CBTiS 108 COMITN CHIAPAS

CATEDRTICO Q.F.B ABELARDO MORALES VELASCO.

MICROBIOLOGA
LAB. QUMICO MAYRA RUBY MNDEZ BAUTISTA
TERCER SEMESTRE GRUPO B


(PRCTICAS)

Generacin 2010-2013




INTRODUCCIN

Las prcticas que a continuacin se darn a conocer fueron realizadas en las
instalaciones de laboratorio de la escuela CENTRO DE BACHILLERATO
INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 108, esto con el fin de complementar nuestra
formacin profesional a nivel tcnico con la ayuda de nuestro catedrtico Q.F.B
Abelardo; ya que cada una de las prcticas son un autoevaluacin para nosotros y
una evaluacin para que el profesor valore que tanto ha avanzado nuestro
aprendizaje, tanto en terico como en prctico.
Desde aos atrs se descubri que la vida comenz con diminutos seres vivos
llamados microorganismos, estudiados por la ciencia microbiologa, se les llama as
porque estos no son visibles, a menos que se lleve acabo un proceso donde el
complemento de equipo sera el microscopio.
El microscopio es uno de los equipos ms importantes para la observacin de los
seres ms diminutos existentes en el planeta tierra, ya que est formado por lentes
graduadas que permiten la observacin de los mismos. La utilizacin de las lentes
depender del medio donde se encuentre el microorganismo que se quiere observar,
ya que existen las tinciones simples y diferenciales. Las primeras se dividen en
tincin simple y tincin negativa, se les llama simples porque no son tan precisos en
caractersticas de los microorganismos, ya que estas solo tien su entorno que las
rodea mas no el microorganismo. A diferencia de las tinciones diferenciales estas son
mas explicitas y especificas para cada microorganismo que se quiere identificar,
porque estn basadas en la morfologa de los microorganismos y en su afinidad.
Las tinciones diferenciales suelen observarse en la lente de inmersin con la ayuda
de un aceite agregado a la tincin ya preparada, se divide en tinciones de GRAM
donde encontramos bacterias Gram positivas (de color azul-violeta) y bacterias
Gram negativas (de color rojo grosella), esto se da por la pared celular y por la
diferencia de peptidoglucano que contiene cada bacteria, se diferencia mediante
tintes como el cristal violeta y el tinte de contraste safranina. La tincin de Ziehl-
Neelsen donde se tien parsitos y bacterias que en su pared contienes cidos
grasos, estas tambin son llamadas B.A.A.R (bacilo acido alcohol resistente) por lo
cual se utiliza calor para que este actu como mordiente y permita la coloracin de
las bacterias B.A.A.R positivas (con el tinte fucsina fenicada) y las bacterias B.A.A.R
negativas se obtendrn porque se decolorarn con el acido alcohol, para luego
teirse de azul violeta. Las tinciones de Kinyoun que son para la identificacin de
hongos, a diferencia de la tincin de Ziehl-Neelsen se hace el mismo procedimiento
con algunas variaciones del uso de calor y el tiempo, en esta se hace en frio y el
tiempo de diferencia es de 2 minutos ms.


Para poder hacer las tinciones de microorganismos, es necesaria primeramente su
existencia, que se lleva acabo mediante procesos y sustancias. Para el crecimiento de
microorganismos especficos es necesario aislarlo mediante un medio de cultivo que
es un gel o una solidificacin que debe contar con nutrimentos necesarios para
permitir su crecimiento. Esto se hace con el requerimiento de AGAR que es una
sustancia contenida en los medios de cultivo que hace la solidificacin, clasificadas
por uso y aplicacin.
Al tener nuestro medio de cultivo tiene que pasar por un proceso, el cual ser
explicado detalladamente en las prcticas, se tiene que sembrar mediante estriados;
cabe mencionar que no solamente el cultivo y sembrado se hacen en cajas petri, si no
que tambin en tubos de ensaye.



















