BILOGO MAESTRO EN DOCENCIA UNIVERSITARIA E INVESTIGACIN EDUCATIVA MAESTRA EN MICROBIOLOGA(c) DIPLOMATURA EN BIOLOGA MOLECULAR Y CITOGENTICA HUMANA ENZIMAS ASPECTOS GENERALES CLASIFICACIN CINTICA ENZIMTICA Propiedades Modo de accin Regulacin de la actividad enzimtica Nomenclatura Ajuste inducido Llave cerradura Oxidorreductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Isomerasas Ligasas Cintica qumica Cintica enzimtica Modelo cintico Michaelis - Menten Clculo de la Km y Vmax de una enzima Actividad enzimtica Los factores que influyen de manera ms directa sobre la actividad de un enzima son: Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser protenas y de actuar como catalizadores. Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable que las dems conformaciones posibles. Los cambios en la conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica. EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino - NH 2 ; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. La pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10 EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima La prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica. EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Una enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis: COFACTORES COENZIMAS Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe ++ , Mg ++ , Mn ++ , Zn ++ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Muchos de estos coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. APOENZIMA + GRUPO PROSTTICO= HOLOENZIMA La actuacin del enzima (1) permite que los reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una orientacin ptima para que la reaccin se produzca y (2) modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin de otros nuevos MODELO LLAVE-CERRADURA El modelo llave-cerradura supone que la estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una cerradura. Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es siempre correcto. MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO En algunos casos, el centro activo adopta la conformacin idnea slo en presencia del sustrato. La unin del sustrato al centro activo del enzima desencadena un cambio conformacional que da lugar a la formacin del producto. Una molcula de enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma velocidad. Su actividad puede estar modulada por: pH T Cofactores [Sustrato] Modificacin Alostrica Modificacin Covalente Protelsis Isoenzimas MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Hay varias formas mediante las cuales se asigna un nombre a una enzima: NOMBRES PARTICULARES Antiguamente, los enzimas reciban nombres particulares, asignados por su descubridor. Al ir aumentando el nmero de enzimas conocidos, se hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que informara sobre la accin especfica de cada enzima y los sustratos sobre los que actuaba. NOMBRE SISTEMTICO El nombre sistemtico de un enzima consta actualmente de 3 partes: - El sustrato preferente - El tipo de reaccin realizado - Terminacin "asa" Un ejemplo sera la glucosa fosfato isomerasa que cataliza la isomerizacin de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6- fosfato. NOMENCLATURA DE LA COMISIN ENZIMTICA El nombre de cada enzima puede ser identificado por un cdigo numrico, encabezado por las letras EC (enzyme commission), seguidas de cuatro nmeros separados por puntos. la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la D- glucosa el que acepta el grupo fosfato. CLASE 1: OXIDORREDUCTASAS CLASE 2: TRANSFERASAS CLASE 3: HIDROLASAS CLASE 4: LIASAS CLASE 5: ISOMERASAS CLASE 6: LIGASAS Clase 1: OXIDORREDUCTASAS Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia de hidrgeno (H) o electrones (e - ) de un sustrato a otro, segn la reaccin general: Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa. AH 2 + B A + BH 2
A red + B ox
A ox + B red
Clase 2: TRANSFERASAS Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin: Un ejemplo es la glucoquinasa, que cataliza la reaccin representada en la Figura de la derecha: glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato A-B + C A + C-B Clase 3: HIDROLASAS Catalizan las reacciones de hidrlisis: A-B + H 2 O AH + B-OH Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin: lactosa + agua glucosa + galactosa Clase 4: LIASAS Catalizan reacciones de ruptura o soldadura de sustratos: A-B A + B Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que cataliza la reaccin: cido acetactico CO 2 + acetona Clase 5: ISOMERASAS Catalizan la interconversin de ismeros: Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones representadas en la tabla inferior: A B Clase 6: LIGASAS Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.): Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reaccin: piruvato + CO 2 + ATP oxaloacetato + ADP + P i
A + B + XTP A-B + XDP + P i
Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a las reacciones enzimticas. Cintica enzimtica Modelo cintico Michaelis - Menten Clculo de la Km y Vmax de una enzima Actividad enzimtica La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (V max ). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos. En este esquema, k 1 , k 2 y k 3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin reciben el nombre de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto, podemos afirmar que: v 1 = k 1 [E] [S] v 2 = k 2 [ES] v 3 = k 3 [ES] V max = k 3 [E T ] [E T ] = [E] + [ES] Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal ENZIMA VALOR DE REFERENCIA TEJIDOS QUE LA FORMAN ELEVADA EN Amilasa 50 a 300 mU/ml Glndulas salivales, pncreas Parotiditis, pancreatitis Aldolasa 0.5 a 3.1 mU/ml Msculo estriado, miocardio Traumatismo, infarto del miocardio Colinesterasa 3 a 8 mU/ml
Hgado, eritrocitos Intoxicaciones con lesin heptica Creatinfosfo- Cinasa Menos de 50 mU/ml
Msculo estriado, miocardio, encfalo Traumatismo e infarto del miocardio
Deshidrogenas a lctica (DHL) 80 a 240 mU/ml
Miocardio, hgado Infarto del miocardio, hepatitis Fosfatasa cida 4.8 a 13.5 mU/ml Menos de 3.5 mU/ml Hueso Prstata Lesiones sea Cncer de prstata ENZIMA VALOR DE REFERENCIA TEJIDOS QUE LA FORMAN ELEVADA EN Fosfatasa alcalina 20 a 48 mU/ml
Hgado, hueso Ictericia obstructiva, lesiones sea Glutamil transpeptidasa Menos de mU/ml