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ANALYSE CHIMIQUE

Contrôle des OGM :

les méthodes
de référence sont prêtes
▼
Depuis avril 2004, la réglementation européenne impose l’étiquetage des OGM présents dans les denrées alimentaires.
Pour réaliser ces contrôles, le Laboratoire Communautaire de Références assiste un réseau de laboratoires européens
(ENGL), appuyés par le centre commun de recherches de la Commission Européenne d’Ispra (Italie). Il a validé des méthodes
de références pour le contrôle de la présence d’organismes génétiquement modifiés (OGM) dans les aliments. Ces
méthodes sont mises à la disposition des industriels. En cas de litige, ce seront elles qui feront foi.

L
a transgenèse végétale modifie le
patrimoine génétique d’une plan-
te pour lui apporter des caracté-
ristiques intéressantes comme la
résistance aux parasites ou une meilleure
tenue aux pesticides. Cette technique intro-
duit dans le génome un ou plusieurs nou-
veaux gènes. La plante ainsi modifiée s’ap-
pelle un OGM (Organisme Génétiquement
Modifié). Le code génétique étant univer-
sel, l’information ainsi introduite sera utili-
sée par la plante réceptrice sans que l’on ne
connaisse l’incidence réelle de ces modifi-
cations sur l’environnement et sur la santé
humaine. Or, à ce jour, des espèces comme
le maïs et soja sont cultivées dans certains
pays sous forme OGM et peuvent entrer dans
la composition des ali-
L’essentiel ments. Pour laisser le
libre choix au consom-
 Les OGM sont désormais
acceptés dans les aliments mateur sans entraver
Les OGM sont considérés comme étant une avancée scientifique majeure. Mais ils suscitent beaucoup de craintes tant sur le plan éco-
 Ils sont soumis à une régle-
les règles du commer- logique que sur celui de la santé. On commence à les autoriser en Europe, tout en les surveillant. Il existe désormais des méthodes
mentation, tant au niveau ce international et la d’analyse normalisées…
de leur nature (certains libre circulation des
OGM sont interdits) que de biens, la commission publiés en ce sens à l’automne 2003. Ils sont il s’agit de détecter la présence d’organismes
leur quantité européenne contraint entrés en application en avril 2004. Ils impli- génétiquement modifiés. Si l’échantillon se
 Pour effectuer des les industriels de l’ali- quent un renforcement des contrôles. révèle négatif, il n’y a pas de problème et l’ali-
contrôles, des méthodes mentaire à étiqueter ment est déclaré sans OGM. Si l’échantillon
de référence ont été déve-
clairement les aliments Un renforcement des contrôles est repéré comme positif, il convient de quan-
loppées
 Deux sont plus particulière-
contenant plus de 1 % Aujourd’hui, le contrôle des aliments sus- tifier l’organisme. Deux cas se présentent
ment prisées : ELISA et PCR d’OGM. Deux nou- ceptible de contenir des OGM doit suivre une alors :
veaux textes ont été procédure clairement établie.Tout d’abord, - l’OGM n’appartient pas à la liste des OGM

