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Chapitre 1 : La cellule : Introduction et Mthodes dEtude

UE 2 : La cellule et les tissus 1



I. Thorie cellulaire (pas au concours)

- 1665, Hooke/Microscopie optique introduit le terme de cellule

- 1833, Brown propose le terme de noyau

- 1838, Schleiden et Schwann / thorie cellulaire : la cellule unit structurale et
fonctionnelle commune lorganisation de tous les tres vivants

- 1858, Virchow : toute cellule provient de la division dune cellule
antrieure, cest la plus petite portion de matire vivante qui puisse vivre
isole et se reproduire.


Classification des tres vivants :

PROTISTES : organismes unicellulaires
PLURICELLULAIRES / Communication cellulaire (comportement social entre
elles)


Apport des techniques de ME, Biochimie, Fractionnement cellulaire = lien entre
structure et fonction grace :
Ltude de larchitecture des organites cellulaires
La dissection de leur composition molculaire


(Cellule cancreuse ne communique plus avec son environnement, autonome)


- Concept de macromolcules (Acides nucliques, protines), constitues par des
outils de base permettant lassemblage des organites cellulaires, leurs remaniements
fonctionnels et leur altration ventuelle en rponse une agression.

Permet dexpliquer la diversit du vivant (structure et fonction), et le mcanisme
intime de lhrdit


Les tapes de la dcouverte du mcanisme de lhrdit et du transfert dinformation
du noyau vers le cytoplasme :

1988, Dcouverte des chromosomes
1909, Baptme des gnes
1910, Chromosomes = support du gne
1941, gnes constituent le plan de construction des protines
1957, flux de linformation gntique : ADN, ARN, PROTEINES
2001, Gnome humain dcod

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II. Mthode dtude des cellules et des tissus.

La microscopie


A. Nature des chantillons

- cellules isoles (fixes ou pas)
- cellules en culture (fixes ou pas)
- tissus
- cellules en culture et tranches de tissus vivants (pas de fixation, colorants ou
marqueurs vitaux)

NB : cellules fixes => cellules mortes, vision un temps t (la fixation tue les
cellules)

B. Principe de prparation des chantillons (fig. 2)

Schma de prparation des chantillons fixs pour lexamen au microscope.


Fixation aldhydes, + - osmium (mort cellulaire et immobilisation des structures)

Dshydration = enlever leau des cellules :
Renforce la fixation initiale
Conserve mieux les tissus

Inclure le prlvement dans un lment de montage (pour la coupe)
Utilisation des colorants, et/ou immunocytochimie (utilis des anticorps Ac pour
dtecter des biolments)
Contraste uranium, plomb => pour contraster





C. Quelques exemples en MO

Apport des colorants en MO (ex : neurone)

Imprgnation argentique (sels dargent qui prcipitent avec le cytosquelette)
=> permet de visualiser la morphologie du neurone ici multipolaire

Colorant de Nissl se lie des substances basophiles comme lARN.
=> Nuclole et ribosomes (REG) sont fortement colors. Permet de
diffrencier axone et dendrite (ARN dans dendrite).


D. Le microscope lectronique (ME)

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Organisation dune cellule eucaryote
Quelques exemples : plasmocyte et pithlium intestinal


Description : Figure 1 : Schma dorganisation dune cellule eucaryote animale
(daprs une coupe ultrafine observe en microscopie lectronique en
transmission).


En ME on ne voit pas forcment tous les constituants cellulaires (coupe)


2 compartiments : noyau et cytoplasme interdpendants.
Spars par du milieu extracellulaire par la membrane plasmique.

Noyau limit par lenveloppe nuclaire :
- Contient lADN et plusieurs familles dARN
- Cas particulier de la mitose : disparition de lenveloppe nuclaire (mlange
contenu nuclaire avec contenu cytoplasmique) + organisation de la
chromatine en chromosomes + rorganisation des microtubules et des
centrioles

Cytoplasme :
Plusieurs compartiments entours dune enveloppe
Systme endomembranaire / synthse et digestion (lysosome notamment
digestion)
Mitochondries et peroxysomes / respiration et nergie (communique change
de protines)
*Cytosol lieu de nombreuses ractions mtaboliques, comprend le cytosquelette

-Membrane plasmique : frontire mais aussi lieu dchanges (exocytose et
endocytose),
Maintien dun gradient de concentration (C) ionique entre les milieux intra- et
extra- cellulaires
Equivalence entre le milieu extra cellulaire et lumire des cavits du systme
endomembranaire
Double courant informationnel / communication intercellulaire


Figure 7 : Aperu du courant dinformation dans une cellule eucaryote

Plusieurs ARN :
ARNm (messager)
ARNt (de transfert)
ARNr (ribosomal)
= synthse protique

ADN reste toujours dans le noyau (sauf 1 exception, mitose ?) ARN, vont dans
le cytoplasme, transite dans le cytosol grce aux pores nuclaires

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En plus de ces 3 ARN : il existe des petits ARN (ne contiennent pas linfo
gntique pour coder les protines), mais peuvent participer la synthse
protique, la maturation des ARN, ladressage au REG.

