El ADN

El cido desoxirribonucleico, abreviado

como ADN, es un cido nucleico que contiene
instrucciones genticas usadas en
el desarrollo y funcionamiento de todos
los organismos vivos conocidos y algunos virus,
y es responsable de su transmisin hereditaria.
El papel principal de la molcula de ADN es el
almacenamiento a largo plazo de informacin. Muchas veces, el ADN es
comparado con un plano o una receta, o un cdigo, ya que contiene las
instrucciones necesarias para construir otros componentes de las clulas, como
las protenas y las molculas de ARN. Los segmentos de ADN que llevan esta
informacin gentica son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN
tienen propsitos estructurales o toman parte en la regulacin del uso de esta
informacin gentica.
Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir,
un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades
simples conectadas entre s.

Estructura del ADN
Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o
bandas formadas por un elevado nmero de compuestos
qumicos llamados nucletidos. Estas cadenas forman una
especie de escalera retorcida que se llama doble
hlice. Cada nucletido est formado por tres unidades: una
molcula de azcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato
y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados
bases: adenina (abreviada como A), guanina (G), timina (T)
y citosina (C).

Extraccin del ADN:
Se separa la molcula de ADN del resto de los componentes celulares. Hay varias
substancias que pueden afectar en este proceso, bien sea los soportes donde se
encuentra la muestra biolgica (ropa) o los propios reactivos para la extraccin.
La tcnica requerir de ms tiempo o resultar ms costosa en dependencia de
tipo de muestra. La sangre o saliva tiene un proceso de extraccin ms rpido y
por tanto ms econmico que un hueso o diente. Por esta razn, la muestra de
saliva mediante hisopo es la prueba ms aconsejada para el anlisis de ADN.
Cuantificacin:
Posterior a la extraccin de ADN se realiza la cuantificacin de ADN, es decir
mesurar la cantidad de ADN aislado y valorar en qu estado se encuentra
(completo o roto).
Amplificacin del ADN o tambin conocido como anlisis por reaccin en cadena
de polimerasa (PCR):
Esta tcnica se utiliza para ampliar un fragmento de ADN, es muy til en caso de
no tener suficiente muestra de ADN, en ese caso, se hacen copias de los
marcadores del mismo ADN para proceder a estudiarlo (es posible amplificarlo
hasta un milln de veces). De manera general, la cantidad ptima de ADN est en
torno a los 5 ng, siempre y cuando se conozca una parte de la secuencia de los
nucletidos. El proceso consiste en varias fases de altas y bajas temperaturas
alternadas mediante un aparato llamado termociclador, que permite calentar y
enfriar los tubos de reaccin. En estos tubos, se pone el ADN original junto con
una mezcla que contiene nucletidos, polimerasa e iniciadores (conocido ms en
ingls comoprimers). Los iniciadores o primers, son molculas de ADN
sintetizadas de forma qumica que se adhieren a la plantilla del ADN, permitiendo
reconocer la zona variable y propiciando el inicio de la reaccin de repeticin. Los
nucletidos y polimerasa permiten la extensin y multiplicacin de la cadena de
ADN.


Secuenciar:
Una vez amplificado, se clasifican los fragmentos de ADN de cada muestra en
dependencia de su tamao mediante el proceso de electroforesis. En este
proceso, los primers son marcados fluorescentemente con unas molculas
denominadas fluorocromos, para poder ser posteriormente detectados por lser.
Mediante el analizador automtico de ADN, un ordenador encargado de traducir
los datos de emisiones fluorescentes en secuencias, detecta los marcadores de
ADN y calcula su medida. Posteriormente son transmitidos a una computadora
especial que analiza la informacin y asigna un repetido nmero para cada
fragmento. Los resultados, se obtienen por medio de ordenadores que facilitan su
interpretacin para el anlisis de ADN.
Anlisis:
Esta fase requiere entre 5 y 7 horas, en el cual el programa informtico hace un
reporte de cada gen examinado mediante un grfico. Cada micro satlite contiene
dos picos en el grfico, cada pico corresponder a los alelos del individuo. La
posicin de cada pico en un grfico es determinada por su tamao, por lo que si
dos complementos genticos de un marcador son iguales en tamao, aparecern
superpuestos como un solo pico en el grfico.
Por ltimo, con el resultado obtenido en el anlisis de ADN, se determina la
inclusin o exclusin en la prueba de paternidad.
Anlisis de ADN; l Proceso de estudio del ADN en los laboratorios.
En el proceso de anlisis de ADN, se estudian las regiones polimrficas
del ADN, de esta manera se comparan los genes biolgicos entre dos
individuos. En cada gen humano, se encuentran fragmentos llamados locu
y marcadores genticos que son examinados por los cientficos para
detectar el patrn hereditario del gen.
Anteriormente, la manera de estudiar los marcadores genticos en el
anlisis de ADN (examen de ADN), era mediante la tcnica de hibridacin
con sondas, pero este mtodo requera grandes cantidades de ADN y que
no estuviera degradado. El avance en gentica ha permitido, mediante el
mtodo por reaccin en cadena de polimerasa (PCR), la extraccin de
ADN incluso desde cantidades mnimas.
Mtodos de extraccin
Se probaron los mtodos de:
Mtodo I: Extraccin con Fenol-Cloroformo.
Mtodo II: Se tomaron 25 mL de cultivo de micoplasma y se centrifugaron
a 12000 rpm durante 10 minutos, el sedimento se resuspendio en 25 mL
de pbs y se centrifugo nuevamente a 12000 rpm durante 10 minutos y
rpidamente e coloco en hielo. El extracto se conserv a 20C hasta su
posterior utilizacin.
Mtodo III: Se hirvieron 25 mL de cultivo de micoplasma durante 10
minutos. Se tom el pellet y se resuspendio en 2.5 mL de agua destilada
estril y se conserv a 20C hasta su posterior utilizacin.