PRCTICA No. 1
LIMPIEZA DEL MICROSCOPIO
OBJETIVO:
Limpiar el microscopio con la ayuda de la solucin desengrasante para poder tener
una buena visin de nuestras muestras.
MATERIAL Y SUSTANCIAS:
*2 MICROSCOPIOS
*SOLUCIN DESENGRASANTE
-ALCOHOLIMETRO
-ALCOHOL
-H2O DESTILADA
-ETER-ETILICO
-1 PROBETA DE 100ML.
-PIPETA DE 5ML.
-AGITADOR DE VIDRIO
-FRASCO DE GUARDADO
*ALGODN (TORUNDAS)
*PAPEL CEDA
*2 MUESTRAS
FUNDAMENTO:
Para obtener una buena visin de nuestras muestras es necesario tener en buenas
condiciones a nuestro equipo necesario, en esta prctica usaremos el microscopio ya
que este se ha diseado especialmente para observaciones de seres diminutos que
pueden ser vivos o inertes, esto depender de los microorganismos que se aslen y de
la tincin que se haga. El microscopio esta compuesto por lentes tan delicadas que se
tiene que tener constantemente limpias, porque atraves de ellas es posible la
observacin de los microorganismos. Como ya sabemos los microorganismos son de
distinta familia as como tambin de tamao. Los microscopios regularmente constan
de 4 lentes, la primera llamada lupa que es la lente mas simple para la observacin de
seres no tan pequeos, la lente de 10x o 15x, la lente de 40x o 45 y el de inmersin que
regularmente se utilizan para la observacin de muestra diferenciales (100x) con la


ayuda de la agregacin a la muestra de un aceite para tener una observacin buena y
exacta.
OBSERVACIONES: Respecto a las muestras(preparaciones secas), estas al observar al
microscopio, la primera muestra (de tuberculosis) se vean pequeos
microorganismos en forma de zixzsac y en la 2 muestra que era de hepatitis observe
que se encontraban partculas con apariencia polvorienta. La solucin desengrasante
utilizada era de color translucida y su olor era muy fuerte, al hacer la limpieza de las
lentes note que los microscopios estaban muy maltratados y que muchos de nosotros
no les damos el uso adecuado.
DISCUCIN: Tuve dificultades en hacer la disolucin, y en la elaboracin de torundas.
RESULTADO: Record como hacer una disolucin de dos sustancias miscibles, asi
como tambin a enfocar, obtuve un microscopio limpio y aprend ha hacer torundas
de algodn.













TCNICA
(ELABORACIN DE LA SOLUCIN DESENGRASANTE)










AFORARA















SUSTANCIAS (ETER, H2O, Y
ALCOHOL) Y EQUIPO:
LAVAR MATERIAL
CON H2O
DESTILADA
AFORAR A 100ML
CON
ALCOHOL

MEZCLAR
PPETEAR ETER
(4.5ML.) Y
AGREGAR AL
ALCOHOL
SERVIR 100ML DE
ALCOHOL AL 70%
MEDIR SU
DENCIDAD Y
ANOTAMOS.

ATIQUETAR
Y USAR
GUARDAR SOLUCIN EN
UN FRASCO DE
GUARDADO
SOLUSIN
DESENGRASAN
TE


CONCLUSIN
Para tener una buena observacin en el microscopio es necesario tener serios
cuidados, desde el momento de agarrarlos hasta el termino de utilizacin, ya que este,
como ya haba mencionado, contiene lentes que son muy delicadas; para sostenerlos
es necesario tomarlos de la base y del brazo del microscopio pegado a nuestro pecho,
para que no tenga mucho movimiento y las lentes no se rayen, tambin tenemos que
hacer una limpieza general tanto como para las lentes como las partes metlicas y no
metlicas exteriores que forman al microscopio. Todo esto se logra siguiendo la
tcnica anterior.























