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C A P I T U L O 5
Respiracin aerobia
y mitocondrias
5-1 Estructura y funcin de las mitocondrias
5-2 Metabolismo oxidativo en el citoplasma y las
mitocondrias
5-3 Papel de las mitocondrias en la formacin de ATP
La perspectiva humana: Papel del metabolismo anaero-
bio y aerobio en el ejercicio
5-4 Translocacin de protones y establecimiento de
una fuerza motriz de protones
5-5 Mecanismo para la formacin de ATP
5-6 Importacin de las protenas rnitocondriales
5-7 Peroxisomas
La va experimental: Acoplamiento de oxidacin a
fosforilacin
FIGURA 5-A. Gammagrama seudocoloreao de un hepatocito fracturado
que muestra las formas y la estructura interna de las mitocondrias. (Cortesa
de Lennart Nsson.)
E
n los primeros 2 000 millones de aos de vida en el
planeta, la atmsfera consisti principalmente en mol-
culas reducidas, como hidrgeno molecular (H^), amoniaco
(NHs) y HÔ. En ese periodo la Tierra estuvo poblada por
anaerobios, microorganismos que captan y utilizan la ener-
ga por medio de un metabolismo independiente de oxge-
no (anaerobio), como la gluclsis y a fermentacin. Luego
aparecieron las cianobacterias, un nuevo tipo de microor-
ganismos que efectan una forma diferente de proceso fo-
tosinttico en el cual se separan molculas de agua y se
libera oxgeno molecular (02). Las cianobacterias tuvieron
gran xito, y los ocanos, los lagos y la atmsfera rpida-
mente se llenaron del nuevo gas.
Segn se analiza en la pgina 34, el oxgeno puede ser
una sustancia muy txica que capta electrones extra y reac-
ciona con gran variedad de molculas biolgicas. La prime-
ra vez que apareci el oxgeno debi haber provocado la
muerte por oxidacin a todos los microorganismos, menos
a unos cuantos tipos. Sin embargo, con el tiempo evolucio-
naron especies que no slo estaban protegidas de los efectos
dainos del oxgeno molecular, sino que posean vas me-
tablcas que utilizan esas molculas con gran provecho. En
ausencia de oxgeno, los microorganismos slo pueden ex-
traer una limitada cantidad de energa de sus nutrientes,
excretando productos como cido lctico y etanol, incapa-
ces de metabolismo adicional. Por lo contrario, los microor-
ganismos que incorporan 2 en su estrategia metablica
pueden oxidar por completo compuestos como C2 y HÔ,
y en el proceso extraer un porcentaje mucho mayor del
171
172 CAPITULO 5 Respiracin aerobia y mitocondrias
contenido energtico de dichos compuestos. Esos microor-
ganismos que se convirtieron en dependientes de oxgeno
fueron los primeros aerobios sobre la tierra y finalmente
dieron lugar a todos los procariotes y eucariotes dependien-
tes de oxgeno que viven en la actualidad. En los eucariotes,
el aprovechamiento de oxgeno para extraer energa tiene
lugar en organelos especializados, las mitocondrias.
Estructura y funcin
de las mitocondrias
A diferencia de la mayor parte de los organelos citoplsmi-
cos, las mitocondrias son lo bastante grandes para observar-
se con el microscopio de luz (fig. 5-1, a) y su presencia den-
tro de la clula se conoce desde hace algunos cientos de
aos. Aun antes de que empezara este siglq ya se haban
aislado mitocondrias de tejidos disecando las clulas con
una aguja fina, y se describieron algunas de las propiedades
de estos organelos. Por ejemplo, se demostr que las mito-
condrias eran osmticamente activas; o sea, que se hinchan
en un medio hipotnico y se encogen en un medio hipert-
nico. Esta propiedad sugiere que las mitocondrias estn ro-
deadas por una membrana semipermeable parecida a la que
rodea a la propia clula.
Igual que muchos otros organelos, la mitocondria po-
see caractersticas morfolgicas reconocibles, pero muestra
gran variabilidad en su apariencia. Las mitocondrias tpicas
tienen forma de salchicha (fig. 5-1, b), aproximadamente 0..2
^ ajLO_ iw m_ de_ di.m_ etro_ . en corte transversal y 1 -a 4 m de
longitud. El hecho de que las mitocondrias tengan un tama-
o similar al de las bacterias es algo ms que una simple
coincidencia, puesto que numerosas pruebas sugieren_ que
estos organelos evolucionaron a partir de bacterias que vi-
van en simbiosis-dentro de otras clulas. En algunas clu-
las", como las del embrin inicial, las mitocondrias tienen
forma casi esfrica, en tanto que en otros, como los fibro-
blastos, son estructuras alargadas fibrinosas (fig. 5-1, a).
En concordancia con su funcin principal de.poner_la
''Ienerga a disponibilidad de la clulafel tamao y nmero
de las mitocondrias y_su localizacin dentro de la clula
" varan efe un tipo de clula a otro. Un hepatocito promedio
de mamfero contiene casi 1 500 mitocondrias, que corres-
ponde o 15 o 20% del volumen celular. Las mitocondrias
sgn_io_ddvajns.abundantes en las-clulas musculares^que
requieren gran_ cantidad de_ATPj:omo combustible para la
contraccin. Las mitocondrias a menudo se relacionan con
gotas oleosas que contienen cidos grasos y de las cuales
obtienen !a materia prima que deben oxidar. En las clulas
del espermatozoide se observa una disposicin particular-
mente notable de las mitocondrias, donde se localizan en la
"porcin meda" de la clula, justo por detrs del ncleo
(fig. 5-1, c). Los movimientos del espermatozoide pueden
efectuarse gracias a la energa suministrada por el ATP de
estas mitocondrias. Las mitocondrias tambin son promi-
nentes en muchas clulas vegetales, donde proporcionan el
suministro primario de ATP a tejidos que no efectan foto-
sntesis, y tambin son fuente de ATP para las clulas de
hojas fotosintticas durante periodos de oscuridad.
En la micrografa de la figura 5-2, a, se muestra la es-
tructura interna de una mitocondria, y en la figura 5-2, b, se
presenta esquemticamente. El papel de la mitocondria
cqmp_ tramdjicJOT cle^ a las
membranas.tan prominentes de las micrografas electrni-
cas de estos organelos. Cada mitocondriajzontiene una_
jnembrana exterrj^L.unxoBiple|o-sis.tema de membranas
_intemas;JLa. membrana externa envuelve gpr~ccjmpteto._a
la mitocondria y sirve como frontera exterior. Una parte de
Mitocondria
( b) (c)
I ' ' ; ri A . " > - Mitocondria. a) Fibroblasto viviente observado con microscopio de contraste de fases. Las mitocondrias se ven como corps-
culos oscuros alargados, b) Micrografa electrnica de transmisin de una delgada seccin a travs de una mitocondria que revela la estructura
interna del organelo, particularmente los pliegues membranosos (crestas) de la membrana interna, c) Localizacin de las mitocondrias en la pieza
media del espermatozoide que rodea la porcin proximal del flagelo, ( a: Cortesa de Norman K. Wcssels; b: K.R. Portcr/Photo Researchers; c: cortesa
de Don W. Fawcett.)
CAPITULO 5 Respiracin aerobia y mitocondrias 173
la membrana interna _ s e_ s it a_ j u s _ to poj^dentro_de_la menv
brana externa, pero gran parte de ella fo rma_ pliegu es ^ro -
fu ndqs ojnyagnaciones llamadas crggtas (figs . 5-1, b, y 5-2).
En algu nas clu las, como el hepato cito de mamfero , las
cres tas s o n ho j as anchas qu e o cu pan to do el dimetro trans -
vers al de la mito co ndria. En la mayo r parte de las clu las
vegetales , las cres tas tienen fo rma ms tu bu lar. En lo s plie-
gu es de la membrana interna au menta mu cho la s u perficie
dis po nible para alo j ar el mecanis mo neces ario para la respi-
racin aero bia.
Las membranas de la mito co ndria dividen_el. o rganelo
en dos co mpartimiento s acu o s o s , u no _ entre e\o de la
mito co ndria Deno minado matriz y o tro co mpartimiento
entre las membraêxtern ejnterna, dgngminado_espa-
cînter_ membrana^La matriz tiene consistencia parecida a
u n gel po r la pres encia de u na elevada co ncentracin de
pro tenas hidro s o lu bles (has ta 500 mg/ml). En las micro gra-
fas y diagramas de las figu ras 5-1 y 5-2 el espacio intermem-
brana aparece ms bien limitado , pero du rante la res pira-
cin activa este co mpartimiento pu ede s er mu y extens o .
Membranas mitocondriales
Las membranas externa e interna tienen pro piedades mu y
diferentes . La membrana externa co ntiene casi 50% de lpi-
. do s en pes o yima cu rio sa mezda de enzimas quejparticipan
en actividades tan diversas co mo oxidacin de adrenalina,
des co rnp^s j an^detriptfô _ yj alargamiento dejcidos gra^
.ggsjrlo co ntrario , T_ membrana interna tiene u na re-
lacin
q.ue co rres po nde _a .una-m&lcula-.de_prptena gor cada 15
fps fo lgj do s , apro ximadamente). Dentro de la compleja es-
tru ctu ra de es ta membrana se encu entran cu ando menos .6.0. -
po iippdo s diferentes . La membrana interna cas iês t des-
pro vis ta dej ro les tero l y es rica en UTI fo s fo lpjdp_ .p_ gcqâ:
jnjn^la cardio Ugiria (difo s fatidilglicero l, cu ya es tru ctu ra s e
mu es tra en la figu ra 4-6); ambas caracters ticas co rres po n-
den a la membrana plas mtica de las bacterias , de la cu al s e
pres u me qu e du rante la evo lu cin s e deriv la membrana
mito co ndrial interna. Se cree qu e la membrana mito co ndrial
externa pro viene de u na membrana externa o bs ervada co mo
parte de la pared celu lar de ciertas clu las bacterianas (fig.
5-3); ambas co ntienen po rinas , pro tenas integrales qu efo r.-^
man grandes gnales ncTselctivos en la membrana. Gracias
a las _ po rnas ,_ la^ membrana externa es es pecialmente per-
meabj eyp^rmiieq lo lcu las ma^^g^g'e I f J Q Q f J dalto ns
pas en libremente hacia el_espacio intermembrana.. Por lo
tanto , para la mayo r parte de lo s s o lu to s el es pacio inter-
membrana s e co ntin a co n el cito plas ma. Fo rj o co ntrario ,
la membrana interna es bas tante impermeable; cas i to das
las mol^Ta^yTDTies^reqeren trans po rtado res es pciales -
s itu ado s _ en_ dicha membrana- interna para tener acceso a la
matriz._ _ _
Co mo analizaremo s en la s igu ientes secciones, la co m-
po s icin y la o rganizacin de la membrana interna s o n la
clave de las actividades bio energticas del o rganelo . Ade-
ms, por contener una gran variedad de sistemas de trans-
po rte, en la membrana mito co ndrial interna res ide la ma-
yo r parte del mecanis mo neces ario para la sntesis de ATP.
C r e s t a s Membrana interna Partculas de ATP- si nt asa
F I G L ' K A 5-2. Estructura de una mitocondria. a) Gammagrama de
u na mito co ndria co ngelada, fractu rada y tratada al "agu afu erte" para
res altar lo s relieves qu e mu es tran la matriz interna encerrada po r lo s
pliegu es de la membrana interna, b) Es qu ema qu e mu es tra la es tru c-
tura interna de una mitocondria. (a: Segn K. Tanaka, Int. Rev. Cytol.
68:111, 1980.)
La arqu itectu ra de la membrana interna y la aparente flu i-
dez de su bicapa facilitan la interaccin de los componentes
requ erido s para la fo rmacin de ATP.
La matriz mitocondrial
Adems de las diferentes enzimas, la matriz miteco ndriaL
tambin co ntiene.ribo s o mas (de tamao mu cho menor qu e
174 CAPITULO 5 " Respiracin aerobia y mitocondrias
Membrana
externa
Pepidoglicano
Membrana
plasmtica
Protena de transporte
FIGURA 5-3. Porinas. Las bacterias gramnegativas poseen una
membrana externa que contiene lpidos por fuera de la membrana
plasmtica como parte de su pared celular. Esta membrana externa
contiene protenas, denominadas porinas, que constan de una hoja fi
como barril y forman una abertura a travs de la cual puedan penetrar
molculas de tamao moderado. Las porinas tambin se observan en
la membrana mitocondrial externa de clulas eucariotas.
0.4 /m
FIGURA 5-4. Fisin mitocondrial. Micrografa electrnica de las
mitocondrias de las clulas de un insecto fijadas durante el proceso de
desdoblamiento. (Segn W.. Larsen, J. Cell Biol. 47:379, 1970, con per-
misa de RockefeUer University Press.)
citoplsmica de este importante ion an est sujeta a con-
troversia.
En breve retornaremos el anlisis de la estructura y fun-
cin de las mitocondrias, pero primero es til considerar el
papel de estos organelos en las vas oxidativas bsicas de las
clulas eucariotas (resumido en la figura 5-5).
!os encontrados en el citoplasma) y_mo_lculas de DNA cir-
cular ; de doble cadena (fig-. 5-2, b). Por lo tanto, la mitoco"
^ _ _ .
el mecanismo para elaborar RA y protenas propias. Este
DNA no cromosmico~es~rnporTante porque" codifica un
pequeo nmero de polipptidos mitocondriales (13 en el
hombre) integrados a la membrana mitocondrial interna
junto con polipptidos codificados por genes residentes en
el ncleo e importados desde el sitio donde se sintetizan
en el citoplasma (vase seccin 5-7).
La observacin de clulas vivientes desarrolladas en
cultivo ha demostrado que las mitocondrias son organelos
dinmicos que cambian su forma, se desplazan de un sitio
a otro dentro del citoplasma y sufren ramificaciones. Ade-
ms, se puede observar que las mitocondrias se fusionan
entre s y tambin pueden sufrir fisin. Igual que las membra-
nas se originan de membranas previas y las clulas de clu-
las anteriores, las mitocondrias se originan por fisin de
mitocondrias ya existentes (fig. 5-4). Adems de un sistema
gentico, la matriz mitocondrial con frecuencia contiene fi-
lamentos y granulos densos. Un tipo de granulos contiene
una reserva de iones calcio en forma de fosfato de calcio
precipitado. Las mitocondrias son acumuladores activos de
ion calcio, aunque su papel para regular la concentracin
5-2 Metabolismo oxidativo
en el citoplasma y las mitocondrias
En el captulo 3 se describieron las etapas iniciales de la
oxidacin de carbohidratos. Las enzimas de la gluclisis
efectan los primeros pasos del proceso de oxidacin de la
glucosa; estas enzimas se localizan en el citoplasma (fig.
5-5). En la figura 3-23 se ilustraron las 10 reacciones que
componen la va glucoltica, y en la figura 5-6 se resumen
los principales pasos de la va. La gluclisis se inicia con la
activacin de una molcula de glucosa por fosforilacin de
dos tomos de carbono dei azcar a expensas de dos mol-
culas de ATP. El producto, fructosa 1,6-difosfato, es un di-
fosfato de seis carbonos, que a continuacin se desdobla en
dos monofosfatos de tres carbonos. En reacciones subse-
cuentes, el aldehido de tres carbonos se oxida a un cido de
tres carbonos y genera una molcula de NADH, y los dos
grupos fosfato se transfieren sucesivamente al ADP, gene-
rando dos molculas de ATP por fosforilacin a nivel sus-
trato. La eliminacin del segundo fosfato genera piruvato,
uno de los productos de la gluclisis.
Durante la gluclisis, la clula slo puede aprovechar
una pequea fraccin de la energa libre disponible en la
glucosa, suficiente para sintetizar dos molculas de ATP
por cada molcula oxidada de glucosa (fig. 5-6). La mayor
Glucosa
Membrana
plasmtica
Oxigeno ausente
C
NAO4
AT P
. ^Cadena
Dixido de transporte
carbono y agua
Lactato
FI GURA ; > - ; > . Diagrama del metabolismo de carbohidratos en clulas eucariotas. Las reacciones de gluclisis generan piruvato y NADH
en el citoplasma. En ausencia de C>2, el piruvato se reduce a lactato (u otro producto de fermentacin, como etanol en las levaduras), que se
excreta, en tanto que el NAD+ se vuelve a utilizar para continuar la gluclisis. En presencia de O^ el piruvato se desplaza al interior de la matriz
(facilitado por un transportador de membrana), en donde se descarboxila y se une a la coenzirna A (CoA), una reaccin que genera NADH. El
NADH producido durante la gluclisis dona sus electrones de alta energa a un compuesto que atraviesa la membrana mitocondrial interna,
llevando los electrones a FAD (o NAD+) para formar FADH2 (o NADH). La acetil-CoA ingresa al ciclo del cido tricarboxlico (como se muestra
en la figura 5-8), que genera GTP, NADH y FADH2 . Los electrones de estas molculas de NADH y FADH2 viajan a lo largo de la cadena
transportadora de electrones, constituida por portadores integrados en la membrana mitocondrial interna, hasta el O2 molecular. La energa
liberada durante el transporte de electrones se emplea para la sntesis de ATP mediante un proceso analizado en detalle posteriormente en este
captulo. Si toda la energa del transporte de electrones fuera utilizada para la sntesis de ATP se podran generar aproximadamente 36 ATP
(incluyendo GTP) a partir de una sola molcula de glucosa.
parte de la energa permanece almacenada en el piruvato.
Cada molcula de NADH sintetizada durante la oxidacin
de gliceraldehido 3-fosfato tambin transporta un par de
"electrones de alta energa". Los dos productos de la gluc-
lisis, piruvato y NADH, se pueden metabolizar siguiendo
dos vas muy diferentes, segn el tipo de clula en la cual se
generan y la presencia o ausencia de oxgeno. Aunque el
tema principal de este captulo es la respiracin aerobia (o
sea, dependiente de oxgeno) y el papel de la mitocondria,
es importante considerar de manera breve una va alterna
mediante la cual las clulas pueden continuar produciendo
ATP en ausencia de oxgeno.
Oxidacin anaerobia del piruvato:
proceso de fermentacin
Es evidente que la gluclisis puede suministrar a la clula
una pequea cantidad neta de ATP por cada molcula de
glucosa oxidada. Sin embargo, como se analiza en La pers-
pectiva humana, en la pgina 182, as reacciones glucolticas
ocurren a gran velocidad, de modo que por esta va una
clula puede producir una cantidad significativa de ATP.
