BIOQUMICA ENFERMERA

Profesores: Sergio Zepeda, Jaime Molina, Fabiola Jamett

UNIVERSIDAD DE LA SERENA
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

GUA DE CINTICA ENZIMTICA

ITEM DE DESARROLLO.
1. Qu se entiende por velocidad mxima (V) de una reaccin enzimtica?
2. Qu se entiende por velocidad inicial (v) de una reaccin enzimtica?
3. Calcule el valor de Km cuando v = 1/2 de V. Deduzca una definicin de Km basado en este resultado.
4. Calcule la velocidad (v) de una reaccin enzimtica como porcentaje de la velocidad mxima (V) de la reaccin cuando:
a) S es igual a km

b) S es 1/10 de km

c) S es 10 veces el valor de km

d) S es 100 veces el valor de km

5. Con qu concentracin de S puede alcanzarse la V de una reaccin enzimtica?

6. Cuando en una reaccin enzimtica la concentracin de sustrato (S) es mucho mayor que el valor de la Km este puede
ser despreciable. Pero si la concentracin del sustrato es muy pequea en relacin al Km, puede despreciarse en el
denominador de la ecuacin de Michaelis?
7. Al poner en una grfica la ecuacin de Michaelis v = (SxV)/(Km + S) se obtiene una hiprbole rectangular. Convierta
esta ecuacin de modo que pueda expresarse como una funcin lineal del tipo y = mx + b. Seale en ella las relaciones
que definiran a la Km y la V.
8. Qu relacin existe entre la concentracin de la enzima y la velocidad mxima (V) de la reaccin? Influye la
concentracin de la enzima sobre el valor del Km? Haga una grfica aproximada de la velocidad en funcin del sustrato
(S) de dos preparaciones de una misma enzima de las cuales una tiene el doble de concentracin de la otra. Indique
claramente en los valores arbitrarios la Km y la V en ambos casos
9. Qu importancia tiene la determinacin del Km en una enzima?
10. Puede una enzima tener diferentes Km para distintos sustratos?
11. En qu unidades deben expresarse las variables que se han medido para la determinacin de la Km de una enzima?
12. Cmo debe tabular sus resultados para calcular la Km de una enzima por el mtodo de Lineaweaver-Burk
(recprocos)?
13. Qu valores debera conocer para poder calcular matemticamente la Km usando directamente la ecuacin de
Michaelis?

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ITEM DE EJERCICIOS
1.
1/v

Si la Km es 5,0 x 10-5 , determine el valor de la pendiente :

0,06 0,04 0,03 0,02 0,01 -

a) 1,50 x 10-2
b) 5,00 x 10-5
c) 2,00 x 10-2
d) 1,00 x 10-6
e) 2,50 x 10-3

1/s
2. En una enzima la constante de afinidad vale 4,5 *10 -5 M y la velocidad inicial en un punto es 10 mmol/L min cuando
la concentracin del sustrato es de 2,8*10-4 M
a) Calcule la velocidad mxima
b) Calcule la concentracin de sustrato cuando la velocidad inicial esta en una relacin de 1/5 con la velocidad
mxima de reaccin
c) Si, se aumenta la concentracin inicial de sustrato en un 20% (2,8 *10-4), calcule la velocidad de la reaccin,
conservando los parmetros de afinidad y actividad?
3. La Km de una enzima es de 3,5 x 10 5 M, se hace reaccionar el sistema enzimtico con una concentracin de sustrato
de 3,5 x10 5 M obtenindose una velocidad inicial de 20.0 micromoles/litro minuto.
a) Calcule el valor de la Vmx si se utiliza el doble de la concentracin de enzima.
b) Con qu concentracin de sustrato se obtiene la Vmx calculada en la pregunta anterior
4. En los siguientes grficos se muestra la cintica de una de la actividad de una enzima A en y luego la enzima
inhibida por la accin de una molcula B (fig.n1). En el figura 2 se muestran ambas curvas lineal izadas, por el
mtodo de los inversos o de Lineckweber-Burk.

Fig.N1
11111N
1 de la enzima "A" y la cinetica de "A"
cinetica

Fig.N2
0.3

enzima con un inhibidor "B"

1/velocidad(mmol/Lmin)

S.I.

16
Velocidad(mmol/Lmin)

y = 0.3395x + 0.0799

0.25

18

14
12
C:I.

10
8
6
4

R2 = 0.9962

0.2
C.I.
S.I.

0.15

0.1

y = 0.2653x + 0.0331
R2 = 0.9931

0.05

2
0

0
0

10

sustrato(mmol/L)

15

0.1

0.2

0.3

0.4

1/sustrato(mmol/L)

0.5

0.6

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DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

Al observar la grafica determine que tipo de inhibidor es la molcula B para la enzima A

Determine los parmetros inherentes (Km y Vmax) en la figura 1 para la enzima A y determine Km y Vmax
segn la curva linealizada y compare.
Determine Ki para el inhibidor B si tiene una concentracin de 0.01mmol/L.