PRCTICA No. 2
PREPARACIN DE FROTIS
OBJETIVO: Aprender ha hacer extendido de muestras, tambin llamados frotis.
MATERIAL Y SUSTANCIAS:
*4 PORTA OBJETOS(SE PIDEN 3 PARA LA TINCIN SIMPLE PARA SEGUIR LAS REGLAS EN
LAS PREPARACIONES BIOLOGICAS)
*1 CUBRE OBJETO
*COLORANTE AZUL DE METILENO
*1 PUENTE DE TINCIN
*SOLUCIN DESENGRASANTE
*JABN
*FRANELA
*PAPEL ABSORBENTE
*ASA
* 2MUESTRAS
*1 QUEMADOR BUNSEN
*H2O DESTILADA
*1 MICROSCPIO
FUNDAMENTO: Las extensiones de muestra son muy importantes, ya que mediante ellas se
hace la identificacin microscpica de organismos pequeos; para que esto se lleva a cabo es
necesario la utilizacin de materiales y sustancias que nos ayudar a tener un buen frotis o
una buena preparacin hmeda, para ello se utilizarn porta objetos donde se realiza el
extendido en forma de zixzsac con una asa inclinada aproximadamente 45, antes de utilizar
los porta objetos, es necesario lavarlos con jabn y luego desinfectarlos con solucin
desengrasante elaborada con ETER y ALCOHOL al 70%; el asa utilizada tambin se esteriliza
con fuego, esto es introduciendo la ruedita a la llama oxidante hasta obtener un color rojo
pasin en ella, que har la eliminacin de microorganismos no requeridos. Respecto a las
preparaciones hmedas, nicamente se utiliza un gotero que nos ayuda a la agregacin de la
muestra al portaobjetos y para su observacin es necesario agregar sobre la muestra lquida
un cubre objeto. Las tinciones simples son aquella que no especifican morfologa bacteriana o
microbiana, ya que nicamente se pretende observar los microorganismos mediante la
tincin del medio donde se encuentran, como es el caso de la tincin simple y la tincin simple
negativa. En la primera se utilizar el colorante azul de metileno que como ya mencione solo
teir el medio, ms no las bacterias, esto se hace con el fin de poder observar las bateras,
pues estas tienden hacer translucidas. Las preparaciones hmedas se hacen con el fin de


observar los microorganismos pero no inertes como la anterior, aqu se observan con
movimiento aunque su identificacin es complicada porque no se utiliza ninguna tincin.
OBSERVACIONES:
Al lavar los porta objetos la suciedad y la grasa fueron desvanecidas por la solucin
desengrasante. Los porta objetos quedaron totalmente transparentes; las muestras que
utilizamos eran de alimentos y H2O de florero descompuestos, su olor era feo y repugnante,
su color era blanco ya que era de atol descompuesto por 15 das y el agua de color amarilla
turbia, al hacer el extendido quedo algo turbulento y en la preparacin hmeda solamente se
notaba un color sucio.
OBSERVACIONES EN EL MICROSCOPIO
PREPARACIN SECA CON TINCIN SIMPLE:
Observe muchos hongos (hifas) estaban formadas en cadena como cuando se forman los
soldados en el cuartel militar, el color de fondo fue azul.
PREPARACIN HMEDA O GOTA PENDIENTE:
Observe muchos cloroplastos, que contenan una ruedita en medio de su pared, conclu que
esto era su ncleo.
DISCUCIN: Se me dificult al hacer la extensin, ya que la muestra que utilice era muy
gruesa, por tanto, tena que hacer una extensin mucho mas delgada para obtener un buen
frotis.
RESULTADO: Obtencin del frotis, tincin simple encontrando hifas y en la preparacin
hmeda muchos cloroplastos.















TCNICA PARA PREPARAR FROTIS
























Extender muestra en zona
estril.

Prender el quemador y
esterilizar aprox. 2-3
min.

Tomar una asada de muestra
en zona estril.




m
Pedir material:

jab
n
jaj
ab
on s
m
p
Dejar secar muestra aprox. 3-5
min.( Al aire).
Fijar frotis a calor aprox. 2 min.
(De estar tibio).
Y listo!!