En realidad, algunas clulas, incluyendo clulas de levadu-
ra, clulas tumorales y clulas musculares, dependen mu-
cho de la gluclisis para la sntesis de ATP. Sin embargo,
estas clulas deben confrontar un problema. Uno de los
productos de la oxidacin del gliceraldehido 3-fosfato es
NADH. La formacin de NADH ocurre a expensas de uno
de los reactantes, NAD+, cuyo suministro es escaso para la
clula. Puesto que en este importante paso de la gluclisis
se requiere NAD+ como reactante, ste debe regenerarse a
partir de NADH. Cuando esto no ocurre, la reaccin no
tiene lugar ni pueden proseguir las reacciones de la gluc-
lisis que dependen de ese producto. Sin embargo, en ausen-
cia de oxgeno no puede oxidarse NADH a NAD+ por medio
de la cadena transportadora de electrones, puesto que el
oxgeno es el aceptor final de electrones en la cadena. Las
clulas tambin pueden regenerar NAD+ por fermentacin
transfiriendo electrones del NADH al piruvato, producto
final de la gluclisis, o a un compuesto derivado de piru-
vato (fig. 5-7). Igual que la gluclisis, la fermentacin tiene
lugar en el citoplasma de la clula eucariota (fig. 5-5). En la
mayor parte de los microorganismos que dependen de O^
CH2OH
Glucosa
OH
O
0
c
Fructosa |
1,6-difosfato f
o
0
2
Gliceraldehido
3-fosfat o
0
2
1 ,3-difosfo-
glicerato
2
3-fosfogli-
cerato
0
0
2
Fosfoen ol-
piruvato
2
Piruvato
N OH
H OH
K 1A T P
^1 A DP
K
1A T P
1 A DP
2 3 o
PLJ opo
x0\2 3
\
i n
OH H
T
t
H
oo
1
HCOH
i
CH2OPOf
2 P ; s 2 NA D+
1 ^. /
." ^2 NA DH + 2 H
0
C-OP023
1
HCOH
i
CH2OPOf
s 2 A DP
(
0 V2A T P
II
c-o-
HCOH
i
CH2OPOf
t
0 *
II
c-o-
C-O-PC^
II
H
CH2
/2 A DP
f
0 ^2 A T P
lo-
c=o
1
CH,
La glucosa es fosforilada a expen sas de un A T P, sufre redistribucin
estructural para formar f osf at o de fructosa, y luego es fosforilada una vez
ms a expensas de un segundo A T P. Los dos grupos fosfat o se sitan en los
dos extremos (C1, C6) de la cadena de fructosa.
E l di fosfat o de seis car bon os se desdobla en dos monofosfatos de t res
carbonos.
E l aldehido de tres carbonos se oxida para for mar un ci do conforme se
emplean los electrones eliminados del sustrato para reducir la coenzima
NA D+ a NA DH. A dems, el cido C1 se fosforila para formar un acilfosfat o, el
cual posee un pot en ci al elevado para transferir grupos fosfat o (denotado por
el sombreado amarillo).
E l grupo fosfat o de C1 se transfiere a A DP para formar A T P por fosforilacin a
nivel de sustrato. Por cada glucosa oxidada se forman dos A T P.
E stas reacciones dan como resultado la redist ribucin y deshidrat acin del
sustrato para f or mar un enolfosfat o en la posicin C2, que tiene un elevado
notencial de t r an sfer en ci a.de grupos fosfato.
E l grupo f osf at o se transfiere al A DP formando A T P por fosforilacin a nivel
de sustrato, generando una cetona en la posicin C2. Por cada glucosa
oxidada se f or man dos A T P.
RE A CCI N NE T A :
Glucosa + 2 NA D+ + 2 A DP + 2 P; 2 piruvato + 2 A T P + 2 NA DH + 2 H+ + 2 H20
CAPITULO 5 177
F I GURA 5-6. Esquema de la gluclisis que muestra alguno de tos
pasos clave. Incluye las dos reacciones de transferencia de grupos
fosfato del ATP al azcar de seis carbonos para formar fructosa 1,6-
difosfato (pasos 1 y 3); la oxidacin y la fosforilacin de glceraldehido
3-fosfato para formar 1,3-difofosglicerato y NADH (paso 6), y la trans-
ferencia de grupos fosfato desde los sustratos fosforilados de tres
carbonos al ADP para formar ATP por fosforilacin de sustratos (pa-
sos 7 y 10).
la fermentacin es un subterfugio para regenerar NAD+
cuando la concentracin de C> 2 es baja, de modo que la glu-
clisis pueda continuar y mantener la produccin de ATP.
El producto de la fermentacin vara de un tipo de clu-
la o microorganismo a otro. Cuando se requiere contraccin
repetida de las clulas musculares, el suministro de oxgeno
no tiene capacidad para mantener el paso con las demandas
metablicas de la clula. En esas condiciones, ciertos tipos
de clulas musculares esquelticas regeneran NAD+ convir-
tiendo piruvato a lactato (vase La perspectiva humana en
este captulo). Al disponer otra vez de oxgeno en cantidad
suficiente, el lactato puede convertirse de nuevo a piruvato
para continuar la oxidacin. Las clulas de las levaduras
han enfrentado el desafo de la vida anaerobia con una solu-
cin metablica diferente: convierten el piruvato a etanol,
segn se ilustra en la figura 5-7.
En muchos microorganismos la fermentacin es un pro-
ceso coadyuvante necesario para el metabolismo, y en algu-
nos anaerobios es la nica fuente de energa metablica,
aunque la energa obtenida slo por gluclisis es escasa en
comparacin con la oxidacin completa de la glucosa hasta
dixido de carbono y agua. De las 686 kilocaloras que pue-
den liberarse en la oxidacin completa de 1 mol de glucosa,
slo se liberan 57 cuando se convierte a etanol y nada ms 47
cuando se convierte a lactato en condiciones estndar. En
cualquier caso slo se sintetizan dos molculas de ATP por
molcula de glucosa oxidada mediante gluclisis o fermen-
tacin; ms de 90% de la energa simplemente se descarta en
el producto de fermentacin (segn lo demuestra la infla-
mabilidad del alcohol etlico).
En las primeras etapas de la vida sobre la Tierra, cuan-
do todava no apareca el oxgeno, la gluclisis y la fermen-
tacin tal vez fueron las vas metablicas primaras de las
clulas procariotas primitivas para extraer azcares. Con la
evolucin de las cianobacterias, la atmsfera se llen de ox-
geno molecular permitiendo la evolucin de una nueva es-
trategia metablica, en la cual los productos de la gluclisis
podan oxidarse por completo y producir mucho ms ATP.
La va aerobia para la oxidacin de piruvato
Los aerobios emplean oxgeno molecular para extraer gran
cantidad de energa a partir de los dos productos de la glu-
clisis, piruvato y NADH, suficiente para sintetizar ms de
30 molculas adicionales de ATP. Este proceso tiene lugar
en las mitocondrias (fig. 5-5). Iniciaremos con el piruvato y
ms tarde volveremos a considerar el destino del NADH.
Cada molcula de piruvato producida por gluclisis se trans-
porta a travs de la membrana mitocondrial interna hacia el
interior de la matriz, donde es descarboxilada para formar
O
U
-0
CH3
Piruvato
Piruvato
d es ca rb ox i Ias a ,;-7 d esh id rog en a s a
NADH
Lclalo
NAO'
HS-CoA
desh idrog en asa
NADH-<-H
NADH
, , ,
Acetaldeh ido
Alc oh ol
O
f-o-
HCOH
f
CH3
Lac tato
S-CoA
CH3
Ac e til CoA
N
d e s h d rog e n as a
CH2OH
CH3
Alc oh ol etlico
Ox idac in ae robia
va c ic lo de l c ido
tric arboxlic o
Ox id ac in an aerobia de l NADH
F I G l' R A 5-7. Fermentacin. La mayor parte de las clulas efec-
tan respiracin aerobia dependiente de oxgeno. Si el suministro de
oxgeno disminuye, como ocurre en las clulas del msculo esquel-
tico sometido a contraccin extrema o en las clulas de las levaduras
vivientes en condiciones anaerobias, estas clulas pueden regenerar
NAD+ por fermentacin. Las clulas musculares efectan la fermen-
tacin formando lactato, en tanto que ias clulas de las levaduras lo
hacen mediante la formacin de etanol.
un grupo acetilo de dos carbonos (CHsCOO"). A conti-
nuacin, el grupo acetilo forma un complejo con la coenzima
A (un compuesto orgnico complejo derivado de la vitami-
na cido pantotnico) para formar acetil-CoA.
Piruvato + HSCoA + NAD+ ->
Acetil CoA + CO2 + NADH + H+
La descarboxilacin de piruvato y la transferencia del grupo
acetilo a la CoA (figs. 5-5 y 5-8) es catalizada por el complejo
multienzimtico gigante piruvato deshidrogenasa, cuya es-
tructura se mostr en la figura 2 -41. El descubrimiento de la
acetil-CoA por Fritz Lipmann, en 1961, fue la ltima pieza
en el enigma de la oxidacin de la glucosa.
Ciclo del cido tricarboxlico (ATC)
Una vez formada, la acetil-CoA se introduce a la va cclica
denominada ciclo del cido tricarboxlico (ATC), donde
oxida al sustrato y conserva su energa. Con excepcin de la
succinato deshidrogenasa, enlazada a la membrana interna,
todas las enzimas del ciclo del cido tricarboxlico residen
en la fase soluble de la matriz (fig. 5-15). El ciclo del cido
o
l "
!c-o-
2c=o
3CH3
Piruvato
HS-CoA
NAO'
Acetil -Co A
co o -
(
HOl
(
(
Ma
i
Fumarasa
AG" = -0.9
Malato
;00~ deshidro genasa
=H A^?-' ,
i\\2
;oo-
ato '- ' ^" '
^H20
\co o -
xc=o
1
^
co o -
Oxal acetato
^^ ^
H20\A
r^^-^^
C trato
sintasa
AG" = -7.5
3I
HOC-COO-
yCH2
zco o -
Citrato
f
Ac o nitasa
2co o -
coo-
I
CH
II
HC
I
co o -
Fumarato
Ci n co pares
de el ectro nes
( pro cedentes de
to mo s de hidro geno
del sustrato ) para
emplear en la
pro duccin
de ATP
HC-WCOO-
y l
HOCH
'coo-
Iso citrato
NAO'
Succ nato
deshidro genasa
..;FAD H?_ ;
FAD
Ispcitrato
deshidro genasa
G-1 = -2.0
HS-Co A
Succinato
Succinil -Co A
sintetasa
AG" = -0.8
co o -
3CH2
x l
CH^
Yf
Succinil -Co A
co o -
NAD ' HS-Co A3CH2
X
CH,
C1
~~
c t-c e to g li
d esh i d ro g en asa
a-cetoglutarato
FIGURA 5-8. Ci cl o del ci do tri carboxl i co, tambi n l l amado ci cl o de Krebs, n ombre del i n ves ti gador que l o for mul , o ci cl o del ci do ctri co
por el pri mer compuesto que se for ma en el ci cl o. El ci cl o se i n i ci a con l a con den saci n de oxa l a ce ta to (OAA) y aceti l -CoA (reacci n 12). Los
carbon os de estos compuestos estn marcados con n meros o l etras. Los dos carbon es que se pi erden dur a n te el paso por el ci cl o se der i van
del oxal acetato. Tambi n se n di ca l a en erga l i bre estn dar y el n ombr e de l as en zi mas. Los ci n co pares de el ectron es e l i mi n a dos de l as mol cu-
l as del sustrato por l a pi r uvato deshi drogen asa y l as en zi mas del ci cl o del ci do tri carboxl i co y tran si eri das a NAD+ o FAD pasan a l o l argo
de l a caden a tran sportadora de el ectron es y se empl ean para pr oduci r ATP. Las reacci on es a qu mostradas empi ezan en el n me r o 11 debi do
a que l a va con ti n a don de se separa de l a reacci n de gl ucl i si s (10 de l a fi gura 3-23).
tricarboxlico tambin se refiere como ciclo de Krebs, por el
bioqumico ingls Hans Krebs, quien trabaj en esta va en
los aos de 1930. Irnicamente, cuando Krebs obtuvo por
primera vez datos suficientes para apoyar la idea de un ciclo
metabHco, escribi un artculo acerca de su investigacin y
lo envi a la revista britnica Nature. Varios das despus le
regresaron el manuscrito acompaado de una carta de re-
chazo. El editor concluy que careca de la suficiente impor-
tancia para publicarse en esa revista.
El primer paso del ciclo del cido tricarboxlico es la
condensacin del grupo acetilo de dos carbonos con un
oxalacetato de cuatro carbonos para formar una molcula
de citrato de seis carbonos (fig. 5-8). Durante el ciclo, la
molcula de citrato disminuye la longitud de su cadena, un
tomo de carbono cada vez, y regenera la molcula de
oxalacetato de cuatro carbonos, la cual se condensa con otra
acetil-CoA. Estos dos carbonos eliminados durante el ciclo
del cido tricarboxlico (que no son los mismos unidos al
grupo acetilo) se oxidan por completo hasta dixido de car-
bono. Durante el ciclo del cido tricarboxlico pueden ocu-
rrir cuatro reacciones, en las cuales se transfiere un par de
electrones de un sustrato a una coenzima aceptora de elec-
trones. Tres de las reacciones utilizan NAD+ para formar
NADH, una reaccin emplea FAD (derivada de la vitamina
riboflavina) para formar FADH2- La ecuacin neta para la
reaccin del ciclo del cido tricarboxlico se puede escribir:
Acctil-CoA + 2H2O + FAD + 3NAD+ + GDP + P ->
2CO2 + FADH2 + 3NADH + 3H+ + GTP + HSCoA
El ciclo del cido tricarboxlico es la va central de las
clulas. Si consideramos la posicin de dicho ciclo en el
metabolismo total de la clula (figs. 5-9 y 3-20), se observa
que los metabolitos de este ciclo son los mismos compues-
tos generados por la mayor parte de las vas catablicas de
la clula. Por ejemplo, acetil-CoA es un producto final im-
portante de un gran nmero de vas catablicas, incluyen-
do la descomposicin de cidos grasos, desdoblados cada
vez a unidades de dos carbonos (fig. 5-9, a). Estos compues-
tos de dos carbonos entran al ciclo del cido tricarboxlico
como acetil-CoA. Hasta ahora se conoce el papel de las mi-
tocondrias en la descomposicin de polsacridos y grasas;
pero estos organelos tambin son importantes en el desdo-
blamiento de protenas. Aunque los aminocidos que cons-
tituyen las protenas forman un conjunto heterogneo de
molculas, su descomposicin tambin genera metabolitos
del ciclo del cido tricarboxlico (fig. 5-9, b) que llegan a la
matriz por medio de sistemas especiales de transporte. Es
evidente que todas las macromolculas que suministran
energa a la clula (polisacridos, grasas y protenas) se des-
componen en metabolitos del ciclo del cido tricarboxlico.
Por lo tanto, las mitocondrias se convierten en el centro
donde ocurren los procesos que conservan la energa final
del metabolismo, cualquiera que sea la naturaleza del ma-
terial con el cual se inicia.
Importancia de las coensimas
reducidas en la formacin de ATP
A partir de la ecuacin neta del ciclo del cido tricarboxlico
es evidente que los productos primarios de las reacciones
del cido tricarboxlico son las coenzimas reducidas FADH2
y NADH, que contienen los electrones tomados de diferen-
tes sustratos oxidados. NADH tambin es un producto pri-
mario de la gluclisis. Las mitocondrias no tienen capacidad
para importar el NADH formado en el citoplasma mediante
gluclisis. En vez de eso, los electrones de NADH se em-
plean para reducir un metaboito de bajo peso molecular,
que entonces: 1) puede entrar a las mitocondrias (a travs de
una va denominada va alterna entre malato y aspartato) y
reducir NAH+ a NADH, o 2) transferir sus electrones a FAD
(a travs de una va denominada va alterna entre glicerol y
fosfato, que se muestra en la figura 5-10) para producir
FADH2.
Ahora que podemos explicarnos la formacin de NADH
y FADH2 por la gluclisis y el ciclo del cido tricarboxlico,
volveremos a los pasos que siguen estas coenzimas reduci-
das para producir ATP. El proceso total se puede dividir en
dos etapas distintas.
Etapa 1. Los electrones pasan desde FADJ2 o NADH a
una serie de portadores de electrones que constituyen la
cadena de transporte localizada en la membrana mitocon-
drial interna. El aceptor terminal de electrones de la cadena
respiratoria es el oxgeno molecular (02), el cual se reduce
para formar agua. Conforme los electrones avanzan a lo
largo de la cadena respiratoria, los cambios de conforma-
cin en los portadores desplazan protones hacia afuera a
travs de la membrana mitocondiral interna, estableciendo
por lo tanto un gradiente de protones a travs de dicha
membrana.
Etapa 2. El movimiento controlado de los protones
(H+) los regresa a travs de la membrana por medio de una
enzima sintetizadora de ATP que suministra la energa ne-
cesaria para efectuar la reaccin endergnica que conduce a
la sntesis de ATP.
La importancia de los movimientos de protones en la
formacin de ATP fue propuesta por primera vez en 1961
por Peter Mitchell, de la Universidad de Edinburgo. Los
experimentos que condujeron a la aceptacin del mecanismo
quimiosmtico, como lo llam Mitchell, se analizan en La va
experimental al final de este captulo; en lo que resta del mis-
mo se har un anlisis ms detallado de las dos etapas resu-
midas antes.
Cada par de electrones transferidos del NADH al oxge-
no por medio de la cadena transportadora de electrones li-
bera suficiente energa para formar unas tres molculas de
ATP. Cada par donado por FADH2 libera bastante energa
para formar casi dos molculas de ATP. Si se suman todas
las molculas de ATP formadas a partir de una molcula de
glucosa completamente catabolizada por medio de glucli-
sis y el ciclo del cido tricarboxlico, la ganancia neta mxi-
ma es de 36 ATP (que incluye el GTP formado en cada vuel-
ta del ciclo, fig. 5-8). Recordemos que la verdadera cantidad
de ATP formado por las molculas oxidadas de glucosa
depende de la relacin [ATP]/[ADP] dentro de la clula y
las actividades particulares en las cuales participa la clula.
La importancia relativa de la gluclisis en comparacin con
el ciclo del cido tricarboxlico, o sea, del metabolismo oxi-
dativo anaerobio comparado con el aerobio en la funcin
NADH + H-
OH
-CH2-C-CH2-C-S-CoA
CH^-C~S-CoA
CICLO DE UN
ACI DO G R ASO
-CH2-CH=CH-C-S-CoA
FADH,
Alanina
Cist erna
G licina
Serina
Treonina
Fenilalanina
Tir osina
L eucina
Usina
Tript fano
R-CH2-CH2-CH2-C- S-CoA
( a)
Piruvat o Acet oacet il CoA
\
Acetil-t
Aspartato
Asparagina
Leucina
I soleucina
Triptfano
Arginina
Histidina
Glutamina
Prolina
co,
Ma'ato C I C L O A C I D O
TRI C A RBO XL I C O Ls^Glutamato
\o
Fuma rato
>C<3=====1I soleucina
Succinat o Succinil-CoA Metionina
Valina
Tirosina
Fenilalanina
W
FIGURA 5-9. Las vas catablicas generan compuestos que ingresan al ciclo del cido tricarboxlico. a) Oxidacin de cidos grasos. El
primer paso en la oxidacin de un cido graso es su activacin por unin al grupo tiol (SH) de la coenzima A, que ocurre luego que el grupo
lipoacil es transportado a travs de la membrana mitocondrial interna en asociacin a una protena transportadora. En la mitcondria, la molcula
lipoacil-CoA sufre diseccin gradual, durante la cual se elimina una molcula de acetil-CoA de la cadena de cido graso con cada vuelta del
ciclo. Adems de la molcula de acetil-CoA que ingresa al ciclo del cido tricarboxlico, en cada vuelta del ciclo del cido graso se produce una
de NADH y una FADH.2. Del examen de esta serie de reacciones es evidente la razn por la cual las grasas constituyen un rico almacn de energa
qumica, b) Ingreso de aminocidos al ciclo del cido tricarboxlico.
del msculo esqueltico humano, se analiza en La perspecti-
va humana.
