TEMA 11

BASES DEL DIAGNSTICO

MICROBIOLGICO
Miguel ngel Bratos Prez
Bases del diagnstico microbiolgico.
Diagnstico directo:
Examen microscpico
Cultivo, aislamiento e identificacin.
Tcnicas de deteccin de metabolitos o componentes
microbianos:
Mtodos fsicos y qumicos, inmunolgicos y genticos.
Diagnstico indirecto:
Utilidad e interpretacin de las pruebas serolgicas.
Examen microscpico
Usos: Deteccin inicial, identificacin inicial o definitiva
Tipos: Campo claro, fondo oscuro, contraste de fases,
fluorescencia, microscopio electrnico
Mtodos
Examen directo: examen en fresco, 10% KOH, tinta china,
lugol
Tinciones diferenciales: Gram, hematoxilina, plata
metanamina, azul de toluidina, tricromica, Giemsa
cido alcohol resistente: Ziehl-Neelsen, Kinyoun, auramina,
Z-N modificados
Fluorescentes: naranja acridina, auramina, calcofluor, IFD
Deteccin de componentes microbianos
Mtodos qumicos/fsicos (deteccin metabolitos):
Cromatografa lquido-gas
Deteccin de CO
2
radiomtrica y espectrometra de
infrarrojos, etc.
Hemocultivos, etc.
Mtodos inmunolgicos:
Deteccin de Ag: Aglutinacin partculas de ltex, CIEF
Enzimoinmunoensayo, Radioinmunoensayo,
Inmunofluorescencia, etc.
Mtodos genmicos:
Hibridacin de ac. nucleicos: Sondas especficas
Mtodos de amplificacin genmica: PCR
Cromatografa lquido-gas
Ltex e
inmunofluorescencia
Diagnstico molecular
Deteccin de ADN, ARN, protenas
Ventajas
Sensibilidad: muestras muy diluidas
Especificidad: distincin de cepas relacionadas
Identificacin virus y bacterias resistentes a Ab
Seguridad: no aislamiento, muestras inactivadas,
agentes sin replicar
Deteccin de material gentico
microbiano
Anlisis electrofortico y RFLP (Restriction Fragment
Length Polymorphism)
Enzima de restriccin y electroforesis
Sondas DNA
Hibridacin in situ
Dot blot: extraccin nitrocelulosa hibridadcin
Southern blot: restriccin nitrocelulosa hibridacion
DNA-DNA
Northern blot: obtencin RNA nitrocelulosa
hibridacion RNA-DNA
PCR
RT-PCR (o PCR-TI): transcriptasa inversa o retrotranscriptasa
PCR-tiempo real
RFLP (Restriction Fragment Lengh
Polymorphism)
Identificacin de clulas infectadas
con virus mediante sondas
CMV en tbulo renal
Tcnicas de hibridacin de cidos nucleicos
PCR (Reaccin en cadena
de la polimerasa)
Deteccin de protenas
Actividad de una protena (ej. transcriptasa inversa)
Patrn de protenas
SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel
electrophoresis)
Western blot: SDS-PAGE Ac
Western blot
Cultivo
Cultivo de bacterias
Medios comunes
Medios enriquecidos no selectivos
Medios selectivos
Medios diferenciales
Medios especiales
Cultivo celular
Virus
Bacterias parsitas intracelulares estrictas
Diagnstico indirecto
Deteccin de Anticuerpos: Serologa
Validez de una prueba serolgica: Sensibilidad,
especificidad, valores predictivos
Modalidades
Determinacin cualitativa: Utilidad
Determinacin cuantitativa: Titulacin. Utilidad
Determinacin Ig totales especficas: Utilidad
Determinacin de IgG, IgA, IgM especficas:
Significado.
Anlisis de Ag y Ac por inmunoprecipitacin
Localizacin de Ag en clulas por EIA o IF
HSV en neuronas
Cuantificacin de Ag
o Ac por EIA
Citometra de flujo
Diagnstico indirecto
Hipersensibilidad de base celular
Tuberculina