Dejar desinfectar los
portaobjetos (5-
10min.) y luego secar.



s

p


TCNICA DE TINCIN SIMPLE
PASO 1- Realizacin del frotis.
PASO 2- Poner el frotis en un puente de tincin.
PASO 3- Agregar de 1-2 gotas de colorante (azul de metileno) y extender completamente
moviendo la muestra de un lado hacia a otro cuidadosamente.
PASO 4- Se deja secar en el puente de tincin durante 1 minuto.
PASO 5- Luego agregamos 3-5 gotas de H2O y escurrir para quitar los residuos de colorante y
as no se observe en el microscopio los cristales de colorante.
PASO 6- Se deja secar completamente al aire.
PASO 7- Se sita la muestra en la platina, conectar el microscopio a una fuente de energa
elctrica, se enfoca y se observa (hacer las anotaciones necesarias).
NOTA: Este procedimiento se realiza por 3 veces para tener opciones de muestras en cuestin
de que una no este bien realizada.
TCNICA DE PREPARACION HMEDA
*PEDIR MATERIAL:(1 porta objeto, 1 cubre objeto, 1 puente de tincin, un gotero, muestra
lquida y 1 microscopio).
PASO 1- Situar el portaobjeto ya desinfectado en el puente de tincin.
PASO 2- Tomar una gota de la muestra y situarla en el portaobjetos (en medio de su
superficie).
PASO 3- Ubicar un cubre objeto sobre la gota de la muestra.
PASO 4- Y a obtenida la muestra en gota pendiente, situarla sobre la platina del microscopio,
conectar a una fuente de alimentacin elctrica, enfocar y hacer las anotaciones necesarias.
CONCLUSIN
El frotis es uno de los elementos ms importantes para identificacin de microorganismos.
Para ello es necesario saber y aprender ha hacer las extensiones, ya que si tenemos una
extensin gruesa la observacin no ser buena, porque la extensin se hace tan solo tocando
suavemente la muestra y extender lo mas delgado posible para que al observa al microscopio
la muestra sea casi translucida, cabe mencionar que los microorganismos son translucidos por
lo tanto es necesario hacer una tincin, para poder observar a los microorganismos.






PRCTICA No. 3
TINSIN SIMPLE NEGATIVA
OBJETIVO: Aprender para qu sirven y hacer las tinciones simples negativas y as poder
observar las capsulas de los espirilos.
MATERIAL Y SUSTANCIAS:
*QUEMADOR BUNSEN
*ASA
*6 PORTA OBJETOS
*TINTA CHINA
*SOLUCIN DESENGRASANTE
*FRANELA
*PAPEL ABSORBENTE
*PACIENTE (DE EL OBTENDREMOS LA MUESTRA BUCAL)
*H2O DESTILADA
*1 MICROSCOPIO
FUNADAMENTO: Existen tinciones que permiten ver las formas de las bacterias sin
especificacin de que bacteria se quiere identificar, en esta prctica la tincin ser simple
negativa que nicamente teir el medio en que esta la bacteria, para as poder observar la
forma de los espirilos mediante su capsula, estas no tienden a teirse, debido a que la tinta
china es un extracto de carbono que no permite que las bacterias se tian, por eso se llama
negativa porque nunca nos dar una coloracin de la bacteria, si no que nicamente del medio
donde se encuentre. Cabe mencionar que la bacteria ser transparente y solo se observara su
capsula, su entorno con formable.
OBSERVACIONES:
Al tomar la muestra observ que la capa bacteriana de los dientes de Yuri era de color blanco
amarillento y al disolverse en el agua su color era transparente.
OBSERVACIONES EN EL MICROSCOPIO:
Vi microorganismos pertenecientes a la morfologa bacteriana llamada espirilos, estos eran en
forma espiral, tambin note que las bacterias no se tieron, nicamente su entorno, por
decirlo as el fondo estaba teido de negro y esto permita notar la forma de la bacteria que
estaba transparente.
DISCUSIN: Tuve problemas al enfocar la muestra, pero en todo lo dems lo hice bien, porque
observ lo que tena que encontrar.


