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FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA
MANUAL DE PRACTICAS
L A B O R A T O R I O DE
BIOLOGA
CH 061
ACTIVIDAD
FECHA
09 - 10 setiembre
16 - 17 setiembre
23 - 24 setiembre
30 setiembre
1octubre
13 de Octubre
10
04 - 05 noviembre
11
11 - 12 noviembre
12
11 - 12 noviembre
13
18 - 19 noviembre
14
Entrega de notas
25 - 26 noviembre
28 - 29 octubre
16
08 de diciembre
17
15 de diciembre
Observa donde dejas el material caliente, cerciorndote que este frio antes de tomarlo
con la mano.
2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compaeros,
pude proyectarse su contenido.
3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lvate inmediatamente con
abundante agua, e infrmalo al profesor del curso.
4. Nunca pruebes una sustancia.
5. Al detectar el olor de un lquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con
tu mano abanica hacia ti el aroma.
6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido.
7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para
evitar su expulsin del contenido.
8. No arrojes cuerpos slidos en los lavaderos, no viertas directamente los cidos.
9. Rotula tu material de trabajo, as te ser fcil identificarlos.
10. Cuando trabajes con el mechero mantn tu cabello recogido.
11. Nunca emplear papel para encender el mechero.
3
Resumen (1 p)
Qu teoras lo sustentan? En relacin al desarrollo de los experimentos.
II.
Objetivos especficos (1 p)
Tema central de estudio para cada experimento desarrollado
III.
IV.
V.
Conclusiones (2 p)
Qu significan los resultados?
Las conclusiones estn relacionadas con los objetivos.
Es el anlisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la prctica
VI.
Cuestionario (1.5 p)
Preguntas relacionadas al tema
VII.
Bibliografa (0.5 p)
Qu autores se consultaron para fundamentar la investigacin?
Qu fuentes han sido consultadas (libros, artculos, tesis?
REVISAR: ANEXO de Referencias Bibliografas
GRUPO
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
Calificacin
Fecha:
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,
se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.
C
a. Identificacin de azucares reductores
b. Hidrolisis de la sacarosa
c. Reconocimiento del almidn
d. Reconocimiento de protenas
e. Reconocimiento de lpidos
2. Cuestionario:
a. Mencione algunos carbohidratos alimenticios, segn la clasificacin de la siguiente
tabla:
Monosacridos (3 ej.)
Disacridos (3 ej.)
Oligosacridos (1 ej.)
Polisacridos (2 ej.)
b. Qu es la inversin de la sacarosa?
c. Qu sucede qumicamente al aadir lugol a las muestras positivas para la reaccin?
d. Cul es la reaccin que tiene lugar entre el reactivo de Biuret y las protenas?
e. Cul es el valor de la polaridad de la acetona y el cloroformo?
3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada
5
GUIA DE LABORATORIO N 1
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
INTRODUCCIN
En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran
cantidad: carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas contienen
carbono, hidrgeno y oxgeno. Adems, las protenas contienen nitrgeno y azufre, y los
nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fsforo.
Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 molculas para tener un conocimiento que
permita trabajar con la bioqumica de las clulas. Dos de esas molculas son los azcares
glucosa y ribosa; otra, un lpido; otras veinte, los aminocidos biolgicamente importantes; y
cinco las bases nitrogenadas, molculas que contienen nitrgeno y son constituyentes claves
de los nucletidos.
En esencia, la qumica de los organismos vivos es la qumica de los compuestos que contienen
carbono, es decir, los compuestos orgnicos.
El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el
tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta capacidad, el
carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos distintos para formar
una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las
molculas orgnicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus
esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades especficas dependen de
grupos funcionales. Una caracterstica general de todos los compuestos orgnicos es que
liberan energa cuando se oxidan. Entre los tipos principales de molculas orgnicas
importantes en los sistemas vivos estn los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los
nucletidos.
OBJETIVOS
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas,
propipetas, pinzas de madera, pisceta, almidn.
