Bancosangretec

INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES
RESPIRATORIAS
ISMAEL COSO VILLEGAS
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TCNICO DEL
SERVICIO DE BANCO DE SANGRE
FEBRERO, 2008
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TCNICOS
Cdig! NCDPT
DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE R"#$
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! (
RESPIRATORIAS
NDICE
I$ INTRODUCCI)N
II$ OB*ETIVO DEL MANUAL
III$ MARCO *URDICO
IV$ PROCEDIMIENTOS
1. MEDDAS DE SEGURDAD EN EL LABORATORO DE BANCO DE SANGRE.
2. LAVADO DE MATERAL
3. METODOS PARA OBTENER MUESTRAS DE SANGRE.
4. FLEBOTOMAS DE 500 ML. EN BOLSAS COLECTORAS.
5. CONTROL DE CALDAD DE REACTVOS.
6. DETERMNACON DE GRUPOS SANGUNEOS ABO.
7. DETERMNACON DE GRUPOS SANGUNEOS RH. (D)
8. PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATBLDAD.
9. DENTFCACON DE ANTCUERPOS RREGULARES.
10. TCNCA DEL DESPEGADO DE ANTCUERPOS
11. ESTUDOS OBLGADOS DE HEMODERVADOS.
12. BRUCELLA.
13. DETERMNACON DEL TREPONEMA PALLDUM
14. DETERMNACN DE ANTCUERPOS ANT-VH.
15. HEPATTS VRAL B
16. HEPATTS C
17. DENTFCACN DE CHAGAS
18. FRACCONAMENTO DE SANGRE
V$ GLOSARIO DE TRMINOS
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
N2,-" C. LLANA E. LC. DR. JOS R. DR.
DR. LUS MALDONADO NOREGA MORALES MARGARTA S. VELZQUEZ BALTAZARES
SUAREZ DEL VALLE SERRATOS LPP
CASTLLO
Fi-2'
F"34' 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008
Cdig! NCDPT
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! 2
RESPIRATORIAS
I$ INTRODUCCI)N
El manual de procedimientos tcnicos del Servicio de Banco de
Sangre integra las polticas y normas que el personal adscrito a
este servicio deber tomar en cuenta para el buen desempeo
de las actividades.
La integracin de este documento ha sido logrado con la
participacin del titular del mismo y sancionado por el
Departamento de Planeacin antes de ser presentado para su
aprobacin a la Subdireccin de Servicios Auxiliares de
Diagnstico y Paramdicos y posteriormente por la Direccin
Mdica.
Este manual deber ser revisado y actualizado peridicamente
segn las necesidades del servicio y/o por cambio en los
lineamientos dictados por autoridades superiores.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
N2,-" C. LLANA E. LC. DR. JOS R. DR. ENRQUE
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
RESPIRATORIAS
35. OB*ETIVO DEL MANUAL
2 Conducir de forma ordenada el desarrollo de las actividades
de servicio de Banco de Sangre.
3 Uniformar criterios en los procedimientos que permitan el
correcto desempeo de las actividades.
4 Establecer los mecanismos bsicos para contribuir al objetivo
institucional del NER.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE
RESPIRATORIAS
III$ MARCO *URDICO
C6.0i0/3i6 P+70i3' d" +. E.0'd. U6id. M"8i3'6.$
D.O.F. 07-V-06
LE9ES
L": O-g;6i3' d" +' Ad2i6i.0-'3i6 P<,+i3' F"d"-'+
D.O.F. 02-V-2006
L": F"d"-'+ d"+ T-','&
D.O.F. 17--06
L": F"d"-'+ d" +'. E60id'd". P'-'".0'0'+".
D.O.F. 21-V-06
L": d" +. I6.0i0/0. N'3i6'+". d" S'+/d
D.O.F. 26-V-06 Ref. 22-V-06
L": F"d"-'+ d" R".=6.',i+id'd". Ad2i6i.0-'0i#'. d" +.
S"-#id-". P<,+i3.
D.O.F. 21-V-06
L": F"d"-'+ d" P-"./=/".0 : R".=6.',i+id'd %'3"6d'-7'
D.O.F. 03-05-06
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! >
RESPIRATORIAS
L": F"d"-'+ d" T-'6.='-"63i' : A33". ' +' I6?-2'3i6 P<,+i3'
G/,"-6'2"60'+
D.O.F. 06-06-2006
L": G"6"-'+ d" S'+/d
D.O.F. 19-X-2006
L": F"d"-'+ d" +. T-','&'d-". '+ S"-#i3i d"+ E.0'd
R"g+'2"60'-i' d"+ '='-0'd B d"+ A-073/+ (25 C6.0i0/3i6'+
D.O.F. 03-V-06
L": d" I6?-2'3i6, E.0'd7.0i3' : G"g-'?7'
D.O.F. 27-12-2006
L": d" A2='-, R"g+'2"60'-i' d" +. '-073/+. (05 : (0@ d"
+' C6.0i0/3i6 P+70i3' d" +. E.0'd. U6id. M"8i3'6.
D.O.F. 24-V-06
L": F"d"-'+ ='-' +' Ad2i6i.0-'3i6 : E6'&"6'3i6 d" Bi"6". d"+
S"30- P<,+i3
D.O.F. 23--05
L": d" P+'6"'3i6
D.O.F. 13-V-06
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! A
RESPIRATORIAS
REGLAMENTOS
R"g+'2"60 d" +' S"3-"0'-i' d" S'+/d
D.O.F. 12--04
R"g+'2"60 d" +' L": F"d"-'+ d" P-"./=/".0 : R".=6.',i+id'd
%'3"6d'-7'
D.O.F. 28-V-06.
R"g+'2"60 d" +' L": G"6"-'+ d" S'+/d "6 M'0"-i' d"
P-".0'3i6 d" S"-#i3i. d" A0"63i6 MBdi3'$
D.O.F. 14-V-1986
R"g+'2"60 d" +' L": G"6"-'+ d" S'+/d "6 M'0"-i' d"
I6#".0ig'3i6 ='-' +' S'+/d$
D.O.F. 16--1987.
R"g+'2"60 G"6"-'+ d" S"g/-id'd R'di+gi3'$
D.O.F. 22-X-1988, Aclaracin: D.O.F. 14-X-1988
R"g+'2"60 d" +' L": d" I6?-2'3i6, E.0'd7.0i3' : G"g-'?7'
D.O.F. 24-03-2004
R"g+'2"60 d" +' L": F"d"-'+ d" E60id'd". P'-'".0'0'+".
D.O.F. 26--1990, Ref. D.O.F. 7-V-1995
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE
RESPIRATORIAS
R"g+'2"60 ='-' +' P-0"33i6 d" +. N F/2'd-". "6 "+ Di.0-i0
F"d"-'+
D.O.F. 6-V-1990.
R"g+'2"60 I60"-i- d" +' S"3-"0'-7' d" S'+/d
D.O.F. 6-V-1997, Ref. D.O.F. 4-V-1999
R"g+'2"60 d" I6./2. ='-' +' S'+/d
D.O.F. 4--1998
R"g+'2"60 d" P-3"di2i"60. ='-' +' A0"63i6 d" C/"&'.
d" +' C2i.i6 N'3i6'+ d" A-,i0-'&" MBdi3
D.O.F. 29-V-1999
R"g+'2"60 d" C60-+ S'6i0'-i d" P-d/30. : S"-#i3i.
D.O.F. 9-V-1999
R"g+'2"60 .,-" 36./2 d" 0','3
D.O.F. 27-V-01
CONVENIOS
C6#"6i -"+'0i# ' +'. E.0'd7.0i3'. d" +'. 3'/.'. d" d"?/63i6
D.O.F. 23--1938 Decreto de Promulgacin y Protocolo de firma.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
RESPIRATORIAS
DECRETOS
D"3-"0 =- "+ D/" ." d' ' 363"- +' ?-2' ?i3i'+ d" +.
3"-0i?i3'd. d" d"?/63i6 : 2/"-0" ?"0'+
D.O.F. 21-X-1986
D"3-"0 d"+ I6.0i0/0 N'3i6'+ d" E6?"-2"d'd". R".=i-'0-i'.
D.O.F. 4-V-1988
D"3-"0 =- "+ D/" ." d' ' 363"- "6 ?-2' ?i3i'+ "+
62,-" d"+ I6.0i0/0 N'3i6'+ d" E6?"-2"d'd".
R".=i-'0-i'. I.2'"+ C.7 Vi++"g'.
D.O.F. 22-V-2006
D"3-"0 =- "+ D/" ." ".0',+"3" +' C'-0i++' N'3i6'+ d" S'+/d d" +'
M/&"-
D.O.F. 6--1998
PROGRAMAS
Plan Nacional de Desarrollo 2007-2012
ACUERDOS DEL E*ECUTIVO FEDERAL
A3/"-d =- "+ D/" ." di.=6" D/" "+ A-34i# G"6"-'+ d" +'
N'3i6 ."-; +' "60id'd 3"60-'+ : d" 36./+0' d"+ E&"3/0i#
F"d"-'+ "6 "+ 2'6"& d" +. '-34i#. 'd2i6i.0-'0i#. "
4i.0-i3. d" +' Ad2i6i.0-'3i6 P<,+i3' F"d"-'+
D.O.F. 14-V-1978
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! E
RESPIRATORIAS
A3/"-d 6<2"- @( =- "+ D/" ." 3-"' "+ Si.0"2' d"
C'='3i0'3i6 : D".'--++ d"+ S"30- S'+/d
D.O.F. 20-V-1987
A3/"-d 6<2"- @E -"+'0i# ' +' '=+i3'3i6, i6.0-/2"60'3i6
: '30/'+i1'3i6 d"+ 2'6/'+ ='-' +' -"?"-"63i' :
360-'--"?"-"63i' d" ='3i"60". : "6#7 d" 2/".0-'. :
".="3i2"6".
CODIGOS
Cdig 3i#i+ ='-' "+ Di.0-i0 F"d"-'+ "6 2'0"-i' 32<6 : ='-'
0d' +' R"=<,+i3' "6 2'0"-i' ?"d"-'+
D.O.F. 26-V-1928 y sus reformas.
Cdig F"d"-'+ d" P-3"di2i"60. Ci#i+".
D.O.F. 24--1943
NORMAS OFICIALES
N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' NOMF(A8FSSA(F(EE8 d"+ "8="di"60"
3+76i3
D.O.F. 14-X-1999
N-2' O?i3i6'+ M"8i3'6' ='-' +' P-;30i3' d" +' A6".0".i+g7'
NOMF(@0FSSA(F(EE8
D.O.F. 1-V-1994
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! (0
RESPIRATORIAS
N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' NOMF0(EFSCFIF(EE5$ S"g/-id'd d"
"D/i= d" =-3".'2i"60 d" d'0.
D.O.F. 20-X-1993
R".+/3i6 =- +' D/" ." 2di?i3' +' N-2' O?i3i'+ M"8i3'6'
NOMF(A8FSSA(F(EE8 d"+ "8="di"60" 3+76i3
D.O.F 22-08-2003
N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' NOMF0(@FSTPSF(EE5, R"+'0i#' '+
"D/i= d" =-0"33i6 ="-.6'+ ='-' +. 0-','&'d-". "6 +.
3"60-. d" 0-','&
D.O.F. 24-V-1994 y sus reformas
N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' NOMF002FSTPSF(EEG -"+'0i#' ' +'.
36di3i6". d" ."g/-id'd ='-' +' =-"#"63i6 : =-0"33i6
360-' i63"6di "6 +. 3"60-. d" 0-','&
D.O.F. 20-V-1994 y su aclaracin
N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' NOMF0(EFSCFIF(EEG S"g/-id'd d"
"D/i= d" =-3".'2i"60 d" d'0.
D.O.F.27- y su aclaracin.
N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' NOMF0(0FSSAS2F(EE5, ='-' +'
=-"#"63i6 : 360-+ d" +' i6?"33i6 =- #i-/. d" +'
i62/6d"?i3i"63i' 4/2'6'
D.O.17--1997
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! ((
RESPIRATORIAS
P-:"30 d" N-2' O?i3i'+ M"8i3'6' PRO9FNOMF0G0FSSA2F
2005 "6 2'0"-i' d" i6?-2'3i6 "6 .'+/d
D.O.F. 04-03-2004
OTRAS DISPOSICIONES ADMINISTRATIVAS
O?i3i 3i-3/+'- D/" ?i&' +'. 6-2'. ' D/" ." ./&"0'-; +'
'd2i6i.0-'3i6 d" +. ,i"6". 2/",+". : "+ 2'6"& d"
'+2'3"6".
D.O.F. 21-V-1988
LINEAMIENTOS
Li6"'2i"60. G"6"-'+". ='-' +' -g'6i1'3i6 : 36."-#'3i6
d" '-34i#. d" +'. d"="6d"63i'. : "60id'd". d" +'
Ad2i6i.0-'3i6 P<,+i3' F"d"-'+
D.O.F. 20-02-2004
Li6"'2i"60. G"6"-'+". ='-' +' 3+'.i?i3'3i6 :
d".3+'.i?i3'3i6 d" +' i6?-2'3i6 d" +'. d"="6d"63i'. :
"60id'd". d" +' Ad2i6i.0-'3i6 P<,+i3' F"d"-'+
D.O.F. 18-08-2003
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig! NCDPT
RESPIRATORIAS
IV$ PROCEDIMIENTOS
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
($ M"did'. d" S"g/-id'd "6 "+ L',-'0-i d" %&'! (5
B'63 d" S'6g-"
($ MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE
BANCO DE SANGRE
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
($ M"did'. d" S"g/-id'd "6 "+ L',-'0-i d" %&'! (G
B'63 d" S'6g-"
MEDIDAS GENERALES
1. Usar bata.
2. Utilizar guantes cuando se maneja sangre y otros lquidos
corporales.
3. Lavarse las manos con los guantes puestos y otra vez al
quitrselos, e inmediatamente despus del contacto de la piel
sana con productos contaminados.
4. Se deben identificar con una etiqueta especial todos los
productos que pudieran estar contaminados.
5. Evitar punciones con agujas u objetos punzocortantes.
6. No reinstalar el protector en la aguja despus de haberla
autorizado, depositarla en un recipiente rgido.
7. No pipetear con la boca, utilizar perilla o pipeta manual.
8. No maquillarse en el rea de laboratorio.
9. No correr, comer, fumar o llevarse objetos a la boca en el
laboratorio.
10. El material contaminado (jeringas, agujas, cajas de Petri, toallas
de papel, etc.) previamente identificado con la etiqueta
especfica, se deber depositar en un contenedor para ser
desechado.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
($ M"did'. d" S"g/-id'd "6 "+ L',-'0-i d" %&'! (>
B'63 d" S'6g-"
MEDIDAS PARA LIMPIAR LICUIDOS
CORPORALES
Los lquidos corporales que se hayan derramado en superficies
inertes (mesa, lavabo, etc.) deben ser limpiados como sigue:
1. La secrecin o lquido corporal que se haya derramado deber
diluirse con desinfectante (de preferencia hipoclorito de sodio
concentrado).
2. Se debe retirar la secrecin diluida con desinfectante.
3. Limpiar escrupulosamente con un trapo humedecido, de
preferencia en hipoclorito diluido del 0.5% al 1% en caso de
utilizar alcohol deber limpiarse varias veces, dado que ste se
evapora rpidamente.
4. Utilizar guantes gruesos durante todo el procedimiento.
MANE*O DEL MATERIAL CONTAMINADO
1. Sumergir el material contaminado en desinfectante qumico (por
ejemplo en hipoclorito de sodio diluido del 0.5% al 1%, por lo
menos durante media hora).
2. Lavar cuidadosamente el material con agua y jabn utilizando
guantes gruesos para retirar todas las partculas orgnicas.
