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C

M.Sc. ORLANDO PREZ DELGADO


BILOGO
MAESTRO EN DOCENCIA UNIVERSITARIA E INVESTIGACIN EDUCATIVA
MAESTRA EN MICROBIOLOGA(c)
DIPLOMATURA EN BIOLOGA MOLECULAR Y CITOGENTICA HUMANA
ENZIMAS
ASPECTOS
GENERALES
CLASIFICACIN
CINTICA
ENZIMTICA
Propiedades
Modo de
accin
Regulacin de
la actividad
enzimtica
Nomenclatura
Ajuste
inducido
Llave
cerradura
Oxidorreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas
Cintica qumica
Cintica enzimtica
Modelo cintico Michaelis - Menten
Clculo de la Km y Vmax de una enzima
Actividad enzimtica
Los factores que influyen de manera ms
directa sobre la actividad de un enzima
son:
Las propiedades de los enzimas
derivan del hecho de ser protenas y
de actuar como catalizadores. Como
protenas, poseen una conformacin
natural ms estable que las dems
conformaciones posibles.
Los cambios en la conformacin
suelen ir asociados en cambios en
la actividad cataltica.
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Los enzimas poseen grupos qumicos
ionizables (carboxilos -COOH; amino -
NH
2
; tiol -SH; imidazol, etc.) en las
cadenas laterales de sus aminocidos
La mayora de los enzimas son muy
sensibles a los cambios de pH.
La pepsina gstrica tiene un pH ptimo
de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la
arginasa lo tiene a pH 10
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
En general, los aumentos de
temperatura aceleran las reacciones
qumicas: por cada 10C de
incremento, la velocidad de reaccin
se duplica
La temperatura a la cual la actividad
cataltica es mxima se llama
temperatura ptima
La prdida de actividad cataltica debida a
la desnaturalizacin trmica.
EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Una enzima requiere para su funcin la
presencia de sustancias no proteicas que
colaboran en la catlisis:
COFACTORES COENZIMAS
Los cofactores pueden ser
iones inorgnicos como el
Fe
++
, Mg
++
, Mn
++
, Zn
++
etc.
Casi un tercio de los
enzimas conocidos
requieren cofactores.
Cuando el cofactor es una
molcula orgnica se
llama coenzima. Muchos
de estos coenzimas se
sintetizan a partir de
vitaminas.
APOENZIMA + GRUPO PROSTTICO= HOLOENZIMA
La actuacin del enzima (1) permite que
los reactantes (sustratos) se unan a su
centro activo con una orientacin ptima
para que la reaccin se produzca y (2)
modifica las propiedades qumicas del
sustrato unido a su centro activo,
debilitando los enlaces existentes y
facilitando la formacin de otros nuevos
MODELO LLAVE-CERRADURA
El modelo llave-cerradura supone
que la estructura del sustrato y la del
centro activo son complementarias,
de la misma forma que una llave
encaja en una cerradura. Este modelo
es vlido en muchos casos, pero no es
siempre correcto.
MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO
En algunos casos, el centro activo
adopta la conformacin idnea
slo en presencia del sustrato. La
unin del sustrato al centro activo
del enzima desencadena un
cambio conformacional que da
lugar a la formacin del producto.
Una molcula de enzima no tiene por qu
actuar siempre a la misma velocidad. Su
actividad puede estar modulada por:
pH
T
Cofactores
[Sustrato]
Modificacin
Alostrica
Modificacin
Covalente
Protelsis
Isoenzimas
MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
Hay varias formas mediante las cuales se
asigna un nombre a una enzima:
NOMBRES
PARTICULARES
Antiguamente, los enzimas
reciban nombres
particulares, asignados por
su descubridor. Al ir
aumentando el nmero de
enzimas conocidos, se hizo
necesaria una
nomenclatura sistemtica
que informara sobre la
accin especfica de cada
enzima y los sustratos
sobre los que actuaba.
NOMBRE SISTEMTICO
El nombre sistemtico de un enzima
consta actualmente de 3 partes:
- El sustrato preferente
- El tipo de reaccin realizado
- Terminacin "asa"
Un ejemplo sera la glucosa fosfato
isomerasa que cataliza la isomerizacin
de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-
fosfato.
NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA
El nombre de cada enzima puede ser
identificado por un cdigo numrico,
encabezado por las letras EC (enzyme
commission), seguidas de cuatro
nmeros separados por puntos.
la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define
como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es una transferasa,
el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es
un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la D-
glucosa el que acepta el grupo fosfato.
CLASE 1: OXIDORREDUCTASAS
CLASE 2: TRANSFERASAS
CLASE 3: HIDROLASAS
CLASE 4: LIASAS
CLASE 5: ISOMERASAS
CLASE 6: LIGASAS
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de
oxidorreduccin, es decir,
transferencia de hidrgeno (H) o
electrones (e
-
) de un sustrato a otro,
segn la reaccin general:
Ejemplos son la succinato deshidrogenasa
o la citocromo c oxidasa.
AH
2
+ B A + BH
2

