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Universidade Federal de Gois

Instituto de Qumica
Laboratrio de Preparaes
Cromatografia
em Coluna (CC)
Orientador: Prof. Dr. Luciano Morais Lio.
!cad"micos: #li $il%eira !les &'nior.
(runa )erreira $il%a.
Larissa Car%al*o $il%a.
Goinia, de maio de 2009.
$er+ abordada neste relatrio a aula de Cromatografia em Coluna tendo como adsor%ente
s,lica em gel- aula reali.ada no dia /0 de abril de /112 sob a orientao do Prof. Dr. Luciano Morais
Lio.
Introduo:
Cromatografia 3 uma t3cnica utili.ada para analisar4 identificar ou separar os
componentes de uma mistura. ! cromatografia 3 definida como a separao de dois ou mais
compostos diferentes por distribuio entre fases4 uma das 5uais 3 estacion+ria e a outra m%el.
6ntrodu.ida pelo pes5uisador russo Mic*ael 7s8ett em 921:4 5uando separou clorofila de uma
mistura de pigmentos de plantas4 atra%3s de uma coluna c*eia de carbonato de c+lcio em p4
fa.endo a la%agem com 3ter de petrleo. Conforme a amostra descia pela coluna4 apareciam bandas
separadas e cores distintas. Pala%ra de origem grega4 onde ;cromo< significa cor e ;grafia< significa
escrita4 ou se=a ;escrita em cores<. Mas a cromatografia pode separar os componentes sem nen*um
aparecimento de cor.
! cromatografia 3 preliminarmente uma ferramenta anal,tica para a separao de
misturas4 combinada com an+lises 5ualitati%as e 5uantitati%as das subst>ncias separadas. ? uma
poderosa e muito usada t3cnica de separao dos componentes de uma amostra.
Os componentes das amostras so distribu,dos entre duas fases4 uma das 5uais
permanece estacion+ria4 en5uanto a outra elui entre os interst,cios ou sobre a superf,cie da fase
estacion+ria. O mo%imento da fase m%el resulta numa migrao diferencial dos componentes da
amostra. O mecanismo en%ol%ido nesta migrao diferencial %ai depender do tipo da fase m%el e
estacion+ria utili.ado. Pela escol*a apropriada da fase fi@a e da fase m%el4 al3m de outras
%ari+%eis4 podeAse fa.er com 5ue os componentes da mistura se=am arrastados ordenadamente.
!5ueles 5ue interagem pouco com a fase fi@a so arrastados facilmente e a5ueles com maior
interao ficam mais retidos.
Os componentes da mistura adsor%emAse com as part,culas de slido de%ido a interao
de di%ersas foras intermoleculares. O composto ter+ uma maior ou menor adsoro4 dependendo
das foras de interao4 5ue %ariam na seguinte ordem: formao de sais B coordenao B pontes
de *idrog"nio B dipoloAdipolo B Can der Daals.
Dependendo da nature.a das duas fases en%ol%idas temAse di%ersos tipos de
cromatografia:
A slidoAl,5uido (coluna4 camada fina4 papel)-
A l,5uidoAl,5uido-
A g+sAl,5uido.
Os m3todos cromatogr+ficos possuem uma fai@a de aplicao ilimitada. Podem ser
usadas para separao de mol3culas menores4 como E
/
e D
/
4 at3 as maiores4 como prote,nas etc.
Fuantidades na ordem de picogramas podem ser separadas e detectadas por cromatografia gasosa
combinada com espectrometria de massa4 e 5uantidades em multigramas podem ser separados e
isolados por m3todos de coluna preparati%a.
! cromatografia em coluna 3 uma t3cnica de partio entre duas fases4 slida e l,5uida4
baseada na capacidade de adsoro e solubilidade. O slido de%e ser um material insol'%el na fase
l,5uida associada4 sendo 5ue os mais utili.ados so a s,lica gel ($iO
/
) e alumina (!l
/
O
G
)4
geralmente na forma de p. ! mistura a ser separada 3 colocada na coluna com um eluente menos
polar e %aiAse aumentando gradati%amente a polaridade do eluente e conse5Hentemente o seu poder
de arraste de subst>ncias mais polares. Ima se5H"ncia de eluentes normalmente utili.ada 3 a
seguinte: ter de petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol,
metanol, gua e cido actico.
O flu@o de sol%ente de%e ser cont,nuo. Os diferentes componentes da mistura mo%erAseA
o com %elocidade distintas dependendo de sua afinidade relati%a pelo adsor%ente(grupos polares
interagem mel*or com o adsor%ente) e tamb3m pelo eluente. !ssim4 a capacidade de um
determinado eluente em arrastar um composto adsor%ido na coluna depende 5uase diretamente da
polaridade do sol%ente com relao ao composto.
