SIEMBRA POR MTODOS CASEROS ESTANDARIZADOS Y CONTEO DE

MORFOTIPOS DE HONGOS PRESENTES EN MUESTRAS DE SUELO DE MACETAS

CON Aspidistra sp.
Facultad de Ciencias Agrarias
Universidad Nacional de Colombia.

INTRODUCCIN

pronosticar una baja o alta fertilidad del

mismo; eso hace de las tcnicas bsicas
de microbiologa una herramienta
fundamental en las ciencias agrarias. El
proceso de aislamiento microbiolgico
esta descrito en diferentes manuales y
libros de microbiologia, todos ellos hacen
necesario el uso de materiales
especficos de laboratorio, como lo son
cajas de petri, micropipetas, tubos de
ensayo, etc...En este trabajo final del
curso de microbiologa contemplamos la
posibilidad de realizar una prctica como
ya mencionamos elemental en las
ciencias agrarias utilizando materiales y
mtodos caseros pero siempre
manteniendo las proporciones y los
procesos estandarizados. La muestra fue
tomada de una maceta con Aspidistra sp.
como planta sembrada, fue escogida por
su presencia frecuente como planta de
jardn o en este caso de balcn.

Los hongos son organismos de

organizacin Eucariota y de mayor
tamao que las bacterias; estos se
diferencian de otros eucariotas por ser
inmviles (aunque algunas clulas
presentan mecanismos de locomocin),
carecer de elementos fotosintticos y por
las variaciones en la composicin de su
estructura (como paredes celulares). Los
hongos presentan un tipo de nutricin
hetertrofa (quimioorganotrofos),
dependiendo de nutrientes orgnicos,
solubilizados por los sistemas
enzimticos de los hongos y absorbidos
a travs de la pared y membrana
celulares.(1). Existen hongos
unicelulares y pluricelulares, como
tambin pleomrfico (forman colonias uni
o pluricelulares segn el medio donde
crece); la levadura S.cerevisiae es el
ejemplo por excelencia de hongos
OBJETIVOS
unicelulares, son hongos de forma
esfrica, alargada u oval y con
Evaluar la eficacia de los mtodos
diferentes colores (blanco, rosado, beige
caseros para prcticas
u rojo), as como tambin existen hongos
microbiolgicas.
que generan otro tipo de estructuras
Estimar la cantidad de morfotipos
como lo son los hongos filamentosos
presentes en un volumen
(mohos) que forman talos estructuras
determinado de muestra de suelo
compuestas por hifas ramificadas que a
de maceta con Aspidistra sp.
su vez conforman el micelio que es
Comprender la importancia de la
macroscpicamente observable.
cantidad de morfotipos en
Identificar la cantidad y tipos de
jardines y maceta
microorganismos que conviven en el
suelo son indicadores necesarios para
MARCO LGICO

JERARQUA DE
OBJETIVOS

RESUMEN
NARRATIVO

INDICADOR
VERIFICABLE
OBJETIVAMENTE

FUENTES DE
VERIFICACIN

SUPUESTOS

Fin

Evaluacin de
microorganismos
en muestra de
suelo de maceta

Crecimiento
microbiano en el
PDA.

Persistencia y
capacidad infectiva
del hongo
fitopatogeno
Fusarium
oxysporum.Francisca
Suarez

Alta variedad de
microorganismos
encontrados en
una muestra

Propsito

Cuantificacin de
morfotipos por
mtodos de
aislamiento
caseros

Aparicin de
diferentes colonias o
cepas de
microorganismos
(hongos).

Revista de Biologa
Tropical. Gladys Ines
Cardona

Regado y
abonado de la
maceta.

Resultados

Cuantificacin de
morfotipos en
muestra de
suelos de maceta

Se encontraron en
promedio 14.5
morfotipos .

Manual de Prcticas
de Microbiologa
Bsica. Hernando
Valencia.

Existen en
proporciones
pequeas
microorganismos
en las macetas.

Acciones

Preparacin de
PDA, diluciones
seriadas, siembra
y conteo.

Materiales caseros
de fcil adquisicin y
manejo

Conceptos y
practicas de
microbiologia
general. Alberto
Rojas.

Uso de los
materiales
adecuados en
cada
procedimiento

MATERIALES Y MTODOS
Para la realizacin de este proyecto fue
necesario utilizar una amplia variedad de
artculos, los cuales, y debido a uno de
los objetivos de la practica, debian ser de
uso cotidiano y fcil adquisicin en el
comercio regular y tpico. A continuacin
se describen los procedimientos
efectuados para el desarrollo prctico del
trabajo.

En todo suelo
donde crece una
planta debera
haber por lo
menos una
mnima cantidad
de
microorganismos.