5. En la tabla se presenta la hidrlisis de lactosa por la actividad de la -galoctosidasa. Grafique los siguientes datos para
las funciones v = f(s), 1/v =f (1/s) y s/v=f(s) y determine de las graficas los valores de Vmax y Km segn la tabla y
compare los valores obtenidos.
sustrato lactosa(M)

velocidad(umol/min*min)

0,01
0,02
0,05
0,1
0,15
0,2
0,3

1/s

1/v

v/s

0,28
100 3,57143
28
0,54
50 1,85185
27
1,2
20 0,83333
24
2,4
10 0,41667
24
3 6,66667 0,33333
20
3,1
5 0,32258
15,5
3,1 3,33333 0,32258 10,333

0,28
0,54
1,2
2,4
3
3,1
3,1

s/v

0,01
0,02
0,05
0,1
0,15
0,2
0,3

0,036
0,037
0,042
0,042
0,05
0,065
0,097

ITEM DE SELECCIN MULTIPLE.

1. Cul de las siguientes grficas representa la velocidad de reaccin frente a la concentracin de sustrato para una
enzima, en ausencia y presencia de un inhibidor competitivo?

a. 1
b.
c.
d.
e.

2
3
4
Ninguno de los anteriores

2. Cual de los siguientes enunciados acerca de la velocidad de reaccin NO es verdadero?

a.
b.
c.
d.
e.

La velocidad de reaccin es la velocidad a la que la reaccin procede hacia el equilibrio.

La velocidad de reaccin esta gobernada por la barrera de energa entre los reactivos y los productos.
Las enzimas pueden acelerar la velocidad de reaccin.
Las velocidades de reaccin no son sensibles a la temperatura.
Ninguno de estos.

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3. Las enzimas:
a.
b.
c.
d.
e.

Estn compuestas esencialmente de polipptidos, que son polmeros de aminocidos.

Pueden unir grupos prostticos tales como iones metlicos que participan en las reacciones enzimticas.
Tienen estructuras definidas.
Unen sus sutratos en el centro activo.
Todos los enunciados son ciertos.

4. Esta grfica representa la variacin de la velocidad de reaccin frente a la concentracin del sustrato; la razn por la
que la curva alcanza una meseta y la velocidad no sigue aumentando para mayores concentraciones de sustrato es
porque:
a.
b.
c.
d.

El centro activo del enzima est saturado de sustrato.

Hay un inhibidor competitivo presente
Hay un inhibidor no competitivo presente
La enzima alostrica est bloqueada en una conformacin
inactiva
e. Todo el sustrato ha sido convertido en producto

5. Las reacciones que requieren energa pueden ocurrir en los sistemas biolgicos porque las enzimas que las catalizan
consiguen el acoplamiento de la reaccin con otras reacciones que conllevan:
a.
b.
c.
d.
e.

Un incremento en la entropa
Una baja energa de activacin
No inhibidores
Productos de menor energa libre que los reactivos
Oxidacin-reduccin

6. Cul de las siguientes grficas muestra los resultados de la velocidad de una reaccin frente a la concentracin de
sustrato para una enzima no-alostrica, en ausencia y en presencia de un inhibidor no competitivo (los inhibidores no
competitivos se unen a la enzima en un lugar diferente del centro activo)?
a.
b.
c.
d.
e.

1
2
3
4
Ninguna de las anteriores

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Solucin

Desarrollo
1. Qu se entiende por velocidad mxima (V) de una reaccin enzimtica?.
Es la actividad mxima que alcanza una concentracin enzimtica y una enzima en particular
2. Qu se entiende por velocidad inicial (v) de una reaccin enzimtica?.
Se entiende como la formacin de producto en un tiempo o el consumo de sustrato en un intervalo de tiempo, pero la
saturacin enzimtica es parcial.
3. Calcule el valor de Km cuando v = 1/2 de Vmax. Deduzca una definicin de Km basado en este resultado.
El valor de Km es un valor igual al sustrato.
4. Calcule la velocidad (v) de una reaccin enzimtica como porcentaje de la velocidad mxima (V) de la reaccin cuando:
se resuelven reemplazando s o km segn lo indique la proporcin despejando los valores de una forma algebraica
sencilla
v/Vmax= S/ S +S
= S/ 2S >> * 100 >>>> 50%
a) S es igual a km= 50%
c) S es 10 veces el valor de km= 90%

