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Universidad Tecnolgica De Puebla

Tecnologa Ambiental

Microbiologa Ambiental
Thamara Janneth Zetina Gonzlez

Reporte Prctica 4:
Siembra Y Aislamiento De Microorganismos
3 A


Objetivo:
1. Conocer e identificar el uso de los medios de cultivo por el tipo de muestra
o microorganismo
2. Conocer, describir y aplicar las diferentes tcnicas de inoculacin de los
medios de cultivo
3. Conocer y emplear la terminologa propia del uso de los medios de cultivo
INTRODUCCIN
Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para
que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproduccin. Las tcnicas de
siembra varan segn el estado fsico del medio o las necesidades del
microorganismo.
Una condicin bsica de la siembra es que se realice bajo condiciones rigurosas
de asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de grmenes del
ambiente en el cultivo. A estos microorganismos se les llama contaminantes.
Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro.
Cuando encontramos ms de un tipo de microorganismo se llama entonces
cultivo mixto.
El proceso mediante el cual se separan los microorganismos se denomina
aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de varias formas,
dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado.

MATERIALES DE LABORATORIO MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS
EN PRCTICA NO. 3
1 Mechero de Bunsen
1 Gradilla Caldo Lacto sado
1frasco estril
1 Pipetas de 10, estril
2 Pipetas de 1ml ,estril
1 Perilla
Agar Eosina azul de metileno
Agar Mac Conkey
Agar Dextrosa Sabouraud
Medio MIO.
EQUIPO DE LABORATORIO
Autoclave
Estufa para incubacin
Refrigerador
MATERIAL INDIVIDUAL/EQUIPO
1 asa bacteriolgica

Cuaderno de laboratorio
Franela (40x40 cm aprox.)
Marcador indeleble punta delgada
Masking Tape o cinta testigo
Algodn o gasas
Cubre bocas
Guantes de ltex estriles

PROCEDIMIENTO
Los medios de cultivo que se utilizaran en esta prctica los preparamos en la
Prctica no. 3: Agar Mac Conkey, Agar EMB y Caldo Lacto sado con Campana
Durham.
1. Preparamos la zona de esterilidad para realizar la toma de muestra y la
inoculacin de los medios de cultivo
2. Tomando las medidas de seguridad e higiene correspondientes; de superficies
limpias y sucias, de manos y de uniformes, y hacer las siembras en los medios
correspondientes. Realizamos la prctica.
3. Despus de a ver sembrado agua residual en el medio Mac Conkey por estra
cruzada y el medio EMB por siembra masiva utilizando hisopos estriles; el
caldo Lacto sado se sembr conforme a lo establecido en la Norma Oficial
Mexicana para Prueba Presuntiva de determinacin de Coliformes por el
Mtodo del Nmero Ms Probable: 5 tubos con 10 ml de muestra a cada tubo,
5 tubos con 1 ml de muestra a cada tubo y 5 tubos con 0.1 ml de muestra a
cada tubo.

4. Incubamos en la estufa durante 24 horas a 35 C. y el mircoles hicimos
lectura de los medios de cultivo. Para el caso de los medios slidos
observamos el crecimiento de microorganismos a travs de la formacin de
colonias. Para el caso del Caldo Lacto sado observar la formacin de gas y la
turbidez.


CUESTIONARIO:
1. Explica qu es una Unidad Formadora de Colonia (UFC)
R=Es un valor que indica el grado de contaminacin microbiolgica de
un ambiente. Expresa el nmero relativo de microorganismos de
un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de agua.
UFC es el nmero mnimo de clulas separables sobre la superficie, o dentro, de
un medio de agar semi-slido que da lugar al desarrollo de una colonia visible del
orden de decenas de millones de clulas descendientes. Las UFC pueden ser
pares (diplococos), cadena (estreptococos) o racimos (estafilococos), as como
clulas individuales Unidad formadora de colonias.
Una dilucin hecha con bacteria y agua peptona da se coloca en el plato de
agar (Cuenta de plato agar para muestras alimenticias o Agar trypticase de soja
para muestras clnicas) y expandida en el plato siguiendo este patrn.
Las "Unidades Formadoras de Colonias" (UFC) se miden en (UFC por
mililitro).

2. Elabora un diagrama de flujo para el aislamiento de un microorganismo.

3. Explica cmo se pueden aislar microorganismos a partir de un cultivo mixto.
Usando una tcnica llamada estriado. En esta tcnica, una gota de del cultivo
es tomada de la muestra, mediante un instrumento llamado asa bacteriolgica,
estril; despus se distribuye la muestra sobre la superficie del medio de cultivo
dibujando estras (de ah el nombre), dejando de esta forma un gran nmero de
microorganismos al principio y una baja cantidad al final de colonias aisladas.
4. Qu es una cepa y como se obtiene?
Una cepa es un conjunto de microorganismos que se desarrollan a partir de una
colonia inicial que comparten ciertas caractersticas fisiolgicas, bioqumicas,
genticas, patolgicas (una o ms de estas caractersticas) que los diferencian de
otras cepas.
5. Cules son las tcnicas para la inoculacin y siembra de los medios de
cultivo?
Es la separacin de un determinado microorganismo del resto de microorganismos
que le acompaan. El mtodo ms usual es la siembra por estra sobre un medio
de cultivo slido adecuado dispuesto en una placa de petri.

Para ello se toma una pequea cantidad de muestra con un asa de platino y se
reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas
e inmovilizadas las clulas bacterianas. Tras la incubacin en condiciones
adecuadas, cada clula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas
divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas caractersticas
determinadas en cuanto a su forma, borde, elevacin, tamao , consistencia, etc..
Los tipos de bacterias presentes en la muestra original es visible como tipos
diferentes de colonias. A partir de colonias separadas suficientemente es posible
obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la
muestra original.
El xito del aislamiento, de la separacin sobre el medio de cultivo, depende de la
superficie sobre la que se ha distribuido la muestra. Es muy importante realizar el
mayor nmero de estras posible. En las primeras estras aparecern colonias
confluentes o una masa continua de microorganismos. En las estras finales
debern aparecer colonias separadas unas de otras. El aislamiento requiere un
reducido inculo de partida. La sucesiva disminucin del tamao de la poblacin
sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de
cultivo, debe asegurar que finalmente algunas clulas queden suficientemente
separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie.



BIBLIOGRAFA
1. Microbiologa. Michael J. Pelczar, Jr. Roger D. Reid. Edit. McGraw-Hill
2. Diagnstico microbiolgico. Texto y atlas a color. Elmer W. Koneman, Stephen
D. Allen, William M. Janda. Editorial Mdica Panamericana
3. Biologa de los microorganismos. Thomas D. Brock, Madigan, Martinko, Parker.
Edit. Prentice- Hall
4. Microbiologa Estomatolgica. Fundamentos, gua y prctica. Marta Negroni.
Editorial Panamericana. Mxico 2001.