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CAPTULO 2

MARCO CONCEPTUAL











Sustancias Txicas en Afluentes del Ro Cauca Captulo 2, Marco Conceptual
Corporacin Autnoma Regional del Valle del Cauca CVC Universidad del Valle
2.1


2 MARCO CONCEPTUAL


2.1 ESTUDIOS DE TOXICIDAD


2.1.1 Pruebas de Toxicidad

El concepto de bioensayo se deriva de la toxicologa clsica, el cual ha sido adaptado y
aplicado al diagnstico ambiental, considerndose como un complemento a la
caracterizacin fisicoqumica convencional. Los ensayos biolgicos son herramientas de
diagnstico adecuadas para determinar el efecto de agentes fsicos y qumicos sobre
organismos de prueba bajo condiciones experimentales especficas y controladas. Esto los
convierte en una herramienta eficaz para la prediccin de niveles de concentracin de
compuestos txicos, en los cuales mediante la qumica analtica clsica no se logra obtener
efectos observables.

De acuerdo con Castillo (2004), estos efectos pueden ser tanto de inhibicin como de
magnificacin y son evaluados por la reaccin de los organismos, tales como muerte,
crecimiento, proliferacin, multiplicacin, cambios morfolgicos, fisiolgicos e
histolgicos. Tambin pueden extenderse al mbito de poblaciones, comunidades o
ecosistemas para la identificacin de elementos biolgicos en riesgo.

La medicin directa o pruebas de toxicidad son un procedimiento de laboratorio que se
puede realizar con una amplia diversidad de organismos, usando las sustancias txicas
como compuestos nicos o como mezclas en efluentes, antes o despus de que se unan con
el ambiente receptor.


2.1.2 Tipos de Pruebas de Toxicidad

Segn Castillo (2004), las pruebas de toxicidad, en general, pueden clasificarse de acuerdo
con:

El mtodo utilizado para incorporar la muestra al sistema de ensayo: esttico, con
renovacin, flujo continuo.

El propsito para el cual son utilizadas: control de calidad de vertidos, evaluacin de
compuestos especficos, toxicidad relativa, sensibilidad relativa, etc.

Tiempo de duracin con relacin al ciclo de vida del organismo empleado, as:

Agudo: ocurre dentro de un periodo corto (minutos, horas o algunos das) en
relacin con el periodo de vida del organismo de ensayo.

Crnico: ocurre durante un periodo relativamente largo de exposicin (una fraccin
significativa de la vida del organismo, superior al 10%).
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2.2
2.1.3 Parmetros Determinados a travs de las Pruebas de Toxicidad

Por medio de las pruebas de toxicidad se pueden determinar las concentraciones que
producen efectos sobre los organismos estudiados, ya sea de tipo letal o subletal. Dichos
efectos se describen a continuacin (Cepis, 2001):

CE
50
( CI
50
)
.
Concentracin Efectiva o de Inhibicin media. Concentracin del material
en agua, suelo o sedimento que se estima afecta al 50% de los organismos de ensayo. La
CE
50
y sus lmites de confianza (95%) son usualmente derivados de anlisis estadsticos.

CL
50
. Concentracin Letal media. Concentracin del material en agua, suelo o sedimento
que se estima letal para el 50% de los organismos de ensayo. La CL
50
y sus lmites de
confianza (95%) son usualmente derivados de anlisis estadsticos.

LOEC. Concentracin ms baja de la sustancia txica a la cual se observa efecto subletal
inhibitorio cuantificable en el organismo de prueba, en las condiciones y el tiempo
preestablecidos.

NOEC. Concentracin ms alta de la sustancia txica agregada que no tiene ningn efecto
subletal inhibitorio cuantificable en el organismo de prueba en las condiciones
determinadas y el tiempo preestablecido.

TOEC. Concentracin umbral a la cual se observa efecto (media geomtrica del NOEC y
LOEC).


2.1.4 Organismos de Prueba

Los organismos acuticos generalmente tienen ciclos de vida y requerimientos de cultivo y
de manejo complejos, por lo que el conocimiento profundo de su ecologa es una tarea larga
que frecuentemente requiere aos de investigacin. Es muy recomendable que se
consideren slo aquellos organismos de los que se tiene informacin suficiente. Las
especies con informacin limitada sobre cultivo y procedimientos de prueba deben evitarse.