b) S es 1/10 de km = 9%
d) S es 100 veces el valor de km=99%

5. Con qu concentracin de S puede alcanzarse la Vmax de una reaccin enzimtica?

Aproximadamente 100 veces el valor de km en concentracin de sustrato
6. Cuando en una reaccin enzimtica la concentracin de sustrato (S) es mucho mayor que el valor de la Km este puede
ser despreciable. Pero si la concentracin del sustrato es muy pequea en relacin a la Km, puede despreciarse en el
denominador de la ecuacin de Michaelis?
A S muy grande en relacin a Km, este se hace despreciable y el valor de velocidad es cercano a Vmax y si el valor de
S es muy, muy pequeo frente Km el valor de la velocidad se acerca a 0
7. Al poner en una grfica la ecuacin de Michaelis v = (SxV)/(Km + S) se obtiene una hiprbole rectangular. Convierta
esta ecuacin de modo que pueda expresarse como una funcin lineal del tipo y = mx + b. Seale en ella las relaciones
que definiran a la Km y la V.
1/v = Km/Vmax*1/s + 1/vamx , v = Vamx Kma v/s , s/v = 1/vmax* s + Km/Vmax
8. Qu relacin existe entre la concentracin de la enzima y la velocidad mxima (V) de la reaccin? Influye la
concentracin de la enzima sobre el valor de la Km? Haga una grfica aproximada de la velocidad en funcin del

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sustrato (S) de dos preparaciones de una misma enzima de las cuales una tiene el doble de concentracin de la otra.
Indique claramente en los valores arbitrarios la Km y la V en ambos casos
La velocidad mxima es dependiente de la concentracin de enzima y si se aumenta la concentracin de enzima es el
doble la curva ser el doble, pero Km es constante para ambos casos
9. Qu importancia tiene la determinacin de la Km en una enzima?
Se pueden determinar en que condiciones de saturacin se encuentra
10. Puede una enzima tener diferentes Km para distintos sustratos?
Si, porque va depender del sustrato la afinidad de la enzima frente a sustrato
11. En qu unidades deben expresarse las variables que se han medido para la determinacin de la Km de una enzima?
Las unidades de concentracin es decir las mismas del sustrato
12. Cmo debe tabular sus resultados para calcular la Km de una enzima por el mtodo de Lineaweaver-Burk(
recprocos)?
1/s y 1/v
13. Qu valores debera conocer para poder calcular matemticamente el Km usando directamente la ecuacin de
Michaelis?
Los valores de v, Vmax y S
Ejercicios de enzimas
1.-

1/v

Si la Km es 5,0 x 10-5 , determine el valor de la pendiente :

0,06 0,04 0,03 0,02 0,01 1/s

Vmax= 1/ ,02 = 50 ; 5*10e-5/50>>>>> 1e-6

a) 1,50 x 10-2
b) 5,00 x 10-5
c) 2,00 x 10-2
d) 1,00 x 10-6
e) 2,50 x 10-3

2.-En una enzima la constante de afinidad vale 4,5 *10 -5 M y la velocidad inicial en un punto es 10 mmol/L min
cuando la concentracin del sustrato es de 2,8*10-4 M
d) Calcule la velocidad mxima
10*(4,5*10e-5+2,8e-4)/ 2,8e-4 = Vmax == 11,6
e) Calcule la concentracin de sustrato cuando la velocidad inicial esta en una relacin de 1/5 con la velocidad
mxima de reaccin
Vmax* 1/5 = Vmax S/ Km +S > Km +S= 5S > Km = 4S ; S= Km/4

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f)

Si, se aumenta la concentracin inicial de sustrato en un 20% (2,8 *10-4), calcule la velocidad de la reaccin,
conservando los parmetros de afinidad y actividad?

2,8e-4* 1,2 = S2 > 3,36e-4 ; v = 11,6* 3,36e-4/( 4,5e-5 *

3,36*10e-4)==== 10 ,22 mmol/Lmin

3.-La Km de una enzima es de 3,5 x 10 5 M, se hace reaccionar el sistema enzimtico con una concentracin de
sustrato de 3,5 x10 5 M obtenindose una velocidad inicial de 20.0 micromoles/litro minuto.
c) Calcule el valor de la Vmx si se utiliza el doble de la concentracin de enzima.
80 umol/Lmin , Km es igual a S y la enzima se duplica
d) Con qu concentracin de sustrato se obtiene la Vmx calculada en la pregunta anterior
Misma concentracin de sustrato
4.-En los siguientes grficos se muestra la cintica de una de la actividad de una enzima A en

y luego la

enzima inhibida por la accin de una molcula B (fig.n1). En el figura 2 se muestran ambas curvas linealizadas,
por el mtodo de los inversos o de Lineckweber-Burk.