Les trs petits ARN (figure 7 et 8 ch10 ?)
Non codants
Participent la rgulation de lexpression des gnes (rgulation post
trascriptionnelle/pigntique)
Peuvent tre dorigine endogne ou exogne
2classes :
- Les siRNA (Small Interferent RNA) : ARN double brin dune vingtaine de
nuclotides gnrs partir dun long double brin dARN. Shybrident avec
les ARNm et provoquent leur fragmentation (vont tre dgrads, donc pas
traduit en protine, contrle la production en protine). Naturels ou artificiels.

- Les miRNA (microRNA) : ARN simple brin dune vingtaine de nuclotides,
cods par des gnes spcifiques, prsents dans la plupart des organismes
multicellulaires. Shybrident avec leur ARNm cibles, puis soit bloquent leur
traduction soit conduisent leur destruction (rgulation).


E. Observations :
Plasmocytes = synthtisent les Ac (REG rticulum endoplasmique granulaire
importants (?)
Epithlium intestinal (MO) : coloration spcifique du mucus/
(ME) : microvillosits intestinales, cellules absorbantes
ME / 4 types de cellules
Pole apical regarde vers la lumire intestinale
Pole basale en dessous
Microscope balayage pas de coupe




F. Immunocytochimie

Principe :
2 types danticorps (Ac) spcifiques : polyclonaux et monoclonaux / spcificit versus
sensibilit (engendre rac Ac/Ag)

AC primaires dirigs contre parties extra ou intra cellulaire dune protine
membranaire (Ag?) => implique sur le plan technique une diffrence dapproche
Extra cellulaire => applique dessus et reconnat
Intra cellulaire => doit traverser la bicouche lipidique ( ?) tape supplmentaire
de permabilisation de la membrane qui permet de rentrer dans la cellule pour se
fixer la protine intracellulaire

Pour trouver lAc primaire, Ac secondaires coupls une enzyme ou un marqueur
fluorescent (fluorochrome) => marqueur fluo, microscope fluo (systeme de
rvlation)
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Epitope ??

Usage Ac monoclonaux + spcifique, mais moins sensibles
Ac polyclonaux vont pouvoir dtecter plusieurs parties dune protine
Permettent de jouer sur la spcificit
Si une protine que lon veut dtecter est : - faiblement exprime => polyclonaux
- extrmement exprime =>
monoclonaux

Ag = protine dintrim ??

Figure 3 : (technique du sandwich )
Principe : injection de la protine que lon veut dtecter chez .. (le lapin par ex)
Production dAc primaire de lapin
Production dAc antilapin reconnat les Ac primaires, sy fixe et se coupe un
fluorochrome ou enzyme
1 anticorps secondaire dirig contre lespece produisant lAc primaire

Difficults :

Figure 4
Risque avec Ac secondaire : se fixe non pas sur le complexe Ac Ag mais sur le tissu

Etape 4 contrle de spcificit de lAc secondaire

Figure 5

Contraitntes lies aux multi marquages


MAP2 (microtubul assiocated protein ) marque corps cellulaire / dendrite
uniquement
Cytosquelette soumis des remaniements permanents
Chromosome au milieu du fuseau mitotique durant la mitose


Microscope confocal : microscope fluorescence coupl un laser dtectant les
marquages plans par plans

Jonction neuromusculaire (permet la contraction musculaire) : visualiser
1) laxone et larborisation prsynaptique par des AC spcifiques coupls des AC
secondaires fluorescents (*)
3 marquages : 1 pour laxone, 1 pour larborisation terminale de laxone
2) la membrane post synaptique de la cellule musculaire par une toxine florescente
(*) qui se fixe sur les rcepteurs spcifiques du neurotransmetteur
-AC primaires utiliss : anti-neurofilament (axone) / vert
anti-SV2 fin diapo


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questions
lanticorps secondaire sera lantilapin
multimarquages : ac primaires doivent tre chez des espces diffrentes