Reactivo de Fehling, solucin de azucares, solucin de almidn, acetona, cloroformo, sulfato de
cobre, hidrxido de sodio
Por grupo: un huevo, 5 ml leche, 1 papa (elementos crudos)
6
Reaccin de Fehling:
Es una reaccin cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azcar reductor que
no sea sacarosa (carece de carbono anomrico y no es azcar reductor).
El reactivo de Fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua.
En la reaccin para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la
reaccin son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante especficamente el Cu
que va a reaccionar con los grupos qumicos de aldehdos y cetonas. Que en reacciones de
oxido reduccin el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitar
posteriormente, como lo expresa la siguiente reaccin (figura 2):
PROCEDIMIENTO
-
COMPONENTES
1
1.Solucin de glucosa
1%
2.Solucin de lactosa
1%
1 ml
1ml
3.Solucin de fructuosa 1%
4.Solucin de sacarosa
1 ml
1%
1 ml
Reactivo de Fehling A
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
Reactivo de Fehling B
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
Calor: ebullicin:
Bao mara 5
PROCEDIMIENTO
-
Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes, ver la tabla 3.
Someter a la accin del calor hasta ebullicin
Tabla N2. Componentes de la hidrolisis de la sacarosa
Muestra
sacarosa
COMPONENTES
Solucin de sacarosa
0.5%
2 ml
1M
1 ml
1 5
Enfriar
1 ml
Reactivo de Fehling A
1 ml
Reactivo de Fehling B
1 ml
Calor: ebullicin
bao mara
PROCEDIMIENTO
-
TUBO DE ENSAYO
1
1 ml
Papa rallada
1 gr
Albmina
Reactivo de Lugol
-
1 ml
3 gotas
3 gotas
3 gotas
Mezclar por inversin y anotar los resultados, ser positivo si se torna azul, violceo.
Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.
Enfriar el tubo de ensayo en agua fra, observar como a los 2-3 minutos reaparece el
color azul.
// ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
10
Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones
coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas
superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas, alcoholes, etc.
Una de las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven para su
identificacin, cabe resaltar la reaccin de Biuret (figura 8). Esta reaccin los producen los
pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ello se debe a la presencia del enlace
peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los aminocidos
Reaccin de Biuret (figura 8)
Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre (II); el cual el
agente denaturante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las
protenas despus de ser denaturadas facilitan la interaccin del Cu con los pares de
electrones sin compartir del grupo amino del pptido mediante enlaces de coordinacin con la
formacin de un complejo coloreado prpura violceo, cuya intensidad depende de la
concentracin de protenas.
11
PROCEDIMIENTO
-
COMPONENTES
1
Albmina (huevo)
2 ml
Casena (lcteo)
2 ml
Sol. almidn
NaOH
2 ml
5%
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
Rvo. Biuret:
Cu2SO4 1%
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
Observe la formacin del color violeta en los tubos que presentan protenas, siendo
Biuret (+), de no haber un cambio de color ser Biuret (-).
12
1 ml
1 ml
1 ml
2 ml
Acetona
2 ml
Cloroformo
-
2 ml
Aceite
+ agua destilada
Aceite
+ acetona
Aceite
+ cloroformo
Soluble
13
GRUPO
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
Nombre del alumno
(Apellidos, Nombre)
Pre
informe
(4 p)
Test
(4p)
Informe
(12 p)
Desempeo
(-)
Nota
(hasta 20)
1 Resumen (1p)
14
2.
3.
4.
5.
glucosa
lactosa
fructuosa
sacarosa
Reductor
Importante: Es necesario indicar la formacin de precipitado y la cantidad con un signo (+++).
15
SI
NO
Hidroliza
almidn
papa
huevo
Almidones?
Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).
16
Muestra
albmina
casena
almidn
Protenas
Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).
Aceite
+ agua destilada
Aceite
+ acetona
Aceite
+ cloroformo
Soluble?
17
18
5. Conclusiones (2 p)
6. Cuestionario (1.5 p)
1. Qu azcares son reductores?
2. Qu funcin tiene el cido clorhdrico?
3. En el experimento 2: reconocimiento del almidn, al trabajar con el lugol Por qu se da
el cambio de coloracin despus de sometido al calor? Fundamente su respuesta.
