PRACTICA DE LABORATORIO N 8

CONSUMO DE GLUCOSA EN AEROBIOSIS POR Sacharomyces cerevisae

I. INTRODUCCIN

II. MATERIALES
2.1. Material Biolgico: Sacharomyces cereviceae levadura del pan o del vino
(suspensin del 10%)
2.2. Material y equipo de laboratorio:
Sistema de fermentacin: matraz de 50 ml de capacidad, tapn de jebe
atravesado por tuvo de vidrio, manguerilla y pinza.
Bomba de vaco
Gradilla y tubos de 16 y 125 mm.
Pipetas de 1, de 2, de 5 y de 10 ml.
Embudos de vidrio y papel filtro.
Cocina elctrica y pocillo.
Espectrofotmetro.
2.3. Reactivos y soluciones:
Buffer acetato 0, 1 M pH 4.6.
Glucosa 0.2 M
cido sulfrico 2/3 N
Tungtato de sodio 10 %
Solucin cprico alcalina
Solucin fosfomolibdica.
Agua destilada.

III. PROCEDIMIENTO
A. SISTEMA DE INCUBACIN
1. En un matraz de 50 ml, adicionar:
a) Buffer acetato 0.1 M pH 50 12.0 ml
b) Glucosa 0.05 M en buffer acetato 0.2 M pH 5.0 1.8 ml
c) Suspensin de levadura al 10 % en buffer acetato 1.5 ml
2. Mezclar y tomar una alcuota de 1 ml y colocarla en un tubo que contiene
1 ml de H2SO4 2/3 N. Mezclar y dejar en reposo como mnimo 2
minutos. Esta alcuota corresponde a la muestra del tiempo cero (0
minutos).
3. Tapar el matraz con el tapn de jebe y extraer el aire con una bomba de
vaco durante 3 a 5 minutos. Proceder a la incubacin, anotando el
tiempo de incubacin desde el momento en que se toma la primera
muestra (tiempo cero).
4. Luego de transcurrido una hora, tomar la segunda muestra y proceder
como en el paso 2.
5. A las muestras de los pasos 2 y 4, se les adiciona 1 ml de tungstato de
sodio al 10 % .Mezclar vigorosamente, dejar en reposo por 2 minutos,
agregar 7 ml de agua destilada, mezclar por inversin y filtrar.

B. DETERMINACIN DEL AZCAR RESIDUAL
El azcar residual se determinara en los filtrados del paso 5, utilizando el
siguiente sistema.
COMPONENTES (ml) Y
PROCESO
TUBOS
B I II
Agua destilada 1.0 0.5 0.5
Filtrado del paso 2 (tiempo 0) --- 0.5 ---
Filtrado del paso 4 (tiempo 40) --- --- 0.5
Solucin cprico alcalina 1.0 1.0 1.0
Mezclar y colocar en bao de agua hirviendo por 8 minutos. Al trmino de
este tiempo enfriar en agua corriente.
Solucin fosfomolibdica 1.0 1.0 1.0
Mezclar enrgicamente y dejar en reposo 3 minutos.
Agua destilada 7.0 7.0 7.0
Mezclar por inversin y dejar en reposo durante 10 minutos.
IV. CUESTIONARIO
1.- Explique
2.- Explique
3.- Explique el destino final de la glucosa en la va glucoltica aerobia de
sacharomices cereviceae "levadura del pan o del vino"
El destino final de la glucosa en la va glucoltica es el piruvato, el cual
mediante procesos sucesivos como el ciclo de Krebs y la fosforilacin
oxidativa produce ATP y la oxidacin del oxgeno a agua. Aqu se forma
biomasa, aumenta el nmero de levaduras.
4.- Explique
5.- Haga un esquema