Vous êtes sur la page 1sur 21

BAV : Biotechnologies animales et vgtales

Caroline Rambaud SN2 207 caroline.rambaud@univ-lille1.fr


08/09/2014
I) Les objectifs de biotechnologies vgtales
On le a!!elle aui le bio"ec#nolo$ie ver"e
% ob&ec"if ma&eur ' cr(er de nouvelle vari("( de !lan"e.
)lle doiven" r(!ondre au* a""en"e du (lec"ionneur +a$ricul"eur, '
- au$men"a"ion de la !roduc"ivi"(
r(i"an"e +maladie- condi"ion environnemen"ale, .
"re abio"i/ue e" bio"i/ue
arc#i"ec"ure de la !lan"e ada!"(e 0 la m(cania"ion
meilleure efficaci"( racinaire +mieu* u"ilier le (l(men"
dan le ol,

)" au conomma"eur. )lle doiven" 1"re !lu !erforman"e ' 2omme
v($("au* /ui on" du $o3"
ric#ee en cer"aine mol(cule +an"io*4dan" - vi"amine-
acide amin(..,. Ce on" de alicamen" +man$er fai" du
bien 0 la an"(,
5nimau*
ric#ee en !ro"(ine +an* e d(velo!!en" !lu ra!idemen",
6a (lec"ion v($("ale e" un ou"il /ui va !erme""re de (lec"ionner le !lan"e !ar l7#omme. On
a!!elle 8a la (lec"ion maale. 9l c#oii" le individu /ui !araien" le meilleur
On !eu" la claifier de (lec"ion $(n(alo$i/ue
18:; ' 1er croiemen" in"er!(cifi/ue
Commen" ob"ien"-on de nouvelle vari("( <
C#oi* de !aren" avec carac"=re in"(rean" ' on le croie en"re eu* 5*> +il on" ouven"
#("(ro?4$o"e,. On ob"ien" alor une famille 5>- !ui !ar au"of(conda"ion ucceive on ob"ien" de
li$n(e #omo?4$o"e.
5 !ar"ir de 2 li$n(e #omo?4$o"e % croiemen" % #4bride . On ob"ien" decendance #omo$=ne-
"able e" vi$oureue. Ce on" ce #4bride /ue l7on commercialie. 9l fau" d7abord le mul"i!lier e"
doi" r(!ondre 0 cer"ain cri"=re !our 1"re commerciali( +incri!"ion au ca"alo$ue,
9l fau" environ une 1@aine d7ann(e !our commercialier une vari("(.
>io"ec#nolo$ie in"ervien" !our aller !lu vi"e dan la cr(a"ion de vari("( car elle con"ourne la
re!roduc"ion e*u(e. On 7en affranc#i
On u"ilie de "ec#ni/ue de labo no"ammen" la cul"ure in vi"ro e" la biolo$ie mol(culaire.
5ABC)ND5D9ON E) 65 F5R95>969D) B)N)D9GA) $rHce 0
-6a "ran$en=e . on c#erc#e le $=ne dan n7im!or"e /uelle e!=ce e" on le in"rodui" dan la
!an"e
-6a mu"a$en=e . on indui" de mu"a"ion c#e? la !lan"e !our induire de r(i"ance !ar e*em!le
-6a fuion de !ro"o!la"e . i on arrive !a a faire de re!roduc"ion e*u(e
-6e auve"a$e d7embr4on imma"ure . croiemen" e*u( en"re 2 $enre diff(ren"- on ob"ien" !a
d7individu mai un !e"i" embr4on /ue l7on !eu" auver
Biotechnologies vgtales . l7enemble de "ec#ni/ue /ui fon" a!!el 0 la cul"ure in vi"ro e" 0 la
biolo$ie mol(culaire e" /ui on" !our bu" de 7affranc#ir de limi"a"ion li(e 0 la re!roduc"ion e*u(e
>F !erme" de $a$ner du "em! car !a de re!roduc"ion e*u(e- on u"ilie l'haplodiploidisation ' on
la rend #a!loIde !ui on la reme" di!loIde
donc uni/uemen" 2 ("a!e
On $a$ne du "em! aui avec ' micropropagation ' en 1an on !eu" ob"enir de million de !lan"e.
Lembryogense somati!"e
)" le mar!"age molc"laire ' Ser" 0 reconnaJ"re le $=ne !our le incrire au ca"alo$ue- on !eu"
faire de car"e d7iden"i"( $(n("i/ue
On va cr(er de vari("( /ui von" 1"re ca!able de !roduire de mol(cule na"urelle en $rande
/uan"i"(' indu"rialia"ion de la !lan"e. Kar e*em!le de mol(cule u"ili( en !#armacolo$ie-
com("i/ue ou a$roalimen"aire.
II) #thodologie gnrale
Cul"ure in vi"ro
On !ar" d7une !lan"e non ae!"i/ue. On c#oii" une !lan"e m=re /ui doi" 1"re le !lu &eune !oible e"
/ui doi" !ouer dan le condi"ion ani"aire le meilleure !oible. On la d(barrae de "ou"e
le bac"(rie e" c#am!i$non
Se fai" dan ' un milieu d7ae!ie . an a$en" con"aminan"- dan de milieu* "(rile
un environnemen" con"rLl(
un milieu de cul"ure con"rLl(
On !rend un fra$men" v($("al . e*!lan" v($("al
On fai" une ae!"ia"ion % r(ci!ien" M milieu ae!"i/ue .N cul"ure en condi"ion con"rLl(e
a, 6e e*!lan" v($("au* e" ae!"ia"ion
Cellule v($("ale e" "o"i!o"en"e . ca!aci"( uni/uemen" v($("ale- une cellule e" ca!able de r($(n(rer
n7im!or"e /uelle cellule. Ane cellule v($("ale iol(e !eu" r($(n(rer une !lan"e en"i=re +24!o"#=e de
1902,. Ce""e #4!o"#=e a ("( v(rifi(e $rHce au* #ormone v($("ale dan le ann(e @0-:0
19;4 ' C#erc#eur O#i"e a ("( ca!able avec racine de "oma"e de le faire !ouer P a l7infini Q
19;9 ' Cie en !lace de la cul"ure ind(finie de cal. Si on me" en cul"ure un bou" de cambium- il va
1"re ca!able de !rolif(rer 0 l7infini ' on a!!elle 8a un cal. 6or/ue cela ralen"i- on re!rend le cal /ue
l7on reme" dan un "ube. Cai il fau" ur"ou" main"enir l7ae!"ia"ion
19@0 ' 1ere cul"ure de m(ri"=me caulinaire . !e"i" "iu au* e*"r(mi"( /ui on" ca!aci"( de
r($(n(ra"ion. Kar cul"ure de m(ri"=me on !eu" (liminer le viru - on !eu" aini auver de
vari("(.
