Dra.

Florencia Giliberto
CATEDRA DE GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA UNIVERSIDAD
DE BUENOS AIRES



DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE/BECKER

DISTROFIAS MUSCULARES
Son un grupo de trastornos caracterizados por debilidad
muscular progresiva y prdida de tejido muscular.
Su causa, un defecto gentico
Protena Gen (smbolo) Localizacin Enfermedad
distrofina DMD Xp21.2 DMD, DMB, XLDC
o-distrobrevina DTNA 18q12.1-12.2 -
|-distrobrevina DTNB 2p23-p22 -
utrofina UTRN 6q24 -
protenas relacionadas a
distrofina 2

DRP2

Xq22

-
o
distroglican
os
a

|

DAG1

3p21

-
miotilina TTID 5q22.3-q31.3 LGMD-1A
1q11-q21 LGMD-1B
1q21.2 EMD2 (AD-MD), AR-
EMD
CMD1A
PLD
1q21.2-q21.3 CMT2 (AR-MT2, CMT2A)



Laminina A/C



LMNA
1q21.2-q21.3 CMT2B1?
calpaina-3 CAPN3 15q15.1-q21.1 LGMD-2A
caveolina-3 CAV3 3p25 LGMD-1C hiperCKemia
RMD
desconocida - 7q LGMD-1D
disferlina DYSF 2p13.1-p13.3 LGMD-2B, MM (Miyoshi)
emerina EMD Xq27.3-q28 X-EMD
o SGCA 17q12-q21.33 ARMD, LGMD-2D
| SGCB 4q12 ARMD, LGMD-2E
SGCG 13q12-q13 SCARMD, LGMD-2C
o SGCD 5q33-q34 LGMD-2F
c SGCE 7q21-q22 MDS, DYT11



sarcoglica
nos
Z SGCZ - -
teletonina TCAP 17q11-q12 LGMD-2G
tripartite motif-containing
32
TRIM32 9q31-q33 LGMD-2H
fukutina FCMD 9q31 FCMD (Fukuyama)
protenas relacionadas con
la fukitina
FKRP 19q13.33 LGMD-21, MDC1C
sarcospanos KRAG 12p11.2 -
desconocida - 1q42 MDC1B
o SNTA1 20q11.2 -
|1 SNTB1 8q23-q24 -


sintrofin
|2 SNTB2 16q22-q23 -
Enfermedades musculares. Protenas y genes implicados
ARMD: Distrofia muscular autosmica recesiva
DMB: Distrofia muscular de Becker
DMD: Distrofia muscular de Duchenne
FCMD: Distrofia muscular congnita de
Fukuyama
hiperCKemia: hiperCKemia idioptica
LGMD: Distrofia muscular de Limb-girdle
MDC: Distrofia muscular congnita
MM: Miopata de Miyoshi
RMD: Enfermedad autosmica dominante de
Rippling
SCARMD: Distrofia muscular autosmica
recesiva severa de la infancia
XLDC: Cardiomiopata dilatada ligada al X.

Distrofia muscular de Duchenne/Becker

Duchenne de Bouglogne (1801-1875)
Caractersticas Clnicas:
Es una de las patologas hereditarias ms frecuentes en el hombre (1:3.500)
Afecta el desarrollo normal de los tres tipos de tejido muscular

Los sntomas clnicos y signos bioqumicos comienzan en los primeros aos de vida
Valores elevados de creatn kinasa srica

Pseudohipertrofia de pantorrillas
Silla de ruedas entre los 12 y 15 aos

Retardo mental no progresivo

Generalmente mueren en la segunda dcada de vida por falla cardaca o respiratoria

La Distrofia muscular de Becker, es ms benigna y menos frecuente (1:18.000/ 1:30.000)
LA CDLX: cardiomiopata preferencial sin signos significativos de distrofia del msculo esqueltico.