3. Someter el material al mtodo de esterilizacin o desinfeccin
seleccionado.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
2$ L'#'d d" 2'0"-i'+
%&'! (A
2$ LAVADO DE MATERIAL
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
2$ L'#'d d" 2'0"-i'+
%&'! (@
LAVADO DE MATERIAL
La limpieza escrupulosa e impecable del material que se utiliza en el
banco de sangre es fundamental, ya que la presencia de restos de
jabn o protena en el material puede dar resultados falsos negativos,
tanto en pruebas de escrutinios a donadores como en pruebas de
escrutinio a donadores como en pruebas de inmunohematologa y
control de calidad, con la consecuencia fatal par la vida de los
pacientes.
Por esto tenemos que valorar que el trabajo de servicios bsicos es
vital para obtener resultados confiables aunque este personal no se
encuentre aparentemente tan cerca del paciente.
A Continuacin se presenta en forma de grficas de flujo los pasos
fundamentales del lavado de material y su control de calidad.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
2$ L'#'d d" 2'0"-i'+
%&'! (8
MATERIAL GENERAL
NCO
Remojo en agua ms cloro comercial para
obtener una dilucin final del 2%
Cepillado con escobilln
adecuado al tamao de material al chorro del
agua aproximadamente 6 veces .
Verificacin visual de la limpieza.
Clasificacin por tamaos y clase de
material en cubetas de acero inoxidable .
Remojar en detergente de Ph neutro al 2%
calentar sin llegar a ebullicin.
R
e
H
e
Cl
a
S
e
20
0
Material listo para su uso.
Reposo 12
horas .
FN
CONTRO
L DE
EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
2$ L'#'d d" 2'0"-i'+
%&'! (E
MATERIAL LIBRE DE %IERRO
NCO
R
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desmineralizada de Fe .
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c
o
n

g
a
s
a

.
FN
CONTROL DE CALIDAD
1. Observar la presencia de residuos o manchas dentro y fuera del
material.
2. Comprobar la eliminacin de detergente y agentes
limpiadores, agregando una gota de solucin
indicadora y gah.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
2$ L'#'d d" 2'0"-i'+
%&'! 20
Jabn lquido neutro . Agua bidestilada
Prueba de consumo de
GAH
Ph por lote o por cambio de marca.
Ph y conductividad
mensual previo Diario material Diario material
enjuague y ltimo Listo para su uso . Listo para su uso .
enjuague .
PRODUCTO LOTE 9
MARCA
CONTROL
DE
EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
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5$ MB0d. ='-' ,0"6"- 2/".0-'. d" .'6g-"
%&'! 2(
5$ MTODOS PARA OBTENER MUESTRAS DE
SANGRE
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
5$ MB0d. ='-' ,0"6"- 2/".0-'. d" .'6g-"
%&'! 22
E80-'33i6 C'=i+'-!
Se utiliza fundamentalmente en recin nacidos e infantes, para
obtener volmenes pequeos de sangre.
El sitio de eleccin en el recin nacido suele ser el taln, mientras
que en nios ms grandes y en adultos, se recomienda el pulpejo
del dedo o en lbulo de la oreja.
TB36i3'!
Se desinfecta la superficie elegida para la puncin con una torunda
de algodn empapada en una solucin de alcohol yodado, alcohol
etlico o ter (de ser necesario calentar ligeramente la zona para
evitar la vasoconstriccin y favorecer la vasodilatacin).
Mediante un movimiento rpido y seguro, dar un pinchazo con una
lanceta estril, enjuagando la primera gota de sangre, para despus
colectar las siguientes en una pipeta o tubo capilar heparinizado, sin
realizar presin.
E80-'33i6". #"6"6.'.!
Proporcionan de forma sencilla volmenes suficientes de sangre.
Los lugares habituales de extraccin son de las venas del pliegue
del codo.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
5$ MB0d. ='-' ,0"6"- 2/".0-'. d" .'6g-"
%&'! 25
TB36i3'!
Despus de colocar un torniquete, se procede a desinfectar la
superficie cutnea, realizndose la puncin con una aguja
hipodrmica montada en una jeringa de plstico se va tirando
lentamente del mbolo, hasta obtener la cantidad necesaria de
sangre, posteriormente se retira primero el torniquete y despus la
aguja.
Actualmente se emplea tambin el sistema Vacutainer, cuya
modificacin consiste en que la aguja tiene doble punta, una en
cada extremo, se introduce una de ellas a la vena y la otra est
montada en un soporte de plstico, en el cual se introduce un tubo
de ensaye al vaco con tapn de plstico, de manera que al
empujarlo sea perforado por el otro extremo de la aguja y mediante
el vaco, la sangre penetre libremente al tubo. La ventaja de esta
tcnica consiste en que es posible la toma sucesiva de varios
volmenes de sangre en diferentes tubos, a partir de un mismo
paciente, en una sola puncin.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
G$ F+",027'. d" >00 2+ "6 ,+.'. 3+"30-'.
%&'! 2G
G$ FLEBOTOMAS DE >00ML$ EN BOLSAS
COLECTORAS
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
Cdig !
G$ F+",027'. d" >00 2+ "6 ,+.'. 3+"30-'.
%&'! 2>
1. No usar ninguna bolsa si la solucin anticoagulante no est
transparente.
2. dentificar la unidad con el paciente.
3. Colocar un torniquete unos tres centmetros por arriba del
pliegue del brazo; palpar bien la vena.
4. Se procede a desinfectar la superficie cutnea con torundas
con jabn quirrgico, isodine o alcohol.
5. Tomar la bolsa colectora y pinzar el tubo piloto para evitar la
entrada de aire contaminado, una vez hecho esto, se quita el
protector de la aguja en forma vertical y se realiza la puncin
en el rea desinfectada, dar posicin y fijar la aguja con una
tela adhesiva, despinzar el tubo piloto para que fluya la
sangre hacia la bolsa colectora.
6. Homogenizar el conservador de la bolsa colectora con la
sangre.
7. Pesar la bolsa y una vez que tenga el volumen adecuado
(para el caso de Baxter, triple ACD, 630 grs.), pinzar la bolsa
por el tubo colector y quitar el torniquete al paciente, retirar la
aguja y colocar una torunda con alcohol en el sitio donde se
puncion, indicar al paciente que doble el brazo y lo
mantenga as por 15 minutos.
8. Dirigir la sangre dentro del tubo colector hacia la bolsa, con
la pinza rodillo. mezclar y permitir que el tubo se llene
nuevamente. Sellar las marcas "X" sobre el tubo colector
colector con un sellador dielctrico para preparar alicuotas
numeradas de sangre anticoagulada para tipificacin o
pruebas cruzadas.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 2A
>$ CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 2@
Los reactivos que se utilizan en el Banco de Sangre deben
controlarse cotidianamente con clulas y sueros testigos antes de
efectuar cualquier prueba como son: grupos sanguneos o pruebas
cruzadas, etc. Para dicho control es ideal usar clulas y sueros
testigos enviados por el Banco Central de Sangre. Este control
consiste en enfrentar los antisueros con clulas control conocidas, y
los parmetros a evaluar son especificidad, avidez y potencia.
M'0"-i'+!
1 Tubos 10x75, pipetas pasteur, gradillas.
2 Sueros anti-A, anti-AB, anti-B, leticinas anti-A, anti-H, anti-D
(Rho), Suero de coombs, albmina bovina.
3 Clulas conocidas A1, A2, B, O. al 3%.
4 Clulas sensibilizadas con anti-D al 3%.
5 Clulas no sensibilizadas al 3%.
6 Clulas R1r y rr al 3%.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
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>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 28
MB0d!
1) Para control de sueros ABO, leticinas anti-A, anti-H.
1. Colocar tres series de cuatro tubos de 10x75 en una gradilla.
2. A la primera serie adicionar 2 gotas de suero anti- A, a la
segunda serie 2 gotas de anti-AB, a la tercera serie 2 gotas de
suero anti-B.
3. - Adicionar una gota de clulas, A1, A2, B, O, a los tubos de
cada serie (Ver fig. 1).
4. Homogenizar y centrifugar 30 seg. A 3000 rpm
5. Leer y reportar en "hoja de control de calidad de reactivos
(NER-BS-06).
B) Control de Lectinas Anti A1 y Anti H
1. Colocar dos series de dos tubos de 10x75 en una gradilla.
2. Adicionar una gota de anti-A a cada tubo de la primera serie.
3. Adicionar una gota de anti-H a cada tubo de la segunda serie.
4. Adicionar una gota de clulas A1 al primer tubo de las dos
series.
5. Adicionar una gota de clulas A2 al segundo tubo de las dos
series.
6. Homogenizar y centrifugar a 3000 rpm. (Ver figura 2).
7. Leer y reportar en formato NER-BS-06.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
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>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 2E
FIGURA ( CONTROL DE CALIDAD DE SUELOS ABO
A1 A2 B O
FIGURA 2 CONTROL DE CALIDAD DE LECTINAS
A1 A2
FIGURA5 CONTROL DE CALIDAD DE ANTIFD 9 ALBUMINA
Rir rr
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
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Cdig !
>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 50
A) Para control de Anti-D y albmina.
1. Colocar dos series de dos tubos de 10x75 mm. en una gradilla.
2. A la primera serie, adicionar una gota de reactivo Anti-D (Rho).
3. Ala segunda serie adicionar dos gotas de albmina al 33% (auto
T).
4. Al primer tubo de cada serie, adicionar una gota de clulas R1
al 5%.
5. Al segundo tubo de cada serie, adicionar una gota de clulas rr
al 5%.
6. Homogenizar, centrifugar a 3000 rpm durante 90 segundos,
leer y reportar en la forma BS-06 (Figura 3).
7. Para control de sueros de Coombs. (antiglobulina humana)
8. Preparar diluciones del suero de Coombs al doble de la
siguiente manera:
9. Numerar tres series de tubos de 10x75 mm. o de 12x75 mm. de
la siguiente manera.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
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Fi-2'
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>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 5(
Fig$ G
FILA ( 2 5 G > A @ 8 E
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
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>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 52
Fila S. A. H.: (Suero Antiglobulina Humana)
1. Coloque en los tubos No. 1 y 2, 6 gotas de suero de
Coombs. (Fig. 4), los reactivos sern utilizados de acuerdo
al fabricante.
2. Coloque en el tubo No. 9, 6 gotas de solucin salina.
3. A partir del tubo No. 2, de la primera serie hasta el No. 8,
colocar 6 gotas de solucin salina
4. Mezcle el contenido del tubo No. 2 y pase 6 gotas al tubo
No. 3 y as sucesivamente hasta el nmero 8 de donde se
descartan 6 gotas.
5. Del tubo No. 8, pasar con una pipeta limpia 2 gotas de los
tubos 8 C. S. y 8 N. S.
6. Saque la pipeta
7. Pase del tubo No. 7, 2 gotas a los tubos 7 CS y 7NS, y del
No. 6, a los tubos 6 CS, 6 NS y as sucesivamente hasta
los tubos No. 2 CS Y 2 NS.
8. Con otra pipeta, pase del tubo, No. 1, 2 gotas de suero de
Coombs a los tubos (de la serie 1) 1CS y 1CNS.
9. Cambie de pipeta y coloque del tubo NO. 9, 2 gotas de
solucin salina a los tubos de la serie 9.
10. Agregue a la fila CS, una gota de eritrocitos sensibilizados al
3% a todos los tubos.
11. Una gota de eritrocitos no sensibilizados a la fila CNS.
12. Mezcle cuidadosamente.
13. Centrifugar a 3000 rpm. Durante 30 segundos.
14. Leer y reportar en formato BS-06.
CONTROL DE EMISI)N
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>$ C60-+ d" 3'+id'd d" -"'30i#.
%&'! 55
Reportar
Ti0/+ C2=/0
D6d" 4+ = 10 puntos
3+ = 8 puntos
2+ = 5 puntos
1+ = 3 puntos
G = 1 puntos
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A$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". ABO
%&'! 5G
A$ DETERMINACI)N DE GRUPOS SANGUNEOS
ABO
CONTROL DE EMISI)N
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A$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". ABO
%&'! 5>
1. Fundamento: Los grupos sanguneos son sustancias antignicas
que se encuentran en membrana eritrocitaria.
En la actualidad se han descrito ms de 400 antgenos de diferentes
sistemas de grupos sanguneos en la membrana eritrocitaria.
Es de primordial importancia la determinacin de la presencia o
ausencia de los antgenos del sistema A B O, ya que en este
sistema se encuentran de manera natural anticuerpos antitticos a
los antgenos eritrocitarios.
Por lo anterior debemos entender que una determinacin correcta
de grupos sanguneos debe constar de:
Grupo Directo: Determinacin de los antgenos eritrocitarios con
antisueros conocidos, Anti-A, Anti-AB, Anti-B.
Grupo nverso: Determinacin de anticuerpos antitticos, con clulas
de fenotipo conocido, A1, A2, B, O.
TECNICA EN TUBO
M'0"-i'+!
1 Sueros hemoclasificadores Anti-A, Anti-AB.
2 Eritrocitos de fenotipo conocido, A1, A2, B, O, suspendidos al
5%.
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A$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". ABO
%&'! 5A
1 Tubos de vidrio de 10x75 mm, Pipetas Pasteur, Centrfugas
serolgicas, Centrfugas clnicas.
2 Gradillas, soluciones fisiolgicas. (Salina al 0.9%)
M'0"-i'+ Bi+gi3!
(-7) ml. De sangre venosa del paciente sin anticoagulante.
MB0d!
1. Extraer la sangre por puncin venenosa y colectarla en un tubo
de 13x10 sin anticoagulante, dejar que se coagule.
2. Retraer cuidadosamente el cogulo y centrifugar la muestra a
3000 rpm. Durante 5 minutos para separara el suero de los
eritrocitos.
3. Colocar en una gradilla 8 tubos en sentido horizontal y colocar 2
gotas de antisueros Anti-A, Anti-AB, y Anti-B en los primeros tres
tubos (grupo directo), el cuarto tubo autotestigo AT.
4. Adicionar una gota de eritrocitos al 5% conocidos A1, A2, B, O,
en los siguientes cuatro tubos, (grupo inverso)
5. Con la misma pipeta tomar de la muestra del suero
sobrenadante de la muestra problema y colocar dos gotas en los
tubos A1, A2, B, O, (grupo inverso) y en el tubo nmero 4
autotestigo (AT) fig. 5
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
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A$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". ABO
%&'! 5@
6. Con la misma pipeta preparar una suspensin al 5% de
eritrocitos problema con su propio suero o con solucin salina
fisiolgica.
7. Adicionar una gota de esta suspensin en los primeros cuatro
tubos Anti-A, Anti-AB, Anti-B, y Auto T.
8. Homogenizar suavemente los tubos y centrifugar a 3000 rpm
durante 30 segundos.
9. Leer aglutinacin y/o hemlisis.
4+ - Botn compacto.
3+ - Botn con Grnulos satlites.
2+ - Grnulos separados.
1+ - Grnulos separados ms pequeos.
1+) - Grnulos ms pequeos.
G - Grnulos muy pequeos.
Prueba Directa Prueba ndirecta (inversa)
Anti A Anti AB Anti B AT A1 A2 B O Gpo
Sanguneo
H H F F F F H F
F H H F H H F F
F F F F H H H F
H H H F F F F F
CONTROL DE EMISI)N
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Cdig !
A$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". ABO
%&'! 58
DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO
ESTUDIO EN ERITROCITO ESTUDIO EN SUERO RESULTADO
IPRUEBA DIRECTAJ IPRUEBA INVERSAJ IGRUPOJ
ANT ANT ANT AUTO CEL CEL CEL CEL
A AB B T A1 A2 B O
A
B
O
AB
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@$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". R% IDJ
%&'! 5E
@$ DETERMINACI)N DE GRUPOS SANGUNEOS R%
IDJ
CONTROL DE EMISI)N
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@$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". R% IDJ
%&'! G0
El siguiente sistema sanguneo en importancia por su frecuencia en
la poblacin mundial es el sistema Rh-Hr, el cual consta de ms de
40 antgenos eritrocitarios de los cuales el mosaico CcDEe, reviste
mayor importancia. Dentro de estos, el antgeno D (Rho) tiene
relevancia porque ste nos permite clasificar a los individuos en Rh
positivos cuando esta presente, y Rh negativos cuando est
ausente. Una mala tipificacin de este antgeno nos podra provocar
una sensibilizacin en un individuo Rh negativo y la probabilidad de
que est antgeno provoque una respuesta de anticuerpo es muy
alta, est antgeno tambin ha sido asociado con mayor frecuencia
en la enfermedad hemoltica del recin nacido.