19@0-19:0 ' d(couver"e de #ormone v($("ale ' on ob"ien" la 1ere cul"ure de cellule iol(e-N
u!enion cellulaire. )" 1ere cul"ure de !ro"o!la"e ' cellule v($("ale an !aroi !ec"o-celluloi/ue
6e !ro"o!la"e a !ermi de v(rifier le "#(or=me de "o"i!o"ence.
E(ormai on ai" cul"iver "ou"e or"e de cellule v($("ale
5e!"ia"ion du ma"(riel v($("al % olu"ion d(infec"an"e ' eau de &avel 10R +#4!oc#lori"e de NaM,
)n DK on u"ilie l7#4!oc#lori"e de Ca2M. C7e" le c#lore /ui (limine le a$en" con"aminan"- on le
me" en dur(e variable elon la vari("(. +Selon la !lan"e- on doi" &ouer ur la concen"ra"ion e" ur la
dur(e.
Karfoi cela ne uffi" !a- on a&ou"e alor un d("er$en" !ar e* le c#lorure mercuri/ue 1Ro
On !eu" u"ilier de "rai"emen" an"ifon$i/ue. Ou encore de an"ibio"i/ue direc"emen" dan le
milieu. Kui on rince avec de l7eau "(rile
b, Cilieu de cul"ure e" leur r(ci!ien"
6e (l(men" een"iel '
-$a"
-%lments minra"& ' Cacro-(l(men" min(rau* +beoin en $rande /uan"i"(, ' N- K- S- Ca- S- C$
Cicro-(l(men" min(rau* +beoin en !e"i"e /uan"i"( inon devien" "o*i/ue, '
5l- Tn- Cu
.N Sou forme de el min(rau*
Uer +ou forme (da"( - !a ou forme de el min(rau*,
-'accharose +ource de carbone,
-Vitamines
6e (l(men" facul"a"if '
()g"late"r de croissance +.#ormone v($("ale,
-5u*ine.2ormone /ui on" effe" ur la r#i?o$(n=e +forma"ion racine,
-C4"oVinine.)ffe" ur le bour$eonnemen" a*illaire
)lle on" un effe" an"a$oni"e. 6e !lu im!or"an" e" le ra!!or" au*ine/c4"oVinine
5/C im!or"an" +N1,' favorie la r#i?o$en=e ur bou"ure
5/C faible +W1, ' favorie le bou$onnemen" a*illaire
5/C.1 ' favorie la callo$en=e +forma"ion de cal,
6e ra!!or" 5/C va orien"er la mor!#o$en=e
(Agar
Dableau 7
6e milieu* de cul"ure doiven" 1"re "(rile. On me" dan r(ci!ien" ada!"( 0 la "aille de l7e*!lan". 9l
!eu" 1"re en !la"i/ue &e"able ou r(u"iliable ou encore cela !eu" 1"re de la verrerie.
Kui on me" dan l7au"oclave ' (limine le con"aminan". 9l ne fau" !a me""re 0 "ro! for"e
"em!(ra"ure !our le vi"amine - le acc#aroe e"c.. Eonc on diminue la "em!(ra"ure 0 11@XC mai
on au$men"e le "em!
On fai" de la "(rilia"ion !ar fil"ra"ion % fil"re don" la "aille du !ore e" de 0-2 m car ne laie !a
!aer le c#am!i$non e" bac"(rie. Ane foi le milieu !r1"- on !roc=de 0 la mie en cul"ure en
condi"ion con"rLl(e
c, Cul"ure en condi"ion con"rLl(e
On !lace la cul"ure dan un environnemen" con"rLl(.Cela donne une c#ambre de cul"ure ' !#4"o"ron
*ontr+le de la temprat"re % D#ermo!(riode +24XC le &our e" 20XC la nui",
L"mire % /uan"i"( de lumi=re ' !#o"o!(riode
"ube fluorecen"
/uali"( de lumi=re ' 6a lumi=re a une im!or"ance ur la mor!#o$en=e en fonc"ion de e
/uan"i"( e" de a /uali"(
rou$e % r#i?o$en=e
bleu % collo$en=e
%change ga,e"& % Y"#4l=ne e" "r= im!or"an" !our la !lan"e- c7e" elle /ui la !rodui". Si il 4 en a
"ro! ' re"ard de la croiance car c7e" un in#ibi"eur- on &oue ur le ca!uc#ona$e
Fi"rifica"ion i "ro! d7#umidi"( dan le r(ci!ien"- ce /ui em!1c#e le dvl!" de la !lan"e. On &oue alor
ur le ca!uc#ona$e
III)-echnologies de clonage
a,Cicro!ro!a$a"ion
5 !ar"ir d7une !lan"e % de millier iden"i/ue
C7e" une forme de mul"i!lica"ion v($("a"ive mai in vi"ro
9l 4 a 4 ("a!e !rinci!ale
1, K#ae ini"iale ' Kr(l=vemen" e" ae!"ia"ion de l7e*!lan" . C#oi* de la !lan"e- ae!"ia"ion e"
mie en cul"ure. On veu" ob"enir au moin un e*!lan" ae!"i/ue ca!able de e mul"i!lier
+K#ae d7en"r(e in vi"ro,
2, Cul"i!lica"ion du bour$eon ob"enu en !#ae 1
;, K#ae de d(velo!!emen" ' on "ranf=re le bour$eon dan un au"re milieu de cul"ure /ui va
!erme""re le dvl!" e" l7enracinemen" .N Ob"enir de vi"ro-!lan"
4, K#ae d7acclima"a"ion ' K#ae de or"ie in vi"ro . Uaire a""en"ion au* "re #4dri/ue- e" au*
a""a/ue de c#am!i$non e" bac"(rie
12/09/14
A partir de quels explants vgtaux allons-nous faire de la micropropagation ?
