Manual de Laboratorio de Qumica Analtica II (QM 228) 2014

Preparado por: Omar Chacn P y Vctor Jimnez Pgina 1

EXPERIMENTO # 4
SEPARACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS POR
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

I. OBJETIVOS.
Estudiar los principios de la cromatografa en capa fina y sus aplicaciones.
Aplicar las tcnicas de cromatografa en capa fina para la separacin de e
identificacin de compuestos orgnicos.

II. MATERIALES Y REACTIVOS.
Tijera, regla en mm, pinzas (saca cejas), cmaras cromatogrficas, vasos
qumicos, probetas, capilares, placas de capa fina y lmpara UV.
Reactivos: Acetona, etanol, triptfano, cistena, prolina, cido acetil saliclico,
aspirina comercial, ibuprofeno, d-limoneno y ninhidrina (0.2%) como solucin reveladora
de aminocidos.
Eluyentes: a) Hexano: acetato de etilo 1:1, b) NH
4
OH:n-butanol:H
2
O 3:5:2 y c)
NH
4
OH: etanol 7:3. Esta ltima es especfica para los aminocidos.

III. MARCO TERICO.
La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una
mezcla.
Esta separacin se logra utilizando un sistema bifsico: fase estacionaria donde
se retienen los compuestos a separar y fase mvil que desplaza de forma diferencial los
compuestos a travs de la fase estacionara.
Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad segn su
polaridad y peso molecular, lo que permite su separacin cuando una solucin de las
mismas asciende por capilaridad a travs de una tira de papel poroso (papel de
cromatografa o de filtro) o sobre lmina de silicagel dispuesta verticalmente sobre una
pelcula de un disolvente orgnico (que en lo sucesivo llamaremos eluyente) ya que las
ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn fcilmente al
disolvente a medida que ste asciende.
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Aparecern por tanto, varias bandas de diferentes colores o incoloras dependen
de la composicin de la muestra. En el caso de manchas incoloras se recurre al uso de
reveladores, como la luz UV para compuestos aromticos, FeCl
3
para fenoles,
ninhidrina para aminocidos, I
2
para insaturaciones, K
2
CrO
4
/H
2
SO
4
para alcoholes entre
otros.
El Rf (rate factor) es la relacin entre las distancias recorridas por un compuesto y
por el disolvente desde el origen del cromatograma.





La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la
mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los Rf sean
reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase mvil,
fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de Rf que se puede alcanzar es
de 1, lo ideal es un Rf entre 0.65 y 0.7.
Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma
placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los Rf y si
son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo
compuesto. Por el contrario si los Rf son iguales los compuestos pueden ser iguales o no
serlo.
Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma
placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separacin
mnima. En este caso no se pueden usar reveladores qumicos, ya que alteraran los
compuestos, sino indicador ultravioleta.
Fase estacionaria: adsorbente. Est constituida por un slido poroso, finamente
granulado, con centros activos polares en su superficie donde se adsorben las molculas de
los compuestos que se van a cromatografiar. Cuanto menor sea el tamao de partcula de
este material mayor ser la capacidad de adsorcin.
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La adsorcin se debe a interacciones intermoleculares del tipo dipolo-dipolo, dipolo
dipolo inducido o enlaces de hidrgeno entre el adsorbente y el soluto. El adsorbente ms
utilizado es el gel de slice donde las interacciones tienen lugar entre los grupos SiOH y
SiOSi; tambin se emplea con relativa frecuencia almina.
El adsorbente debe ser inerte con las sustancias a cromatografiar. El gel de slice
presenta carcter cido y la almina puede adquirirse con carcter neutro, cido o bsico.
Fase mvil: eluyente. Es un disolvente en el que los componentes de las mezcla son,
al menos, parcialmente solubles. Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la
velocidad de elucin de los compuestos de la mezcla.
Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de disolventes e incluso llevar a
cabo la elucin con un gradiente de polaridad aumentando progresivamente la proporcin del
disolvente ms polar.
Orden de polaridad de los compuestos orgnicos: cidos carboxlicos > Fenoles
> Alcoholes y Tioles > Aminas > steres > Aldehdos y Cetonas > Hidrocarburos Aromticos
> Hidrocarburos Halogenados > teres > Hidrocarburos Insaturados > Alcanos.
Para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad de la fase mvil hace que se
desplace con ms facilidad de la fase estacionaria. Por ejemplo, se eluir ms rpidamente
una amina en acetonitrilo que en hexano. Para compuestos poco polares, que se retienen
poco en el adsorbente, se utilizan eluyentes apolares o poco polares como, por ejemplo,
hexano.
Para compuestos muy polares, que quedan muy retenidos en el adsorbente, se
emplean eluyentes muy polares como el metanol o mezclas metanol-diclorometano;
mientras que para compuestos de polaridad media se emplean eluyentes de polaridad
intermedia y son muy aconsejables en estos caso las mezclas en distintas proporciones de
hexano-acetato de etilo.
Cromatografa de Capa Fina (CCP). La fase estacionaria (adsorbente) se
encuentra depositada, formando una capa fina de un espesor uniforme sobre una placa de
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vidrio, plstico o una lmina metlica. La mezcla a analizar se deposita con un capilar a una
pequea distancia del borde inferior de la placa y se introduce en una cubeta donde est la
fase mvil (eluyente), que ascender a lo largo de la capa por capilaridad eluyendo a los
componentes de la mezcla a distintas velocidades, lo que provoca su separacin. Cuando el
frente del disolvente se encuentra a 0.5 cm del borde superior, se saca la placa de la
cubeta, se marca hasta donde ha llegado el eluyente y se deja secar para, a continuacin,
proceder a la visualizacin de las manchas correspondientes a los productos
cromatografiados.
Para la seleccin del adsorbente o fase estacionaria debe considerar los siguientes
aspectos: Polaridad, tamao de partcula (Dimetro y rea superficial), homogeneidad
(solubilidad) y pureza.
Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.
a. Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase
estacionaria.
b. La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
c. Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos.