Fig.N1
11111N
1 de la enzima "A" y la cinetica de "A"
cinetica

fig.N2
0.3

enzima con un inhibidor "B"

1/velocidad(mmol/Lmin)

S.I.

16
Velocidad(mmol/Lmin)

y = 0.3395x + 0.0799

0.25

18

14
12
C:I.

10
8
6
4

R2 = 0.9962

0.2
C.I.
S.I.

0.15

0.1

y = 0.2653x + 0.0331
R2 = 0.9931

0.05

2
0

0
0

10

sustrato(mmol/L)

15

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

1/sustrato(mmol/L)

Al observar la grafica determine que tipo de inhibidor es la molcula B para la enzima A

No competitivo

Determine los parmetros inherentes ( Km y Vmax) en la figura 1 para la enzima A y determine Km y Vax segn
la curva linealizada y compare.
Figura 1 el valor de Vmax = 16 yKm= 2,5 aprox. Figura 2 Vmax = 1/0,0331 = 30,2 y Km = 30,2*0,2653 = 8,01

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Determine Ki para el inhibidor B si tiene una concentracin de 0.01mmol/L.

1/0,0799 = Vmax afectada = 12,5= 30,2/ ( 1 + i/ki)= 30,2/12,5= Ki+i/Ki= >>> 2,416*Ki Ki = 0,01;;;;; Ki = 0,01/ 1,416, Ki
=== 7,06 *10e-3
5.-En la tabla se presenta la hidrlisis de lactosa por la actividad de la b-galoctosidasa. Grafique los siguientes
datos para las funciones v = f(s), 1/v =f (1/s) y s/v=f(s) y determine de las graficas los valores de Vmax y Km segn
la tabla y compare los valores obtenidos.

sustrato lactosa(M)

velocidad(umol/min*min)

0,01
0,02
0,05
0,1
0,15
0,2
0,3

1/s

1/v

v/s

0,28
100 3,57143
28
0,54
50 1,85185
27
1,2
20 0,83333
24
2,4
10 0,41667
24
3 6,66667 0,33333
20
3,1
5 0,32258
15,5
3,1 3,33333 0,32258 10,333

0,28
0,54
1,2
2,4
3
3,1
3,1

s/v

0,01
0,02
0,05
0,1
0,15
0,2
0,3

0,036
0,037
0,042
0,042
0,05
0,065
0,097

Seleccin mltiple.
1.-Cul de las siguientes grficas representa la velocidad de reaccin frente a la concentracin de sustrato para una enzima,
en ausencia y presencia de un inhibidor competitivo?

a. 1
b. 2
c. 3
d. 4
e. Ninguno de los anteriores

2.-Cual de los siguientes enunciados acerca

de la velocidad de reaccin NO es cierto?
a.
b.
c.
d.

La velocidad de reaccin es la velocidad a la que la reaccin procede hacia el equilibrio.

La velocidad de reaccin esta gobernada por la barrera de energa entre los reactivos y los productos.
Las enzimas pueden acelerar la velocidad de reaccin.
Las velocidades de reaccin no son sensibles a la temperatura.

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e. Ninguno de estos.
3.-Las enzimas:
a)
b)
c)
d)
e)

Estn compuestas esencialmente de polipptidos, que son polmeros de aminocidos.

Pueden unir grupos prostticos tales como iones metlicos que participan en las reacciones enzimticas.
Tienen estructuras definidas.
Unen sus sustratos en el centro activo.
Todos los enunciados son ciertos.

4.-Esta grfica representa la variacin de la velocidad de reaccin frente a la concentracin del sustrato; la razn por la que
la curva alcanza una meseta y la velocidad no sigue aumentando para mayores concentraciones de sustrato es porque:
a)
b)
c)
d)

El centro activo del enzima est saturado de sustrato.

Hay un inhibidor competitivo presente
Hay un inhibidor no competitivo presente
La enzima alostrica est bloqueada en una conformacin
inactiva
e) Todo el sustrato ha sido convertido en producto

5.-Las reacciones que requieren energa pueden ocurrir en los sistemas biolgicos porque las enzimas que las catalizan
consiguen el acoplamiento de la reaccin con otras reacciones que conllevan:
a)
b)
c)
d)
e)

Un incremento en la entropa
Una baja energa de activacin
No inhibidores
Productos de menor energa libre que los reactivos
Oxidacin-reduccin

6.-Cul de las siguientes grficas muestra los resultados de la velocidad de una reaccin frente a la concentracin de
sustrato para una enzima no-alostrica, en ausencia y en presencia de un inhibidor no competitivo (los inhibidores no
competitivos se unen a la enzima en un lugar diferente del centro activo)?
a)
b)
c)
d)
e)

1
2
3
4
Ninguna de las anteriores