Herencia
Recesiva, ligada al X
Herencia
Recesiva, ligada al X
2/3 Familiar
1/3 de de novo
Descripcin del gen de la Distrofina
Est localizado en el brazo corto del cromosoma X (Xp21)
Extensin 2,4 millones de pares de bases
Contiene 79 exones
8 promotores que dirigen diferentes transcriptos
Gen de la distrofina: localizacin de los distintos promotores
Promotor S Dp116 S
(clulas de Schwann)
ex 2
Promotor C (corteza) Dp427 c
Promotor M (muscular)
Dp 427 m
Promotor L
(linfocito) Dp 427 l
ex 30 ex 45 ex 63 ex 56
Promotor R (retina)
Dp260
Promotor SNC Dp 140
(cerebelo y rin)
Promotor Dp71
G (ubicua)
Promotor P (clulas de purkinge) Dp427 p
ex 79
RNAm 14 Kb (longitud completa)
5 3


Leiden Muscular Dystrophy pages
Alteraciones moleculares
debidas a grandes rearreglos en el gen:como deleciones (72%) y menos frecuentes
duplicaciones (7%), inserciones y translocaciones. 2/3
1/3
debidas a mutaciones puntuales, de una o pocas bases) (20%) como deleciones,
inserciones o sustituciones.
Gen de la distrofina
1% mutaciones raras (sitios de splicing)
Alteracin molecular/Mutacin
Corrimiento del marco de lectura Sin corrimiento del marco de lectura
No es mltiplo de 3
Se elimina un nmero NO entero de codones
Es mltiplo de 3
Se elimina un nmero entero de codones
Codn stop traduccin
Protena ausente
Prdida de aa
Protena ms corta
GENOTIPO
FENOTIPO DMD
BMD
91%
Se cumple la
regla del marco
Promotor S Dp116 S
(clulas de Schwann)
ex 2
Promotor C (corteza) Dp427 c
Promotor M (muscular)
Dp 427 m
Promotor L
(linfocito) Dp 427 l
ex 30 ex 45 ex 63 ex 56
Promotor R (retina)
Dp260
Promotor SNC Dp 140
(cerebelo y rin)
Promotor Dp71
G (ubicua)
Promotor P (clulas de purkinge) Dp427 p
ex 79
ALTERACION MOLECULAR: CONSECUENCIA FENOTIPICA
Promotor S Dp116 S
(clulas de Schwann)
ex 2
Promotor C (corteza) Dp427 c
Promotor M (muscular)
Dp 427 m
Promotor L
(linfocito) Dp 427 l
ex 30 ex 45 ex 63 ex 56
Promotor R (retina)
Dp260
Promotor SNC Dp 140
(cerebelo y rin)
Promotor Dp71
G (ubicua)
Promotor P (clulas de purkinge) Dp427 p
ex 79
ALTERACION MOLECULAR: CONSECUENCIA FENOTIPICA
Cuanto ms 3 es la mutacin ms grave Ser el fenotipo
Ms isoformas se vern afectadas
Laminina-2
Lmina basal
sarcolema
sarcospano
sarcoglicanos
sintropinas
| - distroglicanos
Distrofina
o - distroglicanos
distrobrevina
F- actina
Modelo de la distrofina en la clula muscular
Domain sub domain amino acids exons
actin binding domain 14-240 2-8
central rod domain 253-3040 8-61
hinge 1 253-327 (8)-9
repeat 1 337-447 10-11
repeat 2 448-556 12-14
repeat 3 557-667 14-16
hinge 2 668-717 17
repeat 4 718-828 (17)-20
repeat 5 829-934 20-21
repeat 6 935-1045 22-23
repeat 7 1046-1154 (23)-(26)
repeat 8 1155-1263 26-27
repeat 9 1264-1367 28-(30)
repeat 10 1368-1463 30-32
repeat 11 1464-1568 32-(34)
repeat 12 1569-1676 34-35
repeat 13 1677-1778 36-37
repeat 14 1779-1874 38-(40)
repeat 15 1875-1973 40-41
interruption 1974-1991 42
repeat 16 1992-2101 42-43
repeat 17 2102-2208 44-45
Domain sub domain amino acids exons
repeat 18 2209-2318 46-48
repeat 19 2319-2423 48-50
hinge 3 2424-2470 50-51
repeat 20 2471-2577 51-53
repeat 21 2578-2686 53-(55)
repeat 22 2687-2802 55-(57)
repeat 23 2803-2931 57-59
repeat 24 2932-3040 59-(61)
hinge 4 3041-3112 61-64
Cysteine-rich domain 3080-3360 63-69
dystroglycan binding site 3080-3408 63-70
WW domain 3056-3092 62-63
EF-hand 1 3130-3157 65
EF-hand 2 3178-3206 65-66
ZZ domain 3307-3354 68-69
Carboxy-terminal domain 3361-3685 70-79
alpha1-syntrophin binding site 3444-3494 73-74
1-syntrophin binding site 3495-3535 74-75
(Leu)
6
-heptad repeat 3558-3593 75