5-3 Papel de las mitocondrias
en la formacin de ATP
Con frecuencia se describe a las mitocondrias como "plantas
en miniatura generadoras de energa", Igual que dichas plan-
tas generadoras, las mitocondrias extraen energa de mate-
riales orgnicos y la almacenan en forma de energa elctri-
ca. Ms especficamente, la energa extrada de los sustratos
se emplea para generar un gradiente inico a travs de la
membrana mitocondrial interna. Este gradiente inico re-
presenta una forma de energa que puede liberarse para
efectuar diferentes tipos de trabajo. En el captulo 4 se vio
cmo las clulas intestinales emplean un gradiente inico a
travs de su membrana plasmtica para transportar azca-
res y aminocidos fuera de la luz intestinal, en tanto que las
clulas nerviosas utilizan un gradiente similar como base
para generar impulsos nerviosos. El uso de gradientes ini-
cos como forma de intercambiar energa requiere varios
componentes, incluyendo un sistema para generar el gra-
diente, una membrana capaz de mantener el gradiente y el
mecanismo para liberar el gradiente de modo que pueda
efectuar trabajo.
Las mitocondrias utilizan un gradiente inico a travs
de su membrana interna para efectuar gran nmero de acti-
Membrana
mitocondrial
H++NADH
3-fosfoglicerol
deshidrogenasa
NAD
Citoplasma
Fosfato de
dihidroxiacetona
H2C OH
C=O
CH2OPOf
interna IV
1i
Cadena
." transportadora
de electrones
t
r, 2e^
3
FIGURA 5-10. Intercambio de glicerol fosfato. El NADH produ-
cido en el citosol no puede atravesar la membrana mitocondrial inter-
na. En el intercambio de glicerol fosfato que aqu se muestra, los elec-
trones se transfieren al fosfato de dihidroxiacetona para formar 3-
fosfoglicerol, que a continuacin transfiere los electrones a una mol-
cula de FAD dentro de la membrana mitocondrial interna. El FADH2
formado en la reaccin puede pasar los electrones a travs de la ca-
dena transportadora de electrones.
vidades que requieren energa, principalmente sntesis de
ATP. Cuando la formacin de ATP se realiza por la energa
liberada de los electrones eliminados durante la oxidacin
del sustrato, el proceso se denomina fosforilacin oxidati-
va. La fosforilacin oxidativa se puede comparar con la fosfo-
rilacin a nivel de sustrato, segn se estudia en la pgina
102, en la cual el ATP se forma directamente por transferen-
cia de un grupo fosfato procedente de una molcula del
sustrato al ADP. Desentraar el mecanismo bsico de la
fosforilacin oxidativa ha sido uno de los logros ms signi-
ficativos en el campo de la biologa celular; las brechas de
conocimiento que todava falta por llenar an constituyen
un rea activa de investigacin. Para comprender el me-
canismo de la fosforilacin oxidativa primero es necesario
considerar de qu manera la oxidacin del sustrato puede
liberar energa libre.
Potenciales de oxidorreduccin
Si se comparan varios agentes oxidantes, pueden clasificarse
en series segn su afinidad por los electrones: cuanto mayor
sea la afinidad, ms fuerte ser el agente oxidante. Tambin
los agentes reductores se pueden clasificar segn su afini-
dad para electrones: a menor afinidad (los electrones se libe-
ran ms fcilmente), rns fuerte ser el agente reductor. Para
poner esto en trminos cuantitativos, los agentes reductores
se clasifican segn su potencial de transferencia de electro-
nes; las sustancias que tienen un potencial elevado para
transferir electrones, como el NADH, son agentes reductores
fuertes, en tanto que aqullas con bajo potencial para trans-
ferir electrones, como HÔ, son agentes reductores dbiles.
Los agentes oxidantes y reductores se presentan en pares,
como NAD+ y NADH. Los agentes reductores fuertes se
unen a los agentes oxidantes dbiles, y viceversa. Por ejem-
plo, NAD+ (del par NADH-NAD+) es un agente oxidante
dbil, en tanto que el otro miembro del par H2, o sea el
oxgeno (en realidad 02), es un agente oxidante fuerte.
Puesto que el movimiento de electrones genera separa-
cin de cargas, la afinidad de las sustancias por los electro-
nes se puede medir con instrumentos que detectan voltaje
(fig. 5-11). En cada par se mide su potencial de oxidorreduc-
cin (o potencial redox) para relacionarlo con el potencial
de algn par estndar. Arbitrariamente se eligi el hidrge-
no corno par estndar. Igual que para cambios de energa
libre, donde el cambio estndar de energa libre es AG,
para los pares redox se emplea una nomenclatura similar. El
potencial redox estndar, EO, para un par dado se designa
como el voltaje producido por una media celdilla (slo estn
presentes los miembros de un par), en la cual cada miembro
del par se encuentra en concentracin y condiciones estn-
dar (como en la figura 5-11). Las concentraciones estndar
son 1.0 M para solutos y iones y 1 atm de presin para gases
(p. ej., H2) a 25C El potencial redox estndar para una
reaccin de oxidorreduccin que implique hidrgeno (2H+
+ 2 electrones -> ty es 0.00 V. La asignacin de un signo
(positivo o negativo) a pares diferentes del par hidrgeno es
arbitraria y vara entre las diversas disciplinas. Considerare-
mos la asignacin de la siguiente manera. Aquellos pares
V oltmetro
Puente de K CI
1MH*
1atmH;
1M/L.
Media celda de referencia Media celda de registro
FIGURA 5-11. Medicin del potencial estndar de oxidorreduc-
cin. La media celda de muestra contiene los miembros oxidados y
reducidos del par, ambos presentes a 1 M. La media celda de referen-
cia contiene una solucin 1 M de H+ en equilibrio con el gas hidr-
geno a una atmsfera de presin. El circuito eictrico se forma conec-
tando las medias celdas a travs de un voltmetro y un puente salino.
Si los electrones fluyen preferencialmente desde la meda celda de
muestra a la media celda de referencia, entonces el potencial redox
estndar (AEo) del par muestra es negativo; si los electrones fluyen en
la direccin opuesta, el potencial redox estndar del par muestra es
positivo. El puente salino consiste en una solucin saturada de KCI;
proporciona una va para que los contraiones se muevan entre las
medias celdas y conserven la neutralidad elctrica en los dos compar-
timientos.
182 CAPITULO 5 " Respiracin aerobia y mitocondrias
L A P E R S P E C T I V A H U M A N A
Papel del metabolismo anaerobio
j aerobio en el ejercicio
La contraccin muscular requiere una
gran cantidad de energa. La mayor
parte de esta energa se emplea para
lograr que los filamentos que contienen
actina y miosna se deslicen uno sobre
otro, como analizaremos en el captulo
9. La energa necesaria para la contrac-
cin muscular se deriva del ATP. La
velocidad de hidrlisis del ATP au-
menta ms de 100 veces en un msculo
esqueltico sometido a contraccin
mxima, en comparacin con el mismo
msculo en reposo. Se estima que en
promedio el msculo esqueltico hu-
mano tiene suficiente ATP "a la mano"
para consumir durante una contraccin
vigorosa de 2 a 5 segundos de dura-
cin. Aunque el ATP se hidroliza, es
importante producir al mismo tiempo
ATP adicional; de otra manera, la pro-
porcin ATP/ADP desciende y tam-
bin se reduce la energa libre disponi-
ble para sostener la contraccin. Las
clulas musculares contienen una re-
serva de fosfato de creatina (CrP), uno
de los compuestos con potencial para
transferir fosfatos mayor que el del ATP
(fig. 3-27) y que por lo tanto puede utili-
zarse para generar ATP en la siguiente
reaccin.
CrP + ADP - Cr + ATP
En condiciones tpicas, el msculo es-
queltico tiene suficiente reserva de
fosfato de creatina para mantener una
concentracin elevada de ATP durante
casi 15 segundos. Puesto que las clu-
las musculares tienen un suministro
muy limitado tanto de ATP como de
fosfato de creatina, se deduce que la
actividad muscular intensa o sostenida
requiere de la sntesis de cantidades
adicionales de ATP, que deben ob-
tenerse mediante metabolismo oxida-
tivo.
El msculo esqueltico humano
consta de dos tipos generales de fibras
{fig. PH 5-1): fibras de "contraccinr-
F1GURA PH 5-1. El msculo esqueltico
contiene una mezcla de fibras de contraccin
rpida (teidas en color oscuro) y fibras de
contraccin lenta (teidas en color claro).
(Cortesa de Duncan MacDougaU.)
pida", que se contraen con gran rapi-
dez (p. ej., 15 a 40 mseg) y fibras de
"contraccin lenta" que se contraen
ms lentamente (p. ej., 40 a 100 mseg).
El microscopio electrnico revela que
las fibras de contraccin rpida estn
casi desprovistas de mitocondrias, lo
que indica que dichas clulas no pue-
den producir mucho ATP mediante res-
piracin aerobia. Por otra parte, las fi-
bras de contraccin lenta contienen un
gran nmero de mitocondrias. Estos
dos tipos de fibras del msculo esque-
ltico son adecuadas para actividades
de diferentes tipos. Por ejemplo, le-
vantar pesas o correr a gran velocidad
depende principalmente de las fibras
de contraccin rpida, capaces de gene-
rar nas fuerza que sus contrapartes de
contraccin lenta. Las fibras de contrac-
cin rpida producen casi todo su ATP
por la va anaerobia como resultado de
la gluclisis. Aunque la gluclisis slo
tiene capacidad para producir cerca de
5% de ATP por molcula de glucosa oxi-
dada en comparacin con la respiracin
aerobia, las reacciones de la gluclisis
ocurren con mayor rapidez que las del
ciclo del cido tricarboxlico y el trans-
porte de electrones, por lo que la velo-
cidad de produccin de ATP por la va
anaerobia es en realidad nas alta que
la lograda en la respiracin aerobia. Los
problemas de producir ATP por gluc-
lisis son el desgaste rpido de la
glucosa disponible en la fibra (almace-
nada en forma de glucgeno) y la pro-
duccin de un producto final indesea-
ble, el cido lctico. Consideraremos
este ltimo aspecto con mayor detalle.
Debemos recordar que la glucli-
sis slocontina si el NAD+ se regenera
y que eso ocurre por fermentacin. Las
clulas musculares regeneran NAD+ al
reducir piruvato, el producto final de
la guclisis, a cido lctico. La mayor
parte del cido lctico difunde fuera de
las clulas musculares activas hacia la
sangre circulante, donde es transpor-
tado al hgado para convertirse de nue-
vo en glucosa. La glucosa producida
en el hgado se libera al torrente san-
guneo y por lo tanto puede regresar al
msculo activo y continuar suminis-
trando energa para efectuar la gluc-
lisis acelerada. Sin embargo, la forma-
cin de cido lctico se acompaa de
un descenso de pH dentro del tejido
muscular (desde pH 7.0 hasta 6.35), lo
que a veces produce el dolor y los ca-
lambres que acompaan al ejercicio
intenso. El incremento de la acidez jun-
to con el agotamiento de las reservas
de glucosa tal vez explique la sensa-
cin de fatiga muscular caracterstica
del ejercicio anaerobio.
Si en lugar de emplear los mscu-
los para levantar pesas o efectuar ca-
rreras se participa en un ejercicio
"aerobio", como montar bicicleta o ca-
minar con rapidez, la actividad puede
prolongarse durante periodos mucho
ms largos sin la sensacin de dolor
muscular o de fatiga. Los ejercicios ae-
robios, como su nombre implica, estn
CAPITULO 5 183
disenados para permitir que los mscu-
los trabajen por la va aerobia, o sea,
continuar la produccin del ATP nece-
sario mediante el transporte de electro-
nes. Los ejercicios aerobios dependen
principalmente de la contraccin de fi-
bras lentas del msculo esqueltico, ca-
paces de generar menos fuerza, pero
que pueden continuar funcionando
durante largos periodos debido a la
produccin aerobia continua de ATP
sin la formacin correspondiente de
cido lctico.
El ejercicio aerobio recibe su com-
bustible inicial de las molculas de glu-
cosa almacenadas como glucgeno en
los propios msculos, pero luego de
unos pocos minutos los msculos de-
penden ms y ms de los cidos grasos
libres liberados en la sangre por el teji-
do adiposo (grasa). Cuanto mayor sea
el periodo de ejercicio, mayor la de-
pendencia de cidos grasos. Se estima
que casi 50% de las caloras consumi-
das por los msculos en 20 minutos de
ejercicio aerobio intenso se derivan
de la grasa. Ejercicios aerobios como
trotar, caminar rpido, nadar o mon-
tar bicicleta constituyen una de las
mejores formas de reducir el conteni-
do de grasa del cuerpo.
La proporcin entre fibras de con-
traccin rpida y fibras de contraccin
lenta vara de un msculo a otro. Por
ejemplo, los msculos posturales de la
espalda, necesarios para que una per-
sona permanezca en posicin erecta,
contienen una mayor proporcin de fi-
bras de contraccin lenta en compara-
cin con los msculos del brazo em-
pleados para tirar o levantar objetos. La
proporcin precisa entre fibras de con-
traccin rpida y fibras de contraccin
lenta en un msculo particular est ge-
nticamente determinada y es muy va-
riable de una persona a otra: factores
que desempean un importante papel
para permitir que un individuo alcan-
ce la excelencia en ciertos tipos de acti-
vidad fsica. Por ejemplo, los corredo-
res de velocidad y los levantadores de
pesas mundiales suelen tener mayor
proporcin de fibras musculares de
contraccin rpida en comparacin con
los corredores de distancias largas.
Adems, el entrenamiento para depor-
tes como levantamiento de pesas con-
duce a un crecimiento desproporciona-
do de las fibras de contraccin rpida.
El tejido del msculo cardiaco tam-
bin debe incrementar su grado de ac-
tividad durante el ejercicio intenso,
pero a diferencia del tejido del mscu-
lo esqueltico, el msculo cardiaco slo
puede producir ATP por metabolismo
aerobio. En realidad, casi 40% del es-
pacio citoplsmico de una clula mus-
cular cardiaca humana est ocupado
por mitocondrias que producen ATP.
cuyos agentes reductores son mejores donadores de electro-
nes en comparacin con H2, o sea, con menor afinidad por
sus electrones en comparacin con HZ, se les asigna poten-
ciales redox negativos. Por ejemplo, ei potencial redox es-
tndar para el par NADH-NAD+ es de -0.32 V (cuadro
CUADRO 5-1. Potenciales redox estndar de reacciones
seleccionadas en un sentido
Ecuacin de electrodo E'
Acetato + 2H+ + 2e~ =acetaldehido -0.58
2H+ + 2e- =H2 -0.421
a-cetogfutarato + COj + 2H+ + 2e- =isocitrato -0.38
Acetoacetato + 2H+ + 2c- =^-hidroxibutirato -0.346
NAD+ + 2H+ + 2e- NADH + H+ -0.320
NADP+ + 2H+ -I- 2e- =NADPH + H+ -0.324
Acetaldehido + 2H+ + 2e~ etanol -0.197
Piruvato + 2H+ + 2e~ =lactato -0.185
Oxalacetato + 2H+ + 2e~ =malato -0.166
FAD + 2H+ + 2e~ =FADH2 (en flavoprotenas) +0.031
Fumarato + 2H+ + 2e~ succinato +0.031
2 ciocromo > K (< IX ) + 2e~ =2 citocromo i> K (red) +0.030
Ubiquinona + 2H+ + 2e~ =ubiquinol +0.10
2 citocrorno cox + 2e~ =2 citocromo crc +0.254
2 citocromo fl3|ax + 2e~ =2 citocromo fl^md) +0.385
2 +0.816
5-1). Los pares cuyos agentes oxidantes sean mejores acep-
tores de electrones que H+, o sea, que presenten mayor
afinidad para electrones en comparacin con H+, tienen
potenciales redox positivos. En el cuadro 5-1 se muestran
los potenciales redox de algunos pares biolgicamente im-
portantes. En dicho cuadro el valor del par hidrgeno no es
0.00, sino -0.42V. Esta cifra representa el valor cuando la
concentracin de H+ es 10~7 M (pH 7.0) en vez de 1.0 M
(pH 0.0), que sera poco empleada en fisiologa. Si el poten-
cial redox estndar se calcula a pH 7, entonces se indica por
el smbolo EQ en vez de EQ.
As como cualquier otra reaccin espontnea se acom-
paa de prdida de energa libre, lo mismo ocurre con las
reacciones de oxidorreduccin. El cambio de energa libre
estndar durante una reaccin de este tipo
=A (ox)
\2 + 2H+ + 2e- =HO
se puede calcular a partir de los potenciales redox estndar
de los dos pares implicados en la reaccin segn la ecuacin
AG' =-
donde n es el nmero de electrones transferidos, F es la
constante de Faraday (23.063 kcal/V*mol) y A es la dife-
rencia en voltios entre el potencial redox estndar de los
dos pares. Cuanto mayor sea la diferencia de potencial redox
estndar entre los dos pares, ms tiempo proceder la reac-
cin para formar productos en condiciones estndar antes
de alcanzar un estado de equilibrio.
Para la oxidacin de NADH por oxgeno molecular,
NADH +\2 +H+-> H2O +NAD+
los potenciales redox estndar de los dos pares se pueden
escribir de la siguiente manera
O2 + 2H+ + 2e~ -* H2O = +0.82 V
NAD+ + 2H+ + 2e- -> NADH + H+ EQ = -0.32 V
El cambio de voltaje para la reaccin total es igual a la dife-
rencia entre los dos valores EQ (AE):
AE' o = +0.82 V - (-0.32 V) = +1.14 V
que es una medida de la energa libre liberada cuando se
oxida NADH por oxgeno molecular en condiciones estn-
dar. Sustituyendo este valor en la ecuacin anterior,
AG' = (-2)(23.063 kcal/V-mol)(1.14 V) -
-52.6 kcal/mol
La diferencia de energa libre estndar ( AGf ) es -52.6 kcal/
mol. Igual que con otras reacciones, el verdadero valor AG
depende de las concentraciones relativas de reactantes y
productos (formas oxidadas y reducidas de los compuestos)
presentes en la clula en un momento dado. No obstante,
pareciera que el descenso de energa libre de un par de
electrones conforme pasan de NADH a oxgeno molecular
(AG0' = -52.6 kcal/mol) es suficiente para formar varias
molculas de ATP (AG0' = +7.3 kcal/mol) incluso cuando
la relacin ATP/ADP dentro de la clula es mucho ms alta
que en condiciones estndar. En las mitocondrias, la transfe-
rencia de energa del NADH al ATP ocurre de manera gra-
dual y ser el principal tema que se exponga en el resto de
este captulo.
