Induccin fngica de la biorremediacin de suelos contaminados con combustibles
Mary Lopretti, Fabiana Rey, M. Piaggio
Resumen
La biorremediacin de suelos ha sido en los ltimos aos una de las aplicaciones de los procesos de la biotecnologa industrial que se ha desarrollado en busca de soluciones naturales y eficientes al problema de la contaminacin. Varios son los microorganismos que viven en condiciones extremas, desarrollando estrategias metablicas que les permiten tener sus vas metablicas aptas para vivir y reproducirse. Dentro de estas estrategias se encuentra la accin de enzimas hidrolticas, oxidativas y depolimerizantes que permiten modificar sustratos complejos como lo son los derivados del petrleo y entre ellos los combustibles. En el presente trabajo se estudi la accin de dos hongos Gloeophylum trabeum y Phanerochaetes chrysosporium actuando en forma consorcial sobre sustratos contaminados con gasoil y nafta. Se prepararon 4 reactores de fermentacin slida: dos de ellos blanco, contaminados sin induccin, y de los otros dos uno con nafta y el otro con gasoil inoculados ambos con 100cc de medio de propagacin con micelios de P.chrysosporium y 50cc de medio de crecimiento con pellets de G. trabeum. Se extrajeron muestras cada 15 das y se evalu en el material de cada reactor caractersticas fisicoqumicas como %C, humedad y pH. Tambin se realiz la evaluacin microbiolgica por siembra en placa y dilucin en placa con agar malta al 1,25%. En todos los casos se obtuvieron micelios. Por ltimo se determin la actividad de enzimas lacasa y peroxidasa. La actividad lacasa se determin por espectrometra usando 0.5mM de ABTS como sustrato en 0,1M de buffer acetato de sodio pH5 y 1 ml de extracto obtenido por extraccin salina. La determinacin de actividad Mn peroxidasa se realiz con 0.01% de rojo fenol como sustrato en buffer succinato de sodio 0.1M en presencia de 1 ml de extracto enzimtico, MnSO4 0.1M y H2O2 0.1M. Las actividad de stas enzimas permiti obtener molculas mas pequeas producto de la degradacin de los derivados de petrleo presentes en los sustratos. La evaluacin se realiz por espectrometra UV a longitudes de onda entre 250 y 310 nm donde se detectan molculas aromticas sustituidas. De los resultados obtenidos podemos ver que desde el punto de vista fisicoqumico, las condiciones se mantuvieron iguales durante todo el ensayo de 4 meses, excepto el pH que baj levemente. En cuanto a los microorganismos presentes Phanerochaetes chrysosporium es el nico que se mantiene hasta el final del ensayo. Aparecen otros nativos como Thrichoderma y Paecylomyces. La actividad de estos hongos se manifiesta por la actividad enzimtica presente. En el caso de los ensayos con nafta tanto en el blanco como en el inducido aparecen actividades Mn peroxidasa y Lacasa, siendo aproximadamente el doble en los ensayos de induccin. En cuanto a los ensayos con gasoil aparecen las dos actividades enzimticas pero siendo el triple en los ensayos inducidos considerando el mismo tiempo. Los productos de degradacin aparecen desde el segundo mes de remediacin siendo productos mas oxidados y de pequeo peso molecular. Creemos que estos sistemas fngicos adaptados a vivir en condiciones extremas de contaminacin son una fuerte herramienta para la biorremediacin y recuperacin de suelos. En el futuro se estudiarn algunos de los metabolismos adaptativos con el fin de manejar exitosamente su crecimiento como herramienta de decontaminacin.