Estudios moleculares

DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE/BECKER
Familia con paciente diag. Clnico de DMD/DMB
Ms de 1 afectado Slo 1 afectado
Familiar Espordico
Mam portadora
obligada
Mam Portadora ?
Mutacin de novo en paciente o lnea
ascendente
Mosaicismo: en casos donde no hay antecedentes por lnea materna. Mam con riesgo de ser
mosaico (aprox 15/20%)
Determinar el estado de portador de la mutacin en las mujeres
interesadas y en varones presintomticos
Realizar estudios prenatales y preimplantatorios
Para que sirven los estudios moleculares???
Confirmar el diagnstico clnico
Correlacionar GENOTIPO VS FENOTIPO
Caracterizar la mutacin: determinar corrimiento del marco,
prediccin de distrofinas afectadas (aplicacin de futuras terapias)
Aportan conocimiento a las familias afectadas. Permitiendo con
ello la realizacin de asesoramientos genticos ms completos
1- Estudio molecular en varones con DMD
Estudio directo: se busca la mutacin
CDNA distrofina
exones
DMB
DMD
32 %
62 %
3 5
4 cuadruplex: 4 pares de primers cada una = 16 exones
Se estudiaron las zonas ms propensas a sufrir deleciones en el gen de la distrofina (Mix I, Mix II,
Mix III y Mix IV).

Chequeo de los productos de
PCR en gel de agarosa 2%
Br de Et
Mpm 3 4 8 17 44 48 19 45 51 52 13 43 50 47 60
90 % de las
deleciones
PCR:
ADN
primers
buffer de la enz
Cl2Mg
dntps
agua
enzima (TAQ pol)
MIXI MIXII MIXIII MIXIV
DMD/DMB: PCR Multiplex
Resultados
406
MIX I
+ -
406
+
-
MIX II
EXON 4 8 (506pb)
EXON 17 (416 pb)
EXON 44 (268 pb)
EXON 8 (360 pb)
EXON 45 (547 pb)
EXON 19 (459 pb)
EXON 51 (388 pb)
EXON 52 (113 pb)
MIX III
406 + -
EXON 3 (410 pb)
Mpm (535 pb)
EXON 4 (196 pb)
EXON 13 (238 pb)
MIX IV
406 407 - 408B +
EXON 43 (357 pb)
EXON 60 (139 pb)
EXON 47 (181 pb)
EXON 50 (271 pb)
4 4 4 4 4 4 7 7 5 5 0 0 5 5 1 1 5 5 2 2 6 6 0 0 4 4 8 8 M M p p m m 3 3 4 4 8 8 1 1 3 3 4 4 3 3 1 1 7 7 1 1 9 9 4 4 5 5
Gen de la distrofina
zona de ruptura
Se amplificaron exones flanqueantes por PCR
simplex hasta acotar los extremos de la delecin
5 5 0 0
4 4 8 8 5 5 1 1
delecin
El est presente,
corroborado por PCR simplex
4 4 9 9
4 4 9 9
Exones presentes
Exones presentes
4 4 9 9 5 5 1 1
ADN genmico
del paciente
5 5 0 0 5 5 1 1 4 4 9 9
ADN genmico
varn normal
DMD o BMD ?
4 4 9 9 5 5 1 1
ADN genmico
del paciente
5 5 0 0 5 5 1 1 4 4 9 9
ADN genmico
varn normal
//CAG CCA GTG AAG AGG AAG//GGA GCC T CT CCT ACTCAG//
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
4 4 9 9 5 5 1 1
ADN genmico
del paciente
5 5 0 0 5 5 1 1 4 4 9 9
ADN genmico
varn normal
//CAG CCA GTG AAG AGG AAG//GGA GCC T CT CCT ACTCAG//
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
4 4 9 9 5 5 1 1
ADN genmico
del paciente
//CAG CCA GTG AAG
CT CCT ACTCAG//
1 2 3 1 2 3
2 3 1 2 3
5 5 0 0 5 5 1 1 4 4 9 9
ADN genmico
varn normal
//CAG CCA GTG AAG AGG AAG//GGA GCC T CT CCT ACTCAG//
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
4 4 9 9 5 5 1 1
ADN genmico
del paciente
//CAG CCA GTG AAG CT CCT ACTCAG//
1 2 3 1 2 3 2 3 1 2 3
1 2 3 1 2
Corrimiento del marco!!!!!
A 24 bases CODN UGA
5 5 0 0 5 5 1 1 4 4 9 9
ADN genmico
varn normal
//CAG CCA GTG AAG AGG AAG//GGA GCC T CT CCT ACTCAG//
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Pentaplex 2011
Penta 1 Penta 2 Penta 3
#1 #1 + - #1 #1 + - #1 #1 + -
Penta 4
#1 #1 + -
Penta 5
#1 #1 #2 #2 #3 #4 + -
2- Estudio molecular en mujeres
Estudio indirecto: NO!!! se busca la mutacin
Del exn 50
?
El cromosoma normal
enmascara la delecin
PCR Multiplex? NOO!!
Se analiza la segregacin del cromosoma X ligado a la mutacin en individuos con
antecedentes de DMD/DMB con el objetivo de predecir el estado de portador de los
mismos.
?
Mtodo indirecto: analizar la herencia del
cromosoma mutado
Estudio en familias
XX
Segregacion de alelos!!
Herramienta molecular
STRs
Microsatlites (STRs)
Secuencias repetitivas de 2 a 7 pb
Distribuidos a lo largo de todo el Genoma
Muy polimrficos (muchas variantes allicas)
Alto nro de individuos heterocigotas