RESULTADO:
Encontr espirilos.
TCNICA
PASO No. 1- Pedir el material (quemador bunsen, asa, 6 porta objetos, tinta china, solucin
desengrasante, franela, papel absorbente, paciente (de l obtendremos la muestra bucal, este
debe estar sin limpieza bucal), H2O destilada, 1 microscopio).
PASO No. 2- Prender el quemador y situar al paciente en la zona estril.
PASO No. 3- Situar el porta objeto en la misma zona y agregar 1 gota de H2O destilada( se
pondr en un extremo del portaobjeto para hacer la disolucin de la muestra).
PASO No. 4- Esterilizar el asa, y enseguida tomar muestras de los orificios de los dientes
(cerca de las encas).
PASO No. 5- Situar la muestra en el extremo donde se encuentra la gota de H2O y hacer la
disolucin.
PASO No. 6- Agregar a la muestra diluida 1-2 gotas de tinta china y extender con la ayuda del
canto del otro porta objeto inclinado aproximadamente a 70.
PASO No. 7- Dejar secar muestra y luego colocarla a la platina, conectar y enfocar (hacer las
anotaciones necesarias).
CONCLUSIN
En esta prctica se dio a conocer que la tincin usada solamente sirve para la observacin de
la forma de la bacteria o del microorganismo, ya que la tinta usada no es adecuada para la
tincin de la bacteria, su funcin es teir su medio para poder observar su capsula.












TINCIONES DIFERENCIALES
Estas tinciones son basadas en especificar la morfologa y la afinidad que se quiere identificar
del microorganismo. En esta unidad nos enfocamos mas en la morfologa bacteriana, espero
que los oriente el recuadro siguiente.



Las tinciones suelen dividirse en muchas pero las ms usadas en nuestra rea ser la TINCIN
DE GRAM, TINCIN DE ZIEHL-NEESEN Y la tincin para hongos KINYOUN.





PRCTICA No. 4
TINCIN DE GRAM
OBJETIVO: Saber qu es y cmo se hace la tincin de GRAM para luego obtener bacterias
Gram positivas que se teirn de color azul-violeta y bacterias Gram negativas que sern de
color rojo grosella. Esta coloracin se llevara a cabo mediante el uso de colorantes y un
mordiente que permitir la coloracin de las bacterias.
MATERIAL Y SUSTANCIAS:
*3 PORTAOBJETOS
*FRANELA
*SULUCION DESENGRASANTE
*PAPEL ABSORBENTE
*MUESTRA (ATOLE Y TOMATE ROJO EN PUTREFACCIN)
*ASA
*1 QUEMADOR BUNSEN
*H2O DESTILADA
*TINTA CRISTAL-VIOLETA
*I2 LUGOL
*TINTA SAFRANINA
*ACETONA
*1 PUENTE DE TINCIN
FUNDAMENTO:
Estas tinciones los colorantes son de vital importancia, ya que estos hacen diferenciar cundo
tenemos una bacteria Gram positiva o cuando tenemos una bacteria Gram negativa; por ello el
1er colorante 8cristal-violeta) acta penetrando en todas las clulas bacterianas (tanto
positivas como negativas) atraves de de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto
formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), este acta como mordiente,
haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared celular. El I2 entra en las
clulas y forman un complejo insoluble acuoso con el cristal-violeta. El alcohol-acetona sirve
para realizar la decoloracin, ya que el complejo es soluble (sea el cristal-violeta y el I2); los
organismos positivos no se decoloran y los negativos si. Para diferenciar ambas bacterias se
utiliza la safranina que funciona como colorante de contraste, tindose as las bacterias Gram
positivas de azul-violeta y las bacterias Gram negativas de color rosa o rojo grosella.