En las pruebas de toxicidad se recomienda utilizar ms de una especie, permitiendo esto
una determinacin ms cuidadosa y ajustada de la toxicidad, debido a que los organismos
acuticos responden de manera diversa a las sustancias txicas. Por ejemplo, los peces
pueden ser mucho ms sensibles que los invertebrados a una sustancia qumica, mientras
que puede suceder lo contrario con otra sustancia. Adicional a esto, es importante
considerar el ciclo de vida del organismo, ya que la mayora de protocolos de bioensayos
agudos y crnicos requieren organismos jvenes o recin nacidos.

Entre los grupos de organismos de prueba ms empleados en estudios de toxicidad se
destacan los dafnidos, los peces, las algas y los celenterados. Otros grupos como protozoos,
rotferos, coppodos, anlidos, insectos, moluscos y crustceos tambin han sido
considerados como organismos de prueba.

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2.3
Seleccin de especies

Fauna

Cladceros. Son crustceos pequeos que constituyen la mitad de la Clase Branchiopoda.
Conocidos vulgarmente como pulgas de agua, son los organismos mas comnmente
utilizados en pruebas de toxicidad. La mayora de estos organismos presentan apariencia
plida y transparente y viven casi exclusivamente en agua dulce (Ruppert y Barnes, 1996;
citados por MacQuhae, 2002).

Debido a su amplia distribucin, importancia ecolgica y sensibilidad a ambientes
intervenidos, se les considera especies indicadoras de condiciones ambientales adversas.
Adems, por ser organismos de fcil mantenimiento bajo condiciones de laboratorio,
normalmente se utilizan en pruebas de toxicidad acuticas. Algunas ventajas de este
organismo de prueba son las siguientes.

Presentan un ciclo de vida relativamente corto, con un amplio periodo reproductivo,
permitiendo realizar pruebas de toxicidad agudas y crnicas

Presentan reproduccin partenogentica, lo cual garantiza homogeneidad gentica de la
poblacin

Representan un eslabn intermedio importante en la cadena alimenticia

Presentan alta sensibilidad a sustancias txicas

Existe informacin extensa sobre tcnicas de cultivo, que con una adecuada
capacitacin facilitan el desarrollo de las pruebas

Peces. Los peces son considerados por muchos toxiclogos acuticos como los organismos
de prueba ms apropiados debido a su ubicacin en la cadena trfica. Ofrecen la ventaja
adicional de permitir anlisis biolgicos ms sofisticados, tales como estudios histolgicos
y patolgicos. Adems, debido a que son fuente de alimento para los seres humanos, la
informacin acerca de la concentracin de las sustancias txicas en sus tejidos es un
componente importante de un programa toxicolgico (CEPIS, 2001).

Existen muchos protocolos de bioensayos para diferentes etapas del ciclo de vida de los
peces: huevos, larvas, etapas tempranas de su desarrollo y reproduccin, entre otros.
Algunas de sus ventajas son:

Se encuentran en el nivel ms alto de la cadena alimenticia y son el predictor ms
directo de la salud de una comunidad acutica

La toxicologa de los peces es extensa porque efectos tales como en la qumica de la
sangre, los tejidos corporales y los rganos puede fcilmente ser estudiada

Sin embargo, tambin presentan algunas desventajas como son:

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Largos perodos de reproduccin y desarrollo

Requerimiento de grandes volmenes de agua de agua dilucin y muestra a ser probada

Flora

Adicional al empleo de una amplia diversidad de fauna acutica en pruebas de toxicidad,
tambin se ha venido implementando en las ltimas dcadas la utilizacin de flora,
empleando tanto semillas como plntulas de diferentes especies. Algunas presentan
importancia econmica, disponibilidad, procesos de desarrollo (germinacin y crecimiento)
rpidos y sensibilidad ante la presencia de sustancias qumicas. Entre las plantas empleadas
se destacan dentro del grupo de las dicotiledneas la lechuga, la mostaza, el rbano, el
pepino, el trbol, la zanahoria, el tomate, entre otras y en el grupo de las monocotiledneas
el maz, el trigo, el sorgo, el arroz y la avena..

Las pruebas de fitotoxicidad que emplean plantas terrestres no son usadas muy
frecuentemente en ecotoxicologa (Wang, 1991; Calow, 1993; APHA, 1995). Las
caractersticas ms importantes de los ensayos con plantas terrestres, son que se les puede
usar con muestras coloreadas o turbias, en ensayos estticos, semiestticos y de flujo
continuo y con un mnimo costo de mantenimiento en el laboratorio (Wang, 1991). El
empleo de semillas de plantas terrestres como herramientas ecotoxicolgicas es ventajoso
por requerir pocos volmenes de muestra y de agua de dilucin comparado con otros
organismos (Arambasic et al., 1995).

Semillas. Como se mencion anteriormente, una de las plantas ms utilizadas en este tipo
de pruebas es la lechuga (Lactuca sativa), la cual de acuerdo con Sobrero (2004) si bien no
es una especie representativa de ecosistemas acuticos, la informacin generada a partir de
pruebas de toxicidad con esta especie proporciona datos acerca del posible efecto de los
contaminantes sobre la comunidad vegetal cercana a las mrgenes de cuerpos de agua
contaminados. Resulta interesante de considerar por su importancia desde el punto de vista
hortcola al igual que por su fcil y rpida germinacin, lo cual permite desarrollar pruebas
en pocos das.

Algunas de las ventajas en el uso de plantas como organismos indicadores se listan a
continuacin (Torres, 2003):

Las plantas son ms sensibles a estrs ambiental que otros sistemas de ensayos
disponibles

Fcil manipulacin y almacenamiento

Bajo costo

Buena correlacin con otros sistemas de pruebas

Mnimos requerimientos en cuanto al acondicionamiento y ajuste de la muestra
(aireacin, turbiedad, pH)

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2.1.5 Control de Calidad de las Pruebas de Toxicidad

La precisin de los resultados de las pruebas de toxicidad en el laboratorio se basa en cartas
o grficos de control (Daz, 2004), que permiten determinar la variabilidad de los resultados
y la estabilidad de la poblacin de los organismos de prueba y, en consecuencia, definir la
aptitud de un laboratorio para obtener resultados confiables.

Las cartas control incluyen cartas control positivo y cartas control negativo, cuyo objetivo y
caractersticas se describen a continuacin.

Carta Control Negativo

Corresponde al control o blanco y permite determinar si la respuesta de los organismos es
debida al efecto de la sustancia y/o mezcla de sustancias estudiadas, ya que evala la
respuesta del lote de organismos empleados a las condiciones de laboratorio, sometindolos
durante el mismo periodo de prueba al agua de dilucin en la cual habitualmente se cran y
aclimatan. Si el nmero de organismos que exhiben respuesta (mortalidad) en el control
negativo excede el 10% del total se hace necesario repetir la prueba, ya que esto es indicio
de que pueden existir condiciones fisiolgicas anmalas de los organismos que afectan la
respuesta de stos ante las sustancias evaluadas (Daz, 2004).

Carta Control Positivo

Es una herramienta de registro que permite la estandarizacin de las pruebas de toxicidad y
brinda los elementos de juicio para establecer los intervalos aceptables de variacin de la
respuesta de los organismos de prueba a un txico de referencia, con un margen de
confianza del 95%. Esta carta es el medio de referencia para evidenciar el control de la
sensibilidad de la especie empleada, de la estabilidad de la respuesta biolgica y de la
repetibilidad (exactitud) de los resultados obtenidos, asegurando as que la respuesta de la
poblacin expuesta a cierto agente txico se deba al efecto de ste y no a variaciones de la
sensibilidad de los organismos (Silva et al, 2003).

La carta control se genera a partir de los resultados obtenidos de pruebas sucesivas con el
txico de referencia seleccionado, para el cual se obtiene el valor de la concentracin de
efecto medio (CL
50
/CI
50
/CE
50
). De acuerdo con Daz (2004), esta carta puede ser
construida con un mnimo de cinco datos y posteriormente se debe continuar realizando
ensayos con el txico para ingresar mensualmente nuevos valores hasta completar una serie
de veinte resultados, los cuales se deben actualizar permanentemente con informacin de
nuevas pruebas.


2.1.6 Txicos de Referencia

Un txico de referencia es un compuesto qumico orgnico o inorgnico utilizado en
programas toxicolgicos con fines de control de calidad analtica de los resultados
obtenidos con los organismos a utilizar en las pruebas de toxicidad. Este compuesto
qumico debe ser soluble, de pureza mayor o igual al 99%. Con l se realizan pruebas de
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toxicidad a los organismos de prueba con el fin de establecer el intervalo de concentracin
del mismo que produce el efecto esperado. Una vez definido el patrn de la relacin dosis-
respuesta ste puede ser empleado como txico de referencia.

En la literatura se mencionan muchos compuestos que pueden emplearse como txicos de
referencia. La Agencia de Proteccin Ambiental (EPA, 1993) cita el empleo de cloruro de
sodio (NaCl), cloruro de potasio (KCl), cloruro de cadmio (CdCl
2
), sulfato de cobre
(CuSO
4
), dodecil sulfato de sodio (SDS) y dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
). Otras agencias,
como Environment Canada (EPS, 1998), recomiendan el zinc (II) como txico de
referencia inorgnico y el fenol como sustancia orgnica; sin embargo, estos compuestos
pueden sustituirse por otros, dependiendo de la especie de prueba, la matriz utilizada y los
puntos finales medidos.


2.2 EVALUACIN DEL IMPACTO AMBIENTAL A TRAVS DE LA ESTIMACIN
DE UNIDADES DE TOXICIDAD (UT)

De acuerdo con el Cepis (2001), las sustancias txicas se pueden considerar desde el punto
de vista de "sustancia qumica individual" (esto es, sustancias qumicas especficas, tales
como plomo, clordano o lindano) o desde el punto de vista de la "toxicidad total del
efluente". Para el ltimo caso, el efluente se considera como una mezcla compleja de
sustancias qumicas que no pueden ser aisladas en compuestos especficos con algn grado
de consistencia. La toxicidad total del efluente se convierte en la variable relevante sustituta
para propsitos de control y se basa en pruebas toxicolgicas, a partir de los cuales se
determinan parmetros como CL
50
, CE
50
, CI
50
, NOEC y LOEC, que permiten estimar las
unidades de toxicidad en cuerpos de agua y vertimientos.


2.2.1 Determinacin de las Unidades de Toxicidad

Existe una relacin inversa entre la toxicidad y la concentracin del bioensayo, esto es,
cuanto ms baja sea la concentracin letal para el 50% de los organismos - CL
50
, tanto ms
alta ser la toxicidad del efluente. Como resultado, una unidad de toxicidad se define como:

UTa,c = 100/(CL
50
o CE
50
o CE
50
o NOEC) (2.1)

donde:

UTa = Unidad txica aguda
UTc = Unidad txica crnica

Zagatto et al. (1988), citado por Ramrez (1999), propone una clasificacin del nivel de
toxicidad de un vertimiento o cuerpo de agua basada en Unidades de Toxicidad (UT) como
se presenta en el Cuadro No. 2.1.



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Cuadro No. 2.1 Nivel de Incidencia Toxicolgico basado en Unidades de Toxicidad
Nivel de Incidencia Unidades Txicas
No Txico 1
Levemente Txico > 1 1.3
Moderadamente Txico > 1.3 2
Txico > 2 4
Muy Txico > 4

Las unidades de toxicidad, adems de ser una herramienta til en la determinacin y
evaluacin del nivel de toxicidad en un cuerpo de agua o vertimiento, permiten incorporar
los efectos agudos y/o crnicos dentro de estndares o guas para el control de la calidad del
agua. Es as como el Cepis (2001) presenta diferentes ecuaciones basadas en el balance de
masa, a partir de las cuales se pueden estimar la carga y la concentracin permitidas para un
efluente complejo, representado por unidades de toxicidad.


Resultados de diferentes estudios han permitido establecer criterios basados en la CL
50
y la
CE
50
. Por ejemplo, la Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (EPA)
recomienda lo siguiente (Cepis, 2001):

El Criterio de Concentracin Mxima (CMC) para niveles agudos: Para la toxicidad
total del efluente, el CMC es la mxima concentracin txica en el ro para controlar
efectos agudos en el ecosistema acutico; se recomienda:

CMC < 0.3 UTa

El Criterio de Concentracin Continua (CCC) para niveles crnicos: define el perodo
promedio de exposicin de cuatro das. Para la toxicidad total del efluente se
recomienda:

CCC < 1.0 UTc

La aplicacin de estos criterios a cuerpos de agua y vertimientos permite definir metas de
reduccin basadas en la medicin de Unidades de Toxicidad, as como ejercer un control
ms efectivo sobre el empleo de sustancias qumicas por parte de los sectores productivos.


2.2.2 Otros Indicadores

Con base en la medicin de las Unidades de Toxicidad, diferentes autores han planteado
otros indicadores que permiten complementar el anlisis de la evaluacin del impacto
generado por la presencia de sustancias txicas en vertimientos y cuerpos receptores. Entre
estos se destacan:

ndice de Contaminacin Txico - ICOTOX. Este ndice fue planteado por Ramrez y
Restrepo (2004) para valorar el impacto ambiental en aguas continentales a partir de la
incidencia de vertimientos y es complementario a los ndices de Contaminacin ICO`s
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desarrollados previamente por Ramirez et al. (1997, 1999). El ICOTOX se determina con
base en las Unidades de Toxicidad y se plantea con el fin de hacerlas comparables con otros
ndices de contaminacin y disimilaridad. El ndice ICOTOX se calcula de acuerdo con la
siguiente expresin:

ICOTOX = 0.26 + 0.96 Log (UT) (2.2)

Cuadro No. 2.2 Nivel de Incidencia Toxicolgico de acuerdo con
el ndice de Contaminacin ICOTOX
Nivel de Incidencia
VALOR DEL
ICOTOX
No Txico < 0.26
Levemente Txico 0.26 0.37
Moderadamente Txico 0.37 0.55
Txico 0.55 0.84
Muy Txico >0.84

Para valores de UT superiores a 4 el ndice ICOTOX se hace automticamente igual a 1,
indicando un nivel de incidencia muy Txico.

Tasa de Emisin de Toxicidad (TER, Toxic Emision Rate): Esta tasa permite determinar
el aporte de carga txica de un vertimiento sobre un cuerpo de agua y as establecer su
impacto. La ecuacin mediante la cual se determina la TER es la siguiente:

TER = UT x Q (2.3)

Donde:

Q = Caudal del vertimiento (m
3
/da)
UT = Unidades de Toxicidad medidas en el vertimiento.

ndice de Contaminacin Bitico - ICOBIO. Adicional a los ndices presentados
anteriormente, existen otros ndices que permiten valorar el impacto del vertimiento sobre
el cuerpo receptor. Entre este tipo de ndices se encuentra el ndice de Contaminacin
Bitico ICOBIO, el cual se basa en la disimilitud de las comunidades biticas presentes
aguas abajo y aguas arriba del vertimiento. Este ndice al igual que el ICOTOX hace parte
del grupo de los ndices de contaminacin planteados por Ramrez y Restrepo (2004). Para
su determinacin se emplea la siguiente ecuacin:

ICOBIO = 1 D (2.4)

D = ndice de Disimilaridad de Jaccard

c b a
a
D
+ +
=

Donde:

a = Nmero de Taxones en comn aguas arriba y aguas abajo del vertimiento
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b = Nmero de Taxones presentes solamente aguas arriba del vertimiento
c = Nmero de Taxones presentes solamente aguas abajo del vertimiento

Valores del ndice ICOBIO superiores a 0.6 denotan la existencia de condiciones
ambientales diferentes antes y despus del vertimiento, lo cual indica la incidencia del
vertimiento sobre las comunidades biolgicas. Si este ndice es inferior a 0.4 indica muy
poca incidencia del vertimiento sobre dichas comunidades.