4. Qu es la desnaturalizacin?
5. Qu la provocado que la desnaturalizacin en la muestra?
6. Cul de las muestras empleadas tiene mayor cantidad de protenas?
7. Qu es una emulsin transitoria?
8. Qu es una emulsin permanente?
9. Con cul de los solventes orgnicos fue soluble el aceite?
10. En nuestro sistema digestivo que enzima se encarga de solubilizar las grasas que
consumimos?
7. Bibliografa (0.5 p)
19
ANEXO 1
PREPARACION DE REACTIVOS
LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
a. Soluciones de azucares glcidos al 1%
Glucosa, maltosa, lactosa, fructuosa, galactosa, sacarosa, almidn.
Se pesa 1 gramo de un glcido y se disuelve en 100 ml de agua destilada, agitando
hasta disolverse por completo.
Se vierte en un frasco limpio y se rotula, indicando la fecha de preparacin.
As para cada uno de ellos.
Para el caso del almidn, debe emplearse agua destilada caliente y agitacin constante
b. Solucin de almidn al 2%
Se pesa 2 gramos de almidn y se disuelve en 100 ml de agua destilada caliente y en
agitacin constante.
c. Hidrxido de sodio al 5%
Se pesa 5 gramos de NaOH y se disuelve en 100 ml de agua destilada.
d. Reactivo de Fehling
Solucin A:
solucin al 3% de sulfato cprico cristalizado
Pesar 30 g de sulfato cprico Cu2SO4 y aforar en un litro con agua
destilada
Solucin B:
solucin al 15% de sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio) en
solucin acuosa al 5% de hidrxido de sodio NaOH.
Preparar un litro de hidrxido de sodio al 5% (50 grs en 1 L) y adicionarle
150 g de tartrato de sodio y potasio
e. Solucin de lugol: yodo/yoduro de potasio
Adicionar 2 g de yoduro de potasio y1 g de yodo a 80 ml de agua destilada, agitar hasta
solubilizar los reactivos Aforar 100ml de agua.
f.
Reactivo de Biuret
Solucin A:
17.3 g de sulfato de cobre Cu2SO4 en 100 de agua destilada caliente
Solucin B:
17.3 g de citrato sdico Na2CO3y 100 g de bicarbonato de sodio anhidro
NaHCO3 en 800 ml de agua destilada caliente.
Se mezclan ambas soluciones, se enrazan a un litro y se ponen en un matraz cubierto
para evitar la accin de la luz. El reactivo se guarda en un frasco color mbar.
20
GRUPO
Fecha:
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,
se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.
A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)
2. Cuestionario:
a. Qu es cdigo gentico?
b. Cuntos genes tiene el hombre?
c. Qu es el Proyecto Genoma Humano?
d. Cmo se secuencia el ADN?
3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada
21
GUIA DE LABORATORIO N 2
MATERIALES Y REACTIVOS
Vasos de precipitado de: 500, 250 y 100 ml; probetas de 100 y 50 ml, 2 pipetas graduadas de
10 ml, 1 propipeta,1 pisceta, 1 pipeta pasteur, 2 tubos de ensayo de 15 ml, 1 gotero, 1 gradilla,
1 varilla de vidrio, 1 embudo, gasa, papel filtro, hielo, shampoo de color claro,
cloruro de sodio 2M, alcohol a bajas temperaturas (muy frio: 0 C), azul de metileno.
Por grupo:
FUNDAMENTO
El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y replegado, unido a protenas
para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogenizar el tejido y romper las
clulas para separar el ncleo, al lograrlo se libera el ADN, se debe separar de las protenas y
precipitarlo para extraerlo de la solucin. Se visualizara como un agregado de fibras
blanquecinas que se podrn adherir a una varilla de vidrio.
EXTRACCION DE ADN ANIMAL
PROCEDIMIENTO (A cada paso indicado, escriba la finalidad en el respectivo informe)
1.