Contrles utiliser :
Ctrl 1 : pas AC anti neurofilament mais AC secondaire correspondant = rsultat
ngatif
Ctrl 2 : pas AC anti SV2 mais AC seconaire correspondant = rsultat ngatif
Contrle 3 IG de lapin non spcifique de lAg et AC secondaire= rsultat ngatif
Contrle 4 IG de chvre non spcifique de lAg et AC secondaire=rsulat ngatif
Contrle 5 aucun Ac = rsultat ngatif
Contrle 6 ; 2 AC dirigs contre des pitpes diffrents dun mme Ag = rsultat + et
identique


Fente synaptique non vide, 8 protines dans les vsicules, dans la zone
prsynaptique 13 prot
Fente synaptique 7 protines



III. De la cellule aux tissus et aux organes.

On distingue :
- les pithliums (= de revtement, protection mcanique, reposent sur du tissu
conjonctif)
- les tissus conjonctifs (tissu sous jacent
- les tissus musculaires
- le tissu nerveux (neurones + c/ gliales, crent la gaine de myline)
- le tissu sanguin (un peu part)

Le nombre de couche cellulaire :
- monostratifi
- pseudo stratifi
- pluristratifi

FIGURE 8 Classification des pithliums : exemple de trois pithliums.

Produisent de la kratine, en surface la couche corne
Pole apical diffrenci par les microvillosit, et un pole basolatral
Msothlium ? (imortant)


Les organes sont constitus de plusieurs tissus formant des entits anatomiques et
fonctionnelles


IV.

Bactries :
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Arobies anarobies
Pathognes ou non
Reproduction rapide, croissance, production dnergie et syntse de leurs propres
constituants si environnement nutritif suffisant
Organisation :
- paroi, bicouche lipidique riche en liposaccharides et en porines
- membrane plasmique
Un cytosquelette rudimentaire
ADN icrculaire double brin = nuclode fix { la membrane ( au niveau dune
invagination de la membane = msosome
Ribosomes

A la diffrence de la c/ eucaryotes :
- pas de systme endomembranaire et donc pas denveloppe nuclaire, pas de
mitochondries et pas de peroxysomes

V. Les archaebactries.

Microorganismes se dveloppant dans des conditions extrmes
c/ commune dont a driv dune part les bactries, dautres part les archaebactries,
dont se sont diffrencis les eucaryotes.

VI. Les virus (acaryotes)

Envelopps ou non
ADN ou ARN ( 1 ou + molcules, mono ou bicatnaires)
Des protines enzymatiques (dont transcriptase inverse)
Des protines formant la capside
Parasitisme obligatoire dune cellule eucaryote ou dune bactrie (pas de mtabolisme
propre et incapacit se multiplier)

CSQ la plus frquente sur la cellule infecte : lyse (avec libration des virus produits)
mais dans certains cas restreins, intgration du gnome viral au gnome de la cellule
hte (volution vers la mort, systme de dtection des anomalies, ou cancrisation :
frquent animaux, mais peu chez lhomme)


Exemple : les papilloma virus (HPV) dans le cancer du col de lutrus.

Les HPV (virus ADN) ont un tropisme particulier pour les pithliums malpighiens du
revetement cutan (verrues) et des muquesues ano-gnitales (tumeurs bnignes et
cancers)

HPV : prof gynco


Phase infestante : effect cytopathogne = lyse des cellules infectes


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Infection peut etre bas risque. On dtecte si HPV haut risque (pouvant entraner
transformation cancreuse).
Hybridation molculaire : prparation dune sonde ARN ou ADNc de la squence
nuclotidique cherche, formation de liaiosonss hydrogenes selon la complmentarit
des bases.
On envoie une sonde nuclotidique complmentaire marque, par radioactivit,
ou par une molcule quon dtectera dans un second temps par un Ac capable de
sattacher cette molcule

Le gnome viral de certains HPV dits haut risque ou oncognes) est intgr au gnome
des cellules du cancer du col de lutrus =>

VI. Vie cellulaire

Alternance de mitose et dinterphases

QUIESCENCE maintien du mtabolisme sans activit intense
Senescence vieillissement physiologique de la cellule (la senescence tudie ici est la
snescence rplicative)

Tout comme la senescence, lapoptose est un mcanisme physiologique et extrmement
contrl

VOIR FIGURE 11

Au cours de la mitose se fomrnt 2 c/ filles, patrimoine gntiques identiques, partir de
celui de la c/ mre
On divise linterphase en 3 phases : G0/G1, S et G2
Durant linterphase, la c/ effectue sa croissance, se diffrencie, et se prpare la mitose
La c/ va recevoir des signaux positifs de diffrenciation.
Les c/ en G0 sont censes ne plus se diviser : certaines sont en G0 dfinitif (elles ne se
diviseront plus, come dans lexemple des neurones) et dautres sont en G0 prolong
(cest lexemple des c/ hpatiques, ce qui explique la reconstitution du tissu manquant
lors dune ablation
Disparition de lenveloppe nuclaire au cours de la mitose

VOIR FIGURE 12

Durant la phase S, on observe la rplication de lADN. On a alors deux fois plus dADN {
la fin de la phase S, pus retour la normale en fin de mitose.

