BQ-II Prctica No 4

PRODUCCIN E IDENTIFICACIN DE PIRUVATO Y ACETALDEHDO

DURANTE LA FERENTACIN DE LA !LUCO"A POR LEVADURA#
OB$ETIVO !ENERAL
Demostrar experimentalmente la produccin de piruvato y acetaldehdo por
fermentacin de la glucosa utilizando levadura.
OB$ETIVO" E"PECFICO"
1).- Comprobar la formacin de cido pir!vico durante la fermentacin de la
glucosa por levadura.
").- #dentificar la presencia del cido pir!vico a partir de glucosa utilizando la
prueba del nitroprusiato de sodio y "$ % - dinitrofenilhidracina.
&).- Demostrar la formacin de acetaldehdo a partir de glucosa e identificarlo
usando la prueba de la piperidina
FUNDAENTO%
'a gluclisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a (tanol y C)
"
$ y*
a cido lctico dependiendo del organismo +ue lo efect!e$ como siendo en el
primer caso las levaduras las responsables.
,mbas rutas de fermentacin son similares hasta la formacin de piruvato$
manteniendo id-nticas las etapas de conservacin de energa +ue conducen a
la formacin de ,./.
'a gluclisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa +ue
conduce a la produccin de ,cetil -Co, y a su oxidacin en el ciclo del cido
ctrico$ sino +ue tambi-n proporciona una va importante para metabolizar
fructosa y galactosa derivada de los alimentos.
'a caracterstica de la gluclisis de proporcionar ,./ en ausencia de oxgeno
es de significado crtico biom-dico$ por+ue permite al m!sculo es+uel-tico
hacer un traba0o sumamente eficiente a!n cuando la oxidacin aerbica se
vuelva insuficiente$ a la vez +ue los te0idos con capacidad glucoltica pueden
sobrevivir a episodios de anoxia. #nversamente el m!sculo cardaco$ +ue est
adaptado al traba0o aerbico$ tiene una capacidad glucoltica relativamente
deficiente y supervivencia escasa ba0o condiciones de is+uemia.
1ay un n!mero pe+ue2o de enfermedades en las +ue las enzimas del sistema
glucoltico como por e0emplo la piruvato cinasa muestran actividad deficiente3
estas anomalas se manifiestan principalmente como anemias hemolticas.
(n las c-lulas cancerosas +ue proliferan con rapidez$ la gluclisis procede a
una velocidad mucho mayor +ue la re+uerida por el ciclo del cido ctrico$ por
tanto$ se produce ms piruvato +ue el puede ser metabolizado.
(l resultado es una produccin excesiva del lactato$ +ue favorece un entorno
local relativamente cido en el tumor$ situacin +ue puede tener implicaciones
con ciertos tipos de terap-utica contra el cncer. .ambi-n se produce acidosis
lctica por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.
ATERIAL
14 tubos de ensaye de 1& x 144
1 gradilla para tubos de ensayo
% tubos de centrifuga
1tripie
1 mechero 5unsen
1 anillo metlico
1 tela de asbesto
& pipetas de 6 ml. graduadas.
" vasos de precipitados de "64 ml
1 vaso de precipitado de 744 ml
" pinzas para tubos de ensaye
1 propipeta
EQUIPO
1 centrfuga
1 5a2o de agua a &89 C o incubadora
1 :ortex
REACTIVO"
;osfato de sodio dibsico <=a
"
1/)
%
) 4.6 >
;osfato de potasio monobsico <?1
"
/)
%
) 4.6 >
@uspensin de levadura <144 g * l en =a
"
1/)
%
)
@uspensin de levadura <144 g* l en ?1
"
/)
%
)
@uspensin de levadura <144 g* l en agua
Alucosa <144 g* l)
=itroprusiato de sodio <64 g* l )B /C(/,C(@( ,=.(@ D( D@,C
1idrxido de amonio
@ulfato de amonio
=a)1 <144 g* l)
1idrocloruro de "$% E dinitrofenilhidracina <solucin saturada en 1Cl ">)
/iperidina <&4 g*l en solucin acuosa)
Fcido tricloroac-tico <144 g* l)
Nota% La &i'o()ci*+ &, (,-a&)ra ', .r,.arar ,( &/a &, (a .rctica
PROCEDIIENTO%
012- FORACIN DE PIRUVATO A PARTIR DE !LUCO"A
1.- (n dos tubos de ensayo pipetear 6 ml de solucin de glucosa 3t)4o' A 5 B)
".- (n el t)4o A agregue 6 ml de suspensin de levadura en solucin
ligeramente alcalina de =a
"
1/)
%
y al t)4o B agregue 6 ml de suspensin de
levadura en solucin ligeramente cida de ?1
"
/)
%
&.- Colo+ue los tubos , y 5 en un ba2o >ara a &89 C durante 1 hora
%.- ,2ada a cada tubo " ml de solucin de cido tricloroac-tico$ mezcle
vigorosamente y centrifugue durante 14 minutos a "644 r.p.m.
6.- @epare el sobrenadante y !selo para la determinacin de piruvato
612- IDENTIFICACIN DEL PIRUVATO
a1 R,acci*+ co+ +itro.r)'iato &, 'o&io
(n un tubo de ensaye agregue " ml del sobrenadante hervido previamente
a 1 gr de sulfato de amonio slido
,gregar dos gotas del reactivo nitroprusiato de sodio <reci-n preparado) y
mezclar vigorosamente
De0ar deslizar por las paredes del tubo unas gotas de hidrxido de amonio
concentrado$ hasta la formacin de dos capas. @i hay piruvato se forma un
anillo verde o azul en la interfase de los dos l+uidos.
'a formacin de un anillo rosado transitorio en la interfase indica la
presencia de grupos tioles y con frecuencia se observa antes de la
coloracin azul o verdosa$ caracterstica de la reaccin con piruvato.
41 D,t,r7i+aci*+ &, .ir)-ato co+ 684-&i+itro9,+i(:i&raci+a
,gregue 1 ml de solucin saturada de "$%-dinitrofenilhidracina a " ml de
sobrenadante
>ezcle fuertemente y colo+ue " o & gotas de la mezcla en un tubo de
ensayo
,gregue 1 ml de solucin de =a)1 <144 g*l) y diluya con agua hasta 6 ml.
'a aparicin de un color ro0o indica la presencia de piruvato
Cepetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series