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autorisés en Europe(1) et son seuil dépasse la De la détection à la quantification
tolérance de 0,5 % : le produit ne peut donc
pas être commercialisé.
- l’OGM présent est autorisé, il convient alors Produit alimentaire
de le quantifier dans chacun des ingrédients
pris individuellement.A cette étape, pour ne
pas avoir besoin d’étiquetage particulier, la
concentration d’OGM doit demeurer infé- Détection de l'OGM
rieure à 0,9 % pour chacun des ingrédients Méthodes de test
entrant dans la composition de l’aliment. Si Elisa (coût raisonnable)
c’est le cas, le produit est déclaré sans OGM. ou
Si un ingrédient contient plus de 0,9 % PCR (coût plus élevé)
d’OGM, l’étiquetage de l’ingrédient ou de
l’aliment est nécessaire.
Autant dire qu’avec de telles contraintes, les
industriels de l’alimentaire doivent mettre en Négatif
œuvre des méthodes d’analyses sensibles, (rien à prévoir de Résultat
fiables et reproductibles permettant de garan- paticulier pour mettre
tir à coup sûr ces limites. le produit sur le marché)
Pour unifier les procédures de contrôle dans
l’ensemble des états membres, simplifier les
Positif (OGM ≥ 0,5%)
procédures d’inspection sur les denrées ali-
mentaires, lever les litiges, il a fallu mettre en
place des procédures de référence(2). C’est le
travail mené par l’ENGL (European Network
Identification de l'OGM
of GMO Laboratories), un réseau d’environ Nouveau test d'identification
70 laboratoires européens rassemblés autour pour savoir si l'OGM est autorisé
de l’Unité de Biotechnologie et OGM du Méthode PCR et analyse
Centre commun de recherche (CCR) d’Ispra du fragment ADN
en Italie. Il a mis au point et validé les
méthodes d’échantillonnage, de préparation
et d’analyse et réalisé l’intercomparaison de
différentes procédures qui font aujourd’hui
référence. Ainsi une trentaine de méthodes
ont été validées pour l’extraction de l’ADN, la OGM non autorisé
détection, l’identification, la caractérisation produit illégal
ou la quantification d’un OGM ou d’une Résultat
famille d’OGM. Les protocoles retenus intè-
grent largement les techniques PCR (Poly-
merase Chain Reaction) et le test ELISA (Enzy- OGM autorisé
me Linked ImmunoSorbent Assay). Pour Guy
Van den Eede, directeur de l’Unité Biotech-
nologie et OGM du centre commun de Quantification de l'OGM
recherche d’Ispra, « on sait aujourd’hui trouver de
façon fiable les OGM dans les aliments,même lorsqu’ils sont Analyse individuelle de tous
présents en petite quantité ». les ingrédients
Méthode PCR préconisée
Détecter la présence d’OGM
puis mesurer
Avant de se lancer dans une analyse longue et
coûteuse, il s’agit tout d’abord de détecter
une éventuelle présence d’OGM. Pour ceci,
deux méthodes sont possibles : les tests ELI- Plus de 1%
Moins de 1% Résultat
SA et PCR. Etiquetage
Etiquetage non requis
La technique la plus rapide et la moins coû- du produit
teuse à ce stade est le test ELISA sur bande- nécessaire
lette. Les tests ELISA ont été reconnus com-
me fiables et permettent de pratiquer des
contrôles de réception sur le soja. La procé-