Au dbut de chaque feuille il y a le bourgeon axillaire
Il peut y avoir 2 types de tissus : explants avec mristme et explants sans mristme
)*!lan" avec m(ri"=me '
-Cul"ure de fra$men" nodau* ou a!e*
ou
-Cul"ure de m(ri"=me iol(
)*!lan" an m(ri"=me
$&plants avec mristmes :
*"lt"re de fragments noda"& o" ape&
On me" le fra$men" nodal dan un milieu de cul"ure e" en fonc"ion de l7e!=ce v($("ale e" du milieu
de cul"ure- ce fra$men" e d(velo!!era de 2 fa8on diff(ren"e '
% Si le milieu e" !auvre en c4"oVinine- le bour$eon a*illaire va e d(velo!!er e" donner une
nouvelle "i$e e" en$endrer 0 on "our d7au"re bour$eon a*illaire +."i$elle,. On !eu" re!r(lever e"
remul"i!lier ce fra$men" 0 l7infini. 9l 4 aura enracinemen" en m1me "em! /ue le d(velo!!emen"
de la "i$e- on a la !#ae 2 e" ; /ui e d(roule en m1me "em!.
% Si le milieu e" ric#e en c4"oVinine. 6e bour$eon a*illaire e d(velo!!e- mai "ou le bour$eon
a*illaire von" aui !ouer - on aura un d(velo!!emen" en "ouffe. 6e c4"oVinine von" in#iber la
dominance a!icale. 9l n4 aura !a dZenracinemen". Kour l7enraciner- on va devoir "ranf(rer de
!e"i"e "i$e d(cou!(e dan un milieu ric#e en au*ine e" !auvre en c4"oVinine
Ce "4!e de d(velo!!emen" !eu" 7ob"enir na"urellemen" i le v($("au* on" ric#e en c4"oVinine
ristmes ont capacit de rgnration trs importante donc la plante avec mristme a plus de
capacit de rgnration
ristmes caulinaires ! bourgeons
! fragments nodaux sont des fragments o" se trouve le bourgeon axillaire
#our mettre les fragments nodaux en culture$ on le met en milieu simple % milieu sans hormone
&es fragments nodaux se dveloppent alors qui donne une tigelle' (n retrouve sur la tigelle des
bourgeons axillaires
)omaine apical est le seul * se dvelopper $ tous les bourgeons axillaires sont dormants +ce qui est
du aux hormones % l,auxine-
.ourgeon apical est en haut de la tige
1 fra$men" nodal % 1 "i$elle avec 10 n[ud % 10 "i$elle 0 10 n[ud
1 moi
1 moi \
On !eu" faire 8a avec [ille"- lavande..
Ce d(velo!!emen" d(!end donc de '
-l7e!ace v($("al
-milieu de cul"ure
On a une "r= bonne conformi"( lor/uZon !ar" d7e*!lan" avec m(ri"=me
*"lt"re de mristmes se"ls
Ce""e "ec#ni/ue a!!or"e un $ain u!!l(men"aire- elle a!!or"e de avan"a$e e" b(n(fice
-6e m(ri"=me cul"iv( eul va 1"re ca!able d7(liminer le viru
-Cer"aine !lan"e on" r(calci"ran"e 0 la cul"ure de fra$men" nodau*- c7e" le ca de !lan"e
li$neue +arbre,- car le "i$e e" le !("iole on" li$nifi(. 6e !robl=me e" d3 0 la li$nifica"ion /ui
em!1c#e la cul"ure in vi"ro. 5vec la cul"ure de m(ri"=me iol(- il 4 aura une re&uv(nilia"ion de la
!lan"e- elle va devenir #erbac(e e" va !ouvoir e d(velo!!er
-A"ili(e !our le !lan"e r(calci"ran"e 0 la micro!ro!a$a"ion comme le orc#id(e
Guand on me" m(ri"=me en cul"ure il e d(velo!!en" en !ro"ocorne de r($(n(ra"ion % "r=
$rande ca!aci"( de r($(n(ra"ion +1 % 10,. 6e !ro"ocorne a la ca!aci"( de e mul"i!lier e" !eu"
donner une !lan"e en"i=re.
Il existe des plantes qui vont avoir trs peu de bougeons axillaires +tige qui se dveloppe mais il n,y
a que le bourgeon apical -
(n a trs peu de mristmes prsents sur la plante voir qu,un seul
$&plants sans mristmes '
Dou" d(!end de l7e!=ce v($("ale e" du milieu de cul"ure. 9l fau" un milieu de cul"ure !lu (labor( car
on !ar" de cellule oma"i/ue
.veloppement direct :
6or/u7on me" en cul"ure un e*!lan" an m(ri"=me on ob"ien" un bour$eon adven"if +.0 l7ori$ine
n7e*i"ai" !a, direc"emen" ur l7e*!lan"
On !r(l=ve n7im!or"e /uel ma"(riel v($("al +feuille- !("iole.., On !ar" alor de cellule diff(renci(e
% d(diff(rencia"ion % rediff(rencia"ion en bour$eon
On "ranf=re e bour$eon dan un au"re milieu de cul"ure !our avoir on enracinemen"
.veloppement indirect :
Kour ob"enir une diff(rencia"ion- on "ranf=re le cal dan un au"re milieu de cul"ure ur le/uel e
d(velo!!era de !e"i" bour$eon +bour$eon n(oform(,. On !eu" !aer aui le cal en milieu
li/uide !our ob"enir une u!enion cellulaire. 6e cellule e (!aren" le une de au"re !our e
mul"i!lier !lu ra!idemen". On le u"ilie !our !roduire de mol(cule dZin"(r1".
b,)mbr4o$en=e oma"i/ue
6or/u7on me" en cul"ure un e*!lan" v($("al no"ammen" ur un milieu /ui renferme beaucou!
d7au*ine- il arrive /u7on oberve ur le e*!lan" de !e"i"e "ruc"ure /ui reemblen" 0 de
embr4on ' on le a!!el de embr4on oma"i/ue.