Dentro de las mitocondrias, los electrones se transfie-
ren al NAD+ (o al FAD) a partir de varios sustratos del ciclo
del cido tricarboxlico, principalmente isocitrato, a-cetoglu-
tarato, malato y succinato. Los primeros tres de estos inter-
mediarios poseen potenciales redox de valor negativo rela-
tivamente alto (cuadro 5-1), lo suficientemente alto para
transferir electrones a NAD+ en las condiciones prevalecientes
en la clula.1 En contraste, la concentracin de succinato a
fumarato, que tiene un potencial redox ms positivo, proce-
de por la reduccin de FAD, una coenzima con mayor afi-
nidad por electrones en comparacin con NAD+.
Transporte de electrones
La mayor parte de las enzimas del ciclo del cido tricarbox-
lico se encuentran libres dentro de la matriz fluida de la
mitocondria. El NADH formado en la matriz se disocia de
1 Segn se indica en el cuadro 5-1, el potencial redox estndar (E)
del par oxalacetato-malato es ms positivo que el del par NAD+-
NADH. Por lo tanto, la oxidacin de malato a oxalacetato slo puede
proceder a la formacin de oxalacetato cuando la relacin de produc-
tos reactantes se conserva por debajo de las condiciones estndar. La
AG de esta reaccin se conserva negativa manteniendo elevadas las
concentraciones de malato o de NAD+en relacin con las de oxalace-
tato o NADH en la regin que rodea al sitio activo de la enzima. La
situacin es anloga a la observada en la formacin de gliceraldehido
3-fosfato a partir de dihidroxiacetona fosfato fpg. 84).
su respectiva deshidrogenase y transfiere sus electrones a
otros transportadores relacionados con la membrana mito-
condrial interna. Cada uno de los casi 20 transportadores de
electrones que constituyen la cadena transportadora puede
existir en su estado reducido u oxidado. Cada transportador
se reduce sucesivamente porque gana electrones proceden-
tes del transportador precedente en la cadena y a continua-
cin se oxida porque dona sus electrones al transportador
subsecuente (fig. 5-14). Por lo tanto, los electrones pasan de
un transportador al siguiente hasta que el aceptor final se
reduce. El aceptor final de esta "cadena de cubetas" de elec-
trones es el C2, el cual se reduce para formar agua. A lo
largo de la lnea cada transportador de electrones tiene un
potencial redox ms positivo que el transportador previo, y
en cada transferencia sucesiva los electrones pierden ener-
ga libre adicional. La energa libre liberada por la transfe-
rencia de electrones se emplea para generar un gradiente de
protones, el cual se utiliza posteriormente para efectuar la
sntesis endergnica de ATP.
Tipos de transportadores
La cadena de transporte de electrones (o cadena respirato-
ria) de la membrana mitocondrial interna se compone de
cuatro tipos de transportadores de electrones enlazados a la
membrana: flavoprotenas, citocromos, ubiquinona, y pro-
tenas de hierro y azufre. Con excepcin de la ubiquinona,
todos los centros redox dentro de la cadena respiratoria que
aceptan y donan electrones son grupos prostticos (compo-
nentes no aminocidos) relacionados con protenas.
Las flavoprotenas constan de un polipptido fuerte-
mente enlazado a uno de los grupos prostticos relaciona-
dos, sea dinucletido de adenina flavina (FAD) o mononu-
cletido de flavina (FMN) (fig. 5-12, a). Los grupos prostticos
de las flavoprotenas se derivan de la riboflavina (vitamina
62) y cada uno puede aceptar y donar dos protones y dos
electrones. El estado de oxidacin de la flavoprotena pue-
de determinarse por mtodos espectroscpicos midiendo la
cantidad de luz absorbida a diferentes longitudes de onda.
Las protenas totalmente oxidadas muestran un mximo de
absorcin a 370 y 450 nm, en tanto que los grupos reducidos
slo tienen un mximo a 370 nm. Las principales flavopro-
tenas de las mitocondrias son la NADH deshidrogenasa de
la cadena transportadora de electrones y la succinato deshi-
drogenasa del ciclo del cido tricarboxlico.
Los citocromos son protenas que contienen grupos hem
(como el descrito para la mioglobina en la pgina 58). El
tomo de hierro de un hem puede sufrir una transicin
reversible entre los estados de oxidacin Fe3+ y Fe2+ como
consecuencia de la aceptacin y prdida de un solo electrn
(fig. 5-12, b). Hay cuando menos cinco especies de citocromos
presentes en la cadena transportadora de electrones, a, 3, b,
c y c\ que difieren entre s por as sustituciones efectuadas
en el grupo hem (indicada por las porciones sombreadas de
la figura 5-12, fc) y tambin por la secuencia de aminocidos
de la cadena del polipptido. Los grupos hem de la citocro-
mo oxidasa tambin se relacionan con iones cobre que pue-
den desempear un papel clave en la transferencia de elec-
trones a O2 (fig. 5-19).
La ubiquinona (UQ, o coenzima Q) es una molcula
Hposoluble que contiene una larga cadena hidrfoba com-
c=o
H3C
F or m a oxi da da de F MN
( es t a do quinona )
_ H'_ e-
0
CHrC" " C' C N-H
3 I II I
CHrC^ ^C^ ^C ^W^C=0
R a d i ca l libre inter m edio
( es t a do s em i qui nona )
CH,-C
N-H
I
C=0
F or m a r educi da de F MN
( es t a do hi dr oxi qui nona )
( a )
( b )
CAPITULO 5 Respiracin aerob ia y mitocondrias 185
CH,OC
II
CH,OC
C-CH,
CH,
Unidad soprenoide
F or m a oxi da da de ubiquinona
(esta do quinona )
,^c-
C-CH3
" I II
CH3OC^ C-R
coo-
F or m a oxidada de hem
T
R a d i ca l ubre inter m edio
(estado semiquinona)
CH-CH,
OH
""
C-CH,
II
C-R
F or m a reducida de ubiquinona
(esta do hidr oquinona ]
( O
F or m a r educi da de hem
FICUlA 5-12. Estructura de las formas oxidada y reducida de los tres tipos de transportadores de electrones, a) FMN de la NADH
deshidrogenasa; b ) el grupo hem del citocromo c, y c) ubiquinona (coenzima Q). Los grupos hem de los diferentes citocromos de la cadena
transportadora de electrones difieren en sus grupos sustituidos sobre el anillo porfirina (indicados por el sombreado) y la naturaleza del enlace
a la protena. Los citocromos slo pueden aceptar un electrn, en tanto que FMN y quinonas pueden aceptar dos electrones y dos protones y
pueden hacerlo en reacciones sucesivas, como se muestra en la figura. FAD difiere de FMN en que contiene un grupo adenosina unido al fosfato.
puesta por unidades isoprenoides de cinco carbonos (fig.
5-12, c) , Igual que las flavoprotenas, cada ubiquinona pue-
de aceptar y donar dos electrones y dos protones. Similar
a flavoprotenas y citocromos, la ubiquinona se puede de-
tectar espectroscpicamente debido a que posee una banda
de absorcin a 280 nm que desaparece en el estado redu-
cido.
A principios del decenio de 1960 se descubri un nuevo
grupo de transportadores de electrones en la membrana in-
terna. Estos componentes, llamados protenas de hierro y
azufre, se descubrieron mediante resonancia electrnica de
giro (el hierro reducido tiene un electrn impar que da lugar
a una seal electrnica de giro). Los tomos de hierro de las
protenas de hierro y azufre no se localizan en un grupo
hem, sino que estn ntimamente unidos a tomos de azufre
inorgnico como parte de un centro de hierro y azufre. Los
centros ms comunes contienen dos o cuatro tomos de
hierro y de azufre, designados [2Fe-2S] y [4Fe-4S], unidos a
la protena en los residuos de cisterna (fig. 5-13). Un solo
centro puede tener varios tomos de hierro, pero todo el
complejo slo puede aceptar y donar un electrn. El poten-
cial redox de un centro de hierro y azufre depende mucho
de los residuos aminocidos que constituyen su entorno
local; como grupo, las protenas de hierro y azufre presen-
tan potenciales que varan de -400 mV hasta +300 mV,
correspondiendo a una mayor porcin del espacio en el que
ocurre el transporte de electrones. Se ha identificado ms de
una docena de protenas de hierro y azufre dentro de las
mitocondrias y todas estn ntimamente relacionadas con
otros portadores de electrones.
Cvs
( a)
[2Fe-2S]
Cvs
Cvs
FI GURA 5-13. Centros de hierro y azufre. Estructura de un centro
de hierro y azufre: a) [2Fe-2S] y b) [4Fe-4S], Los tomos de azufre se
muestran en color amarillo. Ambos tipos de centros de hierro y azufre
estn unidos a la protena por medio de un enlace entre un tomo de
azuf re (mostrados en color amarillo brillante) y un residuo de cistena.
Los dos tipos de centros de hierro y azufre slo aceptan un electrn,
cuya carga se distribuye entre los diferentes tomos de hierro.
Los portadores de la cadena de transporte de electrones
se disponen espacialrnente en orden decreciente de poten-
cial inico, asegurando que los electrones pasen a travs de
toda la cadena conforme fluyen de NADH o FAD2 hacia
2 (fig. 5-14). La secuencia especfica de los portadores que
constituyen la cadena para el transporte de electrones fue
estudiada por Britton Chance y sus colaboradores, en la
Universidad de Pennsylvania, empleando varios inhibido-
res que bloquean el transporte de electrones en sitios espec-
ficos a lo largo de la va. Durante el bloqueo, los portadores
sobre el lado NADH incrementan componentes en estado
reducido, en tanto que los portadores sobre el lado del ox-
geno ios acumulan en estado oxidado. Mediante anlisis
espectroscpico de la naturaleza de los componentes reduci-
dos y oxidados en presencia de diferentes inhibidores se
pudo determinar la secuencia de los portadores. En la figura
5-15 se muestra una analoga del concepto de los experimen-
tos con inhibidores. La secuencia de los portadores determi-
nada experimentalmente concuerda bastante bien con las
predicciones tericas basadas en el potencial redox de pares
individuales, indicados en el cuadro 5-1.
La velocidad de transferencia de electrones desde un
portador a un aceptor depende de la distancia entre los dos
centros redox y la va particular utilizada. Los estudios in-
-0.4
-0.2 -
-0.0 -
E0 +0-2 |-
+0.4
+0.6
+0.8
FIGURA 5-H. Disposicin de varios portadores en la cadena
transportadora de electrones. El diagrama ilustra el potencial redox
aproximado de los portadores y la disminucin de energa libre con-
forme los pares de electrones se desplazan a o largo de la cadena
respiratoria hasta el oxgeno. El gran nmero de centros de hierro y
azufre no se indica en la f igura, para simplificar. Como analizaremos
ms adelante en el captulo, cada uno de los tres segmentos marcados
por flechas rojas produce suficiente energa para mover los protones
a travs de la membrana mitocondrial interna, la cual a su vez sumi-
nistra la energa requerida para generar ATP a part ir de ADP. ( Segn
A.L Lehninger, Biochemistry, 2a. edicin, 1975, Worth Piibshers, Nueva
York.)
Punto de inhibicin
NAD FMN
o- Bloqueo con antimicina A
v
FI GURA 5-15. Uso experimental de inhibidores para determinar
la secuencia de portadores en la cadena de transporte de electrones.
En esta analoga hidrulica, el tratamiento de las mitocondrias con el
inhibidor antimicina A interrumpe el transporte, y a partir del punto
de inhibicin los portadores del lado NADH permanecen en estado
totalmente reducido y los portadores del lado 02 en estado completa-
mente oxidado. Comparando el efecto de varios inhibidores se pudo
establecer el orden de los portadores dentro de la cadena. ( Segn A.L.
Lehninger, Biochemistry, 2a. edicin, 1975, Worth Pvblishers, Nueva
York.)
CAPITULO 5 187
dican que los electrones pueden viajar distancias considera-
bles (10 a 20 A) entre centros redox adyacentes y los que
f l uyen a travs de "tneles" especiales constituidos por una
serie de enlaces covalentes y puentes de hidrgeno que am-
pl an transversalmente algunas partes de diferentes residuos
de aminocidos. Un ejemplo de la va propuesta se refiere al
citocromo c y se muestra en la f igura 5-16.
Transportadores complejos de electrones
Cuando la membrana mitocondrial interna se rompe pue-
den aislarse los diferentes portadores de electrones que for-
man parte de cuatro complejos asimtricos distintos que
rodean a la membrana, identificados como complejos I, II,
III y IV (f ig. 5-17). Dos componentes de la cadena de trans-
porte de electrones, citocromo c y ubiquinona, no forman
parte de alguno de los cuatro complejos, sino que existen de
manera independiente en la membrana. La ubiquinona ocu-
rre como un grupo de molculas disueltas en la bicapa de
lpidos y el citocromo c como una protena perifrica de la
membrana. Se piensa que el citocromo c y la ubiquinona se
desplazan dentro de la membrana o a lo largo de la misma
transportando electrones entre los grandes complejos prote-
nicos relativamente inmviles. Una vez dentro de uno de
los grandes complejos multiprotenas se cree que los elec-
trones viajan a lo largo de vas definidas (del tipo ilustrado
en la f igura 5-16) entre centros redox adyacentes cuyas po-
siciones estn en sus respectivos lugares.
Si el donador de electrones es NADH, los electrones
entran a la cadena respiratoria por la va del complejo I, que
transf iere electrones a la ubiquinona (fig. 5-17). Cuando el
donador es FADH2, los electrones pasan directamente de la
succinato deshidrogenasa del ciclo del cido tricarboxlco
(que constituye el complejo II) a la ubiquinona, pasando
por alto el extremo "izquierdo" de la cadena que posee un
potencial redox demasiado negativo para aceptar los electro-
nes menos energticos del nucletido de flavina.
Si se examinan los potenciales redox de portadores su-
cesivos en la f igura 5-14, es evidente que hay tres sitios en
los cuales la transf erencia de electrones se acompaa de
mayor liberacin de energa libre (del orden de 200 mV).
Cada uno de estos sitios se encuentra entre portadores que
son parte de uno de los tres complejos, I, III y IV. La energa
libre liberada en f orma de electrones que pasa a travs de
estos tres sitios se conserva mediante translocacin de proto-
nes desde la matriz a travs de la membrana interna al es-
pacio intermembrana. La translocacin de protones por estos
complejos transportadores de electrones establece el gradien-
te de protones que efectan la sntesis de ATP. La capacidad
de los complejos I, III y IV para actuar como unidades inde-
pendientes transportadoras de protones se puede demostrar
puri f i cando cada uno de ellos e incorporndolos indi-
vidualmente en vesculas artificiales de lpidos. Cuando se
les suministra el donador apropiado de electrones, estas
vesculas que contienen protenas son capaces de aceptar
electrones y translocar protones a travs de la membrana
vesicular. El mecanismo de la translocacin de protones
(H+) se analiza en las pginas 190 y 200. Examinaremos
brevemente cada uno de los cuatro complejos.
Complejo I (NADH-UQ oxirreductasa o NADH deshi-
drogenasa). El complejo I, que cataliza la transferencia de
F I G U R A 5-16. Vas semejantes a tneles para los electrones del
complejo levadura-citocromo c-citocromo c peroxidasa. El grupo hem
del citocromo c peroxidasa (que no es un portador de la cadena
mitocondrial para transporte de electrones, pero que constituye un
aceptador anlogo de electrones y del cual se conoce su estructura
cristalina con estudios de alta resolucin) se observa en rojo. Existen
varias vas def inidas (amarillas) para el movimiento de electrones de
un grupo hem al otro. (Por e f f re y ]. Re gan, se gn David N. Bcrntnn y
cois., re impre so con autorizacin de Science 258:1741, 1992. 1992 por
Ame rican Assodation f or he Advance me nt of Scie nce .)
un par de electrones del NADH a la ubiquinona (UQ), es
enorme, contiene hasta 30 polpptidos distintos y repre-
senta una masa de casi un milln de daltons. El complejo I
incluye hasta nueve centros distintos de hierro y azuf re
adems de flavoprotena. El paso de electrones a travs del
complejo I se acompaa de la translocacin de protones al
interior del espacio intermembrana; la estequiometra tal
vez sea de 3 a 4 H+ por cada par de electrones transferidos.
Se piensa que seis de los polipptidos que constituyen el
complejo I de la mitocondria humana son codificados por
genes mitocondriales.
Complejo II (succinato-UQ oxidorreductasa o succina-
to deshidrogenasa). El complejo II consta de varios poli-
pptidos, dos de los cuales estn compuestos de succinato
deshidrogenasa, enzima que contiene FAD enlazada a mem-
brana que cataliza una reaccin clave del ciclo del cido
tricarboxlico. Todos son codif icados por genes nucleares.
El complejo II proporciona una va para introducir electro-
nes de "baja energa" (prximos a O mV) del succinato al
FAD o a la ubiquinona. La transferencia de electrones a
travs del complejo II no se acompaa de translocacin de
protones.
Complejo III (UQH2-citocromo c oxidorreductasa o
citocromo bci). El complejo III cataliza la transferencia de
electrones desde la ubiquinona reducida (UQH/?) al citocro-
mo c, que es una protena perifrica de membrana y no parte
integral de alguno de los complejos de la cadena respirato-
ria. Se calcula que cuatro H+ se translocan a travs de la
membrana por cada par de electrones transferidos por me-
dio de la ubiquinona al complejo III. El complejo III contie-
ne casi 10 polipptidos, uno codificado por el genoma mito-
E s p a c i o intermembrana
1/20,+2H1
10 nm
Complejo 1
NADH-UQ
Oxidorreductasa
SUBUN1DADES
Co mp l ej o III
UQH2_
Citocromo c
oxidorreductasa
Compl ej o II
S ucci nato- UQ
oxi dorreductasa
Compl ej o IV
Ci tocromo c
oxi dasa
mtDNA
nDNA
TOTAL
6
-22
-28
1
-9
-10
3
10
13
FIGURA 5-17. Esquema de la disposicin de los componentes de una cadena transportadora de electrones de la membrana mitocondrial
interna. La cadena respiratoria consta de cuatro complejos de portadores de electrones y otros dos portadores (ubiquinona y citocromo c)
situados de manera independiente. Los electrones ingresan a la cadena procedentes del NADH (va complejo I) o FADH? (una parte del complejo
II). En seguida pasan de los complejos 1 o II a la ubiquinona (UQ), un grupo dentro de la bicapa de lpidos. A continuacin se transfieren de
la ubiquinona al complejo III y luego a la protena perifrica citocromo c, la cual se piensa que es mvil; despus los electrones pasan del
citocromo c al complejo IV (citocromo oxidasa) y luego al O para formar H2. Se indican los sitios de translocacin de protones desde la matriz
al citoplasma. El nmero preciso de protones translocados en cada sitio an es tema de controversia.
Citocromo c
FIGI I RA 5- i t. Citocromo oxidasa. El nmero preciso de subuni-
dades en una molcula de citocromo oxidasa vara entre las espe-
cies, pero en los mamferos puede ser hasta de 13. Se cree que la
protena existe en la membrana mitocondrial en forma de un
dmero. Aqu se muestra la disposicin de siete de los polipptidos
de un solo monmero. Se piensa que el monmero contiene dos
copias diferentes de la subunidad VII localizadas en diferentes si-
tios.