BIORREMEDIACIN CON ENZIMAS DE HONGOS La biorremediacin comenz a emplearse desde la segunda mitad del siglo XX como una opcin para eliminar los contaminantes generados por las actividades industriales. En la actualidad se ha convertido en una tecnologa imprescindible para contrarrestar los resultados adversos de nuestra dependencia a componentes como el petrleo, sus derivados y todos los desechos que provocan los productos que empleamos en la vida diaria. La biorremediacin emplea plantas, bacterias u hongos que de forma natural degradan compuestos que afectan el medio ambiente; sin embargo, la manipulacin gentica permite acelerar procesos que normalmente les llevaran varios de aos. Entre este tipo de biotecnologas es conocida de manera general la que utiliza diversos tipos de bacterias. No obstante, cada una de ellas ofrece ventajas particulares, por lo que ahora cientficos de la UNAM analizan la manera de sacar el mayor provecho de aquellas de origen fngico (de hongos). Mediante enzimas de origen fngico buscamos remediar ambientes contaminados con petrleo, eliminando uno de los compuestos ms txicos y que mayor impacto tiene en el ambiente, los llamados hidrocarburos aromtico policclicos (HAP), que son cancergenos, mencion Rafael Vzquez Duhalt, del Instituto de Biotecnologa de la UNAM, quien encabeza las investigaciones. Estas enzimas, explic, permiten oxidar estos hidrocarburos para que pierdan su capacidad txica y eliminar as su mutagenesidad --la capacidad de alterar el ADN y metabolismo de los organismos, lo que provoca cncer--. Los HAP, por ejemplo, tambin se producen en el humo del cigarro as como el que se genera en la coccin de comida a la parrilla. En el petrleo, estos hidrocarburos representan aproximadamente un tercio sus componentes. Cuando el contaminante se dispersa en el ambiente, llega a suelos y cuerpos de agua daando los ecosistemas y a los seres vivos. Por ello, el objetivo sera aplicar sistemas de remocin de sustancias txicas en los efluentes de las industrias que dispersan contaminantes en sus procesos: podra utilizar un reactor enzimtico antes de expulsar los desechos de la fbrica eliminando los txicos. El coordinador del Laboratorio de Biotecnologa Ambiental del instituto universitario detall adems las ventajas de las enzimas fngicas en comparacin con el uso de microorganismos. Apunt que las bacterias son susceptibles a agentes txicos para su reproduccin y no funcionan muy bien para remediar sitios contaminados con grandes cantidades de petrleo, por lo que hay que diluir el suelo para que la concentracin de ste sea baja. Por su parte, las enzimas fngicas trabajan mejor en presencia de compuestos txicos y en concentraciones altas de contaminante. Tambin son ms efectivos cuando se trata de descontaminar efluentes txicos. Lo ideal sera que los efluentes de las industrias tengan un tratamiento enzimtico previo, para posteriormente llevarlos a plantas convencionales de tratamiento de aguas residuales donde los contaminantes sean metabolizados finalmente con el empleo de bacterias. Hongos de pudricin de la madera La madera est compuesta principalmente de celulosa, hemicelulosa y lignina. La degradacin de la madera en los ecosistemas est a cargo, principalmente, de hongos ligninocelulsicos. Este conjunto de hongos son los responsables de reciclar el carbn que se encuentra en la lignina, que es un polmero natural de estructura aromtica. Dicha estructura qumica es similar a las de muchos contaminantes actuales, razn por la cual las enzimas son buenas candidatas biorremediadoras. Debido a la similitud entre la lignina de la madera y los HAP, los cientficos de la UNAM estudiaron las enzimas de los hongos de pudricin de la madera en la oxidacin de compuestos del petrleo. Ahora estamos mejorando la actividad y estabilidad de las enzimas con modificaciones qumicas y genticas. En este sentido hemos logrado mejorar su actividad transformadora mediante la modificacin qumica con un polmero que las hace solubles en el petrleo, lo que de forma natural no es posible. Sin embargo, el cientfico aclar que an necesitan estabilizar ms las enzimas en condiciones de operacin para que los futuros tratamientos sean econmicamente viables. En tanto, junto con el Instituto Mexicano del Petrleo obtuvieron una patente internacional que consiste en el empleo de las enzimas fngicas, pero en un proceso de desulfurizacin de gasolinas y diesel. Aunque para la viabilidad de ambos casos necesitan de igual forma una mayor estabilizacin.