gtagtagccgtagagttgc(cacacacacaca)ttcattattacattaca
(ca)n n=6
Locus= lugar determinado en el genoma
Alelo: secuencia de bases en un locus
Localizacion de STRs en el gen de la distrofina
3
5
1
79
Exn 79
Exn 62
(ca)n (ca)n
Intrn 79 STR62 63
Exn 1
Exon 7
Exn 25
(ca)n
(ca)n
DysII
(ca)n
STR 7A STR25
Exn 44 Exn 45
(ca)n (ca)n (ca)n
STR44 x3
(ca)n
STR45
Exn 49
STR 49 STR 50
Exn 50
*
PR1 PF1
(CA)n
*
PF2 PR2
(CA)n
*
PF3 PR4
(CA)n
Hay que marcar con fluorocromos tantos primers como loci
quiera analizar
* FAM
PF
*
PR
Electroforesis en secuenciador automtico: determinacin del PM de los picos/productos de PCR/STRs
(CA)n
*
PF2 PR2
(CA)n
*
PF3 PR4
(CA)n
PR1
(CA)n
*
PF1
PCR
caca
caca
cacaca
caca
cacaca
cacacaca
Intron 1 Intron 50 Intron 60
STR 45
Pap
Mam
Pac
Hna
187
185
187 185
185
185
STR 49
Pap
Mam
Pac
Hna
187
185
187 185
185
185
252
254
254 237
252 254
?



