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UNIVERSIDAD AUTONOMA CHAPINGO

DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA
ACADEMIA DE FISIOLOGIA VEGETAL


Prctica No. 6: EL TRANSPORTE DE ELECTRONES Y EL EFECTO DE ALGUNOS
HERBICIDAS.

Introduccin.

El problema del papel de la luz en la fotosntesis ha conducido en los ltimos aos a la
postulacin de un modelo del que se conocen varios de sus componentes, de otros se
supone su existencia y de algunos ms no se conoce nada. Este modelo puede
resumirse en la Figura 1.

De acuerdo a este modelo, la luz proporciona la energa necesaria para que los
electrones de la clorofila a 680 del fotosistema II sean transportados a travs de una
serie de acarreadores (Q, plastoquinona, citocromo b, plastocianina y citocromo f) hasta
la clorofila a 700 del fotosistema I, quien a su vez, al ser excitado por la luz, ocasiona un
nuevo transporte de los electrones hasta el NADP para formar NADPH+H +. Como
sabemos, los electrones perdidos por la clorofila del fotosistema II son recuperados
mediante la ruptura del agua (fotlisis).

En resumen, durante la fase fotoqumica de la fotosntesis se produce un transporte de
electrones desde la molcula de agua hasta el NADP, siendo la luz quien proporciona la
energa necesaria para llevar a cabo este proceso. Ahora bien, Cmo podemos
detectar este transporte de electrones?. En Inglaterra, en 1939, Robert Hill se plante la
misma pregunta y para contestarla razon aproximadamente de la siguiente forma:
"Durante el transporte de electrones stos son donados y recibidos por substancias
naturales encargadas de hacerlo. Ahora, si nosotros introducimos artificialmente una
sustancia que recibe electrones y que al hacerlo, cambie de color, podemos detectar
este transporte. As, con substancias como el azul de Metileno, se pudo comprobar que
al estar en presencia de cloroplastos aislados y en presencia de luz, el azul de metileno
cambiaba de azul a incoloro, lo que indicaba que haba recibido un electrn. Cuando no
haba luz no haba excitacin de los electrones de la clorofila y el azul de metileno no
cambiaba.

Un efecto semejante al del azul de metileno se consigue con otro colorante llamado
DCPIP (Diclorofenolindolfenol). En la figura 1 se muestra el sitio aproximado donde el
DCPIP se "roba" los electrones interrumpiendo el transporte. El DCPIP es azul, cuando
recibe un electrn se vuelve incoloro.
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Pero, qu tiene que ver lo anterior con algunos herbicidas? Pues, como se podr
comprender la presencia de substancias que interrumpan el transporte de electrones
impedirn (dependiendo del caso): la formacin de ATP, la formacin de NADPH+H +,
la ruptura de la molcula de agua, etc., ocasionando trastornos que llevarn a la planta,
tarde o temprano, a la muerte. De esta manera se han diseado substancias que al
asperjarse sobre la planta, interrumpen el flujo de electrones en cualquiera de las
siguientes formas.

1. Inhibidores del transporte de electrones. En este caso el compuesto acta mediante
la inactivacin de uno o ms acarreadores de electrones. De los herbicidas de este tipo,
uno de los ms conocidos es el Diurn.

2. Agentes que impiden la formacin de ATP. Dentro de este grupo los compuestos
pueden actuar; separando el transporte de electrones de la fotofosforilacin (es decir,
contina el transporte de electrones pero no se forma ATP y la energa se desperdicia
en forma de calor) impidiendo directamente la formacin de ATP, o un tercer caso,
haciendo ambas cosas a la vez. Dentro de los compuestos que actan de la manera
anterior tenemos: perfluidone, dinoseb, v-fenilcarbamatos, acylanilidas, imidazolesy
benzimidoles substituidos, benzonitrilos substituidos y pyriclor, entre otros. La letra B en
la Figura 1 seala el sitio donde actan estas substancias.

3. Aceptores de electrones. Estos compuestos compiten con algunos compuestos de la
cadena transportadora de electrones y los reciben en su lugar, por lo que se reducen.
Dentro de estos compuestos tenemos Diquat y Paraquat. Sus sitios de accin se
sealan por la letra C en la Figura 1.

