NOMBRE DEL EQUIPO:

AUTOCLAVE

1.0 APLICACIN:
El autoclave es un equipo utilizado para la esterilizacin por vapor de materiales
estables al calor, mediante la desnaturalizacin irreversible de enzimas y protenas
estructurales de agentes biolgicos.

2.0 GENERALIDADES:

El autoclave permite que se alcancen y mantengan durante el tiempo ptimo de

exposicin las condiciones de calor, presin y atmsfera necesarios para alcanzar
la muerte de organismos viables termoresistentes, y/o la destruccin de sus
esporas.
La muerte ocurre ms rpidamente en aire saturado con vapor que en calor seco
porque la temperatura a la cual ocurre la desnaturalizacin de las protenas es
inversamente proporcional a la humedad presente. (El aire seco es mal o
conductor de calor).
Para Microbiologa pueden esterilizarse en el autoclave instrumentos limpios,
materiales envueltos, recipientes, medios de cultivo y material contaminado
antes de ser descartado o lavado. Observndose que la esterilizacin de
materiales limpios y contaminados debe ser hecha siempre por separado.
Es aconsejable utilizar un autoclave para esterilizacin de materiales o productos
contaminados que deben ser descartados o reciclados y otro para esterilizacin
de material limpio como vidrio, plstico, lquidos, slidos, medios de cultivo,
uniformes y cajas de cartn, entre otros. El uso de un solo autoclave para la
esterilizacin de todo el material implica la necesidad de correr ciclos en vaco,
entre cada carga de material limpio y material contaminado para esterilizar el
equipo.
La esterilizacin en autoclave no afecta la radioactividad o toxicidad qumica de
los materiales.
Algunos modelos de autoclaves poseen los siguientes componentes principales:
Cmara del autoclave, deflectores, aislamiento de anaqueles, armazn, puertas,
sellos de las puertas, detectores y sondas de temperatura (RTDs), registro de
grfico de temperatura, vlvulas de seguridad, bomba de vaco, motor de la
puerta lateral, carrito de esterilizacin, transmisores y medidores de presin,
control mediante microcomputadora y censor del nivel alto de agua en la
cmara.
El ciclo de esterilizacin esta constituido por la fase de remocin de aire,
penetracin del vapor y, en algunos equipos, el secado. La remocin de aire
diferencia los tipos de autoclaves (gravitacionales y de alto vaco).
Para Microbiologa, de modo general, el ciclo consiste en el mantenimiento de la
temperatura a 121C por 15 minutos para la esterilizacin de materiales limpios y
por 30 a 40 minutos para la descontaminacin de materiales .

3.0 AMBIENTE:

El autoclave debe colocarse en el rea de preparacin de medios o lavado de

material, lo ms conveniente, es que se coloque en un rea contigua aislada
fsicamente, de manera que no aumente la humedad y temperatura del ambiente donde
se preparan medios y/o se realiza el lavado.
El espacio donde se ubica el autoclave debe contar con un sistema que remueva
del ambiente todo el vapor y olores generados.

El rea donde se coloque el autoclave debe tener instalacin sanitaria para el

drenaje del autoclave.

4.0 PRECAUCIONES:

El material que se va a esterilizar se puede envolver en telas tipo lino o papeles

estables al calor y permeables al vapor. Se usan tambin contenedores en acero
inoxidable o polipropileno.
Al esterilizar con papel se deben hacer pruebas en el material para verificar la
duracin de la esterilidad.

El material peligroso que requiere esterilizacin previo a su descarte, debe

ponerse en bolsas rojas o bolsas para esterilizacin en autoclave, blancas (usadas
universalmente) con smbolos de riesgo biolgico.