Pendant la phase S, on observe un phnomne de mise { lpreuve .

VOIR FIGURE 13


Facteur de croissance pour les G0 qui vont les faire rentrer en division


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Plusieurs types de cellules dans un organisme suprieur :
- cellules spcialiss en G0 dfinitif
- cellules diffrencies en G0 prolong
- cellules souches (CS), assurent la
formation des tissus, des organes et
dun organisme entier, et le
renouvellement cellulaire
c/ souches totipotentes (peuvent donner naissance un organisme entier : uf fcond
+ c/ filles issues des premires division aprs fcondation / G1 trs court

pluripotentes : se diffrencient en + tissus c/ S embryonnaire
multipotentes lorigine de + types cellulaires (ex CS hmatopoieutique et CS du
systme nerveux central
les cellules unipotentes
les cellules souches adultes

les iPS ( pas naturelles, produites par ingnierie partir de c/ adulte)


C/ souches embryonnaires
Potentiel plus grand
Se multiplient bien en culture
Risque de tumeur
Problme thique

C/ souches adultes
Potentiel plus limit
Tres difficles cultiver
Pas de risque de tumeur
Pas de problme thique


La progression dans le lcycle cellulaire est controle et obit un signal extracellulaire

Les complexes CDK-cyclines permettent lavance dans le cycle cellulaire. Ces complexes
vont se relayer le cycle. Les cyclines sont synthtises au moment de la priode du cycle
dans lesquelles elles doivent intervenir. => permet lactivit des CDK est la cycline, puis
une autre cycline prend le relais, et la cycline prcdente est recycle par
ubiquitinylation

La c/, tout au long du cycle, possde des checks-points ou elle vrifie que lintgritde
lADN est conserve. Le contrle est permanent pour permettre une transmission dun
matriel .

Il existe un check point particulier qui napparat pas sur le schma (maintenant si)
Facteur de croissance ncessaire
En cas danomalie, il ya arrt du cycle, et la cellule posde alors deux alternatives :
- si la rparation est possible, il y a reprise du cycle
- si la rparation est impossible, la cellule entame le phnomne dapoptose.
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En faisant un marquage de lADN on peut reprer une apoptose : lors de ce phnomne,
il y a une fragmentation de lADN. La dtection de cet ADN permet de dire quil y a eu
une apoptose

Les caspases existent dans la c/ sous forme de pro caspase. Pour dtecter lapopotose,
on peut dtecter les capsases activites par immunohistochimie avec des anticoprs
dirigs contre les caspases actives.

Lapoptose intervient au cours du dveloppement de lembryon :
Rgression des bauches embryonnaires
Slection des cellules fonctionnelles.

Lapoptose est indispensable chez ladulte

VI. Snescence rplicative

La senescence correspond au vieillissement qui touche les c/ sommatiques. On appelle
senescence rplicative le fait que les tlomres se raccourcissent petit petit au cours
des divisions.


Dans les c/ souches et les cellules germinales, la telomrase rallonge chaque tlomrase
a la fin de chaque mitose


Dtection de la Beta galactosidase pH 6 (acide) dans la snescence (hydrolyse des beta
galactosides en monosaccharides, accumule dans les lysosomes)

Au bout dun certain nb de divisions, la cellule entre en senescence puis met fait
intervenir la protine P53


Saccumule dans le noyau pour jouer son rle, rgule la transcription de gnes : va activer
la transcription des gnes qui vont inhiber
2 classes de protines : Mcanismes favorisent lapoptose, dautres linhibent. Lquilibre
entre les 2 va engendrer lapoptose


Tous les FRT (facteurs de rgulation de la transmission possdent 3 domaines importants :
Un domaine de rgulation de la transcription
Un domaine de liaison lADN


Dans les c/ sans stress gnotoxique pas de P53 ( nveau tres basale


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Linvalidation gnique consiste { supprimer lexpression dun gne dans un tissu.
Sur le schma rpcdent, la souris du bas a une p53 absente par invalidation, et celle-ci
na quun faible taux de survie car elle dveloppe des tumeurs.



Linactivation de lactivit transcritiptionelle de p53 suffit { inhiber linduction de
lapoptose.