Ntese que si agregamos a los cloroplastos una solucin de DCPIP y de Diurn (que
acta en A), el DCPIP (que acta despus del Diurn) permanecer azul aun en
presencia de luz, pues los electrones excitados son "robados" por el Diurn antes de
llegar al DCPIP.

Objetivos.
a) Detectar mediante el cambio de color del DCPIP la importancia de la luz para iniciar
el flujo de electrones.
b) Detectar que la presencia del herbicida Diurn interrumpe el flujo de electrones.

Materiales y Mtodos.
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Aislamiento de los Cloroplastos.
5 gr. de hojas de espinacas
1 mortero
1 centrfuga
4 tubos de centrfuga
2 tubos de ensaye
1 embudo
1 pedazo de gasa
Hielo en una bandeja
Buffer fosfato pH 6.5 (fro)
Sacarosa 0.5 M (fro)



Procedimiento:

a) Muela en un mortero 5 g de hojas con 30 mL de sacarosa 0.5 M.
b) Filtre con la gasa para quitar los restos ms grandes.
c) Centrifugue la solucin a 2500 rpm durante 10 minutos y deseche el sobrenadante (los
cloroplastos estn en el fondo).
d) Resuspenda el precipitado o residuo con los cloroplastos con 10 mL de buffer fosfato
fro. Coloque los tubos con los cloroplastos en hielo hasta que los use en el siguiente
paso. (Si tiene 2 tubos ms de cloroplastos rena todo en uno solo).


Para determinar el efecto del DCPIP y el herbicida en el transporte de electrones

Reduccin del DCPIP y Efecto del Herbicida.
Solucin de cloroplastos aislados.
2,6-Dicloro fenolindolfenol (DCPIP) 2.2 x 10-4M (0.007 g/100 ml agua).
4 Pipetas de 5 mL.
2 Pipetas de 2 mL.
1 Vaso de precipitado de 250 mL.
4 Tubos de ensaye.
Solucin de Diurn (el nombre comercial es Karmex) con 0.312 g/100 ml de agua.
Papel aluminio.
Foco y conexiones.

Numere los tubos de ensaye (del 1 al 3) y los reactivos conforme se muestra en el Cuadro
No. 1:
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Reactivo
Cantidad de reactivo para conformar la
mezcla de reaccin (mL)
Tubo 1 Tubo 2 Tubo3
Cloroplastos aislados 2 2 2
DCPIP 3 3 3
Diurn 0 0 3
Buffer fosfato 5 5 2
VOLUMEN TOTAL (mezcla de reaccin) 10 10 10

Cubra el tubo No. 1 con un papel aluminio para evitar que la luz incida en el, de tal manera
que no se realice el transporte de electrones; en cambio, los tubos 2 y 3 se dejaran
expuestos a la luz. Los tres tubos sern colocados en un vaso de precipitado con agua
suficiente para cubrirlos (sin que penetre el agua o floten) y acerque todo a la lmpara
encendida. Espere 15 20 minutos y compare las coloraciones de los tubos.

Actividad complementaria
1. Describa y compare sus resultados.
2. Describa el transporte cclico y aciclico de electrones?
3. Cuando ocurre el transporte cclico y aciclico de electrones?
4. Describa los mecanismos para la formacin de ATP.
5. Escriba una pregunta con su respuesta sobre este tema o un chiste, una caricatura,
un pensamiento, una frase clebre, un poema, una imagen una fotografa, e.t.c.


Bibliografa

Machlis, C. y Torrey, G.J. 1956. Plants in Action. Freeman, San Francisco.

Truelove, B. (Ed.) 1977. Research Methods in Weed Science. Southern Weed Science
Society, Auburn University, Auburn, Alabama.



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FIGURA 10. Modelo de la fase fotoqumica de la fotosntesis: Las letras A, B Y C encerrdas en un cuadro
sealas los sitios de actividades de algunos herbicidad. Tambin se seala el sitio donde el
Diclorofenolindolfenol (DCPIP) roba los electrones.