6e embr4on oma"i/ue on" une "ruc"ure bi!olaire avec 2 m(ri"=me ' caulinaire e" 1 racinaire
"andi /ue le bour$eon on" une "ruc"ure uni!olaire avec un m(ri"=me caulinaire uni/uemen".
6e d(velo!!emen" e" beaucou! !lu ra!ide
6Zin"(r1" de embr4on oma"i/ue e" /u7il on" mieu* ada!"( 0 la m(cania"ion.
On va m(canier la micro!ro!a$a"ion
Semence ar"ificielle ' Braine iden"i/ue 0 la !lan"e m=re. On enrobe le $raine dan un $el
dZal$ina"e
IV) -echnologies gnratrices de variabilit
9l en e*i"e un $rand nombre
a,Faria"ion omaclonale . vi"rovaria"ion
6or/ue l7on fai" de la micro!ro!a$a"ion- on !eu" oberver de varia"ion $(n("i/ue +.$(n(ralemen"
de d(ficience ou de anomalie mai !a "ou&our,
Ce n7e" !a une "ec#nolo$ie !ro!remen" di"e. C7e" une !ro!ri("( /ui arrive de "em! en "em! e"
/u7on va u"ilier. Guand on fai" de la micro!ro!a$a"ion e" /u7on $(n=re de !lan"e in vi"ro- il arrive
/ue de !lan"e oien" diff(ren"e de la !lan"e m=re- elle !r(en"en" de modifica"ion !lu ou
moin im!or"an"e.
6e modifica"ion le !lu couran"e /u7on oberve on" ouven" ind(irable mai on (limine bien
ur ce !lan"e
Faria"ion omaclonale ' Ce ne on" !a de v(ri"able mu"a"ion - ce on" de modifica"ion du
$(nome /ui concerne l7e*!reion du $(nome % (!i$(nie
Y!i$(n("i/ue ' Carac"=re /ui n7e" !a direc"emen" l7e*!reion de l7informa"ion $(n("i/ue- mai
d(!end d7in"erac"ion en"re cellule ou en"re con"i"uan" d7une cellule.
)* anomalie ou d(ficience '
Kalmier 0 #uile a ("( mul"i!li( !ar cul"ure in vi"ro !ar cul"ure d7 e*!lan" an m(ri"=me %
racine % cal M embr4on oma"i/ue +)S,
9l 4 a de millier d7#ec"are /ui on" ("( !lan"( mai lor/ue le !lan"e on" !ou( on a remar/u(
/ue le fleur avaien" de anomalie % "(rili"( +!a de $raine donc !a d7#uile,
Si on a un b(n(fi/ue "able- on !eu" l7e*!loi"er comme nouveau carac"=re
K(lar$onium % a!ec" de feuille ("ai" comme du velour - il a cr(e une nouvelle vari("(
a!!el( velve" roe
Uraiier % au$men"a"ion de la r(i"ance % 10R de !lan"e r(i"an"e au mildiou
b,Cu"a$en=e
)lle e" na"urelle mai c7e" ae? len". On u"ilie la mu"a$en=e indui"e
6or/ue le !#(nom=ne e" na"urel- la fr(/uence e" e 10-: !our le $(nome nucl(aire e" de 10-8 !our
le $(nome c4"o!lami/ue.
Kour acc(l(rer le !roceu- on u"ilie '
/ de a$en" mu"a$=ne +c#imi/ue ' )"4l Ce"#4l Sulfora"e . )CS e" le M u"ili(,
+!#4i/ue ' AF,
!ui la !reion de (lec"ion.
C("#odolo$ie '
On cul"ive un e*!lan" v($("al ur milieu ric#e en 2-4-E ou ric#e en r($ula"eur de croiance +On
"ravaille ur de cal- de u!enion cellulaire ou de cul"ure de !ro"o!la"e ,
Su!enion cellulaire dan milieu avec beaucou! d7#ormone 2-4-E +.au*ine de 4n"#=e /ui a for"
!ouvoir de mul"i!lica"ion,- on ob"ien" cal % milieu li/uide % u!enion cellulaire % on me" a$en"
mu"a$=ne
6Zin"(r1" du milieu li/uide e" /ue c#a/ue cellule era au con"ac" de l7a$en" cellulaire
On mul"i!lie le cellule en $rande /uan"i"( % on fai" un ("alemen" en milieu $(lo( en boi"e de
!("ri. 6e cellule von" e d(velo!!er e" donner de !e"i" cal
On va "ranf(rer ce cal ur un milieu (lec"if +.milieu avec a$en" (lec"if /ui va $(n(ralemen" 1"re
"o*i/ue e" /ui va aini (lec"ionner le cal /ui on" mu"( e" /ui au$men"e leur r(i"ance 0 ce""e
"o*ici"(,
On (lec"ionne ce cal varian" % r($(n(ra"ion de !lan"e % !lan"e varian"e !ui on fai" de
croiemen" !our voir commen" e "ranme" la mu"a"ion
.N Eonne de !lan"e /ui ne on" !a de OBC
/ '"rprod"ction d'acides amins
9l e*i"e de acide amin( een"iel /ue l7#omme ne !eu" !a fabri/uer' 6eu - D#r- 64- Dr4- K#(-
Fal- Ce"- 9leu. On doi" donc aller le c#erc#er dan l 7alimen"a"ion .
K#rae m(mo ' 6e "r= l4ri/ue Dri"an fai" vac#emen" m(di"er 9eul"
6- CM ' C(r(ale ' !auvre en Lys - D#r- Dr4
C-6M ' 6($umineue ' !auvre en #et - C4"
6e acide amin( on" la ca!aci"( de r("ro-in#iber leur 4n"#=e.9l e*i"e beaucou! de mol(cule
analo$ue d7acide amin( . Ce analo$ue von" 1"re incor!orer dan le !ro"(ine mai celle ci ne
eron" !a u"iliable !ar la !lan"e % mor" du v($("al
On c#erc#e de mu"a"ion au niveau du 4"=me de r("ro-in#ibi"ion. 6a r("ro-in#ibi"ion a lieu au
niveau de la 1ere en?4me de la c#aJne de la 4n"#=e d7acide amin(. 9l 4 aura ur!roduc"ion de
acide amin(.