445 se excluy de ser portadora (certeza > 95%) Casos familiares
b
e
f
j
b
e
f
j
444
445
a
d
h
j
a
c
g
i
443
STR DYSII
STR 44
STR 50
STR 62
446
b
e
f
j
b
e
f
j
Familia 15
Recombinacin
309 result portadora (certeza >95%)
b
d
i
310
312
309 308
c
e
h
311
a
f
g
c
e
h
c
e
h
b
d
i
a
f
g
Familia 5
STR 7A
STR 25
STR 49
418 se excluy de ser portadora
la delecin mape en alguno de los STRs analizados
b
d
g
419
417
417A
c
del
f
c
del
f
c
del
f
b
d
g
a
e
f
STR Dys II
STR 49
STR 50
Familia 10
El estudio se transform
en directo!!!!!!
100% certeza
418
417 419 417A
418
d
e
363 y 364 resultaron portadoras (certeza 100%)
la delecin mape en alguno de los STRs analizados
Familia sin
afectado con vida
363 364
362 365
a
f
g
del
STR 7A
STR 25
STR 45
STR 49
c
e
i
k
a
d
g
j
c
e
i
k
c
e
i
k
a
f
g
del
a
f
g
del
Familia 17
P M 363
364
k
j
- Estudios prenatales:
353
b
del
f
j
k
p
355
b
del
f
j
k
p
a
d
f
i
l
o
354
a
d
f
i
l
o
Familia 6
Florencia Giliberto, Vernica Ferreiro, Francisco Massot, Marcela Ferrer, Liliana Francipane and Irene Szijan. Muscle
and Nerve 2011
"Prenatal diagnosis of Duchenne/Becker muscular dystrophy by
STRs segregation analysis in Argentine families"
Casos espordicos
196 se excluy de ser portadora
i
a
d
f
h
j
b
c
e
h
197
195
194
196
i
a
d
f
h
k
a
c
g
h
j
b
c
e
h
k
a
c
g
h
STRDYSII
STR44
STR45
STR49
STR50
Familia 20
i
a
d
f
h
j
b
c
e
h
Prob antes del estudio molecular de cada hija de ser portadora: x 2/3 33%
Prob despues del estudio molecular de cada hija de ser portadora: 2/3 66%
< 5% de ser portadora
Mutacin de novo
STR Dys II
STR 7A
STR 25
STR 44
STR 45
STR 49
STR 50
a
c
d
f
h
i
l
a
c
d
f
h
i
l
a
b
d
e
g
j
k
317
316
a
c
d
f
h
i
l
318
Familia 29
STR 50
187 185
187 185 185
185
Pap
Mam
Pac
Hna
252 237 254
254 252 237
226
185
233 226
Del
226
233
Ej: CASO ESPORADICO
Delecin de exn 50, 51 y 52 por Mltx
STR 62
187 185
187 185 185
185
252 237 254
254 252 237
226
185
233 226
Del
226
233
Mam
Pap
Hna
Pac
203
175 194
194
203 175
STR 62
187 185
187 185 185
185
252 237 254
254 252 237
226
185
233 226
Del
226
233
203
175 194
194
203 175
Mutacin de novo
Diagnstico ?
Hna: no portadora con 100% de certeza

en paciente o en la madre en cl germinales
(riesgo de mosaico 15%)

Gametas:
237
185
233
175
185
254
226
194
185
254
Del
194
XNormal XMutado
DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE/BECKER
Casos Diagnsticos Complejos
1
Objetivo
Generar una estrategia diagnstica para estimar la probabilidad de ser afectado
o portador de DMD en los integrantes de una familia con antecedentes
3
2 1
1
4
2
2 1
3 4 II
I
III
IV
Materiales y Mtodos
ADN de sangre perifrica y de vellosidades
Anlisis de segregacin de 7 STRs intragnicos
(80 alelos para conformar los haplotipos)
PCR multiplex (16 exones)
Varones y VC
Estudio directo Estudio indirecto
Multiplex Ligation Probe
Amplification (MLPA)
en un afectado
Resultados
PCR multiplex (16 exones) 95% hot spot
Varones y VC
MIX I
MIX II
MIX III
MIX IV
Pac V + -
Pac V + -
Pac V + Pac V + -
No se encontr delecin
PmM 3 4 8 17 19 43 44 45 46 47 48 50 51 52 60
1
3
2
1
1
4
2
2 1
3 4 II
I
III
IV
Resultados
Anlisis de segregacin
B
-
-
-
E
H