M'0"-i'+ : ED/i=!
1 Tubos de 10 x 75 mm.
2 Gradillas
3 Pipetas Pasteur
4 Aplicadores de madera
5 Solucin fisiolgica
6 Centrifuga sexolgica
7 Centrifuga clnica
8 Suero Anti D (Rho)
9 Control albuminoso
M'0"-i'+ Bi+gi3!
7 ml. De sangre venosa sin anticoagulante.
CONTROL DE EMISI)N
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@$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". R% IDJ
%&'! G(
MB0d!
1. Centrifugar la muestra problema a 3000 rpm.
2. hacer suspensin al 3% de eritrocitos problema con el mismo suero
del paciente.
3. Colocar dos tubos de 10 x 75 mm en una gradilla.
4. Al primer tubo debidamente rotulado (D), adicionar una gota de
reactivo anti D (Rho) ver fig. 6.
5. Al segundo tubo agregar 2 gotas de control albuminoso (AT).
6. Adicionar a ambos tubos una gota de la suspensin preparada en el
punto 2.
7. Homogenizar ambos tubos (D) y /AT) y centrifugar a 3000 rpm,
durante 90 segundos.
8. Agitar el tubo suavemente para resuspender el botn formado,
observar si existe aglutinacin.
9. Anote sus resultados.
10. Si obtiene una prueba negativa, realizar la prueba "D para
descartar esta variable.
Variante D dbil
Antes llamado Du. A todas las muestras que den negativos o un
positivo muy dudoso, se le debe realizar la prueba de la
antiglobulina humana.
1. Agregue una gota de AntiD en un tubo debidamente marcado.
2. Agregar una gota de suspensin al 3% de eritrocitos problema.
3. Mezclar, e incubar el tubo a una temperatura de 37 por 15
minutos, centrifugar a 3000 rpm por 90 seg. Leer.
4. Si el resultado anterior es negativo, lavar 3 veces con solucin
salina.
5. Agregar suero de Coombs, homogeneizar, centrifugar a 3000
rpm. Leer.
6. Agregar una gota de eritrocitos sensibilizados al 3% para
observar el consumo.
7. Reportar en la forma de grupo sanguneo.
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@$ D"0"-2i6'3i6 d" g-/=. .'6g/76". R% IDJ
%&'! G2
DETERMINACION DE R4 IDJ
Muestra sin
Anticoagulante
Anti- D Auto testigo
Albuminoso
Rh Positivo Rh Negativo Rh Negativo Rh Positivo
(+) (-) (-) (-) (-) (-) (+) (+)
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8$ P-/",'. 3-/1'd'. d" 32='0i,i+id'd
%&'! G5
8$ PRUEBAS CRUKADAS DE COMPATIBILIDAD
CONTROL DE EMISI)N
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8$ P-/",'. 3-/1'd'. d" 32='0i,i+id'd
%&'! GG
F/6d'2"60!
El objeto de las pruebas cruzadas de compatibilidad, es investigar
anticuerpos especficos activos a 37 C en el suero del paciente
contra los eritrocitos del donador y viceversa.
La Prueba Cruzada se divide en tres partes:
1. Prueba mayor.- Que contiene el suero del paciente y eritrocitos
del donador (D).
2. Prueba menor.- Que contiene el suero del donador y los
eritrocitos del paciente. (R).
3. El autotestigo.- Que contiene el suero y eritrocitos del paciente
(AT).
M'0"-i'+!
1 Tubos de 13x100 mm
2 Tubos de 10x75 mm
3 Solucin salina isotnica (0.9%).
4 Suero antiglobulina humana (AGH, "suero de Coombs).
5 Albmina bovina al 22%.
6 Bao mara para incubacin a 37C
M'0"-i'+ Bi+gi3!
1 Sangre del donador.
2 - Todas las bolsas de sangre para transfusin, llevan segmentos
de tubos de plstico (pilotos) de la sangre que est en la bolsa,
(sangre anticoagulada con ACD CPDA).
CONTROL DE EMISI)N
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8$ P-/",'. 3-/1'd'. d" 32='0i,i+id'd
%&'! G>
S'6g-" d"+ R"3"=0-!
De 5 a 10 ml de sangre fresca sin anticoagulante en un tubo
rotulado con nombre completo del enfermo, expediente, fecha,
edad, pabelln, cama y hora de extraccin.
TCNICA
P-"='-'3i6!
1 Centrifugar el tubo del receptor 5 minutos a 3500 rpm., para
separar completamente el suero de los eritrocitos del coagulo.
2 Deben de anotarse los datos completos del paciente en la hoja
de reporte y anotar sus resultados como se indicar mas
adelante y separar el suero en un tubo rotulado con los datos del
paciente como se indic anteriormente.
3 Cortar un segmento del tubo "piloto de la bolsa de sangre, pasar
todo el contenido de 12x75 mm. y centrifugarlo a 3500 rpm
durante tres minutos, este tubo contiene plasma y eritrocitos del
donador.
4 Colocar las 2 o 3 gotas de sangre remanente del tubo piloto en
otro tubo de 12x75 mm. y adicionar la solucin salina.
5 Realizar tres lavados por un tiempo de tres minutos a 3000 rpm.
Decantando y volviendo a centrifugar.
6 Despus de los lavados, hacer una solucin de eritrocitos al 5%
con solucin salina. (Este tubo contiene eritrocitos "lavados de
la sangre del donador)
7 Colocar en una gradilla 3 tubos de 10x75 mm previamente
rotulados como se indica en la figura No. 7.
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8$ P-/",'. 3-/1'd'. d" 32='0i,i+id'd
%&'! GA
Fig/-' @$
R"3"=0- D6'd-
S+
/3i
6
d"
"-i0
-3i
0.
'+
>L$
P-/",' P-/",' A/00".0ig
M':- M"6- ITJ
IDJ IRJ
1 Con una pipeta Pasteur colocar 2 gotas de suero del paciente.
En el tubo de prueba mayor (D), una gota de eritrocitos del
donador previamente lavados.
2 Con otra pipeta Pasteur, colocar 2 gotas de suero o plasma
del donador y una gota de clulas o eritrocitos del paciente en
el tubo de la prueba menor (R).
3 Colocar con una pipeta en el tubo del autotestigo (T), dos
gotas de suero del paciente y una gota de eritrocitos del
mismo (paciente).
4 Mezclar perfectamente el contenido de los tubos. Centrifugar
durante 30 segundos a 3400 rpm.
5 Leer y reportar en la hoja de anotaciones (SR) salina rpida.
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8$ P-/",'. 3-/1'd'. d" 32='0i,i+id'd
%&'! G@
1 Si en algunos de los tubos (D. R. A. T.) se observa hemlisis o
aglutinacin, debe rectificarse de inmediato el grupo
sanguneo, tanto del donador como del receptor.
2 Si las lecturas son negativas, continuar con el procedimiento e
incubar los tubos (D. R. A.T.) en el bao mara a 37C durante
una hora (checar la temperatura cada 5 o 10 minutos).
3 Una vez terminada la incubacin, centrifugue rpidamente
todos los tubos durante 30 segundos a 3400 RPM.
4 Leer y reportar los resultados en la hoja de reporte BS-7, BS-5,
(Pruebas Cruzadas).
5 Si se observa aglutinacin o hemlisis, la prueba es
incompatible, si el resultado es negativo:
6 Lavar los tubos tres veces con solucin salina: decantando y
secando despus de cada centrifugacin (tiempo de
centrifugacin, 3 minutos a 3400 RPM).
7 Resuspender suavemente el botn (agitando el tubo).
8 Agregar a cada tubo, 1 gota de suero de Coombs (AGH),
mezclar y centrifugar durante 30 segundos a 3400 RPM.
9 Leer los resultados y anotarlo en la hoja de reporte (S/C).
10 Si se observa aglutinacin la prueba es incompatible, si es
negativa:
11 Adicionar 1 gota de clulas sensibilizadas, centrifugar durante
30 segundos a 3400 RPM.
12 Leer y reportar en la hoja de reporte (CONS)
CONTROL DE EMISI)N
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! G8
E$ IDENTIFICACI)N DE ANTICUERPOS
IRREGULARES
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! GE
La deteccin de un anticuerpo y su identificacin constituyen una de
las prcticas ms importantes en el campo de la
inmunohematologia.
Se le llama anticuerpo irregular porque en contraste con los
anticuerpos del sistema ABO, el cual se encuentra regularmente en
todos los individuos sanos, estos anticuerpos solo se encuentran en
algunos. La incidencia de estos anticuerpos irregulares se ha
calculado entre un 0.3 a2%, dependiendo del grupo de individuos
examinados y de las tcnicas utilizadas para la investigacin.
La investigacin de anticuerpos irregulares nos sirve para:
1. Aclarar discrepancias sricas en el sistema ABO.
2. En mujeres embarazadas, para detectar anticuerpos que
puedan causar enfermedad hemoltica del recin nacido o
discrepancias en la prueba cruzada para el momento del
parto, en caso de que la paciente requiera ser trasfundida.
3. En el estudio de reacciones hemolticas transfusionales.
4. En el estudio de anemias hemolticas auto inmunes.
Por lo tanto los anticuerpos irregulares sen encuentran como
hemolizantes, aglutinantes y sensibilizantes.
Aquellos anticuerpos llamados irregulares como Le
a ,
Anti P, Anti M,
no estn relacionados ni con transfusiones, ni con embarazos, en
cambio los llamados irregulares inmunes como el anti D, anti C, anti
F, s lo estn.
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%&'! >0
La presencia de anticuerpos irregulares se evidencian a diferentes
temperaturas in Vitro y pueden requerir para su observacin,
substancias que favorezcan su demostracin como: medios de alta
concentracin proteica, medios enzimticos, de baja fuerza inica,
con la prueba de la antiglobulina indirecta o suero de Coombs.
La albmina ha sido usada para potenciar la aglutinacin de los
glbulos rojos por anticuerpos de la clase gG. Las soluciones de
fuerza inica baja (LSS) acortan el tiempo de incubacin e
incrementan la captacin de anticuerpos.
La utilizacin de substancias que contengan enzimas, son tiles
para potenciar la reactividad de algunos anticuerpos como los
pertenecientes a los sistemas Rh, Lewis, Kidd; pero las enzimas
tambin modifican o destruyen otros antgenos como: MNS, Duffy
Pr, Xg
a
, Yt
a
, Cs
a
y Ch
a
, propiedad que facilita la identificacin de los
correspondientes anticuerpos.
La observacin de la reaccin antgeno anticuerpos se lleva a cabo
slo en condiciones ptimas segn la naturaleza del anticuerpo,
( cantidad del reactivo, tcnica apropiada, etc. ) debiendo considerar
que cuando se demuestra la presencia de un anticuerpo irregular en
el suero de una persona, podemos afirmar que existe un problema,
en cambio en caso negativo no se puede asegurar, an en
condiciones ptimas, que el paciente pudo haber sido estimulado y
producir un anticuerpo en el momento de la investigacin. Por esta
razn se debe tener comunicacin entre el servicio clnico y el
laboratorio. Para saber si el paciente ha tenido embarazos o ha sido
sometido a hemoterapias.
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >(
En la bsqueda de los anticuerpos irregulares fuera del sistema
ABO, se emplean varias clulas de grupo sanguneo "o a las que se
les ha tipificado los siguientes sistemas de grupo sanguneo:
1 Rh-Hr
2 MN
3 SS
4 P
5 Duffy
6 Kell-cellano
7 Kidd
8 Diego
9 Lewis
10 Lutheran
'J P-/",' d" P'60'++' IS"2i='6"+J
Las muestras de sangre con los siguientes fenotipos como:
PANEL
R1R1, MN, SS, P, Fy (a+b- ), Di (a b), Le ( a-+, b- ) Lub.
PANEL
R2R2, MN, SS, P-Fy ( a-b+ ) KK, JK (a-b+ ) Di ( a- b+ ) Lub.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >2
PANEL
rr, MN, SS, P, Fy (a+ b+) KK JK (a+ b+) Di (a- b+) Lub.
2) E6 "+ 3'. d" D/" "6 +' =-/",' d" ='60'++' ." ,0/#i"-'6
-"./+0'd. =.i0i#. ." ".0/di'-; +' ".="3i?i3id'd d"+
'60i3/"-= 360-' (0 2/".0-'. ."='-'d'. I='6"+J 36 +'.
2i.2'. 0B36i3'. D/" ." "2=+"'-6 "6 +' =-/",' d" ='60'++'$
M'0"-i'+ : R"'30i#.!
1. 8 ml. de muestra fresca de sangre del problema, de menos
de 2 horas de extrada, sin anticoagulante.
2. Clulas de los paneles 1,2,3, al 2% en solucin salina isotnica.
3. Clulas de los paneles 1,2,3, suspendidas al 5% en Buffer de
baja fuerza inica ( Liss ).
4. Clulas del panel (10 clulas) suspendidas al 2% en solucin
salina.
5. Clulas del panel (10 clulas) suspendidas al 5% en Buffer
(Liss).
6. Suero antiglobulina humano (suero de Coombs).
7. Albmina bovina al 22% y/o al 30%.
8. Medio enzimtico (ejemplo, Bromelina).
9. Pipeta Pasteur.
10. Tubos de ensaye de 10x75mm.
11. Bao mara 20C.
12. Bao mara o estufa a 37C.
13. Solucin amortiguadora de baja fuerza inica (Liss).
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >5
MB0d!
1. Colocar y marcar los tubos de 10x75mm. como se indica en el
cuadro No. 1.
2. Poner en cada uno de los tubos de las series , , , 2 gotas de
suero problema, ms 1 gota de los eritrocitos correspondientes,
suspendidos al 2% en solucin salina.
3. En las serie V, poner 1 gota de suero, ms 1 gota de eritrocitos,
correspondientes, suspendidos al 5% en Buffer de Liss y llevar a
cabo la siguiente tcnica:
SERIE I
1. Mezclar y centrifugar 30 a 3400 rpm. Leer aglutinacin y/o
hemlisis. Anotar = sr
2. Colocar todos los tubos a 37C durante 60', centrifugar 30 a
3400 rpm. Leer aglutinacin y/o hemlisis y anotar = S 37C.
3. Al contenido negativo de los tubos, lavarlo 3 veces (tubo
lleno) con solucin salina estril, "secando los eritrocitos
despus de la tercera lavada.
4. Agregar de 1 a 2 gotas (segn instructivo) de suero de coombs.
5. Mezclar, centrifugar 30 a 3400 rpm, leer y anotar = s/coombs.
6. A los tubos negativos, obligatoriamente agregarle 1 gota de
"eritrocitos testigo coombs positivo.
7. Mezclar, centrifugar 30 a 3400 rpm y leer.
8. Este resultado debe ser positivo = consumo de la antiglobulina
humana, (coombs).
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >G
SERIE II
1. Agregar a todos los tubos 1 gota de Bromelina.
2. Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente 15'.
3. Centrifugar 30 a 3400 rpm, leer aglutinacin y/o hemlisis,
anotar = Br.
4. Colocar todos los tubos a 37C por 15'.
5. Centrifugar todos los tubos a 30 a 3400 rpm y leer, anotar = Br
15' = 37C.
SERIE III
1. Agregar a todos los tubos de 2 a 3 gotas de albmina (segn
instructivo del proveedor).