Dec#ni/ue '
Cul"ure de cellule M analo$ue d7acide amin( +a$en" (lec"if,
An acide amin( e" ca!able d7in#iber a !ro!re 4n"#=e. 67analo$ue era incor!or( dan le
!ro"(ine +/ui conduira 0 de !ro"(ine modifi(e, /ui eron" l("ale !our la !lan"e auf i elle e"
mu"(e. Eonc i la 1ere en?4me de la c#aJne de bio4n"#=e n7e" !lu e*!rim(e $rHce 0 la mu"a"ion-
on !ourra alor cr(er en mae de acide amin(.
5!!lica"ion '
5u$men"a"ion de la l4ine dan le c(r(ale +analo$ue de la l4ine % amino("#4lc4"(ine,. On a
ea4( c#e? l7or$e e" le maI- mai la l4ine n7au$men"ai" !a dan le $rain % c7e" une e*!reion
"iu !(cifi/ue +.ne Ze*!rime /ue dan cer"ain "iu,
Ce!endan"- fonc"ionne "r= bien c#e? le ri?
/ -olrance et rsistance a"& stress abioti!"es :
Dol(rance au $el ' e!=ce cul"iv(e dan le r($ion "em!(r(e. Yl(va"ion de la "eneur en olu"(
dan la vacuole !our (vi"er /ue l7eau ne $=le e" fae (cla"er la cellule.

Dol(rance au froid ' !lan"e ornemen"ale. Klan"e d7ori$ine "ro!icale rendue r(i"an"e au froid !our
!ouvoir le cul"iver/"ocVer dan endroi" moin c#auff(

S"re #4dri/ue ' 6on$ue !(riode an !luie+] 1@ &our,. On a&ou"e un a$en" omo"i/ue dan le
milieu +K)B, % l7eau va or"ir de la cellule- ce /ui !erme" de (lec"ionner le r(i"ance .

Dol(rance 0 la l7aluminium ' Ka de "o*ici"( !our la !lan"e i ou forme de el mai il 4 a
acidifica"ion de ol /ui !rovo/ue une olubilia"ion de l7aluminium /ui e" alor aborber !ar la
!lan"e /ui e" e*"r1memen" "o*i/ue. Eonc on au$men"e la "ol(rance 0 l7aluminium
Dol(rance ^ R(i"ance
Kour au$men"er la "ol(rance/r(i"ance ' on me" milieu (lec"if
67au"re m("#ode !our au$men"er la r(i"ance au "re e" l7u"ilia"ion de la !roline dan le milieu
+on au$men"e la concen"ra"ion de la !roline dan le vacuole, % la !lan"e au$men"e a r(i"ance.
On u"ilie un analo$ue de la !roline . #4dro*4!roline
/ -olrance et rsistance a"& stress bioti!"es :
C#am!i$non
>ac"(rie
Firu
Fer /ui a""a/uen" le racine
C("#ode !our au$men"er la r(i"ance '
a$en" !a"#o$=ne dan le milieu de cul"ure ' !b d7invaion % di!oi"if mi en !lace
C#am!i$non dan le fond e" cal au deu avec mb en"re deu*. On (!are l7a$en" !a"#o$=ne de la
cul"ure de cal
e*"rai" bru" d7a$en" !a"#o$=ne
"o*ine !urifi(e
analo$ue de la "o*ine +feu bac"(rien- "abac- Keudomona "abacci- m("#ionine ulfonide,
6e c#erc#eur on" "ravaill( ur de u!enion cellulaire e" de !ro"o!la"e de "abac
9l on" fai" a$ir ur le cellule !d" 1# on ob"ien" @2 cal mai avec une in"abili"( car il on" ubi
de mu"a"ion
5 !ar"ir de @2 cal - il on" r($(n(rer /ue ; !lan"e mai /ui avaien" une r(i"ance /uand m1me
/ )sistance a"& herbicides :
On va u"ilier la mol(cule direc"emen" dan le milieu
9l 4 a mie en &eu de m(canime mol(culaire vari( il !eu" 1"re ob"enu !ar '
-Sim!le mu"a"ion au niveau de la cible de l7#erbicide +en?4me, % le $=ne cibl( e" l756S
+modifica"ion d7un C en D,. 6e !lan"e auva$e von" devenir r(i"an"e 0 ce" #erbicide.
-5m!lifica"ion de la cible 0 l7#erbicide ' l7en?4me era e*!rim(e en !lu $rande /uan"i"( e" l7en?4me
ne era !lu ca!able d7a$ir
-C(canime dZam!lifica"ion de la ca!aci"( de d("o*ifica"ion de la mol(cule ac"iv( +#erbicide,
-C(canime de (/ue"ra"ion de l7#erbicide ' 6e !ara/ua" a$i" au niveau du c#loro!la"e e" e" "r=
"o*i/ue !our l7#omme
Krovoca"ion de r(i"ance 0 l7an"ibio"i/ue
Cela a une a!!lica"ion de labora"oire
c,Uuion de !ro"o!la"e
a-Cul"ure de !ro"o!la"e
An !ro"o!la"e e" une cellule v($("ale an !aroi.
On l7enl=ve car elle con"i"ue une barri=re 0 '
-67in"roduc"ion de ma"(riel $(n("i/ue
-6a fuion cellulaire
Kour lZenlever +elle e" con"i"u(e de !ec"ine e" de celluloe,- on fai" a$ir de en?4me /ui von"
di$(rer e con"i"uan"
-Cellulae +di$=re celluloe,
-Kec"inae +di$=re !ec"ine,
On le u"ilie dan un milieu de cul"ure- il doi" 1"re #4!er"oni/ue car la cellule v($("ale !o=de une
(norme vacuole.