Matriz
VI, 9 kD
IV, 17 kD
CAPITULO D Respiracin aerobia y
condrial, e incluye varios grupos hem y centros de hierro y
azufre.
Complejo IV (citocromo c-O2 oxidorreductasa o cito-
cromo c oxidasa). El paso final del transporte de electrones
en la mitocondria es la transferencia de cuatro electrones del
riocromo c ( c. c) aJ oxgeno segn la reaccin
4ct O2 + 4H+ -4cit 2H2O
catalizada por el complejo IV, un enorme ensamblamiento
de polipptidos comnmente denominado citocromo oxida-
sa. Adems de reducir el 02, la citocromo oxidasa tambin
transloca protones a travs de la membrana interna.
En la figura 5-18 se muestra un modelo de la molcula
de citocromo oxidasa. D e los casi 13 polipptidos que cons-
tituyen la enzima del mamfero, tres de ellos, las subunida-
des I, II y III, son los polipptidos ms grandes del complejo
y contienen todos los centros redox. Estas tres subunidades
son codificadas en el genoma mitocondrial. La citocromo
oxidasa de la cadena respiratoria de la mayor parte de las
bacterias aerobias slo contiene tres subunidades. Como
sera de esperar, si la mitocondria evolucion a partir i
bacterias, las tres subunidades codificadas por el D NA mi-
tocondrial son homologas de las tres subunidades que cons-
tituyen toda la enzima de las clulas bacterianas.
Se ha estudiado de manera intensiva el mecanismo de
Iransterena e electrones a tra vs del complejo IV. El prin-
cipal desafo para los investigadores es explicar de qu ma-
nera los portadores que slo son capaces de transferir elec-
trones simples pueden reducir una molcula de O2 a dos
molculas de 2O, proceso que requiere cuatro electrones.
Se cree que la reaccin ocurre paso a paso, como se muestra
en la figura 5-19. Primero se transfieren electrones, uno cada
vez, del citocromo c a travs de un ion cobre (CUA) de la
subunidad II al hem (hem o) de la subunidad I (fig. 5-19, a).
D esde ah, los electrones pasan, uno cada vez, a un centro
redox (binuclear) localizado en la subunidad I que contiene
un segundo hem (hem 3) y a un segundo ion cobre (Cug)
situado a una distancia menor de 5. Una vez que el centro
en 3-CuB acepta su segundo electrn (paso 3, fig. 5-19, b),
una molcula de O2 se une al centro y acepta el par de elec-
Fe3* C u 2 *
2 H2 0
2 H D
< D
05
\
-C u "
4the
\
-C u 2 *
Fe1*
( a ) ( b)
OH-C u 2 *
F e 3 ' -OH
+* F e 3 'C u 1*
1er. e~ 2 o . e -
o
FIGURA 5-19. Mecanismo de accin de la citocromo oxidasa. a) Modelo que muestra el flujo de electrones a travs de cuatro centros redox
de la citocromo oxidasa. Se piensa que los electrones pasan uno cada vez desde el citocromo c al primer ion cobre (CUA) y luego al grupo hem
(Fea) del citocromo a, despus al centro redox binuclear que consta de un segundo ion hierro (del grupo hem del citocromo 113) y un ion cobre
(Cus), b) Mecanismo propuesto para la reduccin de O2 molecular para formar agua en el centro redox binuclear de la citocromo oxidasa, segn
se describe en el texto. Cuatro electrones en total ingresan al complejo hem a^-Cu^, uno a la vez, desde el grupo hem del citocromo a. Tam-
bin se han propuesto otras vas para el flujo de electrones, ( a: Segn M. W. Calhoun, }. W. Thomas y R. B. Gennis, Trends Biochem. Sci. 19:327, 1994;
b: segn un modelo propuesto pro G. T. Babcock y M. Wikstram en Nature 356:306, 1992; 1992 por Mncmillan Magazines Ltd. )
190 C A P T U L O S Respiracin aerobia y mitocondras
Mat ri z
Citoplasma
Matriz
un anlisis estructural de alta resolucin de todo el com-
plejo. De alguna manera, el paso de electrones a travs de
las partes del complejo citocromo oxidasa induce cambios
de conformacin como el ilustrado en la figura 5-20, que
causa que los protones se desplacen desde la matriz al inte-
rior del espacio intermembrana.
La transferencia de electrones del citocromo c al C> 2 ocu-
rre por un gran descenso del potencial redox (cuando monos
300 mV). Un descenso de cuatro electrones en este potencial
puede explicar la translocacin de hasta seis H+ a travs de
la membrana, adems de los cuatro protones derivados de la
matriz que se consumen en la conversin de 2 a agua. La
verdadera proporcin tal vez se aproxime ms a los cuatro
H+ bombeados p o r molcula d e Q - reducida, pero an es un
tema de considerable debate.2
H+
Ci toplasma
FIGURA 5-20. Esquema de un modelo que muestra cmo puede
actuar la citocromo oxidasa como bomba de protones operada por el
potencial redox. En la figura 5-19, a, se mostr que los electrones
pasan del citocromo c a travs de Cu^ al citocromo a . En el modelo
que aqu se muestra, la transferencia de un electrn al citocromo a se
acompaa de un protn que se une a un sitio sobre la enzima. C uando
el electrn se transfiere del citocromo a al centro redox binuclear del
citocromo 3-CuB, hay un cambio de conformacin que libera el pro-
tn en el otro lado de la membrana. Este movimiento de protones
ocurre en adicin a los protones retirados de la matriz que se emplean
para reducir O2. (Segn THE VIT AL FORC: A STUDY OF BIO-
ENERGETICS por F.M. Harold. 1986 por W.H. Freeman and Company.
Reimpreso con autorizacin.)
trones, formando un peroxianin O22~ (paso 5, fig. 5-19, b).
Para impedir su liberacin, el ion perxido reactivo se man-
tiene en su sitio como un puente entre los componentes con
carga positiva 13 y CUB. En el siguiente paso se transfiere un
tercer electrn al centro binuclear, que acepta un protn
procedente de la matriz y rompe el enlace covalente O-O
para reducir uno de los tomos O (paso 7, fig. 5-19, b). El
paso de un cuarto electrn y la entrada de tres protones
adicionales procedentes de la matriz (pasos 8-11, fig. 5-19, b)
conduce a la formacin de dos molculas de agua. Por cada
protn eliminado de la matriz queda detrs un exceso de
carga negativa (en forma de un OH~), y por lo tanto contribu-
ye directamente al gradiente inico a travs de la membra-
na mitocondrial interna. Algunos venenos respiratorios po-
tentes, incluyendo monxido de carbono (CO), acida (Na")
y cianuro (C N~), producen su efecto txico por enlace al si-
tio cataltico de la citocromo oxidasa. (El monxido de car-
bono tambin se enlaza al grupo hem de la hemoglobina.)
Adems de actuar como agente reductor de O, la cito-
cromo oxidasa es una bomba de protones. La determina-
cin del mecanismo para la translocacin de protones por
medio de la citocromo oxidasa, y de qu manera la transfe-
rencia de electrones realiza este proceso, todava esperan
5-4 Translocacin de protones
y establecimiento de una fuerza
motriz de protones
Ya hemos visto que la energa libre liberada en forma de
electrones pasa de NADHo de FADH2 al oxgeno molecu-
lar y se emplea para desplazar protones de la matriz al
espacio intermembrana. La translocacin de protones a tra-
vs de la membrana interna es electrgena (o sea, produce
voltaje), debido a que proviene de un mayor nmero de
cargas positivas en el espacio intermembrana y el citoplas-
ma, y un mayor nmero de cargas negativas dentro de la
matriz. Por lo tanto, se deben considerar dos componentes
en el gradiente de protones. Uno es la diferencia de concen-
tracin entre los iones hidrgeno a un lado de la membrana
en comparacin con el otro lado; ste es un gradiente de pH
(ApH). El otro componente es el voltaje (1/1) que resulta de la
separacin de cargas a travs de la membrana. Un gradien-
te con un componente de concentracin (qumico) y un com-
ponente elctrico (voltaje) es un gradiente electroqumico (pg.
190). La energa presente en ambos componentes del gra-
diente electroqumico de protones se puede combinar y
expresar como fuerza motriz de protones (Ap), que se mide
en milivoltos. Por lo tanto,
Ap = V - 2.3 RT/F ApH
Ya que 2.3 RT/F es igual a 59 mV a 25C, la ecuacin3 se
puede replantear como
2 Con el tiempo se dio gran importancia al nmero particular de
protones translocados por electrn transferido por molcula de ox-
geno reducida a agua por molcula de ATP sintetizada. Estas diferen-
tes proporciones son importantes para determinar el mecanismo pre-
ciso de sntesis de ATP, pero an hay gran desacuerdo respecto de las
verdaderas cifras. Para no aadir complejidad innecesaria a un tema
de por s complicado, tratamos de evitar el anlisis de las diferentes
proporciones. Las estimaciones actuales sugieren que se translocan
casi 10 protones por cada par de electrones que viajan desde el NA DH
al O2 y se utilizan tres protones en la sntesis de una molcula de ATP
por la ATP sintasa.
3 En otras palabras, una diferencia de pHde una unidad representa
una diferencia 10 veces mayor o menor en la concentracin de H+ a
travs de la membrana y equivale a una diferencia de potencial de 59
milivoltios, que es igual a una diferencia de energa libre de 1.37 kcal/
mol.
CAPITULO 5 Respiracin aerobia y initocondrias 191
7)j m
FIGURA 5-21. Visualizacin de la fuerza motriz de protones.
Micrografa por fluorescencia de una clula cultivada y teida con el
compuesto catinico fluorescente JC-1. Cuando la clula est activa,
el voltaj e generado a travs de la membrana mitocondrial interna
(interior negativo) produce acumulacin de la sustancia liposoluble
dentro de la miocondria y provoca fluorescencia de los organelos.
Con potenciales de membrana altos, JC-1 forma agregados que cam-
bian sus propiedades de fluorescencia. En el estado monomrico, el
colorante muestra fluorescencia verde, en tanto que en el estado agre-
gado muestra fluorescencia de color rojo. Se observa que la clula
contiene organelos fluorescentes de color naranj a y de color verde, lo
que sugiere la presencia de dos poblaciones diferentes de mitocon-
drias con distintos potenciales de membrana. (Cortesa de Lan Bo Chen.)
Ap = V - 59 ApH
donde ApH se expresa con valor negativo en tanto [H+] sea
mayor en el espacio intermembrana que en la matriz.
La contribucin del potencial elctrico a la fuerza mo-
triz de protones en comparacin con el gradiente de pH
depende de las propiedades de permeabilidad de la mem-
brana interna. Por ejemplo, si durante el transporte de elec-
trones el movimiento de protones hacia fuera se acompaa
de iones cloro con carga negativa, entonces el potencial
elctrico (i/;) se reduce sin afectar el gradiente de protones
(ApH). Mediciones efectuadas en diferentes laboratorios
fpg. 200) sugieren que una mitocondria que respira activa-
mente genera una fuerza motriz de protones de unos 220
mV a travs de su membrana interna. Se estima que en la
mitocondria de mamferos cerca de 80% de la energa libre
del Ap est representada por el componente de voltaje y el
otro 20% por la diferencia de concentracin de protones (cerca
de 0.5 cuando la diferencia de pH es de una unidad). Si la
fuerza motriz de protones fuera principalmente el gradiente
H+, todo el citoplasma sera muy cido, propiedad que pue-
de afectar la actividad de las enzimas citoplsmicas. La pre-
sencia de voltaje transmembrana se puede demostrar visual-
mente utilizando colorantes liposoubles con carga positiva
que se distribuyen a travs de la membrana en proporcin al
potencial elctrico (fig. 5-21).
Hace varios decenios se descubri que ciertos agentes,
sobre todo 2,4-dinitrofenol (DNF), eran capaces de desaco-
plar el proceso de oxidacin de la mucosa y la desfosforila-
cin del ATP. Cuando se trata a clulas con DNF siguen
oxidando sustratos pero ya no generan ATP. El frmaco
acta como desacoplador de la fosforilacin oxidativa por-
que vuelve permeable la membrana mitocondrial a protones.
Para mantener una fuerza motriz de protones, la membrana
mitocondrial interna debe ser muy impermeable a protones.
En caso contrario, el gradiente establecido por,el transporte
de electrones se disipa de inmediato por la difusin de
protones de regreso al interior de la matriz.
Los experimentos que conduj eron a aceptar la fuerza
motriz de protones como intermediario en la formacin de
ATP se analizan en La va experimental, al final del captulo.
5-5 Mecanismo para la formacin
de ATP
Ya vimos cmo el transporte de electrones genera un gra-
diente electroqumico de protones a travs de la membrana
mitocondrial interna; ahora podemos regresar al mecanis-
mo molecular que utiliza la energa almacenada en este
gradiente para la fosforilacin de ADP.
10 nm
K I G UR A 5-22. Mecanismo de la sntesis de ATP. Micrografa
electrnica de una pequea porcin de la mitocondria del corazn de
ternera secada al aire y teida en negativo. Con una amplificacin
aproximada de medio milln, se observan partculas esfricas unidas
por un pequeo tallo a la superficie de las crestas de la membrana
interna. (Segn Humberto Fcrnandez-Moran y cois. J. Cell Bol. 22.71,
1974, con permiso de Rockefeller University Press.)
A principios del decenio de 1970, Humberto Fernndez-
Morn, del Hospital General de Massachussetts, estaba exa-
minando mitocondrias aisladas por medio de la tcnica re-
cin desarrollada de tincin negativa, y descubri una capa
de esferas unidas al lado interno (lado de la matriz) de la
membrana interna que se proyectaban desde la membrana
y se unan a la misma por medio de tallos (fig. 5-22). Pocos
aos despus, Efraim Racker, de la Universidad Cornell,
aisl las esferas de la membrana externa, a las cuales llam
factor 1 de acoplamiento, o simplemente FI. Racker descu-
bri que las esferas FI se comportaban como una enzima
que hidroliza ATP, o sea una ATPasa. A primera vista este
parece ser un hallazgo muy peculiar. Por qu la mitocondria
debe poseer una enzima para hidrolizar a la sustancia que
se supone produce? Cuando se considera que la hidrlisis
del ATP es la reaccin inversa de su sntesis, puede ser ms
evidente la funcin de la esfera FI; sta contiene el sitio
cataltico en el cual ocurre normalmente la formacin de
ATP. Recordemos que
1. Las enzimas no afectan la constante de equilibrio de la
reaccin que catalizan.
2. Las enzimas pueden catalizar las reacciones en ambas
direcciones.
Por consiguiente, la direccin de una reaccin catalizada
por enzimas depende en todo momento de las condiciones
prevalecientes. Esto se demostr elegantemente en experi-
mentos con otras ATPasas, como la ATPasa de Na+-K+ de
la membrana plasmtica (pg. 149). Cuando se estudi esta
enzima en el captulo 4, se describi como una enzima que
aprovecha la energa obtenida en la hidrlisis del ATP para
exportar Na+ e importar K+ contra sus respectivos gradien-
tes. Esta es la nica funcin de la enzima en la clula. Sin
embargo, en condiciones experimentales esta enzima pue-
de catalizar la formacin de ATP en vez de su hidrlisis (fig.
5-23). Para lograr dichas condiciones se prepararon fantas-
mas de eritrocitos (pg. 139) con concentracin interna de
K+ y concentracin externa de Na+ muy elevadas, ms altas
de las que normalmente existen en la clula. En estas
condiciones, el K+ sale de la "clula" y el Na+ entra a la
misma. Ambos iones se mueven siguiendo sus respectivos
gradientes y no en contra de los mismos, como ocurre nor-
malmente en una clula viviente. Si dentro del fantasma
hay ADP y P, el movimiento de los iones produce sntesis
de ATP en vez de hidrlisis. Experimentos como ste ilus-
tran lo que sera de esperar con base en la reversibilidad
terica de las reacciones catalizadas por enzimas. Tambin
ilustran cmo se puede utilizar un gradiente inico para
efectuar una reaccin en la cual se fosforila ADP para for-
mar ATP, que es precisamente lo que ocurre en la mi-
tocondria. La fuerza empleada es la fuerza motriz de proto-
nes establecida por el transporte de electrones.
Estructura de la ATP sintasa
La esfera FI es la porcin cataltica de la enzima que sintetiza
ATP en la mitocondria, pero sta no es la historia completa.
La enzima sintetizadora de ATP (fig. 5-24), denominada
ATPasa de Na+-K+
FIGURA 5-23. Experimento para efectuar la sntesis de ATP en
vesculas de membrana reconstituidas con ATPasa de Na+-K+. Al
ocasionar en estas vesculas una concentracin interna muy elevada
de K+ y una concentracin externa muy elevada de Na+, la reaccin
tiene lugar en direccin opuesta a la que sigue en su curso normal
dentro de la membrana plasmtica. En este proceso se forma ATP a
partir de ADP y P. El tamao de las letras indica la direccin de los
gradientes de concentracin.
ATP-sintasa (o complejo V), se compone de dos elementos
principales: la pieza cabeza FI y una seccin basal, llamada
FQ , integrada a la membrana interna. Las dos porciones es-
tn conectadas por un estrecho tallo. Se estima que una
mitocondria tpica de hgado de mamfero posee regular-
mente 15 000 copias de ATP-sintasa. En la membrana plas-
mtica de bacterias aerobias, la membrana tilacoides de
clulas vegetales y la membrana interna de las mitocon-
drias se observan versiones homologas de la ATP-sintasa.
Puesto que la ATP-sintasa de la bacteria E. coli es la mejor
caracterizada, emplearemos esta versin particular como
centro del siguiente anlisis.
La pieza cabeza FI tiene un peso molecular de casi
360 000 daltons y contiene cinco polipptidos diferentes (fig.
5-24). En la enzima mitocondrial, los polipptidos homlo-
gos son codificados por el DNA nuclear, sintetizados en el
citoplasma e importados despus de la traduccin. La por-
cin FQ de la ATP-sintasa bacteriana consta de tres polipp-
tidos diferentes y se cree que uno de ellos (el polipptido b)
se proyecta afuera de la membrana para formar el tallo. En
clulas de mamfero, los homlogos mitocondriales de es-
tos tres polipptidos son codificados por DNA mitocon-
drial, en tanto que varios polipptidos adicionales no pre-
sentes en la enzima bacteriana son codificados por DNA
nuclear. En las mitocondrias, la pieza basal Foest integra-
da a la membrana mitocondrial interna y forma un canal a
travs del cual se conducen protones desde el espacio inter-
membrana al interior de la pieza cabeza FI.
La presencia de un canal en la pieza basal FO puede
apreciarse mejor en experimentos donde la membrana mito-
condrial interna se fragmenta y forma vesculas membrano-
sas llamadas partculas submitocondriales (fig. 5-25). Las par-
tculas submitocondriales intactas pueden oxidar sustratos,
generar un gradiente de protones y sintetizar ATP. Sin em-
bargo, si se eliminan las esferas FI de las partculas mediante
FIGURA 5-24. Estructura de la ATP sintasa. a) Micrografa electrnica de la enzima aisla-
da, b) Esquema de la ATP sintasa. La enzima consta de dos porciones principales: la pieza
cabeza FI, que consta de cinco subunidades diferentes en proporcin 3a:3/?:l<5:ly:l.e y la pie-
za basal FO, la cual se integra a la membrana y consta de tres subunidades diferentes en la
relacin la:2b:12c. Las subunidades b de FO se extienden hacia adentro de la pieza ceflica para
formar un tallo, (a: Segn J.W. Soper, G.L. Decker y P.L. Pederson, J. Biol. Chem. 254:11173, 1979.)
tratamiento con urea, la membrana de la vescula ya no puede
mantener un gradiente de protones a pesar de que contina
oxidando sustrato y transportando electrones. Los protones
translocados a travs de la membrana simplemente retor-
nan a travs de la ATP-sintasa "decapitada" y la energa se
disipa.