Todo material que se vaya a esterilizar, debe llevar un indicador visual, tal como
un indicador de temperatura (como cintas termoreactivas) u otro dispositivo que indique
que ya se pas por el proceso de esterilizacin.
Al cargar el material en el autoclave, se deben dejar espacios libres entre ellos,
para facilitar el flujo de aire, la mxima circulacin de vapor y la penetracin del
mismo en los contenedores.
Utilizar guantes y delantales de bioseguridad resistentes a altas temperaturas
para evitar quemaduras.
Permitir que la presin del autoclave llegue a 0 y la temperatura descienda por
debajo de 60 C antes de abrirlo. Evitar los primeros vapores eliminados al abrir
el autoclave y esperar el tiempo adecuado segn el autoclave antes de retirar el
material.
Nunca esterilizar tubos o cualquier contenedor con la tapa ajustada ya que
pueden estallar o impedir la esterilizacin completa, debido a que el aire
retenido en el interior del tubo o contenedor impide la penetracin del calor. En
recipientes con tapa de rosca, despus de ajustar la misma, desenroscar 180.
Al esterilizar lquidos, los envases deben llenarse hasta un mximo de sus dos
terceras partes para evitar que en el proceso el lquido se desborde.
Colocar las bolsas que contengan material contaminado con los extremos abiertos
para maximizar la penetracin del vapor, nunca llenarlas ms de sus tres cuartas
partes. Si se utilizan contenedores metlicos o de polipropileno, la base de stos
debe tener perforaciones que permitan el flujo de aire durante el proceso de
esterilizacin.

5.0 PROCEDIMIENTOS:
Esta informacin se presenta slo para proporcionar una gua. Los procedimientos y su
frecuencia estarn basados en el tipo o modelo de autoclave y en la necesidad y
desempeo del equipo en el laboratorio.

5.1 Procedimientos de control:

5.1.1 Monitoreos fsicos:

Registro de grficos de tiempo, temperatura mxima alcanzada y presin en cada

ciclo del autoclave.
Registro del tiempo completo, desde el inicio hasta el final del ciclo de
esterilizacin.
Sensor de temperatura: Indica la temperatura dentro del autoclave durante el
proceso. El control de la temperatura mxima alcanzada durante el proceso
puede ser medido tambin a travs del uso de termmetros de mxima para
autoclaves.
Manmetros : Registra la presin atmosfrica dentro del autoclave.

5.1.2 Indicadores qumicos:

5.1.3

5.1.4

Deben adherirse a la superficie de todo material a esterilizar. Monitorea el

cambio qumico, inducido por calor, demostrado en el cambio de color o de
consistencia de la sustancia indicadora (como cintas termoreactivas). No indica
esterilidad.

Indicadores biolgicos:
Controlan la eficacia del proceso de esterilizacin por vapor, basndose en la
muerte de esporas resistentes de Geobacillus stearothermophilus. Despus de
pasar por el ciclo de esterilizacin, el microorganismo debe ser incubado y
verificar su crecimiento o no.
Para el control de la limpieza del equipo, se pueden colocar placas con agar
sabouraud y agar de recuento estndar (PCA) en la parte interna de la autoclave
en puntos especficos, despus de toda limpieza del equipo. Esto puede
realizarse semanalmente.

Puntos de alarma:
Hay que comprobar en el autoclave si ocurren temperaturas por debajo o por
encima de la requerida, evacuacin muy prolongada, esterilizacin muy
prolongada, falla del sistema de vaco, puerta abierta, imposibilidad de leer la
temperatura, la presin o ambas, imposibilidad de leer la carga, presin en la
cmara con la puerta sin sellar, inundacin de la cmara, evacuacin del agua de
la cmara en cantidad anormal, vaco insuficiente para efectuar la prueba de
escape, batera descargada.

Requisito

Frecuencia Sugerida

a) Establecer las caractersticas para

cargas/ciclos tpicos
b) Monitorear tiempo/temperatura
c) Hacer un control visual de la
culata, limpiar/drenar la cmara
d) Servicio completo
e) Controlar la seguridad de la
vlvula de presin

Al
inicio
y
despus
de
reparaciones/modificaciones
En cada uso/ciclo
Regularmente, como lo recomienda el
fabricante
Anualmente
Anualmente

5.2 Procedimientos de Certificacin operativa

Describen la informacin necesaria para aportar pruebas de que todos los
componentes del autoclave funcionan segn lo especificado. Esto exige someter a
prueba todos los controles de operacin normal, todos los puntos de alarma, todos los
interruptores y dispositivos visualizadores, controles interactivos y cualquier otra
indicacin de operaciones y funciones.
Se deben definir las especificaciones y los criterios de aceptacin para todas las
operaciones y tener informacin sobre la calibracin del equipo, actividades anteriores a
la operacin, operaciones ordinarias y sus criterios de aceptacin.
El laboratorio debe tener:
Instrucciones especficas del manual del autoclave, sobre operacin,
mantenimiento y calibracin.
Informacin sobre la capacitacin de los operarios.
Instrucciones sobre cualquier prueba esttica o dinmica para comprobar que
el autoclave opera segn lo previsto bajo condiciones normales.

