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EQUIPO DE TRABAJO:
Cifuentes Paola
Guamangallo Raúl
Redrobán Karina
Solis Daniel
INFORME DE BIOTECNOLOGIA
Diciembre de 2009
Dra. Blanca
Esthela Bravo
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INDICE
1. Introducción...........................................................................................3
Por esta razón el suelo presenta una gran alternativa de solución a este
problema, pues su elevada carga enzimática y bacteriana aumenta la
solubilización de los nutrientes haciendo que puedan ser asimilables por las
raíces. De esta manera incrementar la viabilidad de fósforo en el suelo
ayudando a reducir la aplicación de fósforo en forma de fertilizantes
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químicos, reduciendo la contaminación química en los suelos y promover
una agricultura sostenible.
2.Marco Teórico
IMPORTANCIA DEL FOSFORO
pH
La disponibilidad del Fósforo depende del pH del suelo, porque solo puede
ser tomado como ion ortofosfato, el pH óptimo para que el ortofosfato sea
viable en el suelo es alrededor de 6.5 ya que la precipitación de los fosfatos
de aluminio y calcio disminuye.
Un pH alto o bajo puede desnaturalizar la enzima y por consiguiente
inactivarse. El pH del medio es importante para el crecimiento de los
microorganismos, la mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un
pH neutro, un inadecuado pH puede inhibir en crecimiento o alterar los
procesos metabólicos normales.
3.Objetivos:
6.1 Objetivo General
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Aislar en medios de cultivo: SMRS y un medio diseñado,
microorganismos solubilizadores de fosfatos a partir de
suelo para uso agrícola de la provincia del Napo.
Diseñar un medio de cultivo con una solución de fosfato.
Evaluar la actividad fosfatasa mediante la técnica p-
nitrofenilfosfato
1.Marco Metodológico
7. 1 Toma de la muestra
7.2.1 Determinación de pH
El pH influye en el proceso del suelo debido a la acción que ejerce sobre los
microorganismos presentes; en los procesos el pH varía de acuerdo al
tiempo, en respuesta a los materiales que son utilizados, a los productos y
compuestos intermedios de la degradación de estos.
IS = A/B
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Donde:
A = Diámetro total (diámetro de la colonia + diámetro del halo)
B = Diámetro de la colonia
Se escogen las placas que tienen colonias aisladas y además son menos de
40 colonias (entre 10 y 20) para realizar el recuento.
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El principio de la técnica se basa en el uso de una fracción artificial de un
sustrato orgánico (p-nitro fenil fosfato) el cual es hidrolizado por fosfatasas
del tipo fotomonoestereasas para obtener HPO4.
2.Bibliografía
Direcciones Electrónicas
1. http://www.slideshare.net/desarrollo_sostenible/como-hacer-y-
usar-el-compost-1444481?src=related_normal&rel=1444478
2. http://www.uteq.edu.ec/u_investigacion/uict/guias/Triptico_Estudio
%20de%20Mercado_Poster.pdf
3. http://www.quito.cipotato.org/PRESENTACIONES/Resumenes/Articu
lo%20cientifico%20de%20Wilian%20Viera%20y%20Gustavo
%20Bernal.doc
4. http://ciat-
library.ciat.cgiar.org/Articulos_Ciat/Compostaje_Pescador.pdf
6
1.
2. ANEXOS
pH (pasta saturado)
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11.2 ANEXO II. Composición del Medio de Cultivo SMRS
COMPONENTE g/L
Glucosa 10
Extracto de
0.5
Levadura
Púrpura de
0.1
Bromocresol
Ca3(PO4)2 5
Agar 15
Medio base: (NH4)2SO4 0,5 g; KCl 0,2 g; MgSO4.H2O 0,3 g; FeSO4.7H2O 0,004 g;
NaCl 0,2 g;
COMPONENTE g/L
Glucosa 10
Extracto de
0.5
Levadura
Cloranfenicol 0.1
Agar 18
Medio base: (NH4)2SO4, 0,5 g; KCl, 0,2 g; MgSO4.H2O, 0,3 g; MnSO4.H2O, 0.004 g;
FeSO4.7H2O, 0,002 g; NaCl, 0,2 g. en 900 ml de agua destilada
NOTA: Ajustar el pH del medio a 7.2 con una solución de NaOH 0.1 N
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1.3 ANEXO III. Método de determinación de actividad Enzimática p-nitro
fenil fosfato
C1V1 = C2V2
Donde:
C1 = p – nitro fenil 1umol/ml
V1 = volumen de nitro fenil requerido
C2 = concentración en umol/ml a la que se quiere llegar
V2 = volumen de muestra en cada tubo