A
red
+ B
ox

A
ox
+ B
red

Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo
qumico (distinto del hidrgeno) de un
sustrato a otro, segn la reaccin:
Un ejemplo es la
glucoquinasa, que cataliza
la reaccin representada en
la Figura de la derecha:
glucosa + ATP
ADP + glucosa-6-fosfato
A-B + C A + C-B
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis:
A-B + H
2
O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la
reaccin:
lactosa + agua glucosa + galactosa
Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o
soldadura de sustratos:
A-B
A + B
Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que
cataliza la reaccin:
cido acetactico CO
2
+ acetona
Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros:
Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la
fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las
reacciones representadas en la tabla inferior:
A B
Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con
hidrlisis simultnea de un nucletido
trifosfato (ATP, GTP, etc.):
Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que
cataliza la reaccin:
piruvato + CO
2
+ ATP
oxaloacetato + ADP + P
i

A + B + XTP A-B + XDP + P
i

Los principios generales de las reacciones
qumicas se aplican tambin a las
reacciones enzimticas.
Cintica
enzimtica
Modelo cintico
Michaelis - Menten
Clculo de la Km y
Vmax de una enzima
Actividad
enzimtica
La cintica
enzimtica estudia
la velocidad de las
reacciones
catalizadas por
enzimas.
La medida se realiza siempre en las
condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la
velocidad mxima (V
max
). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
En este esquema, k
1
, k
2
y k
3
son las
constantes cinticas individuales de
cada proceso y tambin reciben el
nombre de constantes microscpicas
de velocidad. Segn esto, podemos
afirmar que:
v
1
= k
1
[E] [S]
v
2
= k
2
[ES]
v
3
= k
3
[ES]
V
max
= k
3
[E
T
]
[E
T
] = [E] + [ES]
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la
cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de
sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero
de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg
prot)
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha
definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad
de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo.
Esta unidad se llama katal
ENZIMA VALOR DE
REFERENCIA
TEJIDOS QUE LA
FORMAN
ELEVADA EN
Amilasa 50 a 300 mU/ml Glndulas salivales,
pncreas
Parotiditis, pancreatitis
Aldolasa 0.5 a 3.1 mU/ml Msculo estriado,
miocardio
Traumatismo, infarto
del miocardio
Colinesterasa 3 a 8 mU/ml

Hgado, eritrocitos Intoxicaciones con
lesin heptica
Creatinfosfo-
Cinasa
Menos de 50 mU/ml

Msculo estriado,
miocardio, encfalo
Traumatismo e infarto
del miocardio

Deshidrogenas
a lctica (DHL)
80 a 240 mU/ml

Miocardio, hgado Infarto del miocardio,
hepatitis
Fosfatasa
cida
4.8 a 13.5 mU/ml
Menos de 3.5 mU/ml
Hueso
Prstata
Lesiones sea
Cncer de prstata
ENZIMA VALOR DE
REFERENCIA
TEJIDOS QUE LA
FORMAN
ELEVADA EN
Fosfatasa alcalina 20 a 48 mU/ml

Hgado, hueso Ictericia obstructiva,
lesiones sea
Glutamil
transpeptidasa
Menos de mU/ml

Hgado Hepatitis
Lipasa 20 a160 mU/ml Pncreas Pancreatitis

Aspartato
aminotransferasa
2 a 19 mU/ml

Miocardio, hgado Infarto del miocardio,
hepatitis
Alanina
aminotransferasa
3 a 17 mU/ml

Hgado, miocardio Hepatitis, infarto del
miocardio

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