6a !reion de "ur$ecence N milieu e*"(rieur
6e milieu va !rovo/uer une or"ie d7eau de la cellule % !lamol4e. 6a vacuole va diminuer
On a&ou"e donc de a$en" omo"i/ue dan le milieu comme le manni"ol . ucre-alcool +80-
100$/6, ou le orbi"ol- on !eu" aui u"ilier de olu"ion aline +.CKO, /ui !rovo/ue aui une
or"ie d7eau.
On !eu" u"ilier n7im!or"e /uel "iu v($("al. On "ravaillera ur de feuille % !lan" en =ve %
ae!"ia"ion.
On "ravaillera ur de !lan"ule cul"iv( in vi"ro.
Si 8a marc#e !a 0 !ar"ir de feuille- on !rend de "iu le !lu &eune !oible "el /ue de embr4on
imma"ure /ui on" une ca!aci"( de r($(n(ra"ion im!or"an"e.
On !eu" aui !ar"ir de u!enion cellulaire +. cul"ure de cellule en milieu li/uide,
Kui on !urifie le !ro"o!la"e !ar fil"ra"ion !ui cen"rifu$a"ion !ui on le me" en cul"ure. 6a
cul"ure va e faire en milieu li/uide
Kro"o!la"e.cellule !#(ri/ue avec vacuole- !lamodemme- c4"o!lame
6a !remi=re c#oe /u7il va faire dan le milieu e" la r($(n(ra"ion de la !aroi +dan le 1ere 24#,
Kui il va e d(diff(rencier +il ac/ui=re de carac"=re de cellule d(diff(renci( . c4"o!lame "r=
r(dui", !ui le no4au va e cen"ralier- la vacuole va e fra$men"er en une mul"i"ude de !e"i"e
vacuole- le c4"o!lame va e denifier e" enui"e il 4 a diviion
9l fau" un milieu de cul"ure avec 5/C . 1 M manni"ol
Ane foi /u7on ob"ien" de micro-cal- on r(dui" le manni"ol mai "ou&our avec 5/C . 1
Ane foi /ue le cal on" uffiammen" d(velo!!er +"aille . 2-; mm, - on va modifier 5/C en le
diminuan" - on au$men"e le c4"oVinine % bour$eon
On "ranf=re le bour$eon en au$men"an" ce""e foi 5/C !our !erme""re l7enracinemen".
9l fau" /ue la r($(n(ra"ion oi" o!"imale !our la fuion de !ro"o!la"e.
On va faire de cul"ure avec 20 000 0 1 million de !ro"o!la"e !ar m6
9l !euven" ervir 0 la micro!ro!a$a"ion ou alor de la mu"a$en=e.
.N Cul"ure en milieu li/uide e" la !lu u"ili(e i 8a ne fonc"ionne !a % cul"ure nourrici=re
Cul"ure nourrici=re
On doi" faire une double cul"ure
!ar e* c#e? la banane
Su!enion cellulaire embr4o$=ne de banane +.cul"ure en milieu de cul"ure de banane avec
ca!aci"( de r($(n(ra"ion /ui e" "ranmie au* !ro"o!la"e ,
On !lace en milieu $(lo( le cellule de banane- on me" membrane "r= fine +/ui laie !aer
mol(cule mai !a cellule, !ui on !lace au deu !ro"o!la"e. On indui" la diviion cellulaire.
Kro!ri("( de !ro"o!la"e '
-Ka de !aroi !ec"o-celluloi/ue
-Ca!able de r($(n(rer
-Cul"iver en $rand nombre
b-Uuion de !ro"o!la"e
6or/u7il on" iol( - il von" !or"( 0 la urface de leur membrane de c#ar$e n($a"ive. 9l on"
"endance 0 e re!ouer mu"uellemen". 9l ne e "ouc#en" !a.
9l fau" 2 ("a!e !our faire de la fuion de !ro"o!la"e '
-5ccolemen" +!erme" de !rovo/uer le con"ac" membranaire,
-Uuion
Accolement
% )lle e fai" de 2 mani=re diff(ren"e '
C("#ode c#imi/ue ' on neu"ralie le c#ar$e n($a"ive !our /u7il e collen" en u"ilian" !ar e* le
K)B 1:00-:000. 6e !ro"o!la"e von" alor e coller le un au* au"re en forman" de a$r($a"
mai ne fuionnen" !a
C("#ode (lec"ri/ue ' on !lace le !ro"o!la"e dan un c#am! (lec"ri/ue de couran" al"erna"if ] 0-@ 0
@ C2? - le !ro"o!la"e von" e "ranformer en !e"i" di!Lle- il e c#ar$en" en fonc"ion du
c#am!- il von" venir 7ali$ner le un 0 co"( de au"re e" former de !e"i"e c#aJne""e
0"sion
C("#ode c#imi/ue ' lor/ue le !ro"o!la"e eron" a$$lu"iner - on a&ou"e une olu"ion de c#lorure
de calcium 0 !2 10. 9l va ouvrir le !ore de la membrane de !ro"o!la"e % fuionnen"
C("#ode (lec"ri/ue ' on va c#an$er de c#am! (lec"ri/ue- on !ae en couran" con"inu de "r= for"
vol"a$e 1Sv - on va envo4er de im!ulion (lec"ri/ue "r= br=ve de l7ordre de la m- le
!ro"o!la"e /ui on" en c#aJne""e von" fuionner
5!r= la fuion- on effec"ue une cul"ure de !ro"o!la"e '
-Cilieu li/uide
-Cilieu emi-olide +$el d7a$aroe 0 bae "em!(ra"ure, ' on cou!e le morceau* de $(loe
con"enan" le !ro"o!la"e /u7on reme" dan un milieu li/uide % in"ere" ' le !ro"o!la"e e divien"
/ue lor/u7il on" une !aroi
-Cilieu olide ' on d(!oe la u!enion de !ro"o!la"e li/uide ur la $(loe. 6e li/uide va 1"re
incor!or( dan la $(loe e" le !ro"o!la"e e d(!oeron" ur la urface de la $(loe. Cer"aine
cul"ure on" beoin d7une cul"ure nourrici=re . cellule en diviion ac"ive
On fai" $(n(ralemen" fuionner de !ro"o!la"e de "4!e 5 avec de "4!e >
6or/ue le fuion on" lieu- on ob"ien" diff(ren" "4!e de cellule '
55
>>
5>
e" cer"ain ne von" !a fuionner
.N on ob"ien" une u!enion "r= #("(ro$=ne de cellule diff(ren"e- il va falloir faire une (lec"ion
de !rodui" de fuion. +$(n(ralemen" 5>,
Ane foi (lec"ionn(- on a!!elle 8a de #("(rocar4on. Ce !rodui" de fuion von" (voluer de fa8on
diff(ren"e en fonc"ion de e!=ce donn(e
On !eu" avoir ; ca de fi$ure diff(ren" '
-6e 2 no4au* fuionnen" 5> % 4N +"("ra!loIde,. hybride somati!"e . On va avoir un m(lan$e du
c4"o!lame 6e mi"oc#ondrie fuionnen"- leur $(nome e m(lan$e % forma"ion d7un nouveau
$(nome mi"oc#ondrial. C#loro!la"e c7e" diff(ren" _ un lo" 5 ou > u!!rim(. On $a$ne beaucou!