C
-
-
-
E
I




A
-
-
-
D
G



C
-
-
-
E
I




C
-
-
-
E
I




C
K
O
Q
E
I





A
-
-
-
D
G



B
-
-
-
E
H





A
L
-
R
D
G







B
M
-
S
E
H





A
L
O
R
D
G








C
M
N
S
E
H








C
-
-
-
F
G



C
-
-
-
E
H





C
M
N
S
D
G



C
J
P
T
F
G






-
-
P
T
F
-







1er Recombinacin
STR: DYS II
STR: 7A
STR: 25
STR: 44
STR: 45
STR: 63
(-): locus no fue analizado
2da
Recombinacin
?
Resultados
MLPA: Multiplex ligation probe amplification (Dra. Laura Pirra)
Delecin exn 63! (nico exn)
Prediccin del Corrimiento del marco de lectura (CML)
delecin
EXON 63 EXON 62 EXON 64
EXON 62 EXON 64
ADNg
ARNm
TATATCAA
Y I N
CTGACCTGAAT
D L N
12 3 123 12 23 123 123
3
CTGACCTGAAT CML: STOP UGA!!!!!
Resultados
delecin
STR 62 EXON 63
delecin
STR 62 EXON 63
Corroborar el resultado del nico exn
delecionado por otra metodologa
195 162
II
I
III
del del
195 201
201 163
195 163
Resultados
162
195
195 201
163
163
201
195
Anlisis de segregacin de STR 62
(Primer universal -FAM)
PFuniversal
PR1
1 er PCR
2da
PCR
m13
PF1
(CA)n
(CA)n
PR1
delecin
STR 62
EXON 63
?
Integracin de Resultados
Anlisis de segregacin integrado
(-): locus no fue analizado
-
-
P
T
F
-







1
3
2
1
1
4
2
2 1
3 4 II
I
III
IV
B
-
-
-
E
195
H



C
-
-
-
E
162
I




A
-
-
-
D
-
G



C
-
-
-
E
-
I




C
-
-
-
E
del
I




C
K
O
Q
E
del
I





A
-
-
-
D
-
G



B
-
-
-
E
-
H





A
L
-
R
D
-
G







B
M
-
S
E
-
H







A
L
O
R
D
201
G








C
M
N
S
E
195
H








C
-
-
-
F
163
G



C
-
-
-
E
195
H





C
M
N
S
D
201
G



C
J
P
T
F
163
G






1er Recombinacin
STR: DYS II
STR: 7A
STR: 25
STR: 44
STR: 45
STR: 62
STR: 63
2da
Recombinacin
La delecin hallada del exn 63 y STR 62 permiti
confirmar el diagnstico clnico de Duchenne/Becker
en los pacientes (CML : UGA)
Interpretacin de resultados
162 195
II
I
III
del del
195 201
201 163
195 163
requiere un anlisis especial; si bien ella es heterocigota para el locus implicado en
la delecin, sabemos a priori que es una portadora obligada de DMD (posee hijos y
nietos afectados), la explicacin a dicha observacin radica en la posibilidad de que
presente mosaicismo en lnea germinal y se haya producido una mutacin de novo en
algunas de sus gametas.
Que las 3 sean heterocigotas para el STR 62 indica que no portan la delecin. Se
las excluye de ser portadoras (~ 100%).

Las 2 pudieron ser descartadas de ser portadoras con una alta probabilidad (~ 100%)
en la primera etapa del estudio. Ellas heredaron un cromosoma diferente al de los
afectados.
#55
#876 C
# 876
#876 A
#876 B
Ej: Estudio Prenatal
Dra. Florencia Giliberto
MLPA: normal
STR DYSII : 206
STR 49: 238
STR 62: 189
STR 67: 244
#55
#876 C
# 876
#876 A
#876 B
222
247
148
269
224
236
148
248
206
238
189
244
206
238
189
244
224
236
148
248
222
247
148
269
206
238
189
244
Dra. Florencia Giliberto
Y X
X X
/XoX?
MLPA para DMD
No detecta mutaciones puntuales
??? nico exn
Deleciones y Duplicaciones
MLPA
(Amplificacin mltiple de sondas ligadas. )
22 43 ntds
Secuencia stuffer de long variable para
obtener amplicones de longitud
conocida
PrimerR universal
PrimerF universal
Cada kit posee sondas
especficas y controles.
sondas (aproximadamente 45)
MLPA
MLPA
Amplificacin mltiple de sondas ligadas.
Hibridacin de las sondas (aproximadamente 45)
Ligacin (ligasa)
Amplificacin por PCR de las sondas ligadas (primers universales)
Separacin de los fragmentos en secuenciador automtico (ABI 3100)
Cuantificacin relativa (Software: GENEMARKER GENESCAN 500)
El rea del pico obtenido para cada fragmento es comparado con uno de una muestra
control. As / As
Ac / Ac

La cantidad relativa de los productos de PCR es proporcional al nmero de copias de la secuencia blanco.
MLPA
MLPA
MLPA
-
-
MLPA
-
MLPA - Resultados
MLPA - Resultados
MLPA
PO34
PO35 Normal
Paciente Mtra 49