;12- FORACIN DE ACETALDEHDO A PARTIR DE !LUCO"A

(n dos tubos de ensayo marcados como C 5 D pipetear 6 ml de solucin
de glucosa$ agregue a cada uno de ellos 6 ml de suspensin de levadura
en agua. ,l tubo D a2ada 4.6 g de sulfito de sodio.
>ezcle vigorosamente e incube los dos tubos a &89 C durante 1 hora.
Centrifugue$ separe el sobrenadante$ mezcle " ml del sobrenadante
con 4.6 ml de solucin fresca de nitroprusiato de sodio y " ml de
piperidina acuosa$ y agite.
@i hay acetaldehdo presente se observar una coloracin azul
OB"ERVACIONE"BGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
RE"ULTADO"BGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
COENTARIO" Y CONCLU"IONE" GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG
CUE"TIONARIO
1. HIu- finalidad tiene adicionar a la suspensin de levadura =a
"
1/)
%
y
?1
"
/)
%
J
". H/or+u- deben estar los tubos en ba2o mara a &8KC por &4 minutos.
&. H/or+u- se adiciona .C, <Fcido .ricloro ,c-tico) al 14LJ
%. (scriba la reaccin para la segunda reaccin. #ndicando la funcin del
=a)1.
6. H(xpli+ue y es+uematice las reacciones +ue intervienen en la gluclisis
anaerobiaJ
7. (s+uematice la mol-cula de cido pir!vico.
8. HCuntos enlaces fosfato de alta energa surgen en el catabolismo de la
glucosa tanto aerbica como anaerobiaJ
M. HIue es metabolismo$ catabolismo y anabolismoJ
N. (s+uematice y expli+ue el ciclo de Cori.
14. HIu- importancia tiene la glucosa en el traba0o muscularJ
BIBLIO!RAFA
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