SEPARACION DE TINTES POR CROMATOGRAFIA CC

Y CROMATOGRAFIA CC TLC
Diana Castillo* (1310217), Julieth Sotelo* (1310283)
dianacastilloalmeida@gmail.com , juliet.sotelo@correounivalle.edu.co

Departamento de Qumica*, Facultad de Ciencias, Universidad del Valle

Fecha de Realizacin: 18 de septiembre de 2014.
Fecha de Entrega: 25 de septiembre de 2014.

Resumen
La prctica consisti en la separacin de tintes (azul de metileno y fluorescena) contenidos en una
mezcla. El primer mtodo usado fue cromatografa de columna en la cual se dispuso de aluminia
como fase estacionaria y etanol y agua como agentes mviles, en este proceso se obtuvo 23 mL
de Azul de metileno y 18,6 mL de Fluorescena. En el segundo mtodo TLC, se usaron como
solventes una mezcla de etanol-agua de en proporciones1-10 y 10-1, en la placa la sustancia
estacionaria tambin fue almina y se obtuvo los valores de Rf para la proporcin 1-10
equivalentes a cero, en el caso de la proporcin 10-1 los Rf obtenidos fueron 0,739 para la
Fluorescena y 0, 08 para el azul de metileno.
Palabras clave: Eluyente, adsorbente.

1. Objetivos

2. Introduccin

General

La cromatografa en columna CC es una tcnica

en la que la fase mvil es lquida y pasa a travs de
la fase estacionaria, solida, la cual esta retenida en
un recinto cilndrico [1]. Es una tcnica de
separacin verstil que presenta distintas variantes.
En toda separacin cromatografa hay dos fases
(slida, lquida o gas) una mvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la
otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra
se introduce en la fase mvil y los componentes de
la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria
y la mvil. Los componentes de la mezcla a
separar invierten un tiempo diferente en recorrer
cada una de las fases, con lo que se produce la
separacin. Si un componente est la mayor parte

Comprender la aplicacin de los mtodos de

separacin por cromatografa

Especficos
Adquirir la destreza en la preparacin de
los montajes de los dos mtodos de
separacin.

Interpretar adecuadamente los resultados

obtenidos en la practica

del tiempo en la fase mvil el producto se mueve

rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor
parte en la fase estacionaria, el producto queda
retenido y su salida es mucho ms lenta [2]

de cada uno de los componentes de la mezcla.

Como volumen inicial se determin los 30 mL de
etanol. En el segundo tubo de ensayo se recogi
un volumen de 23 mL de azul de metileno, en el
tercer tubo 18.6 mL de Fluorescena y en el cuarto
tubo 22,8 mL de agua. Los componentes de los
tubos de ensayo dos y tres fueron guardados para
el siguiente paso de la prctica.

La cromatografa en capa fina (en ingls thin layer

chromatography o TLC) es una tcnica analtica
rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio
de Qumica Orgnica la cual permite determinar el
grado de pureza de un compuesto, Si dos muestras
corren igual en placa podran ser idnticas. o si,
por el contrario, corren distinto entonces no son la
misma sustancia. Tambin permite realizar el
seguimiento de una reaccin. La relacin entre las
distancias recorridas por el soluto y por el eluyente
desde el origen de la placa se conoce como Rf y
tiene un valor constante para cada compuesto en
unas condiciones cromatografas determinadas [3]

Cromatografa de capa delgada:

Se tomaron dos placas de almina y fueron
determinados los puntos de referencia de partida y
finalizacin de los recorridos del solvente. Para la
primera placa se tomaron con un capilar los
compuestos recolectados de los tubos dos y tres, se
deposit una pequea gota de cada uno en la
placa, esta fue introducida en un vaso de
precipitados que contena una mezcla de
disolventes etanol-agua 1-10 respectivamente. Se
observ el recorrido y se determin los Rf de los
dos componentes. Para la segunda placa el
procedimiento fue igual con la diferencia de que
fue sumergida en una mezcla etanol-agua 10-1
respectivamente. Se observ el recorrido y se
determin los Rf de los dos componentes.

Figura 1.Representacin de distancias recorridas

por
el
soluto
y
el
eluyente[4]

4. Datos y Clculos
3. Metodologa experimental
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Cromatografa de Columna.

Tabla 1. Volumen recogido.

Para llevar a cabo este mtodo se tom una

columna de cromatografa, en la cual se introdujo
un algodn del orificio de salida, se deposit 4 g
de almina y 30 mL de etanol y se procedi a
compactar la columna con la llave abierta.
Posteriormente se aadi la 3 gotas de la mezcla de
tintes y se inici la recoleccin de los volmenes

NUMERO

CANTIDAD
(mL)

tubo 1

30 mL

tubo 2

23 mL

tubo 3

22,8 mL

tubo 4

8,6 mL

CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA

Mezcla de agua etanol 10:1
Azul de metileno

5. Resultados y discusin

Fluorescena

La cromatografa permite separar los compuestos

de la mezcla por la diferencia de retencin en una
fase fijadora y de elucin por el fluido que la
atraviesa. La deferencia de la retencin a la
afinidad de la adsorcin, de la solubilidad del
medio fijo o de la fijacin de los enlaces inicos, la
deferencia de la elucin se deben principalmente a
la mayor o menor solubilidad en el disolvente que
circula. [5]
Los adsorbentes ms usados son el gel slice
(silicagel) y el xido de aluminio activo (almina).
El tamao de la partcula vara entre 50 y 120 m,
por lo que la superficie de adsorcin es muy
grande. Los compuestos orgnicos se fijan con ms
fuerza cuanto mayor es su polaridad.
El poder de retencin del adsorbente se ve
modificado al aadir pequeas proporciones de
agua y se mide por la rapidez de elucin de un
colorante.