Elaboracin del medio de cultivo PDA

( papa dextrosa agar): Los medios de
cultivo son la base para el estudio
cientfico de microorganismos in vitro,
estos son ambientes artificiales que
otorgan un hbitat y unos
requerimientos nutricionales especficos
para el desarrollo de sus huspedes; de
estos medios depende en gran parte el
xito de las investigaciones en
microbiologa, es por esto que hay que
prestar mucha atencin y cuidado en su

elaboracin.Generalmente se utiliza
agar, el cual es un extracto seco
obtenido de diversas especies de algas
marinas que tiene la propiedad de formar
un tipo de gel, qumicamente hablando
es un poligalactsido (2),otro
componente es la dextrosa o
comnmente conocida como glucosa la
cual es el combustible por excelencia de
todas las clulas (3) y tambin se utiliza
en la elaboracin de este medio de
cultivo la papa (Solanum tuberosum), la
cual es ideal para la germinacin de vida
mictica por su alto contenido de
carbohidratos en especial si estos son
fitopatgenos, adems que ayuda a
regular el pH necesario para que los
hongos prosperen el cual es de 5 y 6
(4).Al elaborar de forma casera la
preparacin de medios de cultivo hay
que ser muy prctico y reemplazar
ciertos componentes y mtodos como
fue el caso de el agar al ser sustituido
por gelatina comercial sin sabor ,aunque
en el laboratorio se puede utilizar este
producto, no es recomendable ya que
algunas bacterias pueden llevarla a
estado lquido.La dextrosa o glucosa fue
suplida por azucar blanca granulada de
uso comun. Las medidas de los
ingredientes fueron papa sin pelar 200 g
,azcar blanca (dextrosa) 10 g, gelatina
sin sabor (agar) 20 g, agua 1 litro (5) ver
ilustracin 1.

Ilustracin 1: ingredientes para

preparacin de medio de cultivo casero

En una olla se colocaron el litro de agua

junto con los 200 g de papa, esta no se
pelo pero se cort en varios trozos ver
ilustracin 2

Ilustracin 2: preparacin del caldo

y se llev a una estufa a fuego alto, esto

hasta que el agua hirvi, con una
coladera se extrajo el caldo, a est se le
agrego el azcar y la gelatina ver
ilustracin 3,

para lograr la asepsia requerida ver

ilustracin 5

Ilustracin 3: Agregado del azcar y la

gelatina al caldo

se revolvi el caldo hasta que resultara

una mezcla completamente homognea,
en seguida el contenido fue trasvasado a
4 frascos de compota con un volumen de
80 ml ver ilustracin 4

Ilustracin 4: recipientes para contener el

PDA

En un adecuado laboratorio se contara

con un autoclave, un recipiente metlico
utilizado para la esterilizacin con calor
seco de recipientes de vidrio y otros
materiales slidos estables al calor, a
una temperatura de 120 c a 15
psi.(5),asi que para esterilizar los frascos
de compota se debio recurrir a una olla a
presion u olla pitadora para tal fin,se
tomaron dos frascos en un bao maria
en la olla a presion durante 20 minutos

Ilustracin 5: frascos con PDA en "bao

mara" para esterilizacin en olla pitadora.

Diluciones seriadas y siembra: Las

diluciones seriadas son una tcnica
microbiolgica que se utiliza para
disminuir la cantidad de microorganismos
que se siembran en un medio de cultivo,
esto se hace para poder contar
manualmente la UFC (unidades
formadoras de colonias) y observar los
morfotipos formados y a partir de esto
estimar la cantidad total de
microorganismos presentes en
alimentos, aguas residuales y otras
muestras donde hay que evaluar
rutinariamente el nmero de clulas. En
el laboratorio se utilizara tubos de
ensayo, micropipetas y vortex (agitador);
para esta prctica los tubos de ensayo
fueron reemplazados por tubos de
escarcha que se consiguen en cualquier
miscelanea, la micropipeta por jeringas
farmacuticas ordinarias y el agitador p
vortex por una licuadora casera de baja
revolucin. los tubos de ensayo fueron
esterilizados utilizando una olla a
presin; los primero fue agregar 500 ml
de agua de llave a la olla a presin
luego se puso una toalla encima de la
placa de agua y se agregaron otros 500
ml de agua de llave; ya estando el agua

se dispusieron los tubos de ensayo

estando seguros de que el agua los
cubriera completamente. Se dej a fuego
alto durante 1 hora y cuando la olla
empez a emitir vapor se disminuy la
intensidad del fuego y se dejo asi por 20
minutos; despus de los veinte minutos
se apago el fuego y se dej enfriar
durante otros 20 minutos, con ayuda de
unas pinzas esterilizadas con alcohol
quirrgico se tom por la parte exterior
los tubos y se pusieron en toallas
antibacteriales, moviendolas de arriba a
abajo para retirar el agua que
permaneca an dentro de cada tubo.
Para medir el volumen del tubo se utiliz
una jeringa con mediciones volumtricas
ya establecidas, la medida fue de 5 ml.
Se realizaron diluciones seriadas de 5 en
5 para estimar el nmero de morfotipos
en una muestra de un miligramo de suelo
medido en una bscula digital. Se diluy
un gramo de muestra de suelo en 4 ml
de agua destilada (para adicionar el agua
destilada se utiliz una jeringa
farmacutica esterilizada
industrialmente) y se dispuso en tubo de
ensayo en una licuadora de baja
revolucin durante 5 minutos; este tubo
fue rotulado como dilucin 10-1 ver
Ilustracin 6 (se guarda la misma
proporcin que utilizando un volumen de