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La méthode PCR
La réaction de polymérisation en chaîne
(PCR, polymerase chain reaction) est un
moyen de connaître la présence et la
nature des séquences introduites dans le
génome d’une plante. Cette technique
de biologie moléculaire permet de repé-
rer un gène ou son messager même s’il
est présent en quantité infime. Son prin-
cipe repose sur la copie d’un fragment
de matière génétique ADN en plusieurs
millions d’exemplaires.
Une PCR classique se déroule dans un
petit tube placé dans une enceinte char-
gée de maintenir le tube aux tempéra-
tures voulues pendant une durée pro-
grammée. Chaque cycle comporte trois
phases et dure environ une minute.
Avant la réaction, on introduit dans le
tube tous les acteurs de la PCR, à
savoir : l’ADN à amplifier, les amorces
(oligo-nucléotides) spécifiques du seg-
ment ADN recherché, de l’ADN polymé-
rase (Taq polymerase) et enfin un
dure est simple et rapide. Il suffit de placer
des graines broyées, de la farine ou encore
quelques morceaux de l’aliment à contrô-
ler dans un récipient, d’y ajouter de l’eau
et d’agiter fortement. En plaçant la bande-
lette dans ce mélange, il est alors facile de
voir (cela prend quelques minutes) s’il y a
ou non présence d’OGM dans le produit.
Mais attention, ces tests ne sont pas
reconnus comme méthodes de référen-
Détecter une protéine avec le test ELISA
Le test Elisa est un test immunolo-
gique qui détecte et/ou dose une pro-
téine présente dans un liquide biolo-
gique. Dans la technique de dosage
dite “en sandwich”, les puits d’une
microplaque sont tapissés d’un anti-
corps de capture capable de lier spéci-
fiquement l’antigène recherché. Pen-
dant cette opération (appelée
“coating”), l’anticorps de capture se
fixe au plastique des puits par interac-
tion électrostatique. La solution à tes-
ter est déposée dans les puits de la
microplaque. Si l’antigène recherché
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mélange des quatre desoxyribonucleo-
tides constitutifs de l’ADN. La séquence
cible représente les segments d’ADN
recherché. Elle sera recopiée de nom-
breuses fois. Elle est déterminée par le
choix des amorces spécifiques à l’OGM
recherché. La réaction se déroule en
trois phases :
Phase 1. Entre 93 et 96 °C, les liaisons
qui assurent la cohésion de l’hélice
d’ADN sont rompues pour former deux
brins simples d’ADN.
Phase 2. Entre 55 et 65 °C (selon la lon-
gueur et la séquence des amorces
recherchées), a lieu le processus d’hy-
bridation. Les amorces hybrides à l’ADN
se fixent sur le brin d’ADN matrice. Elles
servent de point de départ à la polymé-
risation du brin d’ADN complémentaire
de l’ADN matrice.
Phase 3. La réaction de polymérisation
est réalisée à 72 °C. Elle se fait par ajout
successif des desoxyribonucleotides pré-
ce pour cause de résultats trop dispersés.
En cas de résultats positifs, une analyse com-
plémentaire est nécessaire pour identifier
puis doser l’OGM. A ce stade, la méthode
préconisée est une méthode PCR qui permet
de réaliser l’identification. Puis, une fois iden-
tifié, l’OGM est quantifié par PCR temps réel.
Le protocole d’analyse précis (notamment
les réactifs utilisés) est lié à l’autorisation de
mise sur le marché de la plante génétique-
est présent, il se lie spécifiquement à
l’anticorps de capture. Dans un
deuxième temps, un second anticorps
traceur, capable de se lier à l’antigène
capturé, est ajouté aux puits. Les anti-
corps traceurs non fixés sont éliminés
par rinçage. L’anticorps traceur est
ensuite couplé à une enzyme cataly-
sant la formation d’un produit coloré.
La réaction est alors quantifiée par
colorimétrie à partir d’une courbe
d’étalonnage réalisée avec des
concentrations connues de l’antigène
recherché.
sents en excès dans le tube. Chaque base
ajoutée est complémentaire à la base
correspondante du brin matrice. A la fin
du premier cycle, le nombre de brin
obtenu est le double des brins originaux.
De 40 à 45 cycles suffisent pour obtenir
une amplification suffisante pour une
concentration de départ d’une cinquan-
taine de brins. Une amplification plus
importante risque d’entraîner la présen-
ce de séquences non désirables.
Pour l’analyse qualitative, cette métho-
de d’amplification doit être associée à
une méthode d’analyse par électropho-
rèse sur gel. Quant à l’analyse quantita-
tive, elle met en œuvre la PCR temps
réel. La réaction PCR est couplée à
l’émission d’un signal fluorescent, pro-
portionnel au nombre de segments
ADN recherchés. En enregistrant l’émis-
sion fluorescente à chaque cycle, il est
possible de calculer la concentration
des brins recherchés.
ment modifiée. Ceci veut dire que pour
chaque demande d’autorisation déposée en
Europe, l’industriel devra déposer en même
temps que son dossier d’autorisation les
méthodes d’identification et de dosage de
l’OGM. La répétabilité, la précision et la
reproductibilité de celles-ci seront ensuite
vérifiées par l’ENGL. Sans méthode validée,
l’OGM ne pourra pas être commercialisé.
Compte tenu de la précision demandée, la
collecte des échantillons est une phase très
importante.
Une phase-clé, la constitution
de l’échantillon
La préparation de l’échantillon du produit à
contrôler est fonction de l’aliment.Ainsi pour
des aliments secs de type corn flakes, farine,
poudre de protéines… 30 g de matière
seront incubés pendant plus de 20 heures
dans 60 à 100 ml d’eau stérile selon le taux
d’humidité de l’ingrédient, puis homogé-
néisé à l’aide d’un mixer. Les pâtés, le tofu, les
yaourts, crème glacée, saucisse… sont pré-
levés à raison de 30 g et mixés sans eau. Il
en est de même pour les aliments liquides
(lait, boisson au soja, huile, bière…). Sur les
aliments composites de type gâteaux four-
rés, croquettes de poisson… il faut isoler la
portion susceptible de contenir des OGM.
De même dans les produits cuits (biscuits,
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Deux nouveaux textes applicables depuis avril 2004

Le règlement 1830/2003 concerne directement l’industrie ali-
mentaire. Il modifie les règles de traçabilité et d’étiquetage
des aliments contenant des OGM de la directive 2001/18/CE.
Il précise aussi l’approche à avoir au premier stade de la mise
sur le marché des produits alimentaires (y compris pour les
produits en vrac). Ainsi, le contrôle de la présence d’OGM
peut être réalisé sur la matière première, les ingrédients, les
arômes, et les denrées alimentaires.
Quant au texte référencé 1829/2003, il réglemente la mise
sur le marché communautaire d’OGM et entrant dans la com-
position des denrées alimentaires ou des aliments pour
l’homme et les animaux. Applicable le 18 avril 2004, il vise à
dresser une liste précise des OGM autorisés sur le territoire
européen. L’objectif est d’assurer la sécurité des consomma-
teurs en allant plus loin dans l’appréhension des risques
potentiels que la simple labellisation utilisée jusqu’à présent.
En conséquence, toutes les graines, matières premières, den-
rées, additifs, arômes contenant des OGM devront faire l’ob-
jet d’une évaluation scientifique de leur innocuité auprès de
l’Autorité européenne de sécurité des aliments. De plus, pour
être autorisé, l’OGM doit répondre à tout un ensemble de cri-
tères, dont la présentation d’une méthode de détection
fiable et précise. Cette méthode est ensuite contrôlée dans le
Laboratoire d’Ispra. « Nous en étudions la précision. Si elle don-
ne satisfaction, des échantillons sont ensuite analysés en
aveugle par plusieurs laboratoires du réseau en suivant le même
protocole. Il s’agit là de tester la reproductibilité de la méthode
et la dispersion des résultats, » explique Guy Van den Eede,
directeur du laboratoire ; « si les résultats entrent dans notre
cadre de tolérance, la méthode est validée comme méthode de
référence pour cet OGM. Sinon, nous refusons l’autorisation ».
Ainsi, dès son autorisation de mise sur le marché, chaque
OGM se voit remettre un identificateur unique et son proto-
cole d’analyse. Ces deux textes ont été publiés au Journal
Officiel de l’Union Européenne du 18 octobre 2003.