Mecanismo de la formacin de ATP
En la actualidad hay acuerdo prcticamente unnime acerca
de que el movimiento de electrones a lo largo de la cadena
respiratoria produce un gradiente de protones, y que el
movimiento de protones que cruzan de regreso la membra-
na a travs de la ATP-sintasa acta para conducir a la forma-
cin de ATP. El mecanismo para que esto ocurra es menos
claro. Una hiptesis formulada por Paul Boyer y sus cole-
gas, de la UCLA, contina ganando aceptacin. En la hip-
tesis de Boyer, el movimiento de protones a favor de un
gradiente electroqumico a travs de los canales en la base FO
y en la cabeza FI induce cambios de conformacin que alte-
ran la afinidad de la protena para ADP, P y ATP. Conside-
remos con mayor atencin esta hiptesis.
De ordinario se piensa en reacciones celulares que ocu-
rren en un medio acuoso en el cual la concentracin de agua
es 55 M, y los reactantes y productos simplemente estn
disueltos en el medio. En estas condiciones se requiere ener-
ga para formar enlaces covalentes que unan el ADP con
fosfato inorgnico para formar ATP. Sin embargo, se ha
demostrado que una vez que ADP y P se unen firmemente
en el sitio cataltico de la ATP-sintasa, los dos reactantes
enlazados se condensan con facilidad para formar una mo-
lcula de ATP enlazada sin ingreso de energa adicional. En
otras palabras, aunque la reaccin
ADP soluble + P soluble -> ATP soluble + H2O
puede requerir el ingreso de una cantidad considerable de
energa (7.3 kcal/mol en condiciones estndar), la reaccin
enzima-ADP enlazado + enzima-Pi enlazado ->
enzima-ATP enlazado + H2O
posee una constante de equilibrio cercana a 1 (AG = 0), y
por lo tanto puede ocurrir espontneamente sin el ingreso
de energa (pg. 83). Esto no significa que se pueda sinteti-
zar ATP a partir de ADP sin consumir energa; ms bien
indica que la energa se requiere para enlazar los sustratos
al sitio activo, para liberar el producto del sitio activo o para
ambos procesos, y no para la fosforilacin en s. Se cree que
este proceso ocurre de la siguiente manera.
Segn la hiptesis de Boyer de "cambio de enlace", cada
pieza cabeza FI contiene tres sitios catalticos (uno por ca-
da subunidad fi} que varan progresivamente a travs de
tres diferentes conformaciones, segn se refleja en su afini-
dad por nucletidos. Estas tres conformaciones pueden des-
cribirse corno la conformacin "apretada" o T, en la cual los
nucletidos (ADP + P o ATP) estn firmemente unidos; la
conformacin "laxa" o L, en la cual ADP y P estn laxamente
unidos; y la conformacin "abierta" u O, la cual debido a su
muy escasa afinidad por nucletidos se considera que est
vaca. Estos tres sitios se ilustran en el diagrama de la f igura
5-26. Los pasos descritos en seguida se refieren a hechos que
ocurren en el sitio cataltico, coloreado en rojo en esa figura.
Membrana externa
Matriz
Los sustratos se
oxidan y se forma ATP
ATP-
Los sustratos se oxidan
pero no se forma ATP
Vescula de Vescula de
membrana interna la membrana
Membrana interna
Partculas F
50 nm
Lneas de desdoblamiento
durante la sonicacin
Mitocondria
FIGURA 5-25. Formacin de ATP en experimentos con partculas submitocondriales. a) Micrografa
electrnica de partculas submitocondriales que son fragmentos de la membrana mitocondrial interna
convertidas en vesculas cerradas y con las esferas F] proyectndose hacia afuera en el centro, b) Esquema
de un experimento que muestra que las partculas submitocondriales intactas son capaces de oxidar el
sustrato y sintetizar ATP, en tanto que las partculas "decapitadas" son capaces de oxidar sustrato pero
incapaces de formar ATP. (a: Cortesa de Efraim Racker.)
En e) paso 1 de la figura 5-26, ADP y P se enlazan
laxamente al sitio cataltico en la conformacin L. A conti-
nuacin los protones se enlazan a la enzima en los sitios
alostricos que enfrentan el espacio intermembrana donde
la concentracin de H+ es alta. Una vez enlazados, los pro-
tones inducen cambios de conformacin que aumentan
la afinidad del sitio cataltico para ADP y P, provocando
que estos reactantes se unan con mucho mayor firmeza a la
enzima (esto se indica con los sustratos unidos a la confor-
macin T en el paso 2 de la figura 5-26). A continuacin los
reactantes se condensan en forma espontnea para formar
ATP, que permanece fuertemente enlazado al sitio activo en
la conformacin T (paso 3, fig. 5-26). En seguida, la enzima
sufre un cambio de conformacin que expone el sitio alost-
rico de enlace a protones al lado de la membrana correspon-
diente a la matriz, donde la concentracin de H+ es baja. La
disociacin de los protones de la enzima en la matriz cambia
la conformacin del sitio cataltico, disminuye su afinidad
por el ATP enlazado y se libera el producto dentro de la
matriz (paso 4, fig. 5-26). La reaccin total neta llevara a
la sntesis de ATP a expensas de los protones que se mue-
ven siguiendo su gradiente desde el espacio intermembra-
na hacia la matriz.
Se cree que los cambios de conformacin del sitio acti-
vo se acompaan de la rotacin de la pieza cabeza FI en
relacin con su tallo, llevando los sitios catalticos a posi-
ADP
Los protones
se enlazan a
las enzimas
F ormacin
espontnea
de ATP
Liberacin de
los protones
de la matriz
ATP O
FIGURA 5-26. Hiptesis de "cambio de enlace" como mecanismo por el cual el gradiente de protones efecta la sntesis de ATP. Los pasos
numerados se refieren a la secuencia de acontecimientos que ocurren en la subunidad de color rojo, segn se describe en el texto. Lo ms
importante es que el enlace de protones a la enzima en el lado citoplsmico de la membrana provoca un cambio de conformacin (desde el paso
1 hasta el 2), que da como resultado el eniace firme de ADP y de P en el sitio cataltico de la enzima. A continuacin, la formacin de ATP ocurre
de manera espontnea. La liberacin subsecuente de protones al interior de !a matriz causa un segundo cambio de conformacin (pasos 3 a 4)
que libera el ATP recin formado.
Citoplasma rp
ADR3" ^7ATP4-
\
Matriz
FIGURA 5-27. Empleo de la fuerza motriz de protones para des-
plazar ADP al interior de la matriz y ATP al espacio intermembrana
(y por lo tanto citoplsmico).
clones sucesivas para interactuar con los protones que vie-
nen a travs del canal F Q . Un trabajo publicado en 1994 acer-
ca de la estructura atmica de la porcin mayor de la pieza
cabeza F I de las mitocondrias del corazn de ternera su-
ministr fuerte apoyo a la hiptesis de cambio de enlace
as como a la proposicin de que la pieza cabeza gira sobre
su tallo.
Otras funciones para la fuerza motriz
de protones adems de la sntesis de ATP
Aunque la actividad ms importante de las mitocondrias
puede ser la produccin de ATP, estos organels participan
en muchas otras actividades que requieren ingreso de ener-
ga. A diferencia de la mayor parte de los organels que
dependen principalmente de la hidrlisis de ATP para obte-
ner la energa necesaria en sus actividades, las mitocondrias
dependen de una reserva alterna de energa: la fuerza mo-
triz de los protones. Por ejemplo, una investigacin de los
transportadores situados entre la membrana mitocondrial
interna revela varios ejemplos en los cuales el movimiento
de solutos es gobernado por la energa libre almacenada en
el gradiente inico a travs de esta membrana "energizada".
Un punto de discusin es la ADP-ATP tmnslocasa que trans-
porta ADP al interior de la matriz, donde sirve como reac-
tante para la sntesis de ATP, intercambindolo por ATP, el
cual se desplaza haca afuera de las mitocondrias. Las mol-
culas de ATP llevan una carga negativa extra en compara-
cin con sus contrapartes ADP (ATP4" en comparacin con
FIGURA 5-28. Resumen de las principales ac-
tividades que ocurren durante la respiracin aero-
bia en una mitocondria.
C02 C4
7I Ci c l o d e l c i d o
tric arb ox c o c 4
*^\opirvico
Espac i o . ,
inte rme mb rana
196 CAPTULO 5 Respiracin aerobia y mitocondrias
FIGURA 5.29. Importacin de protenas al interior de una mitocon-
dria. a) Micrografa electrnica c!e una mitocondria que importa prote-
nas precursoras mitocondriales in vitro. Los sitios por donde penetran las
protenas se revelan marcando las protenas con partculas de oro visibles
al microscopio electrnico. Las partculas se localizan en sitios donde las
membranas interna y externa estn en contacto, b) Pasos propuestos se-
guidos por una protena importada al interior de la matriz mitocondrial.
El polipptido se dirige a la mitocondria gracias a la secuencia orienta-
dora en el N-terminal, que finalmente es eliminado en la matriz. Hsp70
y mHsp70 son chaperones moleculares. El Hsp70 citoplsmico facilita el
desplegamiento del polipptido antes de penetrar a la mitocondria, en
tanto que el mHsp70 mantiene la protena importada en un estado de
plegamento laxo dentro de la matriz antes de transferirla al chapern
HspO donde ocurre el plegamiento. Hsp60 es una cmara de doble capa
cuya estructura y funcin son similares al GroEL bacteriano descrito en
la pgina 74. (a: Segn Martin Schwaiger, Volker Herzog y Walter Neupert,
J. Cell Biol. 105:243, 1987; con permiso de Rockefellcr Uniuersity Press.)
(a)
Secuencia
orientadora
1. Precursor de
protena desplegada
ATP
nir ^^
Precursor de ">"*"
proena {
mitocondriaL
ADP + P
2. La protena desplegada se
enlaza al receptor y pasa
a travs de ambas membranas
Protena
madura
4. La secuencia de orientacin
es eliminada
Hsp60
ADP + P; ATP
3,
13. La protena
se pliega y se
ensambla
Protena parcialmente
plegada
(b)
ADP3 ). Debido a esta carga negativa adicional, se cree que
el potencial elctrico a travs de la membrana interna (lado
exterior positivo) (f ig. 5-27) "tira" de las molculas de ATP
hacia af uera de la matriz. Un transportador separado de la
membrana interna capta el f osf ato junto con un protn y
suministra la energa para la reaccin. As pues, la f uerza
motriz de protones no slo se emplea para la formacin de
ATP, sino tambin para exportar el producto nucletido
f uera de la mitocondria e importar os reactantes al interior
de la matriz. Estas diferentes actividades se resumen en la
f igura 5-28; la mayor parte de ellas se relacionan de manera
directa o indirecta con la sntesis de ATP.
En otros ejemplos, la f uerza motriz de protones se pue-
de utilizar como f uente de energa para "tirar" de los iones
calcio hacia el interior de la mitocondria; para iniciar la reac-
cin transhidrogenasa que produce NADPH, que constitu-
ye el poder reductor de la clula (pg. 104); y para obligar a
poiipptidos especficos a penetrar a la mitocondria proce-
dentes de la matriz (esto se analiza posteriormente).
5-6 Importacin de las protenas
mitocondriales
Muchas de las protenas de la mitocondria se distinguen
por estar ensambladas a partir de poiipptidos sintetizados
en regiones totalmente diferentes de la clula, caracterstica
que confiere especial inters al estudio de la biognesis mi-
tocondrial. Los poiipptidos codificados por el genorna mito-
condrial y sintetizados en la matriz de la mitocondria son
introducidos a la membrana mitocondrial interna como parte
de protenas integrales de la membrana (f ig. 5-17). Los res-
tantes poiipptidos de la mitocondria son codificados por el
genoma nuclear y sintetizados en el citoplasma. Cmo pue-
de este ltimo grupo de poiipptidos encontrar su camino
dentro de las diferentes partes de la mitocondria? La va
mejor estudiada conduce del citoplasma a la matriz, el com-
partimiento mitocondrial ms interno.
Los poiipptidos importados a la matriz contienen un
segmento de 20 a 70 aminocidos adicionales a su N-termi~
nal que dirige la molcula hacia la matriz. Esta secuencia
orientadora contiene algunos aminocidos hidroxilados con
carga positiva que son la seal reconocida y enlazada por un
complejo receptor en la superficie externa mitocondrial. La
translocacin del polipptido desde el citoplasma al interior
de la matriz mitocondrial ocurre en sitios donde las mem-
branas mitocondriales externa e interna forman contactos
especializados (fig. 5-29, a). El movimiento a travs de la
membrana interna es gobernado por el potencial elctrico a
travs de la membrana que acta sobre la secuencia orienta-
dora con carga positiva; cuando se disipa el potencial aa-
diendo un desacoplador, la translocacin se interrumpe y el
polipptido permanece "atrapado" dentro de la membrana.
La evidencia indica que aunque una protena mito-
condrial puede suf rir plegamiento en el citoplasma, se des-
dobla como resultado de su asociacin a un chapern cito-
plsmico denominado Hsp70 (fig. 5-29, b). (El papel de los
chaperones se analiza en la pgina 71.) La protena desdo-
blada es liberada al receptor mitocondrial y entonces pasa a
travs de un poro situado en la membrana mitocondrial en
su estado extendido, desplegado. Una vez dentro de la ma-
triz, el segmento orientador N-terminal es eliminado por
una proteasa y el polipptido nteracta con nuevos chape-
rones moleculares (fig. 5-29, b) que facilitan el plegamiento
y ensamblado final.
La ruta que siguen las protenas destinadas a la mem-
brana interna y al espacio intermembrana est menos bien
definida. Algunos poiipptidos aparentemente penetran a
la matriz por la va ya mencionada y luego son exportados
de la matriz hacia la membrana interna o la atraviesan por
completo hacia el interior del espacio intermembrana. Otras
pueden pasar del citoplasma, a travs de la membrana ex-
terna, y dirigirse a su destino final. Como se hizo notar
antes, varias protenas de la membrana interna deben en-
samblarse a partir de poiipptidos sintetizados en la mito-
condria y el citoplasma. Los poiipptidos sintetizados en la
matriz mitocondrial tal vez sean elaborados por un meca-
nismo similar al que opera en el retculo endoplsmico ru-
goso (pg. 287). Los ribosomas mitocondriales se unen a la
superf icie interna de la membrana interna y el polipptido
naciente se transloca al interior de la membrana conforme
se sintetiza (o sea, cotranslacin).
5-7 Peroxisomas
En 1954, el examen con microscopio electrnico de las clu-
las de los tbulos renales revel una partcula con aparien-
cia granular densa de 0.5 a 1.0/im de dimetro, aproximada-
mente, enlazada a la membrana. Nada se saba acerca de la
funcin de esta estructura y se le denomin microcorpsculo.
Posteriormente se encontraron organelos similares en varias
clulas eucariotas. Conf orme se conoci ms acerca de su
f uncin se le dividi en dos tipos principales: peroxisomas,
presentes tanto en plantas como en animales, y glioxisomas,
que slo se observan en las plantas. Los microcorpsculos se
consideran en el presente captulo debido a que comparten
dos propiedades con las mitocondrias: participan en el me-
tabolismo oxidativo e importan sus protenas despus de
ser traducidas.
Los peroxisomas son vesculas simples rodeadas por
una membrana (fig. 5-30, a) y con frecuencia contienen un
ncleo cristalino denso consistente en una enzima oxidati-
va (fig. 6-25). Los peroxisomas son "fbricas" metablicas
muy verstiles, con enzimas que participan en actividades
tan diversas como oxidacin de cidos grasos de cadena
muy larga (AGCML, una de cuyas cadenas contiene ms
de 18 carbonos); sntesis heptica de colesterol y cidos bi-
liares; y sntesis de plasmalgenos, un tipo importante de
fosfolpidos del tejido cerebral, en los cuales un cido gra-
so se une al glicerol mediante una unin ter en vez de una
unin ster. La enzima luciferasa, que genera la luz emiti-
da por las lucirnagas, tambin es una enzima peroxis-
mica.
Estos organelos se denominaron "peroxisomas" debido
a que se encuentran en los sitios donde se f orma perxido de
hidrgeno (H2C>2), un agente oxidante txico y muy reacti-
vo. El perxido de hidrgeno se sintetiza por accin de va-
rias enzimas, incluyendo urato oxidasa, glucolato oxidasa y
aminocido oxidasas, que utilizan el oxgeno molecular para
2H?0
2^2
RH;
O x i d a s a Catalasa
H?0 2u2 2H,0
( b)
F I G U R A 5-30. Estructura y fun-
cin de los peroxisomas. a) Microgra-
f a electrnica de peroxisomas purif i-
cados, aislados por centrif ugacin a
travs de un gradiente de densidad
de sacarosa, b) Los peroxisomas con-
tienen enzimas que ef ectan la reduc-
cin del ox geno molecular en dos
pasos para f ormar agua. En el primer
paso, una oxidasa elimina electrones
de varios sustratos (RH2), como cido
rico o aminocidos. En el segundo
paso, la enzima catalasa convierte en
agua el perxido de hidrgeno f or-
mado en el primer paso, ( a: Segn Y.
Fujiki y cois., ]. Cell Biol. 93:305, 1982;
con permiso de Rockefeller University
Press.)
0.5 fim
L A V I A E X P E R I M E N T A L
Acoplamiento de oxidacin a fosforilacin
El vnculo entre oxidacin y f osf orilacin fue propuesto por
primera vez por el bioqumico ruso Vladimir Engelhardt, en
1932, quien observ que las clulas colocadas en condiciones
anaerobias rpidamente agotan sus reservas de ATP. Cuando
se restablecen las condiciones aerobias, el ATP se resintetiza
con rapidez.1 El acoplamiento de dos procesos biolgicos bsi-
cos; la oxidacin de sustratos y la f osf orilacin de ADP, se
convirti en una de las reas ms importantes y debatidas de
la investigacin en biologa celular. Una de las preguntas bsi-
cas que debe responderse es de qu manera se almacena la
energa liberada a lo largo de la cadena respiratoria como con-
secuencia del movimiento de electrones, de modo que pueda
aprovecharse para la sntesis de ATP.