Mezcla de agua etanol 1:10

Los solventes ms empleados en la elucin son de

menor a mayor polaridad siendo el etanol uno
bastante polar

Azul de metileno

Los compuestos menos polares se desplazan con

disolventes poco polares y avanzan rpidamente a
travs de la columna, siendo recuperados en las
primeras fracciones recogidas. Los compuestos
ms polares (mayor retencin avanzan ms
lentamente, necesitan eluyentes mas polares y se
recogen en las ultimas fracciones. [5]

Fluorescena

La almina es el ms activa frente a la silica, ya

que es el que retiene con ms fuerza a los
compuestos, por ello se utiliza para separar
compuestos relativamente apolares (hidrocarburos,
haluros de alquilo, teres, aldehdos y cetonas). Por
el contrario la silica, se utiliza en sustancias ms
polares (alcoholes, aminas, cidos carboxlicos).
[3]
El proceso de adsorcin se debe a interacciones
intermoleculares de tipo
dipolo-dipolo o enlaces de hidrgeno entre el
soluto y el adsorbente. El adsorbente debe ser
inerte con las sustancias a analizar y no actuar
como
catalizador
en
reacciones
de
descomposicin. [3]

Una vez sembrada la muestra se desarrolla la

cromatografa. Se utiliza un adsorbente con
indicardor fluorescente para ver en la lpmpara
ultravioleta donde han quedado las manchas de los
diferentes compuestos, dichas manchas se marcan.
Una vez localizados los compuestos, stos se
extraen de la fase estacionaria, uno a uno, con la
ayuda de una esptula, sobre un papel de filtro u
otro soporte. Posteriormente se coloca cada
componente en un erlenmeyer, y se mezcla con un
disolvente (metanol). Una vez disuelto el
compuesto se filtra varias veces para separar el
compuesto y la fase estacionaria. Una vez separado
se elimina el disolvente (destilacin), con lo cual
se obtiene el componente separado.
Si no se dispone de indicador fluorescente, no se
pueden usar reveladores qumicos sobre toda la
placa. El proceso a seguir es el siguiente: se raya la
placa separando totalmente una pequea franja de
placa, sobre la cual se aplica el revelador qumico,
y a partir de esta franja se marcan las franjas de
compuestos.

6. Preguntas del informe

a. Qu es la cromatografa preparativa?
Comprende un amplio campo de aplicaciones,
desde el aislamiento de 1 g. de muestra para
identificacin espectroscpica hasta el aislamiento
de un compuesto puro de una mezcla de 100 g. La
cromatografa preparativa se diferencia de la
tcnica bsica en muchos aspectos, desde la
preparacin de la papilla. sta debe hacerse con
menos agua que de ordinario. Una papilla ms
espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas
que se precisa para una carga de mayor magnitud.
El espesor ptimo oscila desde un mnimo de 1
mm. hasta un mximo de 2 mm.

[9]http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatogr
afia/bidimensional. 24 de septiembre 2014. 3:45 pm.

b. En CC se emplea un instrumento conocido

como rotaevaporador, que permite extraer
el disolvente empleado tras la elucin del
compuesto de inters. Explique en que
consiste su funcionamiento e ilustre
mediante grficos.

Las placas utilizadas en cromatografa preparativa

son placas grandes, de aproximadamente 20x20
cm. que permiten separar aproximadamente 1 g. de
mezcla utilizando unos 35 g. de adsorbente.

El rotavapor es un aparato que sirve para quitar el

solvente de una mezcla o de un compuesto.
Es una variante de una destilacin a presin
reducida. Consiste en sujetar un matraz en una
boca. Una vez esto hecho, el aparato disminuir la
presin ejerciendo un vaco sobre el contenido del
matraz. Como es de esperarse, el punto de
ebullicin de la mezcla disminuye mucho. A veces
el punto de fusin disminuye tanto que el
disolvente hierve a temperatura ambiente.
El disolvente extrado es enviado por un conducto
hacia un circuito donde se enfriar. Muchos

