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los orgenes de replicacin en la preparacin para la siguiente fase S. La fosforilacin de APC por G
1 complejos de Cdk en finales de T 1 lo inactiva, lo que permite la posterior acumulacin de
ciclinas mitticas durante la fase S y G 2 del ciclo siguiente.
El paso a travs de tres transiciones del ciclo celular crticos, G 1 fase S, metafase anafase , y
la anafase telofase y la citocinesis , es irreversible debido a que estas transiciones se
desencadenan por la degradacin regulada de protenas, un proceso irreversible. Como
consecuencia de ello, las clulas se ven obligados a atravesar el ciclo celular en una sola direccin.
En organismos superiores, el control del ciclo celular se logra principalmente mediante la
regulacin de la sntesis y la actividad de T 1 complejos de CDK. Extracelulares de factores de
crecimiento , llamados mitgenos , inducen la sntesis G 1 complejos Cdk. La actividad de estos y
otros complejos de Cdk est regulada por la fosforilacin en sitios de inhibidores y activadores
especficos de la subunidad cataltica. Una vez mitgenos han actuado durante un perodo
suficiente, el ciclo celular contina a travs de la mitosis , incluso cuando se retiran. El punto a
finales de T 1 , donde el paso a travs del ciclo celular se vuelve independiente de mitgenos se
llama el punto de restriccin
Sistemas experimentales Diversas han sido utilizados para identificar y aislar al ciclo
celular Protenas de control del
La primera evidencia de que factores difusibles regulan el ciclo celular provino de experimentos de
fusin celular con clulas de mamfero cultivadas. Cuando la interfase clulas en el G 1 , S, o G 2
etapa del ciclo celular se fusionaron a clulas en la mitosis , sus envolturas nucleares vesiculadas y
sus cromosomas condensados ( Figura 13-3 ). Este hallazgo indica que algn componente difusible
o componentes en el citoplasma de las clulas mitticas forzados interfase ncleos se someten a
muchos de los procesos asociados con la mitosis temprana. Ahora sabemos que estos factores son
los complejos CDK mitticos. De manera similar, cuando las clulas T 1 se fusionaron a clulas en
la fase S y las clulas fusionadas expuestos a radiomarcado timidina, la etiqueta se incorpor en el
ADN del G 1 ncleo , lo que indica que la sntesis de ADN se inici en el G 1 ncleo poco despus
de la fusin . Sin embargo, cuando las clulas en T 2 se fusionaron a clulas en fase S, no hay
incorporacin de timidina marcada se produjo en el G 2 ncleos. Por lo tanto factores difusibles en
una clula de la fase S pueden entrar en el ncleo de una G 1 celular y estimular la sntesis de ADN,
pero estos factores no pueden inducir la sntesis de ADN en un G 2 ncleo. Ahora sabemos que
estos factores son complejos Cdk en fase S, que pueden activar los complejos pre-replicacin
montados sobre los orgenes de replicacin del ADN en las primeras G 1 ncleos. Aunque estos
experimentos de fusin celular demostraron que se necesita entrada de control de factores
difusibles en las fases S y M del ciclo celular, gentica y experimentos bioqumicos para identificar
estos factores.
Los incipiente levadura Saccharomyces cerevisiae y la levadura de fisin alejadas
Schizosaccharomyces pombe han sido especialmente tiles para el aislamiento de mutantes que
estn bloqueados en los pasos especficos en el ciclo celular , o que presentan alteracin en la
regulacin del ciclo. En ambas de estas levaduras, mutantes sensibles a la temperatura con
defectos en las protenas especficas que se requieren para avanzar en el ciclo celular se
reconocen fcilmente al microscopio y por lo tanto fcilmente aislados. S. cerevisiae clulas hijas
forman a partir de un brote en crecimiento, cuyo tamao relativo a los parentales clula aumenta
durante el ciclo celular. Mutant S. cerevisiae clulas con un defecto del ciclo celular se identifican
fcilmente porque a la temperatura no permisiva son detenidos en el proceso en ciernes (ver
Figura 8-9 ). Estas clulas se llaman cdc ( c ell- d ivision c ycle) mutantes. S. pombe clulas, en
contraste, aumento de la longitud y luego se dividen en el medio para formar clulas hijas. En esta
levadura, cdc mutantes crecen sin dividir y formar clulas enormemente alargados a la
temperatura no permisiva. Otros S. pombe mutantes, llamadas wee (de la palabra escocesa para
los pequeos), antes de la divisin celular de sus padres ha crecido a la longitud normal, formacin
de clulas que son ms cortos de lo normal.
Mutaciones sensibles a la temperatura que bloquean la progresin a travs de la ciclo celular a la
temperatura no permisiva, obviamente, impiden la formacin de colonias a partir de una sola
haploide clula de levadura. Los alelos de tipo salvaje de recesivos alelos mutantes sensibles a la
temperatura se pueden aislar fcilmente mediante la transformacin de las clulas mutantes
haploides con un plsmido biblioteca preparada a partir de clulas de tipo salvaje y luego en
placas las clulas transformadas a la temperatura no permisiva ( Figura 13-4 ). Complementacin
de la recesivo mutacin por la de tipo salvaje alelo en uno de los plsmidos en la biblioteca
permite que una clula mutante transformado a crecer en una colonia; el plsmido que lleva el
alelo de tipo salvaje puede entonces ser recuperado de las clulas. Debido a que muchas de las
protenas que regulan el ciclo celular son altamente conservados, los ADNc humanos clonados en
levaduras de expresin de vectores a menudo pueden complementar mutantes del ciclo celular de
levadura, que conduce a la rpida aislamiento de los genes humanos que codifican las protenas
de control del ciclo celular.
Los estudios bioqumicos requieren la preparacin de extractos celulares de muchas clulas. Para
los estudios bioqumicos del ciclo celular , los huevos y los primeros embriones de anfibios e
invertebrados marinos son particularmente adecuados. En estos organismos, mltiples ciclos
celulares sncronos siguen la fertilizacin de un huevo grande. Mediante el aislamiento de un gran
nmero de huevos de hembras y fertilizar de forma simultnea mediante la adicin de
espermatozoides (o el tratamiento de ellos en formas que imitan la fertilizacin), los
investigadores pueden obtener extractos para el anlisis de protenas y de actividades enzimticas
que se producen en puntos especficos en el ciclo celular.
En las siguientes secciones se describen los experimentos cruciales que llevaron al modelo actual
de la regulacin del ciclo celular eucariota se resume en la figura 13-2 y presentar ms detalles
sobre los diversos eventos de regulacin. Como veremos, los resultados obtenidos con los
diferentes sistemas y enfoques experimentales han proporcionado informacin acerca de cada
uno de los puntos de transicin claves en el ciclo celular