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UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS



MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO



CARRERA PLAN DE ESTUDIOS
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
NOMBRE DE LA ASIGNATURA
QFB 2009 INMUNOLOGA

PRCTICA
NMERO
NOMBRE DE LA PRCTICA
FECHA Y
DURACIN
1 Determinacin de grupos sanguneos Sistema ABO 1 sesin
1 INTRODUCCIN
El sistema ABO fue el primero de los sistemas sanguneos descubiertos y contina siendo el ms
importante con relacin a la transfusin sangunea, ya que la compatibilidad ABO es la base de la
transfusin sobre la cual descansan las dems pruebas pretransfusionales.
El sistema ABO fue descubierto en 1900 por Karl Landstainer, quien observ que los eritrocitos
humanos podan ser clasificados en tres grupos (A, B y O), de acuerdo a la presencia de antgenos
especficos en la membrana de los eritrocitos. El cuarto grupo (AB) de menor frecuencia fue descubierto
en 1902 por Von Decastello y Sturly.
En 1914, Hirszfeld y Hirszfeld sealaron que el sistema ABO tena una distribucin variable en los
diferentes grupos tnicos y, desde entonces, mltiples estudios que se han realizado y publicado
sealan su importancia como marcadores genticos y antropolgicos. Para el banco de sangre es
importante conocer la distribucin de los grupos sanguneos en la poblacin general, con el fin de
establecer las reservas de sangre que de cada grupo se deben mantener y as poder atender de manera
eficiente las demandas que se presenten.

2 OBJETIVOS
Realizar pruebas cruzadas de compatibilidad sangunea para:
a) garantizar que los eritrocitos a transfundir son ABO compatibles con el receptor, y
b) detectar anticuerpos en el suero del receptor que estn dirigidos contra antgenos presentes en
los eritrocitos del donante.

3 FUNDAMENTO
El sistema ABO comprende dos partes: antgenos presentes en los eritrocitos y los correspondientes
anticuerpos presentes en el suero. Bajo condiciones normales, todos los individuos poseen los
anticuerpos contra los correspondientes antgenos A y B, que no estn presentes en sus propias clulas.
De esta manera, se establece una interrelacin constante y predecible entre los antgenos y anticuerpos
del sistema, lo cual constituye la base fundamental para que en la determinacin del grupo ABO, se
realicen las pruebas celulares para evidenciar los antgenos y pruebas sricas o grupo inverso para
determinar los anticuerpos. Tales anticuerpos son principalmente de la clase IgM, por lo tanto son
altamente aglutinantes y fijadores de complemento.
Las determinaciones antignicas de estos sistemas son molculas de carbohidratos, cuya especificidad
reside en los azcares terminales de un oligosacrido. En la superficie del eritrocito y clulas
endoteliales, la mayor parte de los antgenos se unen a glucoprotenas, aunque algn carbohidrato
tambin se une al lpido de membrana.

4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
Material comn de laboratorio.

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REACTIVOS:

Los reactivos que a continuacin se mencionan deben ser grado
analtico.

! Solucin salina isotnica.
! Alcohol etlico


MATERIALES:

! Tubos de ensaye de 13X100
! Pipetas Pasteur desechables
! Parafilm
! Tubos para toma mltiple con EDTA
! Tubos para toma mltiple sin anticoagulante
! Agujas para venopuncin
! Torniquete
! Torundas de algodn

MATERIAL BIOLGICO:

! Sueros tipificadores anti-A, anti-B y Anti-AB.
! Eritrocitos humanos tipo A, B y O previa y correctamente
tipificados en suspensin al 5% en solucin salina isotnica.
! Eritrocitos humanos de grupo sanguneo desconocido en
suspensin al 5% en solucin salina isotnica.
! Solucin de albmina bovina al 22%

APARATOS E INSTRUMENTOS

! Centrfuga.

B DESARROLLO DE LA PRCTICA
PREPARACIN DE LAS MUESTRAS BIOLGICAS.

1. Extraccin de una muestra de sangre venosa.
a. Realizar la extraccin de una muestra de sangre total por puncin venosa en un tubo
con EDTA de grupos sanguneos A, B, y O.
b. Extraer una muestra de sangre total con EDTA y una muestra sin anticoagulante de los
grupos sanguneos a determinar.
c. Esperar 15 minutos para que la muestra sin aditivo coagule completamente.
d. Centrifugar la muestra sin anticoagulante para obtener el suero durante 5 minutos a
2500 r.p.m.
e. Concluido el proceso de centrifugacin verificar que el gel separador se encuentre entre
las dos fases de la sangre total y que el suero sea transparente y no presente hemlisis.