pain…), là où l’ADN peut être dégradée par
les conditions de process (cycle thermique en
présence d’eau), il est préférable de prélever
à l’intérieur même du produit.
Mais le problème le plus difficile à résoudre
a été celui du contrôle des très gros volumes
OGM : l’Europe a son réseau d’expertise
Le réseau européen de laboratoires de
référence pour les OGM a été mis en
place le 4 décembre 2002. Il s’est vu
confier trois missions :
- Améliorer la traçabilité des OGM
dans la chaîne alimentaire
- Elaborer et valider des méthodes de
détection et de quantification des OGM
dans les denrées alimentaires et les ali-
ments pour animaux.
- Contribuer au contrôle de l’utilisa-
tion des OGM en Europe.
Pendant quatorze mois, 70 labora-
toires (dont quatre français) ont testé
et validé les techniques analytiques et
les protocoles d’analyse des OGM
sous la direction de l’unité de Biotech-
nologie et OGM du centre commun
de recherche d’Ispra (Italie). Aujour-
d’hui, ces méthodes sont au point et
peuvent être transférées vers les labo-
hétérogènes, comme c’est le cas pour le char-
gement d’un navire. Comment dans ce cas
réaliser un échantillon représentatif de la car-
gaison hétérogène? « La méthode de prélèvement par
tube n’est pas adaptée pour l’échantillonnage de lots hété-
rogène de faible concentration », explique M.Van
vail de l’ENGL ne s’arrête pas là. Le
réseau participe aussi à la validation
des méthodes d’analyse, lors des
demandes d’autorisation de mise sur
le marché des OGM. Il sera chargé
aussi des expertises, notamment en
cas de litige.
En France, quatre laboratoires adhè-
rent à la démarche :
- L’équipe de méthodologie de la
détection des OGM de l’Unité de Phy-
topathologie et méthodologies de la
détection de Versailles (PMDV), Inra,
www.inra.fr
- Le laboratoire de Strasbourg, DGC-
CRF, www.minefi.gouv.fr/DGCCRF
- Le laboratoire National de la Protec-
tion des Végétaux d’Orléans.
- Le laboratoire BioGEVES, Groupe
d’Etudes et de Contrôle des Variétés
des Semences de Surgères (pour les
den Eede. Pour résoudre ce problème, un pro-
tocole d’échantillonnage a été élaboré pour
la réception des gros volumes de graines. Fruit
d’un programme de recherche européenne,
il a donné naissance à deux logiciels :
- KeSTE (Kernel Sampling Technique Eva-
luation) évalue les techniques d’échan-
tillonnage utilisées pour la détection de
contaminants sur des lots importants(3). Il
est actuellement utilisé lors du contrôle sous
douane des lots de graines de soja impor-
tées en Europe.
- CoDE (Contaminant Distribution Estimate) :
encore en développement, cet outil quantifie
l’erreur accordée aux différents protocoles
d’échantillonnage. Ce logiciel servira comme
outil de support à l’harmonisation des diffé-
rentes méthodes d’échantillonnage, tout en
associant une estimation des risques.
L’ENGL et le centre de recherche d’Ispra assu-
rent la diffusion de toutes ces techniques qui
sont mises à la disposition des industriels.
En plus des informations diffusées sur les
sites Internet, des formations spécifiques et
des validations de protocole d’analyse peu-
vent être réalisées par l’Unité Biotechnolo-
gie et OGM d’Ispra.
Marie-Odile Mizier
(1)Site d’information sur les OGM autorisés en Europe :
http://gmoinfo.jrc.it.
(2)Site d’information sur les méthodes de référence :

ratoires d’analyse et l’industrie. Le tra- graines), www.geves.fr http://gmotraining.jrc.it

(3)Site d’information sur les techniques d’échantillonnage :

http://biotech.jrc.it/sampling.htm

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