OBSERVACIONES MICROSCPICAS:
Al enfocar mi tincin vi muchos estreptococos, colonias de cocos, diplococos y cocos, algunos
estaban teidos, pero otros no. Los cocos estaban teidos de color azul-violeta y encontr
algunos bacilos que estaban teidos de color rosa, otras morfologas, pero pertenecan a la de
los hongos su forma era como de un asterisco y los otros como una dona con el centro de color
rosa y lo dems de azul, tambin encontr estreptococos pero no estaban teidos totalmente
solo su contorno de color rosita.

DISCUSIN:
Tuve problemas al enfocar e identificar cada microorganismo porque eran muchos, debido a
que hice una combinacin de muestras.
RESULTADO:
Bacterias Gram positivas (cocos)de color azul-violeta.

Bacterias Gram negativos (vibrios y bacilos) de color rosa fuerte y rosa bajito.






TCNICA
PASO No. 1- Pedir el material ya mencionado.
PASO No. 2- Hacer el frotis.
PASO No. 3- Situar el frotis sobre los puentes de tincin y agregar el 1er colorante (cristal-
violeta) de 2-4 gotas y dejar extender durante 1 minuto.
PASO No. 4- Escurrir el colorante luego del minuto. Y agregar I2 lugol y esperar
aproximadamente 1 minuto.
PASO No. 5- Decolorar con alcohol-acetona (tener cuidado para que no se lave la muestra).
PASO No. 6- Enjuagar con H2O destilada y escurrir.
PASO No. 7- Agregar el colorante de contraste(safranina) y esperar durante 1-2 minutos(
hasta que este fijada).
PASO No. 8- Situar la muestra con tincin e la platina, conectar microscopio, enfocar, y
observar (hacer las anotaciones necesarias).
NOTA: Se utilizan los 3 portaobjetos, haciendo 3 veces el mismo procedimiento, para seguir
las normas tanto del laboratorio y as tener un remplazo por algn error obtenido en una de
las muestras.
CONCLUSIN
Las tinciones diferenciales se dan por la morfologa bacteriana, ,lo cual este fue un gran
ejemplo, ya que las bacterias que se tornaron de color azul-violeta, fueron las que contenan
mayor capa de peptidoglucano que hace que retenga el primer colorante, mientras que las
bacterias Gram negativas que se tornaron de rojo grosella obtuvieron el color del 2 colorante
debido a que su pared celular es soluble en solventes orgnicos.










PRCTICA No. 5
TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN
OBJETIVO: Aprender hacer la tincin de Ziehl-Neelsen y obtener bacterias B.A.A.R positivas y
bacterias B.A.A.R negativas, mediante la utilizacin de colorantes tales como fucsina fenicada
y cristal violeta; como mordiente una fuente de calor y como decolorante acido-alcohol.
MATERIAL Y SUSTANCIAS:
*3 PORTAOBJETOS
*FRANELA
*SULUCION DESENGRASANTE
*PAPEL ABSORBENTE
*MUESTRA (ATOLE EN PUTREFACCIN)
*ASA
*1 QUEMADOR BUNSEN
*TRIPIE DE METAL
*TELA DE ASBESTO
*H2O DESTILADA
*TINTA FUCSINA FENICADA
*TINTA CRISTAL-VIOLETA
*ACIDO-ALCOHOL
*1 PUENTE DE TINCIN
*PAPEL FILTRO (2CM DE ANCHO POR 4 CM DE LARGO)
FUNDAMENTO:
Las paredes de algunos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de
cadena larga, donde adquieren la propiedad de resistir la decoloracin del acido-alcohol.
Como ya sabemos los colorantes o tintes estn formados por molculas que tienen energa
cintica, en esta tincin tambin llamada B.A.A.R(bacilo acido-alcohol resistente) se utiliza
como primer colorante la fucsina fenicada que tiene como mordiente el calor, ya que este
aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual hace que las bacterias se
tian de color rojo-rosa( se calienta aproximadamente por 3min.), para que este colorante
quede fijado totalmente a las bacterias B.A.A.R positivas es necesario agregar H2O destilada
este tiene como funcin solidificar los cidos grasos de modo que el colorante se fije. El acido-
alcohol funciona como decolorante de las bateras B.A.A.R negativas, lo cual nos hace
referencia de que las bacterias que se decoloran no son resistentes al acido-alcohol por lo