2. Preparacin de la suspensin de eritrocitos de los grupos sanguneos A, B y O y de la
muestra desconocida.
a. De la sangre total con EDTA bien mezclada colocar 10 gotas en un tubo de ensaye,
agregar solucin salina isotnica hasta ! partes del tubo de ensaye, colocar parafilm en

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la boca del tubo, mezclar suavemente por inversin.
b. Centrifugar durante 3 minutos a 1500 rpm.
c. Transcurrido el tiempo de centrifugacin decantar con cuidado el sobrenadante y
desecharlo.
d. Volver a adicionar solucin salina isotnica como en el inciso a y repetir el mismo
procedimiento que en b y c de manera que se deben realizar un total de 3 lavados.
e. Una vez que se tenga el paquete de eritrocitos lavados, resuspenderlo en solucin
salina isotnica para obtener una concentracin aproximada del 5%.


PROCEDIMIENTO.

Determinacin de grupo sanguneo directo.

1. Rotular 4 tubos de 13x100 de la siguiente manera: anti-A, anti-B, anti-AB y autotestigo.

2. Agregar una gota de la suspensin de eritrocitos de grupo desconocido a cada tubo.

3. Agregar a los tubos marcados como anti-A, anti-B y anti-AB una gota del suero tipificador
correspondiente. Al tubo marcado como autotestigo adicionar una gota de solucin de albmina
al 22%, mezclar suavemente.

4. Centrifugar los tubos a 1000 rpm durante 60 segundos.

5. Resuspender suavemente el botn de los eritrocitos en busca de aglutinacin. Anotar los
resultados.


Determinacin de isohemaglutininas (grupo sanguneo inverso).

1. Rotular 3 tubos como A, B y O.

2. Agregar a cada tubo una gota del suero del paciente de grupo sanguneo desconocido.

3. Agregar a cada tubo dos gotas de suspensin de eritrocitos frescos al 5% previamente
tipificados al tubo correspondiente. Mezclar suavemente.

4. Centrifugar los tubos a 1000 rpm durante 60 segundos.

5. Observar los sobrenadantes contra un fondo blanco bien iluminado para detectar hemlisis.

6. Desprender el botn de clulas del fondo del tubo agitndolo suavemente, inclinarlo hasta una
posicin horizontal y leerlo contra un fondo bien iluminado para apreciar los aglutinados
dispersos. Anotar los resultados.

C EXPRESIN DE RESULTADOS E INFORME DE LA PRUEBA.
Los resultados se expresaran de acuerdo a la presencia de los antgenos y anticuerpos
correspondientes.




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5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES
Se elaboraran de acuerdo a los resultados obtenidos y la importancia diagnstica de la prueba.

6 ANEXOS
CUESTIONARIO.
1. Menciona otros sistemas de clasificacin de grupos sanguneos.
2. Cul es la distribucin en Mxico de los grupos sanguneos del sistema ABO?
3. Cmo explicaras que los pacientes posean anticuerpos contra antgenos sanguneos del
sistema ABO desde el nacimiento si nunca ha estado en contacto con los mismos?


7 REFERENCIAS
Garibay Escobar, A. Manual de Prcticas de Inmunologa. Coleccin Textos Acadmicos, Universidad de Sonora,
2006.


8 MECANISMO DE EVALUACIN
Puntualidad y asistencia 40%
Bitcora 20%
Reporte 20%
Conocimientos previos 20%

9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL
1. Se deber utilizar antifaz de seguridad.
2. Se deber tener el cuidado respectivo al manejo de material a altas temperaturas, materiales
corrosivos y txicos.
3. Al pesar o medir reactivos evite tirarlo o derramarlos en el sitio donde se encuentre, en caso de
hacerlo limpiar perfectamente el lugar.
4. Al medir las muestras biolgicas evite tirarlas o derramarlas y sigue los procedimientos
generales de manipulacin para evitar cualquier riesgo biolgico.
5. Cubrir las medidas de seguridad bsicas para el laboratorio.

En caso de accidente (por pequeo que este sea) debe comunicarse de inmediato al maestro
responsable del laboratorio.



10 DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.
1. Los recipientes que tengan residuos de naturaleza lipdica, se limpiarn con papel absorbente
antes de lavarlos en la tarja y estos papeles se tirarn en el bote de basura del laboratorio.
2. Los residuos de origen orgnico se tiraran en el bote de basura respectivo.
3. Los RPBI se desecharn en los contenedores destinados para ello.