La primera hiptesis importante para explicar el acopla-
miento de f osf orilacin a oxidacin se bas en la experiencia
obtenida de investigaciones acerca de reacciones acopladas a
energ a. En 1953, E.C. Slater propuso que la energ a liberada
por el transporte de electrones queda atrapada en un interme-
diario qumico de alta energa, el cual subsecuentemente se
emplea en una reaccin para f ormar ATP.2 En la f igura 3-27
se hizo notar que numerosos compuestos biolgicos tienen
potencial elevado para transferir f osf atos en comparacin con
ATP. Cualquier compuesto de este tipo puede servir para al-
macenar energa que subsecuentemente se utilice en a sntesis
de ATP transf iriendo un f osf ato al ADP. Esta es la esencia de
la f osf orilacin a nivel sustrato {pg. 102). La bsqueda del
intermediario qu mico de alta energa en la f osf orilacin oxi-
dativa ocup la actividad de un gran nmero de laboratorios
cuando menos durante 10 aos, pero no se descubri dicho
compuesto.
En 1961, Peter Mitchell, de la Universidad de Edinburgo,
propuso un mecanismo radicalmente dif erente para explicar
el acoplamiento de oxidacin a fosforilacin, al cual denomin
quimiosmosis. Casi todos los primeros investigadores en el
campo de la bioenergtica eran bioqumicos acostumbrados a
estudiar las reacciones que ocurren en un medio soluble, sea
en el tubo de ensaye o en la fase l quida de la clula. Pero se
haba demostrado que la f osf orilacin oxidativa estaba ntima-
mente relacionada con membranas celulares, ya f uese la mem-
brana interna de la mitocondria o la membrana plasmtica de
bacterias aerobias. Mitchell pens que la estructura de la mem-
brana deba ser un f actor clave en cualquier hiptesis para
explicar la f osf orilacin oxidativa. Las primeras investigacio-
nes de Mitchell acerca del transporte de membrana lo llevaron
a apreciar el hecho de que las sustancias (electrones, iones,
azcares u otros compuestos) se desplazaban en una direccin
especfica ( vectoralmente) de un lado de la membrana hacia el
otro. Algunos de los primeros trabajos de Mitchell que lo lle-
varon a considerar movimientos vectoriales como clave de la
f osf orilacin oxidativa f ueron revisados por R.N. Robertson.3
En la teora de la quimiosmosis, Mitchell propuso que el
movimiento de los electrones a lo largo de la cadena respirato-
oxidar sus respectivos sustratos (fig. 5-30, b). El HjOz gene-
rado en estas reacciones rpidamente se descompone por
accin de la enzima catalasa, presente en elevada concentra-
cin en estos organelos. Igual que en la mitocondria, las
protenas encontradas entre los peroxisomas se sintetizan
en el citoplasma y luego son importados al organelo des-
pus de su traduccin.
El otro tipo principal de microcorpsculos, los glioxiso-
mas, contienen algunas de las mismas enzimas encontradas
en los peroxisomas (como catalasa y enzimas para la oxida-
cin de cidos grasos), pero adems contienen otras enzi-
mas. Los glioxisomas son ms prominentes en las plantas
de semilla, que dependen de los cidos grasos almacenados
para obtener energa y materiales para iniciar la formacin
de una nueva planta (fig. 5-31). Una de las actividades meta-
blicas primaras en estas semillas germinantes es convertir
los cidos grasos almacenados en carbohidratos (gluconeo-
gnesis). El desdoblamiento de los cidos grasos almacena-
dos genera acetil-CoA, que puede condensarse con oxalace-
tato para formar citrato, el cual a su vez puede convertirse
en glucosa mediante una serie de enzimas localizadas en el
glioxisoma.
FIGURA 5-31. Localizacin del glioxisoma en semillas de planta.
Micrografa de luz de una seccin a travs de los cotiledones de se-
millas de algodn embebidas. Los glioxisomas, que se observan como
pequeas estructuras oscuras (flecha), son visibles gracias a un pro-
cedimiento citoqumico que tie la enzima catalasa. (Segn Kent D.
Chapman y Richard N. Trelease, J. Cell Biol. 115:998, 1991; con permiso
de Rockefeller University Press.)
ria da como resultado la translocacin de protones de un lado
de la membrana rnitocondrial interna al otro.4'5 Mitchell lleg
a esta conclusin luego de considerar la naturaleza de los por-
tadores de electrones (pg. 184). La cadena respiratoria est
constituida por dos tipos de portadores: unos que aceptan
protones y electrones y otros que slo pueden aceptar electro-
nes. En la hiptesis quimiosmtica, Mitchell recalc la impor-
tancia de la disposicin espacial de los diferentes portadores
entre la membrana transductora de energa. Sugiri que los
portadores que se enlazan a protones y electrones (corno las
flavoprotenas) podran estar en el lado interno de la membra-
na rnitocondrial de modo que pudieran eliminar protones de
la matriz. Para liberar estos protones en el otro lado, deben
pasar electrones a los portadores del lado externo de la mem-
brana que no aceptan protones (como los citocromos). Dada la
organizacin apropiada de los portadores dentro de la mem-
brana, se pueden pasar electrones a todo lo largo de la cadena
hasta llegar al oxgeno, en tanto que los protones simplemente
seran cambiados a travs de la membrana en una sola direc-
cin. El paso de un electrn desde un portador del lado inter-
no a uno del lado externo y su regreso al lado interno consti-
tuye una asa redox (fig. VE 5-2, a). Inicialmente, la hiptesis
Matriz
NADH NAD+ 2H+ 2H+ l/202 + 2H+ H20
2H+ 2H+
Cito p las ma
FIGURA VE 5-1. Modelo que muestra las tres asas
redox propuestas por Mitchell antes de 1970. En cada asa,
un portador que transloca tomos de hidrgeno capta un
par de protones en la superficie de la matriz. Cuando el
portador del tomo de hidrgeno pasa su carga a un por-
tador que slo acepta electrones (p. ej., citocromos y prote-
nas Fe-S), los protones se descargan en el espacio inter-
membrana (y el citoplasma). Por consiguiente, cada asa
transloca dos protones desde la matriz al interior del espa-
cio intermembrana. Z es un portador hipottico de hidr-
geno propuesto para mover protones, el cual permitira que
la citocromo oxidasa quedara como brazo transportador de
electrones de la tercera asa redox. (Segn THE VITAL FOR-
C: A STUDY OF BIOENERGETICS por KM. Harold.
1986 por W.H. Freeman and Company. Reimpreso con autoriza-
cin.)
200 CAPITULO 5 Respiracin aerobia y mitocondras
( a)
AH 2 + B
Bomba
con canal
W
F I G T ' R A VE 5-2. Modelos de asa ( a) y de bomba ( b) para translo-
cacin de protones. ( Segn Y. Kagawa, B iochim. B iop. Acta 505:76,
1978.)
quimiosmtica predijo la existencia de tres de tales asas, como
se muestra en la figura VE 5-1. En la primera asa, por ejemplo,
FMN2 porta un par de tomos de hidrgeno; los electrones
seran transferidos a una protena de hierro y azufre, en tanto
que los protones se descartan en el lado externo de la membra-
na (citoplsmico).
Segn la hiptesis quimiosmtica, el moviminto de proto-
nes a travs de la membrana conduce al establecmiento de un
gradiente electroqumico que representa el enlace de un inter-
mediario de alta energa, procedente de la oxidacin del sus-
trato, con la fosforilacin del ADP. Para mantener el gradiente,
Mitchel propuso que la membrana mitocondrial interna era
bastante impermeable a protones y tambin a otras especies
inicas. Al mismo tiempo, reconoci que, segn los tipos de
sistema de transporte dentro de la membrana, la translocacin
de protones podra establecer un gradiente de pH , un gradien-
te elctrico, o una combinacin de ambos (pg. 190).
Una buena hiptesis debe hacer predicciones especficas
que puedan probarse en forma experimental. La hiptesis
quimiosmtica hizo algunas predicciones que estimularon un
notable esfuerzo de investigacin en el campo de la bioenerg-
tica. Entre las predicciones de la hiptesis quimiosmtica se
incluyen las siguientes:
1. La oxidacin del sustrato y el subsecuente transporte de
electrones debe acompaarse de la liberacin de protones.
2 . Los portadores de electrones deben disponerse dentro de la
membrana interna para formar asas redox que capten pro-
tones en un lado de la membrana y los liberen en el otro
lado.
3. La membrana mitocondrial interna debe ser .muy imper-
meable a protones. Adems, agentes desacopladores, como
el dinitrofenol, pueden actuar haciendo la membrana ms
permeable a protones, suprimiendo el gradiente electroqu-
mico y por lo tanto suprimiendo la capacidad de los orga-
nelos para generar ATP.
4. Las mitocondrias que respiran activamente deben mostrar,
a travs de su membrana interna, un gradiente cuantifica-
ble de protones, un potencial elctrico, o ambas cosas.
5. La presencia de un gradiente electroqumico de protones a
travs de la membrana mitocondrial interna suministra la
energa requerida para la fosforilacin del ADP.
Consideremos brevemente algunos de los experimentos efec-
tuados que apoyaron o refutaron estas predicciones.
A mediados del decenio de 1960, una serie de experimen-
tos efectuados por Mitchel y Jennifer Moye utilizando varios
tipos de tcnicas de titulacin demostraron que la oxidacin
del sustrato por mitocondrias aisladas de hgado de rata se
acompaaba de la expulsin de protones.6'7 En estos experi-
mentos, las mitocondrias aisladas de hgado de rata se man-
tuvieron en condiciones anaerobias, lo cual desenergiza la
membrana mitocondrial. Cuando se inyect la suspensin de
mitocondrias mediante un pulso breve de solucin salina satu-
rada de C> 2, Mitchel y Moyle pudieron descubrir acidificacin
del medio. Cuando los electrones se suministraron por el sus-
trato /3-hidroxibutirato, que introduce electrones a la cadena
respiratoria por la va NADH , los clculos de titulacin sugi-
rieron que se liberaban seis H + en el medio por cada tomo de
O reducido por un par de electrones. Cuando se emple
succinato como sustrato, el cual transfiere electrones a FAD,
slo se generaron cuatro H + /O. La adicin de dinitrofenoi a la
preparacin mitocondrial inhibi la acidificacin del medio.
La hiptesis quimiosttica original predijo que los electro-
nes transportados del NADH al C> 2 atraviesan tres asas redox,
en tanto que los transportados de FADH 2 atraviesan dos asas
redox (fig. VE 5-1). Puesto que cada asa redox debe translocar
dos protones por cada par de electrones transportados, los
datos obtenidos por Mitchel y .Moyle para la expulsin de
protones se interpretaron como apoyo de la hiptesis. Otros
laboratorios efectuaron experimentos similares utilizando di-
ferentes tcnicas para medir a concentracin de protones y
con frecuencia obtuvieron cifras diferentes, desencadenando
una gran controversia acerca de la existencia de las asas redox
translocadoras de protones.
Mitchel y Moyle efectuaron experimentos subsecuentes
para medir hasta qu grado el gradiente electroqumico de
protones estaba representado por el gradiente de protones en
comparacin con la diferencia de potencial elctrico.8 La esti-
macin de la diferencia de potencial a travs de la membrana
se efectu midiendo la distribucin de iones potasio a travs
de la membrana mitocondrial en presencia de valinomicina,
un compuesto que deja la membrana libremente permeable a
iones K+. Cuanto mayor sea el voltaje a travs de la membrana
(interior negativo), mayor el nmero de iones K+ que fluye al
interior de la matriz como respuesta a la separacin de carga
antes de alcanzar el equilibrio. La diferencia de pH a travs de
la membrana mitocondrial se estim a partir de la potencia
amortiguadora de los compartimientos mitocondriales inter-
no y externo, y a partir del cambio de pH del medio que ocu-
rri cuando se destruy la membrana mitocondrial con de-
tergente. Empleando estas tcnicas, Mitchell y Moyle estima-
ron que la fuerza motriz total de protones era de casi 230 mV,
y que el principal componente estaba representado por el po-
tencial elctrico. Estos valores aproximados fueron confirma-
dos repetidamente.
Aunque Mitchell continu apoyando la existencia de asas
redox dentro de la cadena respiratoria,9-10 el consenso cambi
a bombas de protones como mecanismo primario para la forma-
cin de un gradiente electroqumico de protones. A diferencia
del asa redox, que requiere alternancia de transportadores de
protones y de transportadores de no protones dentro de la
membrana, una bomba de protones slo requiere la presencia
de una protena que pueda mover protones a travs de la
membrana en respuesta al flujo de electrones. Las bombas de
protones son como los otros tipos de transportadores de iones
(seccin 4-5) capaces de translocar iones como resultado de
cambios de conformacin que ocurren dentro de la protena,
segn se describi para la ATPasa de Na+-K+ en la pgina
150. En la figura VE 5-2 se presenta un perfil esquemtico de a
diferencia entre un asa redox y una bomba de protones. Es
importante observar que las asas y las bombas no son meca-
nismos mutuamente excluyentes. Es posible que algunos pro-
tones sean translocados como consecuencia de un asa redox y
otros por una bomba de protones.
La demostracin ms directa de la existencia de las bom-
bas de protones dentro de la cadena respiratoria proviene de
la investigacin de laboratorio de Marten Wikstrm, de la
Universidad de Helsinki, iniciada a principios del decenio de
1970. Wikstrm enfoc su atencin en la citocrorno oxidasa,
que segn la hiptesis quirniosttica original constituye el
miembro transportador de electrones de la tercera asa redox
(fig. VE 5-1). Puesto que la citocromo oxidasa consta de centros
redox (hem y iones cobre) que slo transportan electrones,
sera imposible, segn la hiptesis quirniosttica original, que
este componente de la cadena respiratoria translocara protones.
Pero Wikstrm y sus colegas demostraron que en realidad la
citocromo oxidasa desplaza protones a travs de la membrana,
tanto si se encuentra dentro de la membrana mitocondrial como
si se incorpora a vesculas artificiales.11'12 Para incorporar la
enzima a las vesculas se dispers citocromo oxidasa purifica-
da en un medio que contena fosfolpidos solubilizados con
detergente. Cuando se eliminaron las molculas del detergen-
te mediante dilisis, las vesculas formadas contenan citocro-
mo oxidasa integrada a la bicapa de lpidos. Cuando se aadi
citocromo c reducido a una preparacin de estas vesculas, se
transfirieron electrones de las molculas de citocromo c al Oj.
Si la citocromo oxidasa slo acta para transferir electrones, se
podra esperar que el entorno se alcalinice debido al consumo
de protones conforme se reduce el 2 para producir H2. En
vez de eso, el medio se volvi cido (fig. VE 5-3), lo que indica
expulsin de protones desde las vesculas. La tasa de acidifica-
cin es paralela a la tasa del flujo de electrones desde el cito-
cromo c hasta el C> 2 y fue suprimida por desacopladores, como
el dinitrofenol. Estos resultados suministran una fuerte prue-
ba de la capacidad inherente de la citocromo oxidasa para
translocar protones a travs de una membrana.
Mitchell no acept la conclusin de que la citocromoxidasa
era una bomba de protones, sino que ofreci una versin mo-
dificada del modelo quimiosmtico, en el cual el segundo com-
plejo poda transiocar protones por medio de un "ciclo Q", en
el cual las molculas de ubiquinona captan protones en un
lado de la membrana y los translocan al otro lado, donde los
liberan. Segn la proposicin revisada de Mitchell, la citocro-
mo oxidasa permanece como el miembro transportador de elec-
trones de la ltima asa redox (fig. VE 5-4). La operacin de un
ciclo Q que mueve protones a travs del complejo III ha recibido
considerable apoyo,.pero la demostracin de que la citocromo
oxidasa funciona como bomba de protones tambin es casi
indiscutible.
La caracterstica ms importante de la hiptesis quimios-
rntica propuesta por Mitchell en 1961 fue la idea de que la
energa liberada por el transporte de electrones se almacenaba
como un gradiente electroqumico de protones a travs de la
membrana interna. Hemos descrito algunos de los experimen-
tos que apoyan esta propuesta, en la actualidad aceptada casi
FIGURA VE 5-3. Expulsin de protones desde vesculas membranosas que contienen
citocromo c oxidasa. Las vesculas se suspendieron en 0.1 M de KC1 sin amortiguar.
Luego de cinco minutos de preincubacin se aadieron 10 f\e una suspensin del
donador de electrones ferrocitocromo c (o sea, citocromo c reducido) hasta lograr una
concentracin final de 2/M. La adicin de ferrocitocromo produjo una expulsin inicial
de protones, aumentando la acidez del medio. Esta expulsin fue contrarrestada por
agentes desacopladores. La cantidad de protones expulsados inicialmente excede la con-
centracin de citocromo oxidasa por casi dos rdenes de magnitud, lo que indica que los
protones expulsados se derivan del espacio acuoso interno de las vesculas y que la
funcin transportadora de protones de la citocromo oxidasa tal vez sea una propiedad
intrnseca del complejo. (Segn M.K.F. Wikstrom y H.T. Saari, Biochim. Biop. Acta 462:354,
1977.)
Ferrocitocromo
-H30 seg
p
Acido
1
^-^_T
3*-
H
7.12
7.13
7.14
7.15
7.16
7.17
202 CAPITULO 5 Respiracin aerobia y mitocondras
Matriz
NADH NAD+
2H'
Ci topl asma
FIGURA VE 5-4. Este modelo, propuesto por Mitchell a finales del decenio de 1960, introduj o a idea de un ciclo Q capaz de translocar cuatro
protones y prescindir de una tercera asa que implique citocromo oxidasa. El ciclo Q, cuyos detalles no se analizan, fue ampliamente adoptado
para explicar la translocacin de protones a travs de la porcin ubiquinona-complejo III de la cadena respiratoria. (Segn THE VITAL FORC:
A STUDY OF BIOENERGETICS por FM. Harold. 1986 por W.H. Freetnan and Company. Reimpreso con autorizacin.)
por toda la comunidad cientfica; los restantes argumentos se
relacionan con detalles del mecanismo para generar y utilizar
el gradiente. Antes de abandonar el tema de la quimiosmosis,
es digno mencionar un par de experimentos clave que esta-
blecieron que el gradiente de protones generado por el trans-
porte de electrones pueda efectuar la sntesis de ATP.
Segn la hiptesis quimiosmtka, el gradiente electroqu-
mico de protones constituye por s mismo un estado de alta
energa capaz de efectuar la fosforilacin del ATP. Si esta in-
terpretacin es correcta, entonces el establecimiento de dicho
gradiente por medios artificiales, o sea, transporte no relacio-
nado con electrones, tambin debe servir como fuerza impul-
sora para la formacin de ATP. Esta prediccin fue probada en
1966 en un ingenioso experimento efectuado por Andre
Jagendorf y Ernest Uribe, de la Johns Hopkins University (fig.
VE 5-5).i3
Como se analiza en el siguiente captulo, los cloroplastos
generan ATP mediante un proceso denominado fotofosfori-
lacin, que utiliza el mismo mecanismo bsico que gobierna la
fosforilacin oxidativa en las mitocondrias. Por lo tanto, la hi-
ptesis quimiosmtica tambin se aplica a cloroplastos (y a la
membrana plasmtica de bacterias aerobias), igual que a las
T ran sf e re n c ia
d e cloroplastos
tratad os c on
-- *^
(pH J7)
f *
60 segund os
de incubacin
*-
IIIJIP
Cl oropl ast os
d e espinaca
re c i n aislad os
_ _ _ Amortiguad or pH .4.0
jriHfek
(^9p
V^J7
c i d o al tubo
que contiene
amortiguad or
a pH 8.0
Amortiguad or
p H4. 0
j
Amortiguad or
p HS . O
+ ADP + 32P04
+ MeClo *'&x-"
32P~ATP *
FIGURA VE 5-5. Produccin de ATP en
cloroplastos aislados mediante el estableci-
miento de un gradiente artificial de pH.
