se realiza a travs de la ruptura de dos enlaces fosfodister en la doble hebra, lo que da
lugar a dos extremos de DNA. stos pueden ser romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados.
Estos ltimos tienen tendencia a volver a unirse de modo espontneo, ya que los extremos se pueden unir a otros extremos
coincidentes que pueda haber en la cercana (Apareamiento de Watson & Crick). Los fragmentos de ADN obtenidos de
este modo pueden unirse por otras enzimas llamadas ligasas.

Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR)
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La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls (Polymerase Chain Reaction), es una
tcnica de biologa molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias
de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de ese fragmento
original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificacin resulta mucho ms fcil
identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadveres)
o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se
convierta en una tcnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Electroforesis en Agarosa
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La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico. La
separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte slido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato
de celulosa), o bien a travs de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolucin (electroforesis libre).
Dependiendo de la tcnica que se use, la separacin obedece en distinta medida a la carga elctrica de las molculas y a su
masa.
La electroforesis se usa en una gran mayora en la materia del ADN recombinante ya que nos permite saber la carga que
poseen los polipptidos, y separar los diferentes polipptidos resultantes de las variaciones del experimento del ADN
recombinante. La variante de uso ms comn para el anlisis de mezclas de protenas o de cidos nucleicos utiliza como
soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica
negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las protenas se cargan al unirse con sustancias como el SDS
(detergente) que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la protena. Al poner la
mezcla de molculas y aplicar un campo elctrico, stas se movern y debern ir pasando por la malla del gel (una red
tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas
avanzarn ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida
Electroforesis en Poliacrilamida (SDS-PAGE)
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SDS-PAGE es el acrnimo en ingls de sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (electroforesis en gel
de poliacrilamida con dodecilsulfato sdico). Es una tcnica ampliamente utilizada en bioqumica, gentica, biologa
molecular y ciencia forense para separar las protenas de acuerdo a su movilidad electrofortica (en funcin de la longitud
de la cadena polipeptdica, masa molecular, modificaciones postraduccionales y otros factores). Gracias al SDS la mayora
de protenas adquieren una relacin carga/masa idntica, por lo que se obtiene un fraccionamiento que obedece a: a la
diferencia de peso, a la longitud de la cadena (tamao) y a la forma de la protena. Es el mtodo de electroforesis
empleado con mayor profusin para analizar protenas.

Vectores de Clonacin
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Los vectores de clonacin son molculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan
insertados mediante tcnicas de ADN recombinante. Para que sirva de vector, una molcula debe ser capaz de replicarse
junto con el fragmento de ADN que transporta. Tambin tiene que tener secuencias de reconocimiento que permitan la
insercin del fragmento de ADN a clonar. Para insertar un fragmento de ADN al vector, se utiliza una enzima de
restriccin, y se mezcla con fragmentos de ADN producidos con la misma enzima. Los vectores que transportan un
fragmento insertado se denominan vectores recombinantes.
Hay muchos vectores de clonacin, que difieren en la especificidad de la clula husped, el tamao de los insertos que
pueden transportar y en caractersticas como el nmero de copias que producen y el nmero y tipo de genes marcadores
que contienen, entre otras.
Plsmidos: fueron los primeros vectores que se desarrollaron, y an son ampliamente usados. Estos vectores proceden de
molculas de ADN de doble cadena extra cromosmicas que se encuentran de manera natural y que se replican
autnomamente dentro de las clulas bacterianas.
Bacterifago lambda: El genoma del fago lambda se ha cartografiado y secuenciado completamente. Para ser utilizado
de vector, el tercio central de su cromosoma puede ser reemplazado por ADN forneo, sin que ello afecte a la capacidad
del fago de infectar clulas y formar cpsides. Para clonar ADN utilizando este vector, se purifica el ADN del fago y se
corta con una enzima de restriccin, con la misma enzima de restriccin cortamos el fragmento de ADN de inters y los
unimos con una ADN ligasa. Los vectores lambda recombinantes se empaquetan in vitro en las cpsides proteicas del
fago, y se introducen en clulas del husped bacteriano. Dentro de las bacterias, los vectores se replican y forman muchas
copias del fago infectivo, llevando todas ellas el fragmento de ADN de inters en la clonacin. Los vectores fgicos
pueden transportar fragmentos de hasta 20 kb (kilobases).
Csmidos: son vectores hbridos utilizando partes del cromosoma de lambda y de plsmidos. Tienen la secuencia cosdel
fago lambda, necesaria para el empaquetamiento del ADN del fago dentro de su cubierta proteica, adems contienen
secuencias plasmdicas necesarias para la replicacin y genes de resistencia a antibiticos. Los csmidos pueden
transportar casi 50 kb de ADN insertado.
BAC: Un BAC es un cromosoma artificial bacteriano, basado en el plsmido de fertilidad (factor F) de bacterias. El factor
F es un plsmido que se replica independientemente y que transfiere informacin gentica durante la conjugacin
bacteriana. Los BAC pueden transportar insertos de hasta 300 kb.
YAC: Los YAC son cromosomas artificiales de levadura. Un YAC tiene telmeros en sus extremos, un origen de
replicacin y un centrmero. Estos componentes estn unidos a genes marcadores de seleccin y a un grupo de enzimas de
restriccin para insertar ADN exgeno. Estos cromosomas artificiales de levadura permiten clonar grandes trozos de
ADN, de 100 a 1000 kb.
Hibridizacin
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Hibridizar o hibridar en Biologa molecular se define como el proceso mediante el cual con una macromolcula se busca
combinarse con otra macromolcula para identificarla o separarla. Existen varias tipos de hibridizacin de cidos
nucleicos, protenas, carbohidratos, etc. La hibridacin de cidos nucleicos (ADN ARN) es un proceso por el cual se
combinan dos cadenas de cidos nucleicos antiparalelas y con secuencias de bases complementarias en una nica
molcula de doble cadena, que toma la estructura de doble hlice, donde las bases nitrogenadas quedan ocultas en el
interior. Esto hace que si irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que absorben estas bases (260 nm), la
absorcin de energa ser mucho menor si la cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta ltima los
dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que captan la energa, estn totalmente expuestos a la fuente emisora
de energa. En el caso de las protenas se realiza mediante anticuerpos marcndolas de la misma manera.


1. Introduccin a la biologa Molecular y Bioseguridad.
2.Teoria: Estructura y funcin del ADN.
Lab: Extraccin de ADN.
3.Teoria: Replicacin, transcripcin y traduccin.
Lab: Mtodos de separacin por gradientes de densidad (Ficoll-Hystopaque).
4.Teoria: Control de la expresin gnica.
Lab: Extraccin de ARN.
5.Teoria: Relacin de la clula con su ambiente.
Lab: Cuantificacin de cidos Nucleicos.
6.Teoria: Comunicacin celular.
Lab: Enzimas de restriccin.
7.Teoria: Mecanismos de comunicacin celular.
Lab: Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR).
8.Teoria: Compartimentos intracelulares y distribucin de sustancias.
Lab: Electroforesis de Agarosa.
9. Teoria: Protenas de secrecin.
Lab: Electroforesis de Poliacrilamida.
10.Teoria: Endocitosis mediada por receptor.
Lab: Vectores de Clonacin.
11.Teoria: Organulos relacionados con la produccin de energa
Lab: Hibridizacin.
12.Teoria: Ciclo celular y muerte celular programada.
Lab: Tcnicas de identificacin Filial (Paternidades).
13. Teoria: Elementos gen{eticos adicionales
Lab: Seminarios y club de revistas.