La siembra de la muestra se realiza mediante la

ayuda de una jeringuilla o tubo capilar. La siembra
se realiza a lo largo de una lnea recta (existen en
el mercado diverso utensilios para evitar torcerse).
Si al terminar la primera siembra todava queda
muestra, se seca la primera siembra y se aplica la
segunda, intentando que sta quede sobre la
anterior, para as conseguir que el frente sea lo ms
estrecho posible. La siembra debe realizarse a lo
ancho de la placa.
4

utilizan rotavapores antiguos donde ste conducto

es un tubo en espiral muy largo, y lo enfran con
agua helada. Hay rotavapores que envan el
solvente evaporado a una cmara donde entrar en
contacto con acetona y hielo seco; esta mezcla
enfra cerca de los -70 C. Aqu, evidentemente, el
solvente se condensar y pasar a un colector
donde se podr recuperar.
Finalmente las fases quedan separadas: en el
colector el disolvente y en el matraz los
compuestos slidos que hubieran estado disueltos.
[6]

Indique brevemente en que consiste cada uno de

estos agentes reveladores.
d. Las cromatografas mas empleadas en la
industria
y
en
investigacin
son
denominadas HPLC (High performance
liquid chromatography) y GC-MS (Gas
chromatography-mass
spectrometry).
Explique brevemente en que consiste cada
una de ellas.
HPLC
Tipo de
Cromatografa de
cromatogra
alta resolucin.
fa
Siglas (en
ingls)

GC-MS
Cromatografa de
gases

HPLC

GC - MS

Liquido

GC: La elucin se
produce por un
flujo de una fase
mvil que es un
gas inerte que no
interacciona con
las partculas de
analito.

Fase
estacionaria

Columna tipo
C18

Columnas
capilares de slice
fundida, columnas
empacadas con
tierras diatomeas
hechas de tubos de
vidrio o metal.

Tipo de
soporte

Adsorbente en
columna (tubo
alargado con

A la hora de
realizar su
acoplamiento el

Fase mvil

Figura 2. Equipo rotaevaporador y sus partes.

[6]http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/conte
nidos_mo.php?it=3081. 22 de septiembre 2014.
7:00 am.
c.

En TLC se emplean diversos mtodos para

el revelado de placas por exposicin, y los
ms comunes son los siguientes:

Vainillina
Yodo
Lmpara de UV (ultravioleta)
5

adsorbente en su
interior)

Muestras a
analizar

Frmacos,
metablicos,
productos
naturales

efluente que
emerge de la
columna
cromatografa sale
a presin
atmosfrica
y debe introducirse
en el interior de un
espectrmetro
de masas que
trabaja a alto
vaco.

fase estacionaria al igual que los disolventes a

la hora de realizar separacin de tintes
orgnicos pues se fundamentan en la polaridad
de los componentes a separar, y se
complementan la una con la otra para que para
obtener un anlisis mas completo y el proceso
se lleve a cabo satisfactoriamente.

8. Referencias
[1] M.ValcrcelCases, GmezHensA. Tcnicas
analticas de separacin Editorial Reverte- 1988
Barcelona. Pag. 437

Medioambientales,
alimentos y
aromas, qumica
Industrial,
biociencia,
derivados del
petrleo.

[2]Quioredcromatografa.
http://www.ugr.es/~quiored/lab/oper_bas/crom.ht
m. 23 de septiembre de 2014. 8:37 pm
[3] Cromatografa en placa fina
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/pr
acticas/actuales/guion-p6.pdf. 23 de septiembre de
2014. 8: 11 pm

[7]http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisisqumicos/cromatografa-de-gases. Septiembre 23 2014.

9:30 pm.
[8]M.C. Gutirrez, M. Droguet. Identificacin de
compuestos voltiles por cg-ms. Boletn intexter (u.p.c.)
2002. n 122. Pag 36 37.

[4]
Farmacognosia.
http://profefarmacognosia.blogspot.com/2009/05/c
romatografia-rf-relacion-de-frentes.html. 21 de
septiembre de 2014. 3:52 PM

7. Conclusiones

[5] Primo Yfera Eduardo. Qumica orgnica

bsica y aplicada: de la molcula a la industria,
Volumen 2. Editorial Reverte SA, 1995 Barcelona.
Pag 1223-1224

La cromatografa de columna es muy til para

purificar o separar los componentes de una
mezcla, ya que empleando disolventes
adecuados para cada sustancia o componente,
se pueden separar.

[6]http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/conte
nidos_mo.php?it=3081. 22 de septiembre 2014.
7:00 am.

La cromatografa de capa delgada tiene

muchas ventajas, ya que es rpida, sencilla y
utiliza poca cantidad de muestra.

[7]http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/anali
sis-qumicos/cromatografa-de-gases Septiembre 23
2014. 9:30 pm.

La cromatografa de columna es til cuando se

quieren separar mezclas en grandes cantidades,
mientras que la cromatografa de capa delgada
solo requiere cantidades mnimas de mezcla.

[8]M.C. Gutirrez, M. Droguet. Identificacin de

compuestos voltiles por cg-ms. Boletn intexter
(u.p.c.) 2002. n 122. Pag 36 37.

La cromatografa de columna y capa delgada

estn influenciadas por la selectividad de la
6

[9]http://www.textoscientificos.com/quimica/crom
atografia/bidimensional. 24 de septiembre 2014.
3:45 pm.