DETERMINACION DE AMILASA Y PROTEASA EN DETERGENTES

I.

INTRODUCCION

Las enzimas son altamente especficas y los procesos que utilizan enzimas generalmente generan
menos reacciones secundarias y subproductos que los otros procesos qumicos, y adems son ms
respetuosos del medio ambiente. Las enzimas tambin permiten que algunos procesos, que de
otro modo no seran prcticos, se puedan llevar a cabo de una manera eficiente. Adems, debido a
su estructura tridimensional, la actividad de la actividad de una enzima puede ser fcilmente
eliminada, lo cual hace el uso de enzimas en la industria mucho ms atractivo en la mayora de los
casos ya que pueden ser inactivadas de una manera fcil y rpida despus de su uso. Actualmente
las enzimas son utilizadas en un amplio rango de procesos, siendo especialmente tiles como
aditivos en el desarrollo de productos farmacuticos, biomdicos, alimentarios (incluyendo
bebidas y productos lcteos), detergentes, productos de higiene personal y textiles, entre otros.
En particular como aditivos para detergentes, las enzimas han contribuido enormemente a su
desarrollo y mejora, tanto a nivel industrial como domstico.
Entre los componentes que se encuentran en una proporcin inferior al 5% se encuentran las
enzimas. Detectar la presencia de las enzimas en la formulacin de detergentes de lavadora en
polvo va a ser el objeto de esta prctica. En particular se va a determinar la actividad amilasa
siguiendo la reaccin de hidrlisis del almidn.
(Almidn)n + Agua + -amilasa (Almidn )n-1 + Maltosa
II.
OBJETIVOS
utilizar dos protocolos de medida de actividad amilasa. El primero es el mtodo del DNS,
que detecta la aparicin del producto de reaccin maltosa, y el segundo es el mtodo del
yodo que mide la desaparicin de un complejo azul con el almidn con el transcurso de la
reaccin. El primero es el mas adecuado pues permite cuantificar de una manera sencilla
la actividad enzimtica, mientras que el segundo mtodo puede ser mas cualitativo.
III.
MATERIALES Y METODOS
Espectrofotmetro
Bao termosttico
Pipetas
Maltosa
Almidon
Iodo
Detergente
MTODO DEL DNS
Para realizar la reaccin enzimtica se adiciona a un tubo de ensayo:

Volumen de disolucin de detergente (mL)

Volumen de disolucin de almidn (mL)

Tubo de ensayo
1,0
4,0

 Se homogenizo, luego tomo 1 mL de la mezcla y se pone en contacto con 1 mL del

reactivo de color DNS en un tubo de tapa rosca.
Esta operacin se repiti a los 15, 30 y 60 minutos. Una vez transcurrido ese tiempo se
caliento todos los tubos durante 15 minutos a 85-90 C por inmersin en un bao
termosttico. Finalmente se adicionan 4 mL de agua, y se mide la absorbancia a 540 nm
frente a la muestra de reaccin a tiempo cero.
Luego se tomaron las muestras, y se realiz la recta de calibrado del mtodo DNS
utilizando la disolucin patrn de maltosa. Para ello rotulamos 5 tubos de ensayo, y
adicionamos lo siguiente.

Volumen de disolucin de maltosa (mL)

Volumen de agua (mL)
Volumen de reactivo DNS (ml)

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

0,0
0,3
0,6
1,0
1,0
0,7
0,4
0,0
1,0
1,0
1,0
1,0

Llevado a ebullicin durante 5 minutos ,luego se enfrio en hielo durante 5 minutos

Finalmente estos tubos se midieron en el espectrofotmetro a 540 nm

Figura : Recta de calibrado con maltosa

Absorbancia (540 nm) = 0,2385 [Maltosa] (mM)

Figura : Medida de la actividad enzimtica amilasa con el reactivo DNS

DISCUSION
CONCLUSION
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS