Practica 4

Universidad Alas Peruanas Filial Arequipa
Tecnologa Mdica Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

Inmunohematologa y Banco de Sangre
Docente: Lic. TM Christian Albornoz
Katherine Teresa Maldonado Nina

Prctica N 5
Prueba Cruzada Mayor
1. Introduccin
Entre las medidas de seguridad transfusional estn aquellas encaminadas a evitar la reaccin
hemoltica aguda, es decir, las que aseguran la compatibilidad entre donante y receptor.
Aunque comprenden tanto normas pretransfucionales como para la administracin de los
componentes en general, se definen como las pruebas analticas del laboratorio que se llevan a cabo
para detectar posibles anticuerpos en el receptor contra antgenos en las clulas a transfundir. Estas
incluyen diferentes estudios en el receptor, determinacin del grupo sanguneo y factor Rh, AI y en
concreto, las denominadas en este trabajo como son las pruebas cruzadas que se llevan a cabo en
determinados casos entre el suero del receptor y clulas del donante (hemates o plaquetas) e
investigan la presencia de posibles anticuerpos en el suero mediante su reaccin en diferentes
medios fsicos.
Por la importancia de la reaccin hemoltica en los casos de incompatibilidad eritrocitaria y la
facilidad tcnica para realizar las pruebas con hemates, estas se llevan a cabo de manera rutinaria en
los casos de transfusin.
La prueba cruzada mayor consta en investigar en el suero del receptor los posibles anticuerpos frente
a antgenos.
Para ello, se observa la aglutinacin eritrocitaria en la mezcla in vitro de suero del paciente y
hemates del donante. La mezcla se estudia en diferentes medios fsico-qumicos (incluida la fase de
anti globulina) que modificando las propiedades del suero y hemates favorecen a la presencia de
aglutinacin. Cuando no hay aglutinacin en ninguno de estos medios estudiados, la prueba cruzada
mayor es negativa para esta unidad especfica, hay compatibilidad entre el receptor y donante y la
unidad de sangre se puede administrar.
2. Objetivos
o Conocer el procedimiento de pruebas cruzadas para la deteccin de donantes
incompatibles.
o Interpretar reacciones de aglutinacin Ag-Ac que se dan en el procedimiento.
o Conocer la importancia de determinar las pruebas cruzadas en una transfusin
sangunea.
o Realizar una buena interpretacin a partir del resultado de la aglutinacin con
muestra de suero y muestra de glbulos rojos.
o Como objetivo de las pruebas cruzadas tenemos una transfusin ABO compatible y
detectar anticuerpos en el receptor.


3. Marco Terico

CONCEPTOS PREVIOS
Prueba mayor: se utilizan dos gotas de suero del receptor mas una gota de eritrocitos lavados del
donador.
Prueba menor: dos gotas del suero o plasma del donador mas una gota de eritrocitos del receptor.
Autotestigo: una gota de eritrocitos del receptor mas dos gotas de suero del receptor.

CONCEPTOS BSICOS
Intentan detectar reacciones Ag-Ac potenciales antes de que la sangre sea transfundida .Cada unidad
de sangre extrada debe ser examinada y clasificada de forma individual para descartar
incompatibilidades entre el donante y el receptor. Las pruebas de compatibilidad se realizan antes de
transfundir la sangre para asegurarse de que los hemates del donante son compatibles con el
paciente .Comprende las siguientes determinaciones:
Tipaje de grupo ABO y Rh del receptor.
Deteccin e identificacin de Acs en el suero del receptor.
Tipaje correcto de grupo ABO y Rh del donante.
Deteccin de Acs en el donante.
Pruebas cruzadas (compatibilidad pretransfusional).
Cada unidad de sangre extraida debe ser examinada y clasificada de forma individual para descartar
incompatibilidades entre el donante y el receptor, a fin de que la transfusin se realice con las
mximas garantas.
Las posibilidades de incompatibilidad se reducen mucho si el paciente y el donante, presentan
pruebas negativas de screening de Ac. La prueba cruzada debe ser lo ms completa posible, a fin de
proteger al paciente.
Las pruebas cruzadas se denominan: Mayor y menor.

FUNDAMENTO TERICO:
Prueba Cruzada Mayor

Consiste en enfrentar suero del receptor con hemates del donante. Los hemates y el suero han de
ser incubados el tiempo suficiente para que puedan reaccionar incluso los Ac muy poco potentes; por
lo que es necesario aadir suero antiglobulina para detectar los Ac que recubren a los hemates pero
que no llegan a aglutinarlos. Para preparar la suspensin de hemates del donante se utiliza la sangre
contenida en los segmentos de la bolsa.
Los hemates y el suero han de ser incubados el tiempo suficiente para que puedan reaccionar
incluso los Ac muy poco potentes; por lo que es necesario aadir suero antiglobulina despus de la

incubacin para detectar los Ac que recubren a los hemates pero que no llegan a aglutinarlos. La
prueba debe comprobarse mediante controles.
FASES DE LA PRUEBA CRUZADA MAYOR:
La prueba cruzada se realiza en tres fases:
a) FASE I. Se usa suero + eritrocitos, se centrifuga y se
lee inmediatamente.
b) FASE II. Se usa suero + eritrocitos y se agrega un
medio que acelere la reaccin (albmina bovina,
solucin salina de baja concentracin inica,
enzimas), se incuba a 37 grados centgrados por 15-
30 minutos, se centrifuga y se lee.
c) FASE III. Se usa suero + eritrocitos, se incuba a 37
grados durante 30 minutos y se agrega suero de
Coombs (prueba indirecta de antiglobulina
humana), se centrifuga y se lee.
La aglutinacin indica que algn anticuerpo del suero del
donador se uni con los glbulos rojos del receptor y se
considera, por lo tanto, incompatible.
La prueba es compatible cuando no se observa hemlisis o
aglutinacin en ninguna de las fases.
Debe realizarse siempre un autocontrol con suero del
receptor + eritrocitos del receptor, se procesa al mismo
tiempo que la prueba mayor y sirve para identificar
sensibilizacin in vivo de los eritrocitos, Rouleaux y otras
anormalidades.

Prueba de la antiglobulina
indirecta.
Para demostrar la presencia de
anticuerpos incompletos en el
suero del paciente y para
determinar grupos sanguneos,
en las pruebas cruzadas, en la
investigacin de anticuerpos
irregulares contra eritrocitos y
para detectar anticuerpos
maternos en embarazo
(isoinmunizacin materno-
fetal).
Prueba de la antiglobulina
directa.
Se usa para demostrar la
sensibilizacin in vivo de los
eritrocitos del paciente.
Positiva en anemia hemoltica
autoinmune idioptica,
inducida por frmacos,
enfermedad hemoltica del
recin nacido,
hipergammaglobulinemia y en
reacciones de incompatibilidad
transfusional.


1. Materiales
Muestra de sangre con anticoagulante (EDTA) del donador, o la bolsa extraida del mismo.
Suero del paciente a quien le van a donar la unidad.
Solucin fisiolgica
Albumina bovina
Antiglobulina humana
Pipetas
Centrifuga clnica
Bao Mara

2. Procedimiento
FASES:

FASE I
Preparar hematies lavarlos y suspenderlos 5%
Rotular tubo, agregar 2 gotas de suero
Agregar 1 gota suspencin de hematies 5%
Lectura: Centrifugar 15 a 3400 (1x1000RPM)

FASE II
Agregar 2 gt de Alb. Bov. mezclar e incubar 37C por15-30 min.
Lectura: Observar hemolisis y/o aglutinacin

FASE III
Lavar 4v con SSF, decantar cuidadosamente
Agregar 2 gotas de AGH, mezclar
Lectura: Observar aglutinacin
Si es negativa se agrega 1 gotas de CCC, debe haber aglutinacin.

A) Resultados

Hay presencia de aglutinacin cuando el donante y el paciente son incompatibles en
cualquiera de las fases mencionadas.
Si no hay la presencia de un aglutinado, en cualquiera de las fases, es que ambos son
compatibles.

B) Discusin
PRUEBA POSITIVA:
La aglutinacin indica incompatibilidad ya que significa que algn Ac del suero del receptor se ha
unido a los hemates del donante.
La valoracin se puede hacer con cruces, o bien se puede hacer una prueba cruzada titulada
empleando diluciones dobles progresivas.
Para diferenciar aloanticuerpos de los autoanticuerpos se debe disponer de un autocontrol, y cuando
ste es negativo se sospecha la existencia de aloanticuepos en una prueba cruzada incompatible.
Los Ac se deben identificar antes de que el paciente reciba la transfusin.
Si el autocontrol es positivo se sospecha la presencia de autoAc.

Los aloAc producen reacciones transfusionales ms graves que los autoAc.
PRUEBA NEGATIVA:
La prueba cruzada es compatible si no hay aglutinacin, ya que indica que no existen aloAc
eritrocitarios en el suero del receptor.
No obstante hay que tener en cuenta que todas las pruebas de la antiglobulina negativas deben ser
comprobadas para asegurar que la tcnica se ha realizado correctamente. Para ello, se aaden
hemates sensibilizados y lavados (GR control) a todos los tubos que contienen resultado negativo.
Si los resultados son correctos los hemates control deben ser aglutinados. En cambio si no se
observa aglutinacin, la prueba no es vlida y debe repetirse.

OTROS:
En circunstancias extremas (hemorragia masiva), el procedimiento de las pruebas cruzadas puede ser
alterado. Deber sopesarse el riesgo de transfundir sangre no cruzada, que puede ser incompatible,
contra el peligro de muerte del paciente.
Los Ac IgG no provocan aglutinacin visible, pero se hace aparente al ponerlos en contacto con
antiglobulina humana, que se une a la fraccin comn de la cadena gamma de la inmunoglobulina,
que sirve como puente para que los eritrocitos se aglutinen. Algunos anticuerpos IgG pueden fijar
complemento a los eritrocitos.Para demostrar la fijacin de anticuerpos incompletos (IgG) a la
membrana eritrocitaria.

C) Conclusin
La prueba de cruzada mayor sirve para confirmar si existe
compatibilidad ABO entre el receptor y el donador.
Detecta anticuerpos en el suero del paciente que no se hayan
demostrado en la prueba de tamizaje (porque el antgeno
correspondiente no estaba presente en las clulas detectoras o
eritrocitos de fenotipo conocido).

D) Bibliografa
AABB MANUAL TCNICO, 13 EDICION.
Pginas Web consultadas:

http://es.scribd.com/doc/109303558/Prueba-Cruzada-Mayor
http://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2005/ims051d.pdf

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