Triturar en un mortero una porcin de hgado de pollo (20 grs), aadir 1 gramo de arena
fina, seguir
homogenizando. Una vez que el hgado mas arena este triturado
homogneamente (como una pasta) ir adicionando de a pocos agua destilada fra, en un
volumen total de 50 ml
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teir con azul de metileno
durante 3 minutos. Secar la lmina y observarla al microscopio. Describir la muestra al
microscopio.
23
GRUPO
Pre
informe
(4 p)
Test
(4p)
Informe
(12 p)
Desempeo
(-)
Nota
(hasta 20)
1. Resumen (1p)
24
Triturar una porcin de pltano de seda (20 grs) con 50 ml de agua destilada fra
en un mortero, aadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando.
3.2
25
3.3
3.4
26
3.5
3.6
27
3.7
Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teir con azul
de metileno durante 3 minutos. Secar la lmina y observarla al microscopio.
Describir la muestra al microscopio.
28
5. Conclusiones (2 p)
6. Cuestionario (1.5 p)
a.
b.
c.
d.
7. Bibliografa (0.5 p)
29
GRUPO
Fecha:
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,
se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.
A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)
Cuestionario:
a. Qu es la catalasa?, Cul es su funcin? En dnde se encuentra?
b. Cules son las propiedades de las enzimas?
c. Qu es anabolismo?
d. Qu es catabolismo?
30
GUIA DE LABORATORIO N 3
31
OBJETIVOS
Observar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales Ver el
efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimtica.
Comparar la actividad enzimtica de las diferentes muestras midiendo el producto
MATERIALES Y REACTIVOS
Vasos de precipitado de: 50, 100 ml; 2 matraces de 125 ml, 5 tubos de ensayo de 15 ml, 2
pipeta graduada de 10 ml, 1 propipeta,1 pisceta, 1 gradilla, 1 varilla de vidrio, 1 tapon horadado
embudo, tubo de vidrio en forma de U, cronometro, placapetri, cuchilla.
Perxido de hidrogeno al 30%, del cual se preparan las siguientes diluciones: 0, 25, 50, 75 y
100%
Por grupo:
PROCEDIMIENTO
I. EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUBSTRATO SOBRE LA CATALASA
1. Cortar la muestra en cinco trozos de igual tamao, dados de 1x1 cm mm, pesar (1 g aprox.).
2. Rotular cinco tubos de ensayo con los nmeros 1, 2, 3, 4 y 5
3. Realizar cinco disoluciones de agua oxigenada (0, 25, 50, 75 y 100 %)
4. Introducir un trozo de muestra en tubo de ensayo, a continuacin la disolucin de agua
oxigenada correspondiente cubriendo la muestra (2.5 ml)
5. Observar la velocidad de reaccin
Repetir los pasos anteriores para la siguiente muestra
32
GRUPO
1.
Pre
informe
(4 p)
Test
(4p)
Informe
(12 p)
Desempeo
(-)
Nota
(hasta 20)
Resumen (1p)
33
Tubo 2
H2O2 25%
Tubo 3
H2O2 50%
Tubo 4
H2O2 75%
Tubo 5
H2O2 100%
Muestra vegetal:
Muestra animal:
*Indicar con cruces +++ la intensidad de la reaccin (a mas cruces mas veloz)
34
Experimento II:
COMPARACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE AMBAS MUESTRAS
MUESTRA VEGETAL
..
ml/minuto
5
10
15
35
36
5. Conclusiones (2 p)
6. Cuestionario (1.5 p)
a. Qu es y qu hace un enzima?
b. El enzima empleado en esta prctica se denomina:
c. Su sustrato es:
d. Cules son las funciones de la enzima trabajada?
e. Cul es la estructura molecular de las enzimas trabajadas?
f. Qu efecto hace el cambio en la concentracin de la enzima en la
velocidad de descomposicin del H2O2?
7. Bibliografa (0.5 p)
37
A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)
2.
Cuestionario:
a. Defina: bacterias gram positivas, bacterias gram negativas, tincin, cepas, colonia,
agar, unidades formadoras de colonias (UFC)
b. Cul es la composicin del agar nutritivo?
c. En qu condiciones se favorece el crecimiento de bacterias?
d. Cmo es la fijacin del colorante en la pared celular bacteriana?