de ma"(riel $(n("i/ue. Kour la re!roduc"ion e*u(e- on r(cu!=re le m" e" c#loro!la"e de la m=re.
)!=ce "r= !roc#e !#4lo$(n("i/uemen".
-6e 2 no4au* fuionnen" mai au fur e" 0 meure le c#romoome von" ubir une (limina"ion
!ar"ielle +2N M * c#romoome avec *W2n, . hybride asymtri!"e1 9l 4 a aui une fuion de
$(nome mi"oc#ondriau*- mai le remaniemen" !euven" cr(er de la "(rili"( mHle c4"o!lami/ue.
)!=ce !eu (loi$n(e !#4lo$(n("i/uemen"
-Ka de fuion de no4au*- il 4 a un no4au /ui e" (limin( au fur e" 0 meure de diviion. On aura
fuion de m" % nouveau $(nome e" lo" de c#loro!la"e oi" 5 oi" >. 6a fuion de m" va !erme""re
la SCC +"(rili"( male c4"o!lami/ue, . cybride
)!=ce "r= (loi$n(e !#4lo$(n("i/uemen"
d-6e auve"a$e d7embr4on
$mbryon immat"re . embr4on iu de croiemen" in"er!(cifi/ue- car incom!a"ibili"( e*uelle
+!a de $raine,- mai il 4 a /uand m1me un embr4on /ui e d(velo!!e e" donc !ar cul"ure in vi"ro
on ea4era de faire du auve"a$e.
9l 7a$i" d7embr4on ?4$o"i/ue. Guel/ue foi lor/u7on croie deu* e!=ce diff(ren"e cela ne
marc#e !a.
On e rend com!"e /u7il 4 a un embr4on /ui commence 0 e d(velo!!er e" /u7au bou" de /uel/ue
emaine l7embr4on avor"e % e!=ce e*uellemen" incom!a"ible
% croiemen" in"er!(cifi/ue.
)mbr4on % 1 $(nome ma"ernel M 1 $(nome !a"ernel
5lbumen % 2 $(nome ma"ernel M 1 $(nome !a"ernel
6e c#erc#eur e on" di" /ue lor du d(velo!!emen" de l7embr4on - il e" nourri" !ar l7albumen e"
/ue donc lor de la f(conda"ion '
1 !? va f(conder l7oo!#=re % embr4on ?4$o"i/ue 2n
1 !? va f(conder le 2 no4au* !olaire +nMn, +ac embr4onnaire, % albumen ;n
Si l7albumen e" "r= diff(ren" de l7embr4on ?4$o"i/ue- il ne !ourra !a le nourrir - ce /ui caue
l7avor"emen"
Eonc avan" /u7il n7avor"e- il va 1"re e*ci( e" 1"re mi en cul"ure ur un milieu nu"ri"if
Klu le e!=ce on" (loi$n(- !lu l7avor"emen" era !r(coce - !lu l7embr4on era !e"i"- e" !lu ce
era difficile.
% Uuion de m" e" c#loro!la"e 5 ou >
>eoin nu"ri"if % embr4on e d(velo!!e.
6or/ue l7embr4on e" "r= &eune- il va avoir de beoin d7omolari"( "r= (lev( +acc#aroe, mai il
va ra!idemen" devenir "o*i/ue- il faudra donc le diminuer
6e "r= &eune embr4on ne !euven" aborber le ni"ra"e donc on me" de l7a?o"e or$ani/ue.
6e Uer e" "o*i/ue- on le diminue
mai on au$men"e le calcium +!erme" la urvie, e" le !o"aium +!erme" la croiance,
On a donc un milieu "r= !(cifi/ue d7embr4on de !e"i"e "aille
Normalemen" - un embr4on e" ca!able de 4n"#("ier e #ormone mai on doi" a&ou"er de
r($ula"eur de croiance au "ade "or!ille !our (vi"er la $ermina"ion !r(coce. 9l fau" (vi"er /ue
l7embr4on e d(velo!!e "ro! vi"e. On a&ou"e de l7acide abcii/ue- c7e" une #ormone /ui in"ervien"
dan le d(velo!!emen" % elle !erme" le d(velo!!emen" normal
5!!lica"ion '
On !eu" avec ce""e "ec#ni/ue aller c#erc#er de $=ne de r(i"ance 0 de maladie d7e!=ce
auva$e
Souven" on fai" de croiemen" - mai 7il marc#en" !a on a recour au auve"a$e d7embr4on.
)* lai"ue ' elle e" enible 0 un c#am!i$non- le c#am!i$non va donner le mildou de la lai"ue. 2
e!=ce auva$e on" r(i"an"e 0 ce c#am!i$non- en faian" le auve"a$e d7embr4on on ob"ien" de
#4bride in"er!(cifi/ue % (lec"ion de r(i"ance
On !eu" faire aui de la cr(a"ion vari("ale - /ui e" u"ili(e !ar e* c#e? le Krumu +; e!=ce
diff(ren"e,- on !eu" cr(er de nouvelle vari("(
)!=ce avec !loIdie diff(ren"e. )lle on" !ol4!loIde- elle a!!or"en" de rendemen" !lu
im!or"an" car elle on" !lu $roe e" on" rendemen" !lu im!or"an". Cela e" difficile de faire
croiemen" avec !loIdie diff(ren"e % on doi" faire auve"a$e d7embr4on.