2. Mezclar perfectamente.
3. Centrifugar 90 a 3400 rpm. ( segn instructivo del proveedor )
4. Leer aglutinacin y/o hemlisis, anotar = Ar.
5. Colocar todos los tubos a 37C durante 60', centrifugar y
reportar =A 37C
6. Lavar todos los tubos negativos 3 veces con solucin salina
y continuar como en la tcnica s/coombs= A Coombs
SERIE IV
1. Colocar todos los tubos 10' a 37C.
2. Centrifugar 30 a 3400 rpm, leer y anotar = Liss 10' 37C.
3. Lavar todos los tubos negativos 3 veces con solucin salina
y continuar como en la tcnica s/coombs = Liss/coombs.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >>
Cuadro No. 8
SERIE ERITROCITOS ERITROCITOS ERITROCITOS ERITROCITOS
PROBLEMA PANEL N$ ( PANEL N$2 PANEL N$ 5
ATS S 25 35 = Salina
rpida
ATB B 2B 3B =
Bromelina
ATA 1A 2A 3A = Albmina
V ATL 1 L 2L 3L = Liss
ATS = Autotestigo en Salina.
ATB = Autotestigo en Bromelina.
ATA = Autotestigo en Albmina.
ATL = Autotestigo en Liss.
Cuando un suero contiene dos o ms anticuerpos, su
identificacin puede complicarse. El patrn de
aglutinacin del panel se caracteriza por:
1. No define la presencia de un determinado anticuerpo.
2. Todas las clulas del panel o la mayora son aglutinadas.
3. Puede haber variaciones en el grado de aglutinacin, en los
diferentes medios.
4. Bajo estas circunstancias se debe considerar que existan:
o Anticuerpos mltiples o bien.
o Presencia de anticuerpos contra antgenos de alta
frecuencia.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >A
Unas de las tcnicas utilizadas en estos casos son: Absorcin y elucin
selectiva.
A,.-3i6!
La tcnica de absorcin se usa:
1. Para remover anticuerpos y facilitar la identificacin de otro.
2. Confirmar la especificidad (de un anticuerpo).
Las tcnicas de elucin son usadas para confirmar la especificidad
de los anticuerpos removidos por absorcin. En este procedimiento
las molculas de anticuerpos son liberadas de la membrana del
glbulo rojo, ya sea mediante la destruccin del antgeno o
cambiando las condiciones que favorecen la disociacin del
complejo antgeno anticuerpo.
Existen varias tcnicas de elucin:
Por calor, con eter, digitonina acida, congelamiento, xileno y cloroformo.
I60"-=-"0'3i6 d" -"./+0'd.!
La interpretacin del panel se hace por exclusin o descarte de
posibles anticuerpos, basndose en la no reactividad del anticuerpo
con aquellas clulas del panel que poseen determinados antgenos,
es decir, si el suero no reacciona con una determinada clula del
panel en todas las fases de la prueba.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >@
Significa que el anticuerpo presente en el suero no est dirigido
contra los antgenos presentes en clula. En cambio el anticuerpo
tendr especificidad contra el o los antgenos presentes en las
clulas que resultan aglutinadas.
Sin embargo es posible llegar a conclusiones errneas, en la
identificacin de anticuerpos. Por lo cual para poder determinar la
especificidad de un anticuerpo al realizar el panel, lo cual consta de
8 a 10 clulas, por lo menos 3 de ellas que contienen el antgeno
correspondiente, deben dar reaccin positiva otras 3 en las cuales el
antgeno est ausente, no deben reaccionar.
Si esta regla se cumple, el nivel de probabilidad de certeza es mayor
del 95%.
P-/",' d" +' A60ig+,/6i6' %/2'6' Di-"30' C2,.
Di-"30 : d"+
D".="g'd d"
A60i3/"-=.
La destruccin precoz de los eritrocitos como en la Enfermedad
Hemoltica del Recin Nacido (EHRN), en las reacciones
transfusionales hemolticas o en la Enfermedad Hemoltica
autoinmune, es debida a anticuerpos (Acs) especficamente dirigidos
a Antgenos (Ags), contra los eritrocitos del beb, quien posee Ags
heredados del padre y de los que la madre carece. En el segundo
caso, los pacientes sometidos frecuentemente a transfusiones de
eritrocitos, pueden desarrollar tambin Aloanticuerpos.
Por el contrario en el ltimo de los casos, el paciente afectado por
una regulacin defectuosa de su respuesta inmune, es capaz de
desarrollar Acs (Autoanticuerpos) contra sus propios eritrocitos.
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! >8
Una prueba de laboratorio muy til para demostrar anticuerpos
ligados al eritrocito, es la prueba de la antiglobulina humana directa o
prueba de coombs directa. Esta cuando es positiva nos indicara
solamente la presencia de Acs ligados al eritrocito.
Posteriormente, debe obtenerse al Ac en solucin por medio de las
tcnicas del despegado (elusin) para poder estudiar su especialidad.
Estas tcnicas se basan en procedimientos fsicos y/o qumicos
aplicados al eritrocitos recubierto de Ac y que rompen su unin.
PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA %UMANA DIRECTA IAG%DJ O
DE COOMBS DIRECTO
M'0"-i'+!
1. Sangre problema anticoagulada con EDTA (EP)
2. Eritrocitos sensibilizados con gG (testigo positivo de coombs
TPC).
3. Eritrocitos no sensibilizados (testigo negativo de coombs TNC)
4. Suero Antiglobulina Humana o Suero de Coombs (SAH)
P-"='-'3i6 d" +. "-i0-3i0.!
1. Tome 3 tubos de 13 x 100, en uno coloque 1 gota de EP, en
otro 1 gota de TPC y en el tercero 1 gota de TNC.
2. Lvelos con solucin salina isotnica, (SS), tubo lleno, por 3
veces.
3. Resuspndalos al 2.55 con SS.
4. Colquelos a 20C mientras prepara el siguiente material.
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%&'! >E
Preparar diluciones del suero de Coombs al doble de la siguiente
manera:
1. Numerar tres series de nueve tubos de 10 x 75 mm., como se
indica en la figura 8.
Donde:
SAH= Suero Antihumano
EP= Eritrocitos problema
TPC= testigo positivo de Coombs
TNC= Testigo negativo de Coombs.
FILA S$A$%$!
1) Coloque en los tubos No. 1 y 2, 8 gotas de suero de coombs.
2) Coloque en el tubo No. 9, 8 gotas de solucin salina.
3) A partir del tubo No. 2 hasta el No. 8, coloque 8 gotas de solucin
salina.
4) Mezcle el contenido del tubo No.2 y pase 8 gotas al tubo No.3 y
as sucesivamente hasta el
No.8 en donde se descartan 8 gotas.
5) Del tubo No.8, pasar con una pipeta limpia 2 gotas a los tubos
8 EP, 8 TPC y 8 TNC.
6) Saque la pipeta.
7) Pase del tubo No.7, 2 gotas a los tubos 7 EP, 7 TPC, 7 TNC y
del No. 6, a los tubos, 6 EP, 6 TPC y 6 TNC, y as
sucesivamente hasta los tubos No. 2 EP, 2 TPC y 2 TNC.
8) Con otra pipeta, pase del tubo No.2, 2 gotas de suero de coombs
a los tubos de la serie 1.
9) Cambie de pipeta y coloque de tubo No.9, 2 gotas de solucin
salina a los tubos de la serie 9.
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! A0
10) Agrege a la serie EP 2 gotas de eritrocitos EP al 2.5% a todos los
tubos.
11) 1 gota de eritrocitos TPC a la serie TPC y 1 gota de eritrocitos
TNC a la serie TNC.
12) Mezcle cuidadosamente.
13) Centrifugue todos los tubos.
14) Lea.
E&"2=+ d" -"./+0'd.!
Di+/3i6". d"+ S/"- d" C2,.
1 2 3 4 5 6 7 8 9
1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256
E.P. 4+ 4+ 3+ 2+ 1+ (+) g - -
T.P.C. 2+ 2+ 1+ (+) g - - - -
T.N.C. - - - - - - - - -
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
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E$ Id"60i?i3'3i6 d" 3/"-=. i--"g/+'-".
%&'! A(
P-"='-'3i6 d" S/"-. d" C2,.
Numere tres series de tubos de 10 x 75 mm o de 12 x 74 mm de la
siguiente manera.
FILA ( 2 5 G > A @ 8 E
S. A. H.
E. P.
T. P. C.
T. N. C.
CONTROL DE EMISI)N
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(0$ TB36i3' d"+ d".="g'd d" +. '60i3/"-=.
%&'! A2
(0$ TCNICA DEL DESPEGADO DE LOS
ANTICUERPOS
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(0$ TB36i3' d"+ d".="g'd d" +. '60i3/"-=.
%&'! A5
TECNICA DEL DESPEGADO DE LOS ANTICUERPOS CON
CLOROFORMO IELUIDOJ
M'0"-i'+!
1) El habitual en el laboratorio.
2) Sangre total del problema, anticoagulada con EDTA
D".="g'2i"60 36 3+-?-2
R"'30i#.!
1) Cloroformo
2) Albmina bovina al 22% 33%
3) Solucin salina isotnica (NaCL 0.9%) (SS)
MB0d!
Coloque el volumen necesario de eritrocitos en un tubo de 13 x 100
de acuerdo con la intensidad de la reaccin del coombs directo,
(cmputo).
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
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(0$ TB36i3' d"+ d".="g'd d" +. '60i3/"-=.
%&'! AG
EJEMPLOS: S/P 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/28 1/256
No.1 33 punto 2+ 2+ + + (+) (+) g - - =
COMPUTO 8 8 5 5 3 3 1 0 0
No.2 51 punto 4+ 4+ 3+ 2+ + (+) g - - =
COMPUTO 12 12 10 8 5 3 1 0 0
La intensidad de la reaccin nos indica, aunque de manera gruesa,
la cantidad de anticuerpos pegados al eritrocito. Se necesitar una
mayor cantidad de eritrocitos del ejemplo No. 1 que del No. 2 para
obtener una cantidad apropiada de anticuerpo despegado, ejemplo:
Del No. 1, 0.2 ml. de paquete de eritrocitos y del No. 2, 0.1.
TB36i3'!
1) Lavar 3 veces los eritrocitos problema con S a 4C.
2) Preparar una solucin de albmina al 6% con solucin salina.
3) En un tubo 13 x 100, poner volumen a volumen la solucin
anterior y el paquete de eritrocitos lavados. Agregar un
volumen equivalente de cloroformo.
4) Tapar con tapn de caucho, mezclar vigorosamente por 15
seg., mezclar por inversin durante un minuto.
5) Destapar con mucho cuidado para que no se proyecte el
contenido. Poner el tubo a 56C durante 5 minutos exactos,
mezclando constantemente con un aplicador (pipeta
pasteure). Centrifugar 5 minutos, pasar el sobrante a un tubo
de 12x 75, centrifugar 2 minutos, decantar el sobrante.
6) Coloque el total del eluido, distribuido equitativamente en los
tubos donde se va a probar su especialidad.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(0$ TB36i3' d"+ d".="g'd d" +. '60i3/"-=.
%&'! A>
7) Agrege las clulas de fenotipo conocido al 2.5% en SS.
8) ncube a 37C de 30 a 60.
9) Lave 3 veces con SS (tubo lleno).
10) "Seque los eritrocitos.
11) Suspndalos suavemente.
12) Agregue el suero antiglobulina humana.
13) Centrifugue y lea aglutinacin.
14) Si los resultados son negativos, agregar una gota de
eritrocitos control positivo de Coombs. (Consumo)
TB36i3' d"+ D".="g'd d" +. A60i3/"-=. A G>MC IB'N
M'-i'J
1) Los eritrocitos problema se lavan como en el caso de la tcnica
del cloroformo.
2) Agregue la mitad del volumen de eritrocitos de SS o albmina
bovina a 6% en SS.
3) Mezcle perfectamente bien.
4) Coloque el tubo en un bao mara de 45C durante 20'.
5) Agite la mezcla vigorosamente de 4 a 5 veces durante este
tiempo de incubacin.
6) Centrifugue la mezcla durante 5' a 4000 R.P.M.
7) Separe cuidadosamente el sobrenadante (Ac eluido o
despegado).
8) Recentrifugue el sobrenadante durante 3' a 4000 R.P.M.
9) Decntelo sobre un tubo limpio.
10) Reparta de inmediato y equitativamente todo el eluido en
tubos de 10 x 75 12 x 75 mm.
11) Agregue los eritrocitos de fentipo conocido necesario y,
12) Lleve la prueba hasta coombs.
13) Realizar consumo de coombs.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(0$ TB36i3' d"+ d".="g'd d" +. '60i3/"-=.
%&'! AA
DESPEGADO POR TRICLOROETILENOFCLOROFORMO
1) Lavar 3 veces los eritrocitos problema con S a 4C.
2) En un tubo de 13 x 100 poner volumen a volumen con
solucin salina eritrocitos lavados, agregar igual volumen del
reactivo, tapar el tubo, incubar a 37C durante 5 a 10 minutos
rotando constantemente con una inclinacin de 45C hasta
que se observe la hemlisis total.
3) Centrifugar 5 minutos, con pipeta pasteure recuperar el
sobrenadante procurando no tocar la interfase ni el reactivo
porque entonces todo se hemiolizar.
4) Centrifugar nuevamente por 2 minutos, decantar y realizar el
estudio de anticuerpos ( como en el paso No. 5 de la tcnica
de cloroformo).
5) Reportar resultados en NER-BS 18 98.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(($ E.0/di. ,+ig'd. d" 4"2d"-i#'d.
%&'! A@
(($ ESTUDIOS OBLIGADOS DE
%EMODERIVADOS
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(($ E.0/di. ,+ig'd. d" 4"2d"-i#'d.
%&'! A8
A todas las unidades de sangre y hemoderivados se les tienen que
practicar obligatoriamente las pruebas siguientes:
1. -Prueba serolgica para identificacin de reaginas contra sfilis
( RPR )
2. -Determinacin de Brucella mediante la tcnica de Rosa de Bengala.
3. -Prueba serolgica para el antgeno de superficie de la hepatitis "B
(HbsAg).
4. -Prueba serolgica para la determinacin de anticuerpos anti-HV.
5. -Prueba serolgica para la determinacin de anticuerpos anti-HCV.
A continuacin se describir cada una de las tcnicas
detalladamente; son en general pruebas de floculacin, aglutinacin
e inmunoensayo enzimticos y antes de empezar la ejecucin de
cada tcnica es necesario hacer las siguientes consideraciones.
R"32"6d'3i6". G"6"-'+".
Todas las tcnicas son sumamente sensibles y para tener la
fiabilidad de los resultados depende en gran parte del correcto
cumplimiento de las normas de laboratorio establecidas.
1 No utilizar reactivos caducados.
2 No mezclar reactivos de diferentes lotes en una serie de pruebas
determinadas.
1 Antes de comenzar las pruebas, esperar 30 minutos para
estabilizar los reactivos a temperatura ambiente.
2 Reconstruir los reactivos cuidadosamente.
3 Verificar las pipetas y el equipo para una operacin correcta y
precisa.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(($ E.0/di. ,+ig'd. d" 4"2d"-i#'d.
%&'! AE
A3"-3' d" +'. M/".0-'.!
1. Obtener las muestras de acuerdo con las prcticas habituales.
2. Se deben separar lo antes posible las muestras para evitar
hemlisis.
3. No usar muestras lipmicas, hemolizadas y que visiblemete
presenten contaminacin (bacteriana), si no se puede obtener
una muestra fresca, las muestras existentes deben ser
clasificadas mediante filtracin.(0.45um).
4. No se deben utilizar muestras que se hayan congelado y
descongelado en mltiples ocasiones.