tanto es necesario teir con un segundo colorante que funciona como contraste (cristal
violeta) dejando teir alrededor de 2 minutos, y luego lavar con H2O para quitar los residuos
de colorante.
OBSERVACIONES:
Al hacer la tincin vi que el colorante comenzaba a salificarse por el calor y que necesitaba de
mas colorante, luego al decolorar quedaba un color muy bajito de rosa tranparente en la
muestra, al termino de la tincin mi muestra se torno a un color violeta muy bonito.
OBSERVACIONES MICROSCOPICAS:
Al prestar atencin a las formas bacterianas note que haba teido cocos y bacilos positivos de
color rojo-rosa, aunque algunos cocos solo estaban teidos en su entorno, encontr hongos
(hifas) en color azul-violeta y de igual color otros microorganismos pero no identifique que
eran porque su forma era deforme. Encontr una variedad microbiana pero no estaban
teidas, algunos si, pero solamente su contorno de azul-violeta, sus formas eran como
telaraas.
DISCUSIN:
Se me hizo complicado al enfocar y detectar que microorganismos tenia, porque sus formas
eran muy dispersas.
RESULTADO:
Bacilos y coco positivos teidos de color rosita y rojo-rosa.
Hifas y otros hongos negativos en color azul-violeta.














TCNICA
PASO No. 1- Pedir material (3 portaobjetos, franela, sulucion desengrasante, papel
absorbente, muestra (atole en putrefaccin), asa, 1 quemador bunsen, tripie de metal, tela de
asbesto, h2o destilada, tinta fucsina fenicada, tinta cristal-violeta, acido-alcohol, 1 puente de
tincin, papel filtro (2cm de ancho por 4 cm de largo)).
PASO No. 2- Realizacin del frotis siguiendo los pasos de la prctica #2.
PASO No. 3- Precalentar la tela de asbesto (debe estar tibia).
PASO No. 4- Colocar sobre el frotis el papel absorbente. Ya listo el frotis, se coloca sobre la tela
de asbesto.
PASO No. 5- Sobre el papel filtro agregar colorante fucsina fenicada y prender el quemador.
(Se deja evaporar durante 3 minutos sin dejar que se seque el colorante, para eso debes
agregar ms colorante si es necesario).
PASO No. 6- Despus de los 3 minutos, debes quitar el papel filtro para poder decolorar con
acido-alcohol (ten cuidado porque el exceso de acido-alcohol puede provocar el lavado de tu
muestra).
PASO No. 7- Enjuagar la muestra con H2O destilada, escurres y agregas el colorante de
contraste (crista-violeta) dejas teir durante 2 minutos en el puente de tincin.
PASO No. 8- Luego de los 2 minutos enjuagas nuevamente con H2O y dejas secar, para luego
ser observada (hacer anotaciones necesarias).

CONCLUSIN
Las tinciones de Ziehl-Neelsen son para la identificacin de bacterias patgenas como la
bacteria de la tuberculosis, ya que mediante el proceso anterior se logra teir las bacterias
que tienen cidos grasos que no permiten ser combatidas con facilidad, para que estas
pudieran ser teidas tuvo que intervenir el calor que aumento la energa cintica de las
molculas y as poder entrar el colorante a las capsulas de las bacterias; las capsulas de estas
bacterias son como tipo cera que al estar expuestas a calor se desasen por un momento y para
solidificar es necesario tener un factor frio que sera el agua, el agua en este caso seria el
fijador de color.