J medida 5ue os compostos da mistura so separados4 bandas ou .onas m%eis comeam a
ser formadas- cada banda contendo somente um composto. #m geral4 os compostos apolares
passam atra%3s da coluna com uma %elocidade maior do 5ue os compostos polares4 por5ue os
primeiros t"m menor afinidade com a fase estacion+ria. $e o adsor%ente escol*ido interagir
fortemente com todos os compostos da mistura4 ela no se mo%er+. Por outro lado4 se for
escol*ido um sol%ente muito polar4 todos os solutos podem ser elu,dos sem serem separados. Por
uma escol*a cuidadosa das condies4 praticamente 5ual5uer mistura pode ser separada
Outros adsor%entes slidos para cromatografia de coluna em ordem crescente de
capacidade de reteno de compostos polares so: papel, amido, aucares, sulfato de clcio, slica
gel, xido de magnsio, alumina e carvo ativo. !inda4 a alumina usada comercialmente pode ser
+cida4 b+sica ou neutra. ! alumina +cida 3 'til na separao de +cidos carbo@,licos e amino+cidos- a
b+sica 3 utili.ada para a separao de aminas.
ateriais e !todos:
Materiais
Coluna cromatogr+fica4 algodo4 funil4 b35uer4 pipeta4 s,licaAgel em p4 3ter de petrleo4
acetona4 amostra (maceramento de fol*a em acetona resultando em uma mistura de cor %erde).
Mtodos
#m uma coluna cromatogr+fica contendo um pe5ueno algodo na ponta mediuAse K cm de
s,licaAgel em p e transferiuAse a s,lica para um b35uer. Por ser con*ecida a polaridade dos
sol%entes 5ue sero utili.ados4 a s,lica foi misturada em 3ter de petrleo4 5ue 3 menos polar 5ue a
acetona e ser+ o primeiro sol%ente a ser utili.ado no procedimento de separao. Com a a=uda de um
funil4 a s,lica foi colocada na coluna cromatogr+fica e o e@cesso de 3ter de petrleo foi retirado.
Itili.ando uma pipeta colocouAse a amostra dentro da coluna de forma a no criar rac*aduras.
!briuAse no%amente a ponta da coluna at3 5ue a amostra esti%esse toda em contato com a s,lica
(sem *a%er l,5uido sobrando sobre o final da coluna).
Lentamente adicionouAse o 3ter de petrleo at3 a %isuali.ao de duas fases distintas. ! fase
amarela foi descendo en5uanto a %erde permanecia no topo da coluna. !ps obser%ar essa
separao das fases enc*euAse a coluna com 3ter de petrleo e col*euAse toda a fase amarela da
amostra em um b35uer4 restando somente a fase %erde no topo da coluna. Lemo%euAse tamb3m o
restante de 3ter de petrleo 5ue restou na coluna.
!o in,cio da eluio com acetona a coluna criou rac*aduras em seu interior e para remo%"A
las colocouAse algodo umedecido com clorofrmio por fora da coluna4 cobrindo todos os pontos de
rac*adura. O clorofrmio esfria o ar presente na coluna facilitando sua retirada (diferena de
presso M a presso da coluna sobre a rac*adura 3 maior). !ps a coluna %oltar a ficar uniforme
continuouAse a adio de acetona at3 a coleta de toda banda %erde em outro b35uer.
"esultados e #iscusso:
O m3todo de cromatografia de coluna permitiu a separao de duas bandas %is,%eis do
e@trato de fol*as4 a banda amarela 5ue 3 uma mistura de carotenos e a banda %erde 5ue 3 uma
mistura de clorofilas4 de%ido N interao de cada banda com o sol%ente. ! banda amarela interagiu
com o 3ter de petrleo4 pois ela 3 mais apolar do 5ue a banda %erde. ! banda %erde interagiu com a
acetona4 pois ela era mais polar.
Os aspectos 5ue alteram a efici"ncia de uma coluna cromatogr+fica so o empacotamento da
s,licaAgel 5ue compe a coluna e a aplicao da mistura sobre a coluna. O empacotamento de%e ser
o mais uniforme poss,%el4 sem a presena de bol*as e rac*aduras no interior da coluna4 pois estas
atrapal*am a separao das bandas. ! aplicao da mistura sobre a coluna de%e ser pe5uena para
5ue as bandas possam se separar completamente antes 5ue a coluna termine.
$oncluso:
! separao de misturas contendo subst>ncias com diferentes polaridades atra%3s da
cromatografia de coluna 3 eficiente4 pois 3 poss,%el separar completamente essas subst>ncias de%ido
N sua interao com o sol%ente utili.ado. #las de%em ser analisadas posteriormente para 5ue *a=a
certe.a de 5ue e@iste somente a5uele determinado composto da mistura. 6sso pode ser feito atra%3s
da cromatografia de camada delgada.

%i&lio'ra(ia:
#COAFIOM6C!4 Portal de Fu,mica e Meio !mbiente M Fu,mica )+cil M Fu,mica Org>nica
#@perimental. Dispon,%el em: P*ttp:QQubeA9:R.pop.com.brQrepositorioQRRSSQmeusiteQ5organica
e@perimentalQcromatografia.*tmB. !cessado em G1Q1RQ/112.