5. Toda las muestras y controles de origen humano deben
manejarse como potencialmente infectantes.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(2$ B-/3"++'
%&'! @0
(2$ BRUCELLA
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(2$ B-/3"++'
%&'! @(
Las brucelas son cobacilos gram negativos. El gnero comprende 3
especies importantes patgenos para el hombre, que se diferencian
originalmente sobre la base de sus principales reservorios animales:
Cabras y ovejas para B. mellitensis, ganado vacuno para B. abortus
y los cerdos para B. suis. Esta divisin ha sido apoyada por
diferencias metablicas y antignicas. El hombre se infecta a travs
de la ingestin de leche no pasteurizada o de queso, o bin del
contacto con los tejidos de animales infectados.
La respuesta inicial de los anticuerpos es la aparicin de gM,
seguida despus de gG. Las pruebas de aglutinacin se realiza con
suspensiones fenoladas de bacilos lisos, muertos por el calor, Se
utiliza para esto una cepa normalizada de B. abortus (n 456), que
es avirulenta para el hombre; detecta igualmente bien los
anticuerpos frente a las tres especies principales.
nterpretacin: Los ttulos superiores de 1:80 se considera una
indicacin de la existencia de una infeccin o de una infeccin
anterior.
M'0"-i'+ : ED/i=!
1 1 placa de vidrio
2 Aplicadores
3 Antgeno de Brucella Abortus
4 Suero control positivo para Brucella Abortus
5 Suero control negativo para Brucella Abortus
6 1 agitador rotatorio
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(2$ B-/3"++'
%&'! @2
P-3"di2i"60!
1. Colocar 1 gota de suero problema en cada divisin de la placa de
vidrio, colocar tambin 1 gota de suero control positivo y de
control negativo respectivamente.
2. Depositar en el lado opuesto donde est la gota de suero , 1 gota de
antgeno de B. Abortus.
3. Con un aplicador, unir las dos gotas de cada divisin y homogenizar
la mezcla.
4. Agitar durante 6 minutos a velociada media.
5. nterpretar resultados.
Se utiliza antgeno Brucella Abortus 99 inactivado por calor y fenol
en buffer de lactato de sodio y teido con Rosa de Bengala.
M'0"-i'+!
1 Gradilla
2 Placa-soporte desechable
3 Pipeta-agitador desechable
4 Rotor
5 Cronmetro
M'0"-i'+ Bi+gi3!
1 Muestra (s) de sangre venosa sin anticoagulante centrifugada y
separada en suero y paquete globular.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(2$ B-/3"++'
%&'! @5
R"'30i#.!
1 Antgeno rosa de bengala
2 Control positivo (suero)
3 Suero control negativo
P-3"di2i"60!
1. Llevar reactivos a temperatura ambiente.
2. Con ayuda de las pipetas, tomar una gota de suero problema y
colocarla en la placa desechable. Hacer lo mismo con cada uno
de los controles.
3. Homogenizar perfectamente el antgeno de rosa de bengala y
adicionar una gota en la placa desechable que contiene la
muestra problema y proceder del mismo modo con cada uno de
los controles.
4. Mezclar ambas gotas con la punta de una pipeta desechable.
5. Colocar en el rotor y accionarlo durante 4 minutos
6. Observar, leer y reportar.
7.
n
t
e
r
p
r
e
t
a
c
i
n

d
e

r
e
s
u
l
t
a
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o
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.

A
g
l
u
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a
c
i
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:

P
r
u
e
b
a

p
o
s
i
t
i
v
a
.

No Aglutinacin : Prueba negativa
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(2$ B-/3"++'
%&'! @G
I60"-=-"0'3i6 d" -"./+0'd. ='-' -.' d" ,"6g'+'$
1. Control positivo mas antigeno rosa de bengala. (4+)
2. Control negativo mas antigeno rosa de bengala. ( - )
3. -6 suero problema mas antigeno rosa de bengala. ( - )
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(5$ D"0"-2i6'3i6 d" 0-"=6"2' ='++id/2
%&'! @>
(5$ DETERMINACI)N DE TREPONEMA
PALLIDUM
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(5$ D"0"-2i6'3i6 d" 0-"=6"2' ='++id/2
%&'! @A
D"0"-2i6'3i6 d" T-"=6"2' P'++id/2 Si?i+i. =- "+ MB0d d"
R"'gi6' R'=id' IRPRJ$
La sfilis, principal enfermedad venrea del hombre, encausada por
la espiroqueta (treponema pallidum) y suele transmitirse por
contacto sexual, aunque la entrada estragenital est bin
demostrada.
La respuesta inmune a esta invasin se divide en :
1) Anticuerpos reagnicos biolgicamente no especficos.
2) Anticuerpos especficos a treponema pallidum que producen
aglutinacin, adherencia inmune, fijacin de complemento.
Para la determinacin de estos anticuerpos existen dos tipos de
pruebas: Las no treponmicas (VDRL y RPR) que utilizan como
antgenos cardiolipinas sensiblizadas por colesterol para detectar
anticuerpos reagnicos y las treponmicas que s utilizan antgeno o
extractos de treponema pallidum para detectar anticuerpos
especificos (las ms frecuentes son: la prueba de inmovilizacin de
treponema pallidum TP la prueba de fijacin de proteinas
complemetarias de Reiter (RPCF).
Sin embargo hablaremos aqu especficamente de la prueba reagnica
de RPR .
Esta prueba se basa en la floculacin visible (macroscpica) del
antgeno artificial combinacin de cardiolipina, colesterol, lecitina y
colorante en solucin alcohlica estabilizado con cido benzico
ante la presencia del anticuerpo en el suero del paciente.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(5$ D"0"-2i6'3i6 d" 0-"=6"2' ='++id/2
%&'! @@
M'0"-i'+!
1 Gradilla
2 Placa de reaccin con anillos grabados
3 Pipetas desechables
4 Aguja sin bisel
5 Agitadores
6 Rotor
M'0"-i'+ Bi+gi3!
Muestra (s) de sangre venosa sin anticoagulante, centrifugada y con
suero separado.
R"'30i#.!
1 Antgeno en suspensin.
2 Control positivo.
3 Suero control negativo.
4 Agitador Rotatorio
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
Cdig !
(5$ D"0"-2i6'3i6 d" 0-"=6"2' ='++id/2
%&'! @8
MB0d 3/'+i0'0i#!
1. Depositar con ayuda de la pipeta desechable una gota
(0.05ml) de suero problema, en un anillo de la placa de
reaccin . Se proceder del mismo modo con cada una de las
muestras y controles. Extender perfectamente la gota sobre la
superficie del anillo.
2. Aadir con la ayuda de la aguja sin bisel una gota de la
suspensin del antgeno una vez homogenizado a cada una
de las muestras.
3. Colocar la placa en el rotor y agitar por un espacio de 8 minutos
a 180 rpm.
4. Leer resultado.
I60"-=-"0'3i6 d" -"./+0'd.!
1 Presencia de flculos (grumos)- Positivo.
2 No presencia de flculos (grumos)- Negativo.
DIAGRAMA
CONTROL DE EMISI)N
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Cdig !
(5$ D"0"-2i6'3i6 d" 0-"=6"2' ='++id/2
%&'! @E
MB0d C/'60i0'0i#!
1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba
cualitativa.
2. Colocar en una gradilla 4 tubos de 12X75mm y numerarlos.
3. Agregar a cada uno de ellos 0.5ml de solucin salina.
4. Depositar 0.5ml. de suero problema en el tubo No. 1 y mezclar.
5. Pasar 0.5ml. del tubo No.1 al tubo No. 2 y mezclar.
6. Continuar esta operacin hasta el tubo No.4.
7. Depositar 0.05ml de cada una de las diluciones sobre anillos
diferentes de la placa de reaccin . Extender la muestra sobre
la superficie del anillo.
8. Aadir una gota de la suspensin de antgeno , previamente
resuspendido utilizando el frasco gotero al que se le ha
insertado la aguja sin bisel.
9. Colocar la placa de reaccin sobre el rotador mecnico a 180
RPM durante 8 minutos.
10. Leer resultados microscpicamente.
I60"-=-"0'3i6!
El ttulo de suero problema ser la ltima dilucin que presente grumos,
ejemplo:
T/, O Di+$ S/"-
1 1:2
2 1:4
3 1:8
4 1:16
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(5$ D"0"-2i6'3i6 d" 0-"=6"2' ='++id/2
%&'! 80
El ttulo del suero problema ser 1:8
NOTA: Las limitaciones del procedimiento sern con :
1 Sueros extremadamente turbios o hemolizados son
insatisfactorios para realizar la prueba.
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 8(
(G$ DETERMINACI)N DE ANTICUERPOS ANTIF
VI%
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 82
P-/",'. ='-' d"0"30'- +' =-"."63i' d"
'60i3/"-=. '60iFVI%, =- "+ 2B0d d"
%"2'g+/0i6'3i6 ='.i#' : "+ "6.':
i62/6"61i2;0i3 IELISAJ
%"2'g+/0i6'3i6 P'.i#'
Dicha prueba es un procedimiento sencillo que no requiere de
instrumentos especiales para su realizacin; esta prueba utiliza
antgeno de VH obtenido por cultivo del virus en clulas linfoides
(VH ). El virus es inactivado y desintegrado y con el se cubren
partculas que actan como soporte (eritrocitos humanos
estabilizados, partculas de gelatina). El principio de esta prueba se
basa en que estas partculas sensibilizadas son aglutinadas por la
presencia de anticuerpos de HV en muestras de suero o plasma.
M'0"-i'+!
1 Tubos de 13X100.
2 Pipetas graduadas de 1ml.
3 Micropipeta de 25ml.
4 Puntas para micropipeta.
5 Agitador rotatorio.
6 Placas con fondo en "U.
7 Reactivo del Kit en uso.
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 85
P-3"di2i"60!
1. El kit serodia cuenta con dos viales; uno de partculas control
y otro con patculas sensibilizadas, ambos viales vienen
liofilizados. Reconstituir ambos frascos con Buffer
(reconstituyente). Dejar hidratar durante 30 minutos.
(Adicionar el volumen necesario de Buffer de acuerdo a la
presentacin del Kit).
2. Se manejan 3 pozos por cada muestra; se agregan 75
Microllitros de diluyente de muestras en el primer pozo y 25
Microlitros en el segundo y tercer pozo
3. Agregar 25 Microlitros de muestra al primer pozo.
4. Homogenizar la muestra en el primer pozo y transferir 25
Microlitros al segundo pozo, homogenizar con una micropipeta
y transferir al pozo 3, homogenizar y descartar los ltimos 25
Microlitros.
5. Proporcionar en el pozo 2, 25 Microlitos. de partculas no
sensibilizadas.
6. Colocar en el pozo 3,25 Microlitos de partculas sensibilizadas.
7. Homogenizar en un agitador rotatorio durante 5 minutos (a
180 rpm), cubrir e incubar 2 horas a temperatura ambiente
(15-25C) en una superficie libre de vibraciones.
8. Correr un control positivo en cada ensayo.
9. Leer resultados.
10. Registrar nmero de lote del reactivo y fecha de caducidad.
I60"-=-"0'3i6 d" -"./+0'd.!
1- Resultado negativo: Formacin de un botn compacto.
2- Resultado positivo: Formacin de un Halo (anillo) aglutinado.
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%&'! 8G
El VH como cualquier otro agente infeccioso estimula la respuesta
inmune provocando la formacin de anticuerpos especficos. Entre
los mtodos comunes de detenccin de estos anticuerpos se
encuentra el ensayo ELSA . Dicha prueba se basa en la reaccin
inmunolgico que se presenta entre un antgeno y su anticuerpo
especfico ; el antgeno de VH se encuentra fijo en una superficie
(fase slida), el cual reacciona con el anticuerpo especfico al
adicionar alguna muestra seropositiva. Posteriormente se lleva a
cabo una segunda reaccin en la cual se adiciona un anticuerpo
marcado con una enzima (conjugado), dicho anticuerpo va dirigido
al primer anticuerpo; enseguida se adiciona un sustrato el cual
desarrolla color para visualizar la reaccin positiva.
Principio de la prueba
HV Anti-HV (g anti-humano)-HRP+ sustrato
Antgeno en fase Muestra Anticuerpo marcado con
slida Positiva enzima
Material:
1 Reactivos del Kit en uso.
2 ncubador.
3 Lavador de microtiras.
4 Lector.
5 Micropipetas. (50-200 Microlitos).
6 Puntas para micropipeta.
7 Tubos de 13X100 para muestra.
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 8>
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Seguir estrctamente el procedimiento propuesto.
Utilizar los controles negativos, positivos y el valor umbral en cada
serie de pruebas, para validar los resultados.
Seguir estrictamente las normas de laboratorio establecidas:
1. Cuidadosamente establecer la distribucin de las muestras y el plan
de identificacin.
2. Preparar la solucin de lavado. (concentrada 10X)
3. Sacar la placa soporte con los mdulos de la bolsa de proteccin.
4. Distribuir directamente sin lavados
previos de la microplaca y en serie: 4.1-
80 l. de diluyente en cada pocillo.
4.2- 20 l. de suero control negativo en los pocillos a A
1- 20 l. de suero valor umbral en los pocillos B1, C1 y D1
2- 20 l. de suero contro positivo en el pocillo E1.
3- 20 l. de la muestra No.1 en el pocillo F1.
4- 20 l. de la muestra No.2 en el pocillo G1, etc.
4.3 Adicionar dos muestras control interno negativo y positivo
Aspirar y explsar al menos tres veces para homogenizar la mezcla.
Tambin es posible, distribuir 100 l. de la muestra previamente
diluida 1:5.
5. Cubrir la microplaca con plstico adhesivo. Apretar firmemente
sobre toda la microplaca para asegurar una firme adhesin.
6. ncubar la microplaca en un bao mara a 40C =1 durante 30
minutos =5.
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 8A
7. Quitar el plstico adhesivo. Aspirar el contenido de los pocillos
a un recipiente de residuos desechables ( contenido
hipoclorito sdico ), aadir 0.3 l. de la solucin de lavado en
cada pocillo. Aspirar otra vez.
Repetir este procedimiento dos veces ( ej. un total de 3
lavados ), a continuacin secar la microplaca volteando hacia
abajo sobre papel absorvente. Si se utiliza un lavador
automtico, seguir el mismo procedimiento.
8. Distribuir 100 l. de la solucin de conjugado en todos los pocillos.
Agitar el frasco del conjugado antes de utilizarlo. Cubrir con
un plstico adhesivo nuevo e incubar durante 30 minutos a
40C =1.
9. Quitar el plstico adhesivo, vaciar todos los pocillos por
aspiracin y lavar cuatro veces como se indica en el prrafo No.
7. A continuacin secar la microplaca volteando hacia abajo sobre
un papel absorbente.
10.Preparar la solucin de substrato justo en el momento de usarlo.
(Una tableta de OPD en 10ml de Buffer). Esta solucin no deber
exponerse a la luz directa, y no usarla despus de 10 minutos.
11.Evitando la luz directa distribuir rpidamente 100 l. de la
solucin de revelado (preparada en el punto 10), en todos los
pocillos. Dejar que se desarrolle la reaccin en un lugar oscuro
durante 30 =5' minutos a temperatura ambiente. (18-25C)
N /0i+i1'- "+ =+;.0i3 'd4".i# d/-'60" ".0' i63/,'3i6$
12.Aadir 50 l. de la solucin de parada (H
2
SO
4
4N) utilizando la
misma secuencia de distribucin a la empleada para la solucin
de revelado.
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 8@
13.Secar cuidadosamente la base de la microplaca. Realizar la
lectura de las densidades pticas a 492/620 nm, utilizando un
lector de microplacas dentro de los 30 minutos despus de la
parada de la reaccin (los mdulos se debern mantener fuera
del alcance de la luz intensa antes de la lectura).
14.Verificar todos los resultados y la correspondencia entre la
lectura y la distribucin de la muestra y el plan de identificacin.
15.Guardar registro de lecturas.
OBSERVACIONES
P-"3'/3i6".!