5.3

Procedimientos de Calibracin:
Se solicita su realizacin a los ingenieros de la compaa contratada para tal fin

o a los organismos de control que realizan esta actividad y que estn acreditados como
laboratorios de calibracin.
Las partes de importancia crucial que generalmente se calibran en un autoclave
son las siguientes:
Sensores de temperatura
Sensores de presin
Medidores de presin
Interruptores de presin
Transmisores de presin y transmisores de entrada/salida.
Los instrumentos de calibracin que se requieren:
Pares trmicos, calibrador de presin, calibrador de vaco, detectores y sondas
de temperatura, cronmetros, bao de temperatura, medidores de flujo. (Se
debe hacer referencia a los mtodos de certificacin.)

5.4 Procedimientos de certificacin funcional:

Deber efectuarse despus de realizar y aprobar la Certificacin Operativa.
a) Para la instalacin inicial, modificacin, sustitucin o cambio de ubicacin de
cualquier componente crucial del autoclave.
b) Para revalidacin.
c) Para cada configuracin adicional de la carga.
d) Si se produce un problema de contaminacin.
La compaa contratada para mantenimiento y calibracin del autoclave debe someter a
prueba las funciones del autoclave.
Las pruebas ms comunes son las siguientes:
Integridad del sello de la cmara
Vibracin de ventiladores impelentes y motores
Mecanismos de interrupcin de la corriente al abrir las puertas
Prueba de escape de la presin
Prueba de extraccin completa del aire residual (DART)
Tres estudios de distribucin del calor: se traza un mapa de la distribucin de
calor en la cmara vaca.
Tres estudios de mapeo en la cubierta: demuestra el calentamiento uniforme de
la cubierta.
Determinacin de la ubicacin de cualquier punto fro
Registrar toda la informacin y los datos pertinentes con respecto a los estudios de
distribucin de temperatura y las configuraciones de las cargas que se sometern a
prueba, incluida la prueba de desafo. Los resultados debern demostrar que la
operatividad cumple regularmente las especificaciones determinadas con anterioridad
tanto en las condiciones normales como, si corresponde, en las peores condiciones
posibles.
Es importante efectuar pruebas para comprobar la penetracin del calor / vapor en cada
carga, y la destruccin de un inculo bacteriano de desafo en cada carga. Los
instrumentos de medicin tendrn que calibrarse antes y despus de cada estudio de
validacin para asegurarse de que cumplan las especificaciones para cada ciclo.
Las pruebas a realizarse son las siguientes:
a) Distribucin del calor en la cmara cargada (demuestra la penetracin del calor/vapor
en cada material y para cada tamao de carga, mediante la insercin de pares
termoelctricos en cada carga).
b) Desafo biolgico (muestra que la reduccin del indicador biolgico est dentro

de los lmites especificados; para ello, en cada carga se insertan indicadores

biolgicos).
Es importante conseguir la penetracin adecuada del vapor en las cargas secas.

En relacin con cada prueba de distribucin del calor, penetracin y desafo,

debern efectuarse a satisfaccin tres veces consecutivas a efecto de demostrar
que el autoclave cumple uniformemente los criterios de aceptacin.
Con respecto a las diferentes configuraciones de la carga y ciclos, las pruebas se
efectuarn tres veces para cada uno, usando las peores condiciones posibles
(carga mxima o masa mxima). Por ejemplo, el autoclave tiene cuatro
configuraciones diferentes de la carga (A, B, C y D) y utiliza tres ciclos diferentes
de esterilizacin (1, 2 y 3). Si para la carga A se necesita el ciclo 1, para la carga B
los ciclos 2 y 3, y para las cargas C y D el ciclo tres, tendremos que probar cada
carga con sus diferentes ciclos.

Referencia
Gua de la OMS sobre los requisitos de las prcticas adecuadas de fabricacin (PAF)
Segunda parte: Validacin
NORMA CHILENA OFICIAL
NCh 2725.of2002 I N S T I T U T O N A C I O N A L D E N O R M A L I Z A C I O N 0 I N N - C H I L E .
Directrices para la aplicacin de NCh-ISO 17025 en los laboratorios que realizan ensayos y
anlisis qumicos.
MANUAL DE ACREDITACION DE ALIMENTOS, SUBCOMISION DE ACREDITACION DE
LABORATORIOS DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE
MICROBIOLOGIA Documento Elaborado en Buenos Aires en Noviembre 2000.