10 ml)

Ilustracin 6. Color turbio y oscuro que

1
muestra dilucin 10 de la muestra de
suelo.

, del tubo 10-1 se extrajo con una jeringa

diferente ( se utiliz una jeringa para
cada una de las 6 diluciones) un mililitro
y se dispuso en otro tubo ver Ilustracin
7,

Ilustracin 7. Se extrae 1 ml de muestra

10-2para agregar a un nuevo tubo

el cual fue llenado agregando 4 ml de
agua destilada y se rtulo como dilucin
10-2 ; se procedi de la misma manera
hasta obtener el tubo dilucin 10-3. Se

utiliz una nica jeringa para agregar el

agua destilada y una jeringa por cada
dilucin y ahora la siembra se utiliz una
nueva jeringa, as se garantizo la
veracidad de las proporciones. Las
siembras se realiz en presencia de un
mechero de alcohol, se tom 1 mililitro y
se agregaron a al PDA casero ya
preparado y esterilizado ver Ilustracin 6;
se realizaron 4 rplicas.

Ilustracin 8.Siembra 1 ml de dilucin 10

en PDA casero contenido en tarros de
compota.

-3

Los frascos fueron dejados en un

recipiente metlico envueltos en papel
peridico detrs de una nevera y se pudo
estimar por medio de un termometro
casero de mercurio que la temperatura
era de 28 C; se dejaron all durante un
lapso de 8 das. La disposicin de los
frascos en el recipiente se puede
observar en el esquema No. 1.

Esquema No. 1. Muestra de la ubicacin de los recipientes en la incubadora casera

RESULTADOS

se contaron el nmero de los diferentes morfotipos encontrados en los 4 fracos y los

resultados se muestran en la tabla 1.

Tabla No. 1 Nmero de morfotipos por cada medio de cultivo

FRASCO

NMERO DE MORFOTIPOS

19

15

10

14

ANLISIS Y DISCUSIN DE
RESULTADOS

el recipiente de metal, el frasco Nmero 3 se

encontraba en el extremo opuesto a la
superficie de la rejilla al respaldo de la
nevera, condicin opuesta presentaba el
frasco Nmero 1, el que se encontraba
inmediatamente despus del lado de del
recipiente que haca contacto con la rejilla del
respaldo de la nevera, como se puede
observar en el esquema No. 1.

La ubicacin de los frascos en el

recipiente se hizo de forma aleatoria
utilizando un mtodo de aleatorizacin
simple con asignando un nmero a cada
posicin y un a cada frasco.

Grfico No. 1 Nmero de morfotipos por

medio de cultivo
En promedio se obtuvo 14.5 morfotipos en el
experimento, con una desviacin estndar de
3.20 un valor cercano a uno, lo que indica
que los valores no se encuentran muy
distantes a la media. Aunque la desviacin
estndar no sea muy grande, se encuentran
valores cuya diferencia es significativamente
grande considerando la variable respuesta;
este es el caso de los frascos Nmero 1 y
Nmero 3 cuyos valores son 19 y 10
respectivamente. Analizando el
procedimiento y recordando los detalles, se
puede resaltar la ubicacin de los frascos en

Los valores que se esperan de

morfotipos consultando la literatura se
encuentran entre los 30 y 50 para un
PDA preparado en laboratorio y una
incubacin de 8 a 10 das a 25.8C de
temperatura. (6)
A partir de los resultados obtenidos se
pueden deducir los siguientes resultados:

Cuando el medio de cultivo

conserva temperaturas cercanas
a los 28 C se aumenta la
cantidad de nmero morfotipos.
A menor temperatura de
incubacin menor van a ser el
nmero de morfotipos

encontrados en un medio de
cultivo.
El nmero de morfotipos
encontrados en la muestra de
suelo de maceta de una planta
Aspidistra sp es
significativamente baja en
comparacin a muestra de suelo
tomadas en otro ambiente o en
un ambiente natural.

BIBLIOGRAFA
1. Valencia, H. 2004.Manual de

2.

3.

4.

5.

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infectiva del hongo fitopatogeno
Fusarium oxysporu, f.sp melonis en
residuos vegetales de meln, tesis
doctoral. Universidad de
Almeria,Departamento de biologa
aplicada, area de microbiologa.