EVITAR LA CONTAMINACION DURANTE EL
ENSA9O
EN CASO DE CONTAMINACION Id"--'2"., g"6"-'+".$$$J
1 Los derrames no cidos, se debern limpiar a fondo con solucin de
hipoclorito sdico a 5%.
2 Los derrames cidos, se debern limpiar en seco. El rea
derramada se deber limpiar con una solucin de hipoclorito
sdico al 5%. El material utilizado para limpiar, se deber
desechar en un contenedor para material contaminado y
desechar de acuerdo con las normas de seguridad establecidas.
3 NUNCA USAR EL MSMO CONTENEDOR PARA DSTRBUR
EL CONJUGADO Y LA SOLUCON DE REVELADO.
4 RESPETAR EL NUMERO DE CCLOS DE LAVADO PRESCRTOS.
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Cdig !
(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 88
1 VERFCAR LA SOLUCON DE REVELADO ENZMATCA.
(tampn sustrato y cromgeno) ANTES DE DSTRBUR deber
estar incolora , a lo mximo amarillo plido.
La aparicin de un color amarillo-naranja a los pocos minutos
despus de la reconstitucin, indica que el reactivo no puede
utilizarse y se deber reemplazar.
El tampn sustrato, el cromgeno, la solucin de revelado y la
solucin de parada, pueden contaminarse por iones metlicos.
Por esta razn, es preferible utilizar contenedores y equipos de
distribucin de plstico o vidrio, previamente lavados con cido
clorhdrico 1N y enjuagados cuidadosamente con agua destilada y
secados.
CALCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS
La presencia o ausencia de anticuerpos frente a VH-1 y/o VH-2, se
determina comparando la lectura de absorbancias para cada
muestra contra el Valor Umbral calculado.
1) C'+3/+'- +' 2"di' d" ',.-,'63i'. d"+ S/"- C60-+ d"+ V'+-
U2,-'+!
DOR4 = DO (B1)+DO (C1)+DO (D1)
3
2) C'+3/+'- "+ V'+- U2,-'+
El Valor Umbral viene dado por
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! 8E
Valor umbral = DO = V.U.
10
3) V'+id'3i6 d" +' =-/",'
El suero control Negativo, deber ser inferior al 70% del Valor Umbral:
D.O. (Control Negativo)< 0,7 V.U
La medida del Suero Control Valor Umbral, deber ser superior a 0.6:
DO > 0,6
El Valor D.O. Control pos fuerte / D.O. DO de V.U deber ser igual o superior a 1.3:
DO
> 1,3
DO
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%&'! E0
4) I60"-=-"0'3i6 d" +. -"./+0'd.
Las muestras con un valor de absorbancias inferiores al Valor
Umbral, deben considerar negativas por la prueba de GENELAVA
MXT.
Los resultados con un valor justo inferior al Valor Umbral:
D.O. VU - 10% < D.O. UV, debern ser interpretados con mucha
precaucin y a las muestras correspondientes, se les repetir la
prueba en duplicado.
Las muestras con valor de absorbancias igual o superior al Valor
Umbral, inicialmente se consideran positivas por la prueba
GENELAVA MXT. Se deber repetir la prueba por duplicado antes
de emitir el resultado final.
Si despus de repetir una muestra, los valores de absorbancias de
la prueba por duplicado son inferiores al Valor Umbral, el resultado
inicial no es considerado reproducible y la muestra se declara como
negativa.
Reacciones no reproducibles son a menudo causadas por:
1 Lavado insuficiente
2 Contaminacin de las muestras negativas por sueros con un ttulo
alto de anticuerpos.
3 Contaminacin de la solucin de revelado por agentes oxidantes
(leja, iones metlicos, etc..)
4 Contaminacin de la solucin de parada.
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(G$ D"0"-2i6'3i6 d" '60i3/"-=. A60iFVI%
%&'! E(
Si despus de repetir, las absorbancias de uno de los duplicado es
igual o superior al Valor Umbral, el valor inicial es reproducible, y la
muestra se declara positiva.
Un resultado negativo indica que la muestra ensayada no contiene
anticuerpos VH.
REALIKACION
La sensibilidad de HV-1 es 100% para 300 pacientes
diagnosticados de SDA y con complejos de SDA (ARC).
La sensibilidad para HV-2 es 100% para 67 muestras confirmadas por
Western Blot.
La sensibilidad de HV-1 subtipo 0 es 100% para 9 muestras.
La especificidad es 99.82% (5545/5555) en una poblacin de
donantes. No ha sido observada en muestras hemolizadas o
pacientes con otras enfermedades virales o autoinmunes.
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(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! E2
(>$ %EPATITIS VIRAL B
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(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! E5
TB36i3'. d" E+i.' ='-' %"='0i0i. B : %"='0i0i. C
%"='0i0i. Vi-'+
I60-d/33i6 : F/6d'2"60!
La Hepatitis Viral es una de las enfermedades en las que se desarrolla
un cuadro
clnico comn , pero los agentes causantes son etimolgicamente y
epidemiolgicamente distintos.
Los diferentes tipos de Hepatitis tienen importancia significativa en
la salud pblica, no solo en trminos de morbilidad y mortalidad,
tambin en trminos de consecuencias econmicas (CDC de
ATLANTA).
La Hepatitis B ha sido reconocida y estudiada desde los 40S y en el
laboratorio es diagnosticada por pruebas serolgicas especficas. El
agente causal es un virus con ADN de filamento doble y miembro de
la familia Hepadnaviridae, mide 40nm.
El VHB posee una parte central que es el corazn , rodeado de una
cubierta viral que contiene la protena de superficie el Ag HBS. El
ADN viral y una Polimerasa participantes en su replicacin se
encuentran dentro del Ncleo. La transmisin ocurre, en especial
por va parenteral o sexual.
La Hepatitis B puede presentarse como aguda o crnica. Se calcula
que 50 a 60% de los individuos infectados se mantienen
asintomticos, mientras que el resto presenta signos clnicos
de hepatitis aguda. Los pacientes con sntomas ms importantes en la fase aguda pueden
presentar una respuesta inmunitaria ms exitosa que provoca la eliminacin del virus.
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(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! EG
La mayora de los pacientes que desarrollan hepatitis B crnica
presentan una enfermedad inicialmente asintomtica o
relativamente leve. Es por eso la importancia de conocer e
interpretar los marcadores del VHB en el laboratorio desde el punto
de vista clnico. (Para llegar a un diagnstico).
HBsAG es la protena predominante de la cubierta viral, presente en
suero indica infeccin viral aguda crnica. Puede ser detectado en
suero 30 a 60 das despus de la exposicin al virus es el primer
marcador serolgico, precede a los sntomas. Alcanza una
concentracin mxima durante los estados agudos de la infeccin
por hepatitis B despus declina, de manera gradual a niveles no
perceptibles en un lapso de cuatro a seis meses en infecciones de
curacin espontnea.
El HBeAg se libera durante periodos de replicacin viral activa y se
relaciona con aumento de infectividad. Aparece simultneamente
con el HBsAg y disminuye justo antes de que se reduzcan los ttulos
de HBsAg. Cuando el resultado de la prueba de HBeAg es positivo ,
el riesgo de transmisin perinatal es de 75 a 90%, sin embargo
existe un riesgo de 5% cuando el resultado es negativo.
El antgeno (HbcAg), es un componente protenico de la
(nucleocpside) y se encuentra cubierto por el HBsAg, no penetra
en suero y no se cuenta con alguna prueba comercial para
determinarlo. El husped , al reconocer al HBcAg como extrao
producir anticuerpos especficos gM contra esta protena (ANT-
HBc).
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(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! E>
El ANT-HBc gM es el primer parmetro serolgico visible de la
respuesta inmunitaria del husped contra el VHB y suele
presentarse entre la 6 y 10 semana despus de la infeccin inicial.
Por lo que se le considera un indicador de Hepatitis Aguda y
desaparece despus de la recuperacin.
El ANT Hbc gG, aparece despus y es visible indefinidamente. El
ANT Hbc gG es el mejor indicador de una exposicin previa con el
VHB y sobre todo es de suma importancia durante el perodo de
VENTANA ya que se ausenta el HBsAg de circulacin y por lo tanto
se le considera como un indicador de previo contacto.
El ANT Hbs los anticuerpos especficos contra el HBs Ag se forman
unos seis meses despus de la infeccin inicial. En un porcentaje
reducido de pacientes (5 a 15%) no se presenta anti HB. Estos
anticuerpos tambin se forman como respuesta a la vacuna de
Hepatitis B y podra persistir despus de una inmunizacin con
gamaglobulina inmune.
Podemos resumir, la presencia de HBsAg y ANT HBc-gM son
indicadores de una infeccin aguda causada por el VHB.
La prdida de HBsAg y HBeAg y la presencia de anti Hbs son
indicadores de inmunidad. Los individuos no inmunizados contra el
virus y expuestos al VHB, incluida la exposicin a piquete de aguja,
maternoneonatal y sexual deben recibir una combinacin de
inmunoterapia pasiva y activa. La inmunoglobulina de hepatitis B
(HBG) debe administrarse lo antes posible durante los siete das
despus de la exposicin y de nuevo a los (14 a 30 das, junto con
la administracin de la vacuna de hepatitis B.
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(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! EA
P-i63i=i : P-3"di2i"60
Microplaca sensibilizada con un anticuerpo
monoclonal
Lavar la placa.
Dispensar 100 ul. de muestras y controles.
Dispensar 50 ul. de conjugado.
ncubar por 90 minutos a 40C
Lavar 5 veces.
Dispensar 100ul de solucin reveladora.
1- ncubar 30 minutos en la oscuridad.
2- Dispensar 50 microlitos de H2SO4 4N
Leer a 492/620 nm.
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(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! E@
MTODO
Tres mtodos para la deteccin de Ags HB son disponibles.
Para cada mtodo 1,2 3 el procedimiento es el siguiente:
1. Preparar la solucin de lavado
2. Tomar de la bolsa el nmero de tiras necesarias, las restantes
dejarlas dentro de la bolsa y sellar.
3. Llenar los pozos con 370ml. de solucin de lavado.
3.1 Aspire el contenido de los pozos dentro de un recipiente.
3.2 Repita el procedimiento una vez ms y seque la placa sobre
papel absorbente.
3.3 Si se emplea sistema de lavado automtico, realizar los
mismos ciclos de lavado.
4. Distribuir los pozos en el siguiente orden:
Pozos A1, B1 C1 y D1: 100
microlitros de control
negativo. Pozos E1 y F1: 100
microlitros de control positivo
Pozos G1, H1, etc.: 100 microlitros de muestras no conocidas.
5. Distribuidas 50 microlitros de solucin de conjugado en los
pozos, cubrir con un tira adhesiva.
6. Mtodo 1.- ncubar por 90 minutos a 40C en bao mara.
Mtodo 2.- ncubar por 90 minutos a 40C en un
incubador seco con agitacin. Mtodo 3.- ncubar
por 45 minutos a 40C en un incubador seco con
agitacin.
7. Remover la tira adhesiva y vaciar los pozos lavar 5 veces como
indica en el punto 3.
8. Preparar la solucin de desarrollo enzimtico unos minutos
antes.
9. Dispense 200 microlitros de la solucin de desarrollo en cada
pozo, incubar 30 minutos en la oscuridad a temperatura
ambiente.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! E8
10. Adicionar 50 microlitros de solucin de paro 4N en cada pozo.
11. Leer la placa a una densidad ptica de 492/620 nm. dentro de
los 30 minutos siguientes de la interrupcin de la reaccin.
12. Guardar registro de resultados.
S"g<6 TB36i3' d"+ F',-i3'60"
M'0"-i'+ : ED/i=!
1. Reactivos del Kit en uso.
2. Lavador de Microplacas.
3. Micropipeta para toma variable.
4. Punta para Micropipetas.
5. ncubadora para 40C.
6. Lector de tiras Microelisa.
7. mpresora
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! EE
CALCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS
1. Calcular el promedio de la densidad ptica
de los controles negativos: DO EJEMPLO:
Control negativo D.O.
1 0.010
2 0.011
3 0.012
4 0.015
D.O TOTAL 0.048
1= = 0.012 = D.O.
4 4
2. Calcular el promedio de la densidad ptica de
los controles positivos D.O. EJEMPLO:
Control positivo D.O.
1 0.980
2 0.964
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
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Cdig !
(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! (00 D"! (2E
D.O TOTAL 1.944
1= = 0.972 =D.O
2 2
3. Calcular el valor de corte.
Para cada mtodo el valor de corte es igual a : D.O + 0.025
EJEMPLO: D.O = 0.012
VALOR DE CORTE = 0.012 + 0.025 = 0.037
4. Condiciones de validacin de la prueba.
Todos los valores de los controles negativos deben ser menores
que 0.100 unidades de densidad ptica.
Si el valor promedio de los controles negativos (D.O) es mayor que
0.010, es posible eliminar cuando ms un valor aberrante cuando
el valor se desva ms de un 40% con respecto al valor promedio.
Si el valor promedio de los controles negativos (D.O) es menor
igual a 0.010, todos los valores individuales de control negativo
deben estar dentro del intervalo de -0.005 a +0.005 del promedio.
Es posible eliminar cuando ms un valor aberrante.
Cuando el valor aberrante se ha eliminado, calcular nuevamente el
valor promedio de los controles negativos (D.O) con lo otros tres
valores.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(>$ %"='0i0i. Vi-'+ B
%&'! (0( D"! (2E
El valor promedio de los controles positivos (D.O) deben ser mayor
0.400 para los mtodos 1 y 3 y mayor que 0.800 para el mtodo 2.
5. nterpretacin de resultados.
1- Muestras con una densidad ptica menor que el valor de
corte son negativos.
2- Muestras con una densidad ptica mayor igual que el valor
de corte son positivas.
CONTROL DE EMISI)N
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(A$ %"='0i0i. C
%&'! (02 D"! (2E
(A$ %EPATITIS C
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! (05 D"! (2E
La primera vez que se identific el virus de hepatitis C (VHC), cuya
clasificacin formal es no A, no B, fue en 1988. Existen dos clases,
siendo la ms comn la encontrada en sangre que se relaciona en
forma estrecha, con transfusiones.
Tambin se describi una variedad existente en agua y se le
relaciona con epidemias en ndia, Asia y Amrica Central. Desde el
punto de vista epidemiolgico, el VHC semeja el VHA y en
ocasiones se le denomina hepatitis entrica o VHE.
Los anticuerpos aparecen entre el primero y tercer mes del
surgimiento del antgeno HCaG. La infectividad es reducida por
contacto personal, razn por la que se le relaciona, en especial , con
transfusin sangunea. El periodo de incubacin vara entre dos
semanas y seis meses. las pruebas que en forma directa identifican
el virus estn en desarrollo pero encuentran el obstculo de
resultados falsopositivos y falsonegativos desproporcionados.
A60ig"6 Cdi?i3'd d"+ Vi-/. d" +' %"='0i0i. C
IR"32,i6'60".
322F5, 3200: NS>J,
ORT%O
En el sistema de prueba ELSA ORTHO HCV 3.0, se utilizan tres
antgenos recombinantes codificados del virus de la hepatitis C. Los
tres antgenos recombinantes, desarrollados por Chiron
Corporation , son los c22, c200 y NS5.
Procedimiento de la Prueba - ncubacin ESTANDAR:
1. Treinta minutos antes del comienzo del procedimiento,
aproximadamente, deje que los componentes del equipo
adquieran la temperatura de la habitacin ( de 15 a 30C ). Voltee
suavemente los reactivos varias veces, pero evite que se forme
espuma. Compruebe la temperatura del incubador: mantngala a
37C + 1C.