PRCTICA No. 6
TINCIN KINYOUN
OBJETIVO:
Aprender hacer tinciones de Kinyoun, con el propsito de teir hongos, con la ayuda de
colorantes tales como fucsina fenicada, cristal-violeta y un decolorante (acido-alcohol).
MATERIAL Y SUSTANCIAS:
*FRANELA
*SULUCION DESENGRASANTE
*PAPEL ABSORBENTE
*MUESTRA (ATOLE EN PUTREFACCIN)
*ASA
*1 QUEMADOR BUNSEN
*H2O DESTILADA
*TINTA FUCSINA FENICADA
*TINTA CRISTAL-VIOLETA
*ACIDO-ALCOHOL
*1 PUENTE DE TINCIN
FUNDAMENTO:
Las sustancias que se utilizan en esta tincin tienen por funcin teir a hongos sin la
intervencin de calor como mordiente, sino que el primer colorante que es fucsina fenicada
contiene fenol que hace teir a los hongos en fro, estos a su vez se decoloran con acido-
alcohol los que no son resistentes a el, para diferenciar de los que son resistentes y no
resistentes al acido-alcohol se utiliza el colorante cristal violeta, cabe mencionar que
quedaran sin teirse las bacterias que contienen cidos grasos debido a que su mordiente no
estuvo presente en esta tincin. Los hongos de la tincin Kinyoun positivos sern de color
rosa y los negativos de color azul-violeta.
OBSERVACIONES:
Al hacer la tincin vi que los colorantes llevan mas tiempo para poder teir, y al decolorar con
acido alcohol el primer colorante este se tornaba en un color rosa tranparente y al teir con el
colorante de contraste este se tornaba a morado fuerte.




OBSERVACIONES MICROSCOPICAS:
Encontr muchos bacilos teidos de rosa bajito, tambin encontr cocos estos a su alrededor
estaban teidos de azul y por dentro de color rosita bajito. Te hongos, uno en forma de
asterisco teido de color azul y otras morfologas de hongos en forma de colonias de color
rosa.
DISCISIN:
Se me hizo complicado en el enfoque porque no saba si estaba bien mi tincin, pero al final
pude encontrar hongos teidos y algunas bacterias teidas de rosa.
RESULTADO:
Bacilos positivos de color rosa.
Cocos de color rosa por dentro y azul en su entorno.
Hongos en forma de asterisco de color azul y otros hongos de forma deforme en color rosa.

TCNICA
PASO No. 1- Pedir material (3 portaobjetos, franela, solucin desengrasante, papel
absorbente, muestra (atole en putrefaccin), asa, 1 quemador bunsen, H2O destilada, tinta
fucsina fenicada, tinta cristal-violeta, acido-alcohol, 1 puente de tincin).
PASO No. 2- Realizacin del frotis siguiendo los pasos de la prctica #2.
PASO No. 3- Ya listo el frotis, colocarlo sobre el puente de tincin.
PASO No. 4- Agregar al frotis 1-2 gotas de tinta fucsina fenicada y dejar teir durante 5
minutos.
PASO No. 5- Despus de los 5 minutos, debes dejar escurrir y decolorar con acido-alcohol.
(Debes tener cuidado porque un exceso de cido alcohol puede lavar tu muestra).
PASO No. 6- Enjuagar la muestra con H2O destilada y ponerla sobre el puente de tincin.
PASO No. 7- Agregar a la muestra 1-2 gotas de tinta cristal-violeta y dejar teir durante 5
minutos.
PASO No. 8- Luego de los 5 minutos enjuagas nuevamente con H2O y dejas secar, para luego
ser observada (hacer anotaciones necesarias).






CONCLUSIN
Las tinciones de Kinyoun fueron diseadas especialmente para la identificacin de hongos en
muestras liquidas y slidas, no se utiliza calor ya que las paredes de los hongos no resisten a
el, por lo tanto estas solo son teidas en frio con ayuda de fenol que se utiliza como mordiente
de colorante. Pude identificar hifas que pertenecen a la morfologa de los hongos.