Cl oropl ast os
ah ora con pH 4
CUADRO VE 5-1. Cintica de la disminucin alcalina
y la fosforilacin del ADP
Rendimiento de ATP en el tiempo (seg)
Reaccin 30 60
Disminucin de pH 8 41
ADP + P - ATP 3
7 1.7 1.1
27 48 47
0.4
42 47
FUENTE: A. Jagendorf y E. Uribe, Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 55:
173,1966.
CUADRO VE 5-1. El ATP se expresa en nmol/mg de clorofila. La
disminucin de la alcalinidad (rengln 1) se midi inyectando los
cloropiastos cidos en un medio amortiguado a pH 8 y esperando
luego el nmero indicado de segundos antes de aadir ADP, Mg2+,
y fosfato marcado con 32P, seguido por un lapso de 15 segundos es-
tndar con estos reactivos antes de interrumpir la reaccin por adicin
de cido tricloractico. E segundo rengln muestra e! tiempo de fos-
forilacin determinado inyectando cloropiastos acidificados en toda
la mezcla de reaccin de fosforiiacin y esperando el nmero indicado
de segundos antes de interrumpir la reaccin con cido tricarboxlico.
En el rengln de arriba es evidente que cuanto ms larga sea la espera
antes de aadir los cloropiastos, menor ser el ATP sintetizado, debi-
do a que el gradiente de pH se disipa. En el segundo rengln, la
cantidad de ATP sintetizada aumenta conforme el tiempo de incuba-
cin de la mezcla de reaccin con el istopo marcado aumenta hasta
un punto cercano a seis segundos, cuando ya no se observ incremen-
to adicional debido, una vez ms, a que el gradiente de pH se disipa
durante el periodo de sntesis de ATP.
mitocondrias. Jagendorf demostr desde el principio que la
iluminacin de cloropiastos aislados genera un gradiente de
protones a travs de las membranas del cloroplasto, de modo
que el lado interno es cido en relacin con el externo. Para
establecer un gradiente "artificial" a travs de las membranas
del cloroplasto, Jagendorf y Uribe prepararon cloropiastos ais-
lados de clulas de espinaca y los suspendieron en la oscuridad
en un tubo que contena un amortiguador a pH 4 durante casi
60 segundos {ftg. VE 5-5), tiempo requerido para que los
protones del medio crucen la membrana del cloroplasto de
modo que desciendan el pH dentro de dicho compartimiento.
Luego que el pH de los compartimientos internos del cloro-
plasto descendi a 4 aproximadamente, se inyectaron en ia
oscuridad los cloropiastos acidificados dentro de un segundo
tubo que contena un medio amortiguado a pH 8 junto con las
sustancias necesarias para sintetizar ATP radiactivo. La trans-
ferencia de los cloropiastos al amortiguador alcalino gener un
gradiente transitorio de H+ 10 000 veces mayor (10~8 M [H+]
en comparacin con 10~4 M [H+]) a travs de las membranas
internas del cloroplasto. Unos cuantos segundos despus de a
transferencia se pudo descubrir ATP recien sintetizado (lnea 2,
cuadro VE 5-1). Los resultados indican que un gradiente de pH,
por s mismo, puede efectuar la fosforilacin del ADP.
En 1974, Efraim Racker y Walter Stoeckenius14 efectuaron
un segundo experimento ingenioso que ilustr la potencia
de un gradiente de protones para formar ATP. Recordemos de
la pgina 150, captulo 4, que las bacterias prpura del gnero
Hdobacterium poseen una protena denominada bacteriorrodop-
sina, la cual acta como bomba de protones operada por luz.
Cuando se incorpora bacteriorrodopsina en vesculas artificia-
les de fosfolpidos, esta protena establece un gradiente de
protones a travs de a membrana vesicular despus de ser
iluminada. Si se prepararon vesculas artificiales que conte-
nan tanto bacteriorrodopsina como ATP-sintasa mitocondrial
purificada, la iluminacin de las vesculas en presencia de ADP
y P se acompaa de la sntesis de ATP. Claramente, el gra-
diente de protones generado por una bomba bacteriana opera-
da por luz fue capaz de efectuar la fosforilacin del ADP utili-
zando la maquinaria enzimtica de la mitocondria.
Los resultados de estos dos ltimos experimentos son
importantes por muchas razones. No slo demostraron que
un gradiente electroqumico puede suministrar energa Ubre
para formar ATP, sino tambin indican qu transporte de elec-
trones y sntesis de ATP no necesitan estar directamente acopla-
dos. En estos experimentos no hubo transporte alguno de elec-
trones; por lo tanto, se puede concluir que la fosforilacin puede
ocurrir independientemente del transporte de electrones. En
condiciones normales, el transporte de electrones genera un
estado de alta energa empleado para la fosforilacin, pero no
hay condiciones particulares para que ese estado de alta ener-
ga no pueda satisfacerse con un gradiente generado de otra
manera.
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204 CAPITULO 5 * Respiracin aerobia y mitocondrias
SINOPSIS
Las mitocondrias son grandes organelos constituidos por una
membrana porosa externa y una membrana interna altamen-
te permeable y plegada (cresta) que contiene gran parte del
mecanismo requerido para la respiracin aerobia. La porosi-
dad de la membrana externa es resultado de la presencia de
protenas integrales denominadas porinas. La arquitectura
de la membrana interna y la aparente fluidez de su bicapa
facilitan la interaccin de los componentes requeridos durante
el transporte de electrones y la formacin de ATP. La membra-
na interna rodea una matriz parecida a un gel que contiene,
adems de protenas, un sistema gentico que incluye DNA,
RNA, ribosomas y todos los mecanismos necesarios para trans-
cribir y traducir informacin gentica. Muchas de las propieda-
des de la mitocondria se pueden explicar al asumir que evolu-
cionaron a partir de antiguas bacterias simbiticas (p. 172).
La mitocondria es el centro del metabolismo oxidativo de
la clula que convierte los productos del catabolismo de
carbohidratos, grasas y protenas en energa qumica alma-
cenada en ATP. Piruvato y NADH son los dos productos de
la gluclisis. El piruvato es transportado a travs de la mem-
brana mitocondrial interna, donde sufre descarboxacin y
se combina con la coenzima A para formar acetil-CoA, que se
condensa con oxalacetato para formar citrato, el cual ingresa
al ciclo del cido tricarboxlico. Conforme el citrato sufre las
reacciones del ciclo del cido tricarboxlico, dos de sus car-
bonos son eliminados y liberados en forma de C2, que re-
presenta el estado ms altamente oxidado de los tomos de
carbono. Los electrones eliminados de los sustratos se trans-
fieren a FAD y NAD+ para formar FADH2 y NADH. Los
cidos se descomponen en acetil-CoA, que ingresa al ciclo
del cido tricarboxlico, y todos los 20 aminocidos se desdo-
blan para piruvato, acetil-CoA o intermediarios del ciclo del
cido tricarboxlico. Por lo tanto, dicho ciclo es el camino en
el cual convergen las principales vas metabcas de la clula
(p. 175).
Los electrones transferidos desde los sustratos a FADH2 y
NADH siguen a lo largo de una cadena portadora de electro-
nes hacia O^ liberando energa que se emplea para generar
un gradiente electroqumico a travs de la membrana mito-
condrial interna. El movimiento controlado de protones que
regresan a travs de la membrana por medio de una enzima
sintetizadora de ATP se emplea para la formacin de ATP en
el sitio cataltico de la enzima. Cada par de electrones de NADH
libera suficiente energa para formar casi tres ATP, en tanto
que la energa liberada de un par electrones de FADH2 explica
la formacin de casi dos ATP (p. 179).
La cantidad de energa liberada en forma de electrones se
transfiere de un donador (agente reductor) a un aceptor (agen-
te oxidante) y puede calcularse a partir de la diferencia del
potencial redox entre dos pares. El potencial redox estndar
de un par se mide en condiciones estndar y se compara con el
par F2-H+. El potencial redox estndar del par NADH-NAD+
es -0.32 V, que refleja el hecho de que NADH es un agente
reductor fuerte, o sea, uno que transfiere con rapidez sus elec-
trones. El potencial redox estndar del par H2O/O2 es +0.82
V, que refleja el hecho de que O2 es un fuerte agente oxidante,
o sea, uno que tiene gran afinidad por electrones. La diferencia
entre estos dos pares, equivalente a 1.14 V, proporciona una
medida de la energa libre liberada (52.6 kcal/mol) cuando un
par de electrones pasa del NADH a lo largo de toda la cadena
transportadora de electrones hasta el 2 (p- 181).
La cadena transportadora de electrones contiene cuatro tipos
diferentes de transportadores: citocromos que contienen hem,
flavoprotenas que contienen nucletidos con flavina, pro-
tenas de hierro y azufre, y quinonas. Flavoprotenas y
quinonas pueden aceptar y donar tomos de hidrogeno, en
tanto que citocromos y protenas de hierro y azufre slo acep-
tan y donan electrones. Los portadores de la cadena de trans-
porte de electrones estn dispuestos espacialmente en orden
decreciente de potencial redox. Los diferentes transportadores
se organizan en cuatro grandes complejos de multiprotenas.
Citocromo c y ubiquinonas son portadores movibles que inter-
cambian electrones entre los complejos ms grandes. Confor-
me los pares de electrones pasan a travs de los complejos I, III
y IV, se transloca un nmero especfico de protones desde la
matriz a travs de la membrana al interior del espacio inter-
membrana. La translocacin de protones por estos complejos
transportadores de electrones establece el gradiente de proto-
nes en el cual se almacena la energa. El ltimo de los comple-
jos es la citocromo oxidasa, que transfiere electrones desde el
citocromo c al Q y lo reduce para formar agua, un paso que
tambin elimina protones de la matriz y contribuye al gradien-
te de protones (p. 184).
La translocacin de protones genera separacin de cargas a
travs de la membrana, adems de una diferencia en la con-
centracin de protones. Por consiguiente, el gradiente de pro-
tones tiene dos componentes: un gradiente de voltaje y uno de
pH; la magnitud de stos depende del movimiento de otros
iones a travs de la membrana. Los dos componentes j untos
constituyen una fuerza motriz de protones {Ap). En mitocon-
drias de mamferos se estima que casi 80% de la energa libre
de la Ap est representada por el gradiente de voltaje, y 20%
por el gradiente de pH (p. 185).
La enzima que cataliza la formacin de ATP es un complejo
grande de mltiples protenas denominado ATP sintasa que
contiene dos partes diferentes: una pieza cabeza FI que se
proyecta al interior de la matriz e incluye un sitio cataltico,
y una pieza basal FQ integrada a la bicapa de lpidos y que
forma un canal a travs del cual se conducen protones desde
el espacio intermemhrana hasta la enzima. Se cree que el
movimiento controlado de protones a travs de la ATP sintasa
induce cambios de conformacin para la formacin de ATP.
La hiptesis aceptada en la actualidad propone que cada uno
de los tres sitios catalticos de la porcin FI de la enzima se
encuentra en estados de conformacin diferentes, designados
firme, laxo y abierto. Cada sitio se mueve de una conforma-
cin a la siguiente en respuesta a la unin y liberacin de
protones. Las pruebas indican que el paso que requiere ener-
ga no es en realidad la fosforilacin del ADP, sino la unin de
nucletidos al sitio activo, la liberacin del sitio activo del ATP
producido, o ambos. Se cree que los cambios de conformacin
son gobernados por el movimiento de protones a travs de la
enzima y estos pasos se efectan mediante cambios de afini-
dad del sitio activo hacia los nucletidos. Adems de la forma-
cin de ATP, la fuerza motriz de protones tambin suministra
la energa necesaria para algunas actividades de transporte,
incluyendo captacin de ADP en la mitocondria durante los
cambios para liberar ATP del citoplasma, captacin de iones
fosfato y calcio, e importacin de protenas mitocondriales
( p. 291).
Las protenas que constituyen una mitocondria pueden ser:
1) codificadas en el DNA mitocondrial y sintetizadas en el
organeio, o 2) sintetizadas en el citoplasma e importadas
al organelo luego de la traduccin. Las protenas mitocon-
driales sintetizadas en el citoplasma contienen una secuencia
orientadora con carga positiva en su N-terminal, que provoca
la unin del polipptido con su receptor en la superficie exter-
na de la mitocondria; esto da lugar al transporte del polipp-
tido a travs de la membrana mitocondrial hacia el interior de
la matriz. La importacin puede auxiliarse mediante chapero-
nes situados tanto en el citoplasma como en la matriz micon-
drial ( p. 197).
PREGUNTAS DE REPASO
1. Describir los cambios en el metabolismo oxidativo que de-
bieron haber acompaado a la evolucin y el xito de las
cianobacterias.
2. Comparar las propiedades de las membranas mitocondria-
les interna y externa; e! espacio intermembrana y la matriz.
3. Cmo se conectan los productos de la gluclisis a las
reacciones del ciclo del cido tricarboxlico?
4. Por qu se considera el ciclo del cido tricarboxlico como
la va central del metabolismo energtico de una clula?
5. Describir el mecanismo mediante el cual el NADH produ-
cido por gluclisis puede ingresar electrones al ciclo del
cido tricarboxlico.
6. Describir de qu manera el transporte de electrones a lo
largo de la cadena respiratoria establece un gradiente de
protones.
7. Cules son algunas de las principales actividades de los
peroxisomas? Cul es el papel de la catalasa en esas acti-
vidades?
8. Cmo algunas protenas, como las enzimas del ciclo del
cido tricarboxlico, pueden llegar a a matriz mitocondrial?
9. Observar la figura 5-12 y describir en qu son similares los
estados semiquinona de la ubiquinona y la FMN.
10. Qu debe entenderse por centro binuclear de la citocromo
oxidasa? Corno funciona en la reduccin de C> 2?
11. Cules son las dos maneras diferentes en que contribuye
la citocromo oxidasa al gradiente de protones?
12. En qu difiere el transporte de electrones de uno de los
grandes complejos de la cadena transportadora de electro-
nes del transporte de electrones entre los complejos?
13. Por qu la transferencia de algunos electrones da como
resultado mayor liberacin de energa en comparacin con
otros tipos de transferencia?
14. Cules son los dos componentes de la fuerza motriz de
protones y cmo pueden sus contribuciones relativas va-
riar de una clula a otra?
15. Cul es el efecto del dinitrofenol sobre la sntesis de ATP
en la mitocondria? Qu es lo que ocurre? Cmo se vincu-
la el gradiente de protones a la sntesis de ATP?
16. Describir la estructura bsica de la ATP-sintasa y el meca-
nismo para sintetizar ATP.
PREGUNTAS ANALTICAS
1. Considerar la reaccin A:H + B =B:H + A. Si en el equi-
librio la proporcin [B:H]/[B] es igual a 2.0, se puede con-
cluir que: 1) B:H es el agente reductor ms fuerte de los
cuatro compuestos; 2) el par {A:H, A) tiene el potencial
redox ms negativo en comparacin con el par (B:H, B); 3)
ninguno de los cuatro compuestos son citocromos; 4) los
electrones relacionados con B son de ms alta energa que
los relacionados con A. Cules de las afirmaciones pre-
vias son ciertas? Dibujar la reaccin en uno de los sentidos
de esta reaccin redox.
2. La vescula membranosa de una partcula submitocondrial,
luego de eliminar las esferas Fj, sera capaz de: 1) oxidar
NADH; 2) producir HÔ a partir de Oa; 3) generar un gra-
diente de protones; 4) fosforilar ADP. Cules de las afir-
maciones previas son ciertas? En qu seran diferentes
estas respuestas, si es que hay alguna diferencia, si los
objetos estudiados fueran partculas submitocondriales
intactas tratadas con dinitrofenol?
3. La protena A es una flavoprotena con potencial redox de
-0.2 V. La protena B es un citocromo con potencial redox
de +0.1 V.
a. Dibujar las reacciones en ambos sentidos para cada uno
de los dos portadores de electrones.
b. Escribir la reaccin que ocurrira si se aadieran a la
mezcla molculas A reducidas y molculas B oxidadas.
c. Cul de los dos compuestos en la reaccin de la parte b
estara presente en concentracin ms alta cuando la
reaccin alcanzara el equilibrio?
4. De las siguientes sustancias: ubiquinona, citocromo c,
NAD+, NADH, C> 2, H2O, cul es el agente reductor ms
fuerte?; cul es el agente oxidante ms fuerte?; cul tiene
mayor afinidad por electrones?
5. Si se determina que la membrana mitocondrial interna es
libremente permeable a iones cloro, qu efecto tendra
esto sobre la fuerza motriz de protones a travs de la mem-
brana mitocondrial interna?
6. Observar el descenso de energa durante el transporte de
electrones mostrado en la figura 5-14. Ese perfil sera dife-
rente si el donador original de electrones fuera FAD2 en
vez de NADH?
7. Sera de esperar que la importacin de sustancias como
ADP o P disminuyera la fuerza motriz de protones? Por
qu?
8. En los potenciales redox estndar del cuadro 5-1, el par
oxalacetato-malato es menos negativo que el par NAD+-
NADH. Cmo pueden ser estos valores compatibles con
la transferencia de electrones de malato a NAD+ en el ciclo
del cido tricarboxlico?
9. Cuntos fosfatos de alta energa se forman mediante
fosforilacin a nivel de sustrato durante cada vuelta del
ciclo del cido tricarboxlico {considerar slo reacciones de
este ciclo)? Cuntos se forman como resultado de la fosfo-
rilacin oxidativa? Cuntas molculas de CC> 2 se liberan?
Cuntas molculas de FAD se reducen? Cuntos pares
de electrones se extraen de los sustratos?
10. Los protones se mueven en ambas direcciones a travs de
la membrana mitocondrial interna. Se mueven en una di-
reccin corno resultado del transporte de electrones. Cul
es la causa de que se muevan en la direccin opuesta?
11. El descenso en AG' de un par de electrones es -52.6 kcal/
mol y la AG' de la formacin de ATP es +7.3 kcal/mol. Si
se forman tres ATP por cada par de electrones eliminados
de un sustrato, se puede concluir que la fosforilacin oxi-
dativa es de 21.9/52.6, o 42% eficiente? Por qu s o por
qu no? (No basta afirmar que la clula no opera en condi-
ciones estndar.)
12. Es de esperar que mitocondrias aisladas, metablicamen-
te activas., acidifiquen o alcalinicen el medio en el cual es-
tn suspendidas? Sera la respuesta diferente si estuviera
trabajando con partculas submitocondriales en vez de
mitocondrias? Por qu?
13. A veces se requiere el movimiento de tres protones para la
sntesis de una molcula de ATP (fig. 5-28). Calcular
la energa liberada por el paso de protones al interior de la
matriz (vase pgina 191 para informacin).
14. Por qu sera de esperar que el movimiento de protones al
interior del espacio intermembrana tuviera efecto sobre las
enzimas del citoplasma?
15. Calcular la energa libre liberada cuando FADH/z se oxida
mediante 2 molecular en condiciones estndar.
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