CONTROL DE EMISI)N
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Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! (0G D"! (2E
2. Determine el nmero total de micropocillos necesarios para el
ensayo. Adems de las muestras, en cada placa o en cada placa
parcial, se deber incluir un sustrato blanco, tres controles
negativos y dos controles positivos. Si no se necesita la tira
entera, puede separarse el nmero adecuado de pocillos que se
vayan a utilizar. Los pocillos que no se utilicen debern
almacenarse entre 2 y 8C en la bolsa de aluminio que se
suministra, con desecante, firmemente sellada y habrn de
usarse dentro de los cuarenta y dos das siguientes a la apertura
de la bolsa de aluminio. Anote en el espacio destinado para ello
en la bolsa de aluminio la fecha en la que se abre la misma y la
fecha de caducidad de los pocillos que no se usen. La realizacin
de la prueba en una placa ms pequea que la placa entera se
permite siempre y cuando se cumplan las siguientes condiciones:
Las tiras de micropocillos de diferentes placas pueden mezclarse
para formar placas completas o parciales siempre y cuando
pertenezcan a un mismo lote, no hayan caducado y provengan
de placas que han demostrado con anterioridad una respuesta
adecuada a los controles del equipo.
Al ensamblar una placa que contengan tiras de una placa recin
abierta y que no se ha ensayado con anterioridad, deber
colocarse una de estas tiras al comienzo de la placa y realizar
todos los controles del equipo
ADVERTENCA: Manipule las tiras de los micropocillos con cuidado.
No toque la superficie exterior del fondo de los
pocillos.
NOTA: Una vez comenzado el ensayo , todos los pasos han
de completarse en orden.
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! (0> D"! (2E
3. Monte las tiras de micropocillos en el soporte para tiras Las tiras
han de estar niveladas en dicho soporte. Aada tiras de
micropocillo negras o sin recubrir para formar una microplaca
completa.
4. Prepare una ficha en la que se identifique la disposicin de los
controles y de las muestras en los micropocillos. Disponga los
pocillos de control de ensayo de forma que el pocillo 1A sea el
sustrato blanco. Partiendo del pocillo 1A, disponga todos los
controles en una configuracin horizontal o vertical, tal y como se
indica a continuacin . Esta configuracin depender del
"soffware.
P1 (A S/.0-'0 B+'63
Control Negativo
Control Negativo
Control Negativo
Control Positivo
Control Positivo
5. Aada los controles y las muestras a los micropocillos.
Compruebe que el equipo dispensador es capaz de pipetear los
volmenes especificados y las diluciones apropiadas tal y como
se indican en el procedimiento.
Verificar visualmente los pocillos despus de la dispensacin de
muestras y sueros de control. Un cambio de color marrn
grisceo hacia verde es indicativo de que la muestra o el control
ha sido correctamente dispensado en el pocillo. Si no se observa
ningn cambio de color el resultado correspondiente a esa
muestra o control ( ser invalidado y se le realizar un nuevo
ensayo.
CONTROL DE EMISI)N
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CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! (0A D"! (2E
Para la Adicin de una Muestra Directa:
1) Al utilizar instrumentos automticos para dispensar los controles
y las muestras al micropocillo, siga las instrucciones del
fabricante para lograr los volmenes y las diluciones precisas.
Cuando se dispensen los controles y las muestras manualmente,
debern llevarse a cabo los siguientes pasos:
9) Aada 200 l de Diluyente de la Muestra a todos los
pocillos, excepto al 1A.
35) Aada 10 l de los controles a los pocillos correspondientes.
61) Aada 10 l de cada muestra de suero o plasma que se
vaya a ensayar a los pocillos correspondientes.
V) Coloque el soporte para tiras de micropocillos en un agitador
de placas para que se
mezcle durante 5 10 segundos a menos que utilice el Aparato
Automtico
Dilutor/Pipeteador ORTHO o material equivalente. El
agitador deber utilizarse a una
velocidad lenta o moderada , teniendo cuidado de no
producir salpicaduras con el
contenido de los pocillos de prueba.
Para la adicin de Muestras Prediluidas:
1. Aada 300 l de Diluyente de Muestras a un tubo o recipiente.
2. Aada 15l de control de la muestra al tubo. Mzclelo a fondo.
3. Transfiera a 210 ml de cada muestra o control , diluidos
previamente, al pocillo correspondiente.
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(A$ %"='0i0i. C
%&'! (0@ D"! (2E
6. Tape la microplaca con adhesivos de placas e incube a 37C +
1C durante 60 minutos + 5 minutos.
7. Nivele las tiras en el soporte. Utilizando un dispositivo
aspirador/lavador, aspire y lave todos los pocillos cinco veces
consecutivas con Tampn de Lavado (1X).
ADVERTENCA: El seguimiento escrito del procedimiento de lavado
descrito es crucial para asegurar la realizacin
ptima de la prueba. Siga los pasos que se citan
con objeto de asegurar un lavado a fondo.
1) Aspire las soluciones de muestra de los micropocillos y proceda a
llenarlos con Tampn de lavado (1X). No deje que los pocillos
rebosen. Deje transcurrir 20 segundos , aproximadamente, desde el
momento en que aada el Tampn de Lavado hasta la aspiracin
siguiente.
2) Realice la secuencia completa de aspirado y llenando otras cuatro
veces.
3) Aspire los pocillos de manera completa. Dle la vuelta a la placa
y golpee firmemente sobre una toallita de papel limpia para eliminar
el exceso de Tampn de Lavado.
8. Aada 200l de Conjugado a todos los pocillos, incluir al 1A
9. Tape el soporte de tiras de micropocillo con adhesivo de
placas nuevo e incube a 37C + 1C durante 60 minutos + 5
minutos.
CONTROL DE EMISI)N
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Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! (08 D"! (2E
10. Prepare suficiente Solucin de Sustrato aproximadamente 10
minutos antes de que termine la segunda incubacin . Djese
transcurrir el tiempo suficiente para que las pastillas de OPD
se disuelvan adecuadamente. No es correcto utilizar ms de
una preparacin de Solucin de Sustrato en una misma placa.
11. Tras la segunda incubacin , lave los pocillos tal y como se
describe en el paso 7.
12. Aada 200l de solucin de Sustrato a todos los pocillos, incluso
el 1A.
13. ncube a la temperatura ambiente y en la oscuridad durante 30
minutos + 1minuto.
14. Aada 50l de cido sulfrico (H2SO4) 4N a todos los
pocillos, incluido el 1A. El cido ha de aadirse mediante un
chorro enrgico y constante poniendo especial cuidado para
no producir salpicaduras entre pocillos.
15. Si existiera humedad, limpie cuidadosamente el fondo de las
tiras con un papel absorbente y suave para eliminarla antes
de la lectura. Asegrese de que las tiras estn niveladas en su
soporte. Lea la placa con una longitud de onda de 490
492nm. En el caso de lectores de longitud de onda duales,
ajuste la longitud de onda de referencia 620 630 nm. Ajuste
el blanco de lectura en el pocillo 1A de acuerdo con las
instrucciones del fabricante del aparato.
16. Registrar el nmero de lote de los reactivos utilizados y la
caducidad de los mismos en la bitcora.
NOTA: Las microplacas han de leerse dentro de los 60 minutos
que siguen a la dispensacin del cido sulfrico 4N. Las placas
han de conservarse en la oscuridad hasta que sean ledas.
I2=-0'60": Al final de cada jornada, limpie el aparato
aspirador/lavador con agua destilada o desionizada
(aproximadamente 500ml) siguiendo las instrucciones
recomendadas por el fabricante del aparato.
CONTROL DE EMISI)N
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Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! (0E D"! (2E
P-3"di2i"60. d" C60-+ d" C'+id'd FI63/,'3i6
ESTANDAR 20,2($
1. Criterios de Aceptacin del Sustrato Blanco. Se considera que
una placa es vlida con respecto al sustrato blanco si el valor de
absorbancia del pocillo con el Sustrato blanco (pocillo
1A) es mayor o igual a -0,020 y menor o igual a 0,050.
2. Criterios de Aceptacin del Control Negativo.
1) Los valores individuales del control negativo deben ser
menores o iguales a 0,120 y mayores o iguales a -0,005
son vlidas y debern ser redondeadas a 0,000 para los
clclos. Si uno de los tres valores control se encuentran
fuera de alguno de estos lmites, recalcle el volor medio
del control negativo basndose en los dos valores control
aceptables. La placa no ser vlida y habr de repetirse la
prueba si dos o ms de los tres valores control se
encuentran fuera de alguno de los lmites.
2) Halle la media de
los valores del
control negativo.
Ejemplo:
Control Negativo Absorbancia
1 0,010
2 0,030
3 0,020
Absorbancia Total = 0,060
NCX = Absorbancia Total
3
= 0,020
CONTROL DE EMISI)N
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Fi-2'
Cdig !
(A$ %"='0i0i. C
%&'! ((0 D"! (2E
3. Clculo del valor
de la lnea de
Corte ("Cutoff)
Valor de la lnea
de Corte = NCx
+ 0,600 Ejemplo:
Control Negativo Absorbancia
1 0,010
2 0,030
3 0,020
Absorbancia Total = 0,060
NCX = Absorbancia Total
= 0,020
3
Valor de la lnea de Corte = 0.020 + 0.600 = 0.620
4. Criterios de Aceptacin del Control Positivo.
El control positivo se utiliza para verificar que los compontentes del
Kit son capaces de detectar una muestra reactiva, siempre que se
haya seguido estrctamente el procedimiento del ensayo. Una placa
se considera vlida con respecto al control positivo si el valor de
ambos controles positivos es mayor o igual a 0.800 y no dfieren
entre s ms de 0,600. Cualquier otro resultado para el control
positivo es considerado invlido. NOTA: Los resultados por encima
del lmite superior del lector pueden aparecer como "OVER, "*** O
" ".
CONTROL DE EMISI)N
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(A$ %"='0i0i. C
%&'! ((( D"! (2E
1. Las muestras con valores de absorbancia menores de -0,025
debern ser sometidas de nuevo a la prueba en un nico pocillo.
La prueba deber considerarse no reactiva si el valor de
absorbancia en la repeticin de la prueba es inferior a 0,025.
2. Las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la
lnea de corte se considera negativos (no reactivos). No es
necesario hacer ms pruebas.
3. Las muestras con valor de observancia superiores o iguales al
valor de la lnea de corte se consideran inicialmente reactivas y
debern ser sometidas a una nueva prueba por duplicado antes
de hacer una interpretacin definitiva.
4. Al someter de nuevo a ensayo una muestra inicialmente reactiva,
dicha muestra se considerar repetidamente reactiva para el
anticuerpo frente al HCV si alguno o los dos valores de la prueba
duplicada es (o son) reactivo (s), es decir mayor(es) o igual(es) al
valor de la lnea de corte.
5. Tras la repeticin de la prueba para una muestra inicialemte
reactiva, dicha muestra se considerar no reactiva para el
anticuerpo frente al HCV si ambos valores de la prueba por
duplicado son negativos, es decir, inferiores a la lnea de corte.
CONTROL DE EMISI)N
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(@$ Id"60i?i3'3i6 d" C4'g'.
%&'! ((2 D"! (2E
(@$ IDENTIFICACI)N DE C%AGAS
CONTROL DE EMISI)N
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(@$ Id"60i?i3'3i6 d" C4'g'.
%&'! ((5 D"! (2E
PRUEBA DE ESCRUTINIO PARA T-i='6.2' 3-/1i
OB*ETIVO!
dentificar los anticuerpos (Acs) anti-T cruzi para disminuir, la posible
transmisin de la enfermedad de chagas a travs de los
componentes sanguneos, determinando los Acs producidos por el
individuo (disponente) contra el Tripanosoma cruzi y para dar
cumplimiento a la Normatividad vigente.
FUNDAMENTO!
La enfermedad de Chagas es una infeccin parasitaria producida
por el Tripanosoma cruz. El diagnostico de laboratorio depende del
estadio en el cual se encuentre la enfermedad. Durante la fase
aguda, se efecta directamente mediante la comprobacin de los
parsitos en sangre o por mtodos inmunolgicos como: reaccin
de fijacin de complemento, aglutinacn de ltex, floculacin,
hemaglutinacin, aglutinacin directa, imnunofluorescencia o ELSA.
En sta tcnica cualitativa para la deteccin de anticuerpos anti-
T.cruzi, la muestra se diluye en el soporte en el que se encuentran
inmovilizados antgenos recombinantes, obtenindole un mtodo de
3. Generacin. Estos antgenos se obtienen por tcnica de ADN
recombinante a partir de protenas especficas de los estadios
epimastigote y tripomastigote del T.cruzi, correspondientes a zonas
altamente conservadas entre distintas cepas. La tecnologa
empleada permite asegurar una mezcla antignica de composicin
conocida y constante lote a lote, brindando resultados reproducibles,
especficos y con una elevada sensibilidad. Si la muestra contiene
los anticuerpos especficos, stos formarn un complejo con los
antgenos y permanecern unidos al soporte. La fraccin no unida
se elimina por lavado tras lo que se agregan anticuerpos anti-
inmunogloobina
CONTROL DE EMISI)N
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(@$ Id"60i?i3'3i6 d" C4'g'.
%&'! ((G D"! (2E
humana conjugados con peroxidasa. Si se produjo la reaccin en la
primera etapa del proceso, se unir el conjugado con peroxidasa. Si
se produjo la reaccin en la primera etapa del proceso, se unir el
conjugado. Luego de un nuevo lavado se agrega el sustrato
enzimtico. En los casos en que se haya unido el conjugado habr
aparicin de color celeste. La reaccin se detiene con cido
sulfrico, con lo que el color celeste vira al amarillo.
MUESTRA!
Suero o plasma
Recoleccin: Obtener de la manera usual. No usar
muestras inactivadas por el calor. Sustancias interferentes
conocidas: La hemlisis, hiperlipemia y otras causas de
turbiedad pueden provocar resultados errneos.
MATERIAL 9 ECUIPO!
1 Micropipetas capaces de medir los volmenes indicados.
2 Reloj, alarma o cronmetro.
3 Estufa a 37 C
4 Espectrofotmetro para lectura de policubetas.
ETIFSTAR$ MARCA DIASORIN
REACTIVOS PROVISTOS!
Policubetas sensibilizadas: policubeta de tiras removiles con pocillos
que contienen antgenos recombinantes de T.cruzi inmovilizados.
CONTROL DE EMISI)N
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(@$ Id"60i?i3'3i6 d" C4'g'.
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Conjugado: anti-inmunoglobulinas humanas (cabra) conjugadas con
peroxidasa.
Revelador A: perxido de hidrgeno de hidrgeno 60mmol/l en
buffer citrato 50 mmol/l pH 3.2. Revelador A: tetrametilbencidina
(TMB) 0.01 mol/l en cido clorhdrico 0.1N.
Stopper: cido sulfrico 2N.
Buffer de lavado concentrado: cloruro de sodio 1.4 mol/l en buffer
fosfatos 100 mmol/l y tensioactivo no inico 0.1 g/l
Diluyente de muestras: albmina bovina en solucin fisiolgica
tamponada con buffer fosfatos pH 7.2.
Control Positivo: dilucin de suero inactivado conteniendo
anticuerpos contra Tripanosoma cruzi. Control negativo: dilucin
de suero no reactivo, inactivado.
Los reactivos provistos son estables en refrigerador (2 - 10 C) hasta
la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar.
PROCEDIMIENTO!
Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras antes de
iniciar la prueba. Una vez iniciado el procedimiento debe
completarse sin interrupcin.
Procesar simultneamente 2 Controles Positivos (CP) 3 Negativos
(CN) y los desconocidos (D). Al depositar la muestra y/o Controles
sobre el Diluyente de Muestras, debe asegurarse de colocar los
mismos en el seno del lquido y no sobre las paredes o el fondo del
pocillo. Enjuagar la pipeta con el Diluyente dispensado en el pocillo
para asegurar la correcta homogeneizacin.
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(@$ Id"60i?i3'3i6 d" C4'g'.
%&'! ((A D"! (2E
En los pocillos a utilizar de la policubeta colocar:
D CP CN
Diluyente de muestras 200 ul 200 ul 200 ul
Control Positivos - 10 ul -
Control Negativo - - 10 ul
Muestra 10 ul - -
Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta
durante 10 segundos una vez cargadas las muestras en cada tira.