IV. FASE EXPERIMENTAL.
1. Preparar los eluyentes segn las indicaciones descritas en la II parte.
Nota: dependiendo de la disponibilidad de disolventes, es posible que el profesor
le indique preparar otras mezclas o cambiar la relacin de los eluyentes antes
mencionados.
2. Las muestras de frmacos deben disolverlas en acetona y los aminocidos
(1%) en solucin al 10% de propanol; estas y las otras muestras se le colocar un
nmero, el cual debe ser anotado a lpiz en la parte inferior de la lnea base del
cromatograma y su referencia en la libreta.
3. Colocar en las cmaras cromatogrficas las mezclas de los eluyentes (debe
ser ligeramente inferior a la altura de la lnea base del cromatograma). A cada cmara
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se le colocar una tira delgada de papel filtro para saturarla de los vapores del eluyente.
Por qu?
4. Anotar la relacin en la que estn preparados los eluyentes, para cada cmara
y a lpiz en la parte superior del cromatograma con letra y abreviaturas pequeas o
colocar un nmero a cada cromatograma cuya descripcin sobre los eluyentes y orden
de muestra empleadas deber registrar en su libreta.
5. Aplicar con el capilar sobre la placa de capa fina 3 aplicaciones de la muestra.
Cada aplicacin se pone siempre en el mismo punto (se puede marcar los puntos con
un lpiz previamente).
6. Al terminar de preparar la placa, colocarla dentro de la cmara, cuidando que
el borde inferior haga contacto con el eluyente, y observar que este se desplace en
forma ascendente.
7. Esperar unos 10 a 30 minutos y observar el recorrido del eluyente hasta la
lnea superior.
8. Sacar la placa cuando el eluyente este por llegar a la lnea cercana al borde
superior.
9. Colocar la placa en el horno por 2 minutos (este deber estar previamente
calentado a 80 C).
10. Sacar la placa y revelar con la lmpara UV y la que contiene los aminocidos
con ninhidrina.
11. Marcar las manchas obtenida en el cromatograma con un lpiz, medir y
calcular los Rf de cada mancha.
12. Interprete sus resultados.
13. En su discusin indique porqu el eluyente debe estar por debajo de la lnea
base del cromatrograma?

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Figura 3. Cromatografa antes y despus del recorrido






Figura 1. Muestras

Figura 2. Aplicacin de Muestras sobre CCF