3.
38
OBJETIVO
Conocer el fundamento y la utilidad de la tincin Gram.
Aprender una tcnica de coloracin diferencial e interpretar los resultados obtenidos,
distinguiendo bacterias gram positivas y gram negativas.
39
FUNDAMENTO
Un primer colorante bsico: CRISTAL VIOLETA, se aplica sobre la muestra y
reacciona con las bacterias (cargadas negativamente) colorendolas.
Un mordiente: LUGOL, que incrementa la afinidad entre el primer colorante y las
bacterias. El mordiente se combina con el colorante para formar un compuesto
insoluble coloreado en el interior de la bacteria.
Un agente decolorante: como el ETANOL de 95% o la mezcla de ALCOHOL-ACETONA
(1:1), que son disolventes orgnicos capaces de eliminar el primer colorante de algunas
bacterias, decolorndolas.
Un colorante contraste: SAFRANINA, igualmente de carcter bsico pero de distinto
color que el primer colorante. La safranina es de color rosa, que contrasta con el color
violeta (del primer colorante), y que teir solo a las bacterias decoloradas en el paso
anterior.
Las diferencias qumicas en sus paredes celulares, son las que permiten o no la salida
del complejo cristal violeta-lugol.
Las bacterias GRAM POSITIVAS debido a la estructura y composicin bioqumica de
su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun despus del tratamiento con el
decolorante conserva el colorante bsico, por lo que se observan al microscopio de color azul
oscuro a violeta una vez concluida la tcnica de tincin
Las bacterias GRAM NEGATIVAS pierden el colorante bsico cuando son tratadas con
el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipdico de la pared celular lo que
aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la prdida del complejo cristal violetalugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante contraste, razn por la cual estas
clulas bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la tcnica de
tincin.
MATERIALES Y REACTIVOS
Cultivos bacterianos, laminas portaobjetos, asa de siembra (asa de kolle), pinzas para lminas,
mechero, alcohol, microscopio, aceite de inmersin, papel tissue
Colorantes: la tincin gram utiliza en estricto orden:
- Cristal violeta :
colorante bsico
- Lugol:
mordiente
- Alcohol acetona:
agente decolorante
- Safranina (fucsina): colorante de contraste
PROCEDIMIENTO
1. Preparacin de un frotis bacteriano.
a. Extensin. Colocar una pequea gota de agua destilada en el porta objeto. Con el
asa de siembra transferir una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio
slido a la gota. Remover la mezcla con el asa hasta formar una suspensin
homognea y extenderla, bien con la propia asa, produciendo la extensin del
inculo. (Si el material de partida es un cultivo en medio lquido, realizar
directamente la extensin).
b. Fijacin. Es imprescindible para que las bacterias queden inactivadas y adheridas
al vidrio, permitir la evaporacin espontnea del porta, ayudndose con la llama del
mechero de manera muy leve (en ningn caso el porta debe quemar al tacto). Si el
40
porta alcanza una temperatura excesiva a la llama, las clulas pueden deformarse o
romperse.
PREGUNTAS
1. Qu es una bacteria?
2. Qu partes tiene una bacteria?
3. Qu diferencias estructurales existe entre la pared celular de una bacteria gram
negativa y gram positiva?
4. Qu bacterias observo durante el desarrollo de la prctica?
41
Pre
informe
(4 p)
Test
(4p)
Informe
(12 p)
Desempeo
(-)
Nota
(hasta 20)
Resumen (1p)
42
BACTERIA:
MUESTRA
CARACTERISTICAS
43
44
4. Conclusiones (2 p)
6. Cuestionario (1.5 p)
a.
b.
c.
d.
e.
f.
Qu es esterilidad microbiolgica?
Explique la esterilizacin de calor seco y calor hmedo. Para que se emplea cada
uno.
Qu son los medios de cultivo?
Cmo se clasifican los medios de cultivo?
Cmo se reproducen los hongos?
Es importante el control microbiolgico de los ambientes?
7. Bibliografa (0.5 p)
45