Para evitar la evaporizacin, cubrir la placa e incubar en la estufa 30
minutos a 37 C. Luego espirar cuidadosamente el lquido de cada
pocillo recibindolo en un recipiente para desechos biolgicos que
contenga 5% de hipoclorito sdico. A continuacin, lavar 5 veces
con Buffer de lavado empleando aproximadamente 300
ul/vez/pocillo. Despus de cada lavado, el lquido se descartar
tambin en el recipiente con hipoclorito. Opcionalmente, emplear
lavador automtico. Al finalizar el ltimo lavado, eliminar por
completo el lquido residual, invirtiendo la policubeta y golpendola
varias veces sobre papel absorbente, ejerciendo una leve presin
con la mano sobre los laterales mayores del soporte, para evitar la
cada de las tiras de pocillos. Luego agregar en cada pocillo.
Conjugado 1 gota 1 gota 1 gota
En caso de utilizar micropipeta automtica, dispensar 50 ul. Mezclar
aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10
seg. Para evitar la evaporizacin, cubrir la placa e incubar 30
minutos en estufa a 37C. luego aspirar el lquido de los pocillos,
recibindolo en el recipiente con hipoclorito y lavar segn se indic
ms arriba. Al finalizar el ltimo lavado, eliminar por completo el
lquido residual, inviertiendo la policubeta y golpendola varias
veces sobre papel
CONTROL DE EMISI)N
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%&'! ((@ D"! (2E
absorbente, ejerciendo una leve presin con la mano sobre las
laterales mayores del soporte, para evitar la cada de las tiras de
pocillos. Luego agregar en cada pocillo.
Re velador A 1 gota 1 gota 1 gota
Revelador B 1 gota 1 gota 1 gota
segundos. ncubar 30 minutos a temperatura ambiente y luego
agregar:
Stopper 1 gota 1 gota 1 gota
segundos.
Leer en espectrofotmetro a 450 nm o dicromtica a 450/620-
650 nm o evaluar el resultado a simple vista por comparacin
con los Controles Positivos y Negativos.
ESTABILIDAD DE LA MEKCLA DE REACCION
FINAL
El color de la reaccin es estable durante 30 min., por lo que los
resultados deben observarse durante ese lapso.
CONTROL DE EMISI)N
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%&'! ((8 D"! (2E
CRITERIOS DE VALIDACION DE LA CORRIDA
La corrida se considera vlida si se cumplen simultneamente las
siguientes condiciones:
1) Las lecturas de al menos 2 de los 3 Controles Negativos
corregidas contra el Blanco de Reactivos deben ser
menores o iguales a 0.150 D.O.
2) La lectura media de los Controles Positivos corregida
debe ser mayor o igual a 0.600 D.O.
Si una o ambas condiciones no se cumple, repetir la corrida, para
ambos casos recordar que las lecturas obtenidas dependern de la
sensibilidad del aparato empleado.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS!
a) Con instrumental ptico:
La presencia o ausencia de anticuerpos anti-T.cruzi se determina
relacionado la absorbacia de la muestra respecto al valor Cut-off.
Cut-off=CN + 0.300 D.O.
Donde CN: promedio de las
lecturas del Control
Negativo. Zona de
indeterminacin: Cut-off +
10%
Muestras No Reactivas: Se consideran aquellas con absorbancia
menores al lmite inferior de la zona de indeterminacin.
Muestras Reactivas: se consideran aquellas con absorbacias
mayores al lmite superior de la zona de indeterminacin.
CONTROL DE EMISI)N
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Cdig !
(@$ Id"60i?i3'3i6 d" C4'g'.
%&'! ((E D"! (2E
Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con absorbacias
que caen dentro de la zona de indeterminacin. Estas muestras
deben ser ensayadas nuevamente.
b) nterpretacin visual
Si se opta por este tipo de interpretacin debe considerarse No
reactiva toda muestra que no presente una coloracin mayor que la
de los Controles Negativos. Por el contrario, una muestra netamente
amarilla se considera Reactiva.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
Fi-2'
Cdig !
(8$ F-'33i6'2i"60 d" S'6g-"
%&'! (20 D"! (2E
(8$ FRACCIONAMIENTO DE SANGRE
CONTROL DE EMISI)N
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FUNDAMENTO!
La eleccin cuidadosa del elemento a fraccionar favorece el
aprovechamiento ptimo de la sangre, es decir la donacin de una
persona puede beneficiar a cuatro pacientes al separarse en:
Concentrados eritrocitarios, plasma fresco congelado, plasma
desprovisto de F-V, concentrado plaquetario y concentrado de
factor V crioprecipitado. La sangre y sus componentes se indican
para sustituir el elemento especfico en dficit, los glbulos rojos para
transporte de O2, plasma para restituir volumen, protenas pro-
coagulantes y poder onictico , plaquetas para trombocitopenia y
factor V en hemofilia.
MATERIAL 9 ECUIPO!
1 Tijeras
2 Centrfuga Refrigerada.
3 Balanza.
4 Prensa.
5 Hematron.
6 Bolsas de coleccin de sangre.
7 Pinzas Rodillo.
8 Pinzas de Kelly
PROCEDIMIENTO!
A) Preparacin de glbulos rojos (Bolsa doble) y plasma fresco
congelado (P.F.C.). Para este procedimento se debe de usar una
unidad de recoleccin que tenga una bolsa de transferencia. La
separacin del plasma de los glbulos rojos puede ser o hacerse
de la siguiente forma:
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
CASTLLO
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Cdig !
(8$ F-'33i6'2i"60 d" S'6g-"
%&'! (22 D"! (2E
Por centrifugacin entre (3000) RPM Durante 15 minutos la
temperatura de la centrfuga debe ser de 4C.
TCNICA DE SEPARACI)N!
Una vez centrifugadas las bolsas de sangre como se indic
anteriormente seguir los siguientes pasos:
1. Colocar la bolsa de sangre centrifugada en el extractor de
plasma.
2. Libere el mecanismo de presin suavemente.
3. Cierre con una pinza hemosttica el tubo que comunica a una
de las bolsas satlite.
4. Romper el sello de la bolsa madre y dejar fluir el plasma en la
otra bolsa satlite. Se debe usar una bolsa para medir la
cantidad de plasma obtenido.
5. Cerrar con otra pinza hemosttica el tubo de comunicacin ,
por el cual esta fluyendo el plasma , cuando haya pasado la
cantidad estipulada, sellar el tubo piloto con un sellador
electrnico (hematrn).
6. dentificar la unidad de plasma con el mismo sistema que se
us para la bolsa madre, cortar el piloto despus de haber
sellado.
7. Pilotear con una separacin de 5 10 cm. de separacin todo
el tubo piloto que qued en la bolsa del concentrado
eritrocitario y colocarlo a un costado de la bolsa para pruebas
futuras.
8. Del mismo modo para el paquete de plasma como se indic
anteriormente , pilotear el tubo y adicionarlo al extremo de la
bolsa.
CONTROL DE EMISI)N
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%&'! (25 D"! (2E
9. El concentrado eritrocitario debe ser guardado en un
refrigerador especial a una temperatura entre 4 y 6C para su
conservacin.
10. El plasma se guarda o se debe mantener a una temperatura
de -20C para su conservacin.
B+.' T-i=+"
B) Preparacin de Concentrados Plaquetarios:
En la recoleccin de sangre para preparar plaquetas, se debe
observar la siguiente
recomendacin:
1- Dejar la sangre a temperatura ambiente que es entre 20-24C ,
hasta que inicie el proceso de separacin.
2- Es necesario practicar dos centrifugaciones, la primera a baja
velocidad produce el plasma rico en plaquetas (PRP) y la
segunda a alta velocidad , produce un concentrado de plaquetas
ms
una unidad de plasma pobre en plaquetas (PRP).
- Se sealan tres factores importantes en este procedimiento:
1. El tiempo y la fuerza gravitacional de centrifugacin .
2. La tcnica de resuspensin de plaquetas despus de la
centrifugacin.
3. El pH del plasma.
CONTROL DE EMISI)N
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TB36i3' d" P-"='-'3i6$
1. La centrfuga refrigerante debe tener una temperatura de 20C.
2. Centrifugar a 1800 RPM, durante 10 minutos.
3. Colocar la bolsa de sangre en el extractor y separar el plasma
rico en plaquetas en una bolsa satlite, pinzar el tubo piloto
por donde fluye el plasma o sellar una vez terminado el paso
de separacin de PRP y cortar.
4. Anotar datos del donador como son nombre, grupo sanguneo y
Rh. sin poner la etiqueta
que quedar al final. (Esto es para tener un mejor control en la
identificacin de los productos a obtener.
5. Centrifugar el plasma rico en plaquetas P.R.P. a una velocidad
de 3000 R.P.M. x 10 minutos , a una temperatura de 20C.
6. Colocar la bolsa en el extractor y transferir el plasma
sobrenadante a la segunda bolsa satlite, dejar un volumen
de plasma , no menor de 50ml., as las plaquetas sern
conservadas a 20C.
7. dentificar los productos , tanto el PRP, como el C.P. con las
etiquetas elevadas sealando la fecha, hora de preparacin y
vencimiento.
8. Colocar los concentrados plaquetarios en un agitador para
plaquetas a +20C, (es aproximadamente de 1 a 2 horas.) de
3 a 5 das de la bolsa colectora.
9. El plasma pobre en plaquetas se guarda y conserva a una
temperatura de -20C para su almacenamiento por un ao.
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OBSERVACI)N!
Los C.P. deben cumplir con tres parmetros:
1. Volumen de plasma 50ml.
2. Nmero d plaquetas, no menor de 5.5 x 10
10
.
3. PH = a 6 por lo menos en el 75% de las unidades
preparadas al final del periodo de expiracin.
3) Crioprecipitado de Factor V.
El crioprecipitado de factor V o factor antihemoflico (FAH) (es la
porcin del plasma que precipita en frio, despus de que el P.F.C. ha
sido descongelado bajo condiciones congeladas.) Contiene la mayor
parte del factor V y cierta cantidad de fibringeno, de los
existentes en la unidad original de plasma.
Es la protena que precipita a temperatura de -120C y posteriormente
de descongelar el plasma.
TB36i3' d" P-"='-'3i6!
1. Colocar la sangre total del donador en bolsas triples y una
vez obtenida y centrifugar a 3000 RPM durante 15 minutos.
2. Pasar con un extractor el plasma a una bolsa satlite ,
pesando en una balanza para precisar el volumen, sellar el
tubo piloto y separar el P.G. refrigerndolo de 2 a 6C.
3. Poner los datos correspondientes a la bolsa del plasma (no
etiqueta).
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4. Congelar el plasma rpidamente con hielo seco y acetona
para que de un proceso de congelacin (completa o dejar
congelar a una temperatura de 20C durante toda una noche
14 a 18 Horas) de -120C.
5. Una vez congelado el plasma, descongelarlo a una temperatura
de 1 a 6C.
6. Ya que estn descongelados, centrifugar el plasma a 4000
RPM durante 15 minutos, a una temperatura de 4C.
7. Terminada la centrifugacin, colocar la bolsa en un extractor
de bolsas y separar el plasma en la segunda bolsa satlite.
8. Separado ya el plasma, etiquetar debidamente los productos
ya fraccionados con todos los datos.
9. Los plasmas y crioprecipitados se guardarn a una
temperatura de -20C para su conservacin.
CUADRO DE CONSERVACI)N DE PRODUCTOS!
PRODUCTO ANTICUAGULAN DIAS DE CONSERVACI
Concentrado Eritrocitario ADSOL 41 das
Concentrado Eritrocitario C.P.D. A.C.D. 21 das
Concentrado Eritrocitario C.P.D.A. 35 das
Plasma Fresco Congelado 1 ao
Plasma sin Factor V 1 ao
Plasma Pobre en Plaquetas 1 ao
Concentrado Plaquetario 3 das a 5 das
Factor V o crioprecipitado 1 ao
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Fi-2'
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Datos que debe contener la etiqueta:
Datos del Hospital nstituto
1. Nombre del donador.
2. Grupo y Rh.
3. Fecha de extraccin.
4. Fecha de caducidad.
5. Hematocrito.
6. Volumen.
7. Producto. (C.E., P.F.C., C.P. Y (C.P.D.O.) (CPDO)
8. Nmero de registro.
9. Hora y tiempo de extraccin.
C.E.: Concentrado Eritrocitario.
P.F..C.: Plasma Fresco Congelado.
P.P.P.: Plasma Pobre en Plaquetas.
C.P.: Concentrado Plaquetario.
C.P.D.O.: Crioprecipitado. (Factor V).
Las unidades fraccionadas deben mantenerse en una rea
perfectamente identificada con la leyenda "No usar Falta Liberar, en
tanto este tiempo se estarn realizando las pruebas que nos
permiten liberar las unidades como son: HBsAg, HCV, HV, RPR,
BRUCELLA, una vez obtenidos estos resultados, siendo negativos y
rectificando el grupo sanguneo se procede a etiquetar las unidades
con las siguientes etiquetas, y se colocan en su charola de grupo
correspondiente.
NOTA! Si alguna prueba serolgica sale positivo, se le dar destino
final.
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CASTLLO
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Cdig! NCDPT
DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE R"#$ (
RESPIRATORIAS
IV$ GLOSARIO DE TRMINOS
1. ANTICUERPO IRREGULAR DE IMPORTANCIA CLINICA!
nmunoglobulina inusualmente presente en el plasma (o
suero) que puede causar enfermedad a travs de diferentes
mecanismos
2. CONCENTRADOS DE PLACUETAS: Trombocitos
recolectados por afresis o preparados mediante
fraccionamiento de unidades de sangre fresca.
3. CONCENTRADOS ERITROCITARIOS: Fraccin que contiene
principalmente glbulos rojos, como resultante de la remocin
casi completa de plasma.
4. CONTROL DE CALIDAD: mtodo que se lleva a cabo para
garantizar la efectividad y funcionalidad de equipos, reactivos
y tcnicas, as como, la viabilidad y seguridad de la sangre y
de los componentes sanguneos.
5. DISPONENTE ALTRUISTA: sujeto que proporciona su sangre
o componente de esta, para quien la requiere.
6. DISPONENTE FAMILIAR: persona que proporciona su
sangre o componentes de esta, a favor de un paciente
vinculado con ella.
7. PACIENTE POLIGLOBULICO: Persona que por un proceso
patolgico primario o secundario, tiene un incremento
absoluto del volumen eritroctico circulante.
8. PLASMA FRESCO: el que se encuentra en el lapso de las
primeras 6 horas despus de la recoleccin.
9. PLASMA FRECO CONGELADO: el que se congela en el
lapso de las primera seis horas, despus de la recoleccin y
as se conserva.
10. PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD! estudio practicado in-vitro
empleando muestras de sangre del disponente y del receptor
para comprobar la existencia de afinidad reciproca entre las
clulas de uno y el suero del otro, para efectos
transfusionales.
CONTROL DE EMISI)N
E+',-! R"#i.! A/0-i1!
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Fi-2'
Cdig! NCDPT
DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE R"#$ (
INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES %&'! (2E
RESPIRATORIAS
11. SANGRE FRESCA: tejido hemtico no fraccionado, de menos
de 6 horas despus de su recoleccin
12. SANGRE TOTAL: Tejido hemtico no fraccionado, de ms de
6 horas despus de su recoleccin
13. TRANSFUSI)N AUTOLOGA: aplicacin a un individuo, de la
sangre o componentes sanguneos recolectados de el mismo.
14. TRANSFUSION AUTOLOGA MEDIANTE DEPOSITO
PREVIO: disposicin de sangre y componentes sanguneos
que en forma anticipada se acopian para uso teraputico del
propio disponente.
15. UNIDAD: Volumen de sangre o componente sanguneo
recolectado de un solo disponente.
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