)* le Vi`i e" #e*a!loIde. 9l 4 a un e!=ce de Vi`i "r= r(i"an"e au froid
% Bain de "em! car dan cer"ain ca - on u"ilie embr4on dan croiemen" in"ra!(cifi/ue. Car au
cour" du d(velo!!emen" il 4 a "ade de ma"ura"ion de la $raine. C#e? cer"aine e!=ce il fau" un an
avan" /ue la $raine $erme
e* "ourneol ' au lieu d7une $(n(ra"ion !ar an - on a 4-@ $(n(ra"ion !ar an
e- Dran$(n=e
au"re !rof
V)L'haplodiplo2disation
C7e" une "ec#ni/ue /ui va !erme""re de $a$ner du "em!- car elle va !erme""re de cr(er de li$n(e
#omo?4$o"e an !aer !ar au"of(conda"ion ucceive.
9l e" !lu facile de faire la mu"a$en=e ur de !lan"e #a!loIde- car "ou"e le mu"a"ion
7e*!rimen" % mu"a"ion #omo?4$o"e
Klan"e di!loIde #("(ro?4$o"e % !lan"e #a!loIde % !lan"e di!loIde #omo?4$o"e
9l 4 a donc 2 ("a!e
Cr(a"ion de !lan"e #a!loIde '
Si on fai" de la cul"ure de $am("o!#4"e femelle% gynogense
Si on fai" de la cul"ure de $am("o!#4"e mHle % androgense
Androgense
6e $am("o!#4"e mHle e" le $rain de !ollen - on a ; no4au* #a!loIde dedan - 2 !? e" 1 no4au
v($("a"if. Ce $rain de !ollen e" un enemble de cellule "r= diff(renci(- donc difficile 0 cul"iver.
6e $rain de !ollen on" iu de cellule m=re de l7an"#=re /ui en ubian" la m(ioe donnen"
naiance au* "("rade /ui e (!aren" le une de au"re !our donner le micro!ore. 6e
micro!ore e divien" !ar mi"oe e" donnen" le $rain de !ollen. 6e "ade micro!ore e" id(al
!our faire de la cul"ure
Cul"ure d7an"#=re imma"ure
6e $rain de !ollen e d(velo!!en" dan le an"#=re- il va falloir faire de la cul"ure d7an"#=re
imma"ure % !lu facile 0 !r(lever
Evl!" direc" ou indirec" d(!end du milieu de cul"ure.
Ean le an"#=re on a beaucou! de $rain de !ollen
Ean cer"ain ca- on va r($(n(rer de !lan"e albino- elle ne !euven" !a faire de $rain de
!ollen - elle ne on" !a in"(rean"e.
Comme la "ranmiion de !la"e e" ma"ernelle - de foi on en a de non fonc"ionnel.
6or de $4no$en=e- on a !a de !lan"e albino.
3ynogense
6e $am("o!#4"e femelle e" le ac embr4onnaire. 9l e" "r= !e"i"- on ne !eu" !a le cul"iver eul.On
le cul"ive avec l7ovaire dan le/uel il e" con"enu. On fai" de la cul"ure d7ovaire
On a un d(velo!!emen" direc" ou indirec".
5""en"ion de v(rifier /ue le !lan"e oien" bien #a!loIde a Car e !lan"e !euven" doubler
!on"an(men".
Dan" /u7elle on" #a!loIde - elle n7on" aucun in"(r1" car elle on" "(rile- c#("ive
Colc#icine blo/ue la forma"ion du fueau
Cu"a$en=e ur !lan"e #a!loIde % on va avoir !lu de mu"a"ion viible car on aura !a de
!#(nom=ne de dominance e" r(ceivi"( % mu"a"ion #omo?4$o"e
e* d7a!!lica"ion ' a!er$e
C7e" une !lan"e dioI/ue . !lan"e mHle Cm e" !lan"e femelle mm
VI)4rod"ction de molc"les nat"relles par la c"lt"re cell"laire
Ean une !lan"e- on a 2 "4!e de m("abolime '
-C("abolime !rimaire b urvie b commun au* !lan"e
-C("abolime econdaire b d(fene- communica"ion - !(cifi/ue de e!=ce v($("ale
6e m("abolime econdaire d(!end du "ade !#4iolo$i/ue e" du "ade de d(velo!!emen" de la
!lan"e. Ce m("aboli"e on" "ocV( dan de "iu +ouven" dan la vacuole,
On !eu" le claer en ; clae '
-5lcaloIde ' nico"ine - mor!#ine - an"icancer
-Com!o( !#(noli/ue ' amer"ume - !ro"ec"ion AF
-Der!(noIde ' mol(cule aroma"i/ue
9n"(r1" en !#armacolo$ie - a$roalimen"aire - c#imi/ue - com("olo$ie
9l 4 a !lan"e alimen"aire e" le non alimen"aire
On va u"ilier de u!enion cellulaire !our la !roduc"ion de mol(cule
C("#odolo$ie '
On !ar" d7e*!lan" v($("al !arce /u7elle e" uce!"ible de !roduire de mol(cule.
On me" l7e*!lan" dan milieu avec du 2-4-E - il va 4 avoir forma"ion de cal
% mul"i!lica"ion de cal
% creenin$ +on va (lec"ionner le cal /ui !roduien" le !lu de mol(cule en u"ilian" de
ac"ivi"( biolo$i/ue,
% milieu li/uide e" on va ea4er de "abilier la u!enion cellulaire
% au bou" de : moi - on aura une u!enion "abili(e
% !roduc"ion en $rande /uan"i"(
% bior(ac"eur
Si on arrive 0 !roduire beaucou! de mol(cule % modifica"ion de (/uence d7e*!reion
$(n("i/ue.