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sfr

GONIGYT
(IN
(OMl'.IIT* %At 4 ,
It I$4v - -o)4.A
CIENTfrICA Y TECNOLGICA

INFORME FINAL

cIOsIDENO DE C4ILE

PROYECTO FONDECYT POSTDOCTORADO 2008

3080021

2 aos

2Q ao (2009)
DURACIN

NMERO PROYECFO

AO DE EJECUCIN

Gustavo Andrs Ciudad Bazaul

13.317.0464

Rodrigo Navia Diez

11.261.522-9

INVESTIGADOR(A) POSTDOCFORADO

RUT

INVESrIGADOR(A) PATROCINANTE

RUT

gdudad@ufro.cl

88101332

rnaviaufro.cl

045-325477

E-mail

FONO

E-mail

FONO

Av. Francisco Salazar 01145, Laboratorio de Bio-combustibles, Universidad de la Frontera, Temuco, Chile
DIRECCION INVESTIGADOR(A) POSTDOCFORADO

PERODO QUE INFORMA

01

11
DESDE

19

JJp HASTA

CONTENIDO
(MARQUE CON UNA X EL CASILLERO QUE CORRESPONDA)
INCLUYE

Formulario de Informe Fina!

Publicaciones

Presentaciones a Congresos

Evaluacin del(de la) Investigador(a) Patrocinante

Otros (especificar)

Firma Investigador(a) Patrocinante

NO INCLUYE

Firma Investigador(a) Postdoctorado

Fecha

CONTENIDO DEL INFORME FINAL

1. Cumplimiento de los objetivos planteados para el perodo que se informa. Marque con una X el
casillero correspondiente.
Cumplimiento
OBJETIVOS
Total
1. Aislar identificar y selecionar a
microorganismos productores de lipasas,
provenientes de ambientes contammados
con grasa y aceite (To isolate, identify and
select lipase-producing microorganisms
from environments rich in oils and animal
fats).
2. Inmovilizar microorganismos en zeolita
utilizando reactores aiilift (Fo immobilize
and grow microorganisms onto zeolite in
an airlift reactor).
3. Disear, construir y operar un reactor
whole celi para la produccin de biodiesel
(ro design, construct and operate a
biofilm whole ceil bioreactor for biodiesel
production)

Parcial

No

Fundamentar el cumplimiento parcial

o incumplimiento
Se aislaron e identificaron 9 cepas de
bacterias productoras de lipasas. En este
estudio se incluyeron 3 cepas de
Pseudomonas sp. aisladas por el centro de
investigacin Helmholtz (UFZ) de Leipzig,
Alemania y el hongo Rhizcpus oryzae.
Se construyeron 15 reactores airlift, donde
se realiz la inmovilizacin de todas las
cepas, tanto en zeolita como en poliuretano.
Adems, se prob la inmovilizacin directa
en el aceite
De acuerdo a las propiedades evaluadas de
los microorganismos en el centro de
investigacin Helmholtz (UFZ) de Leipzig,
se encontr una alta hidrofobicidad, lo que
indic que los microorganismos podran ser
inmovilizados en una matriz apolar como el
aceite. Utilizando este concepto y con la
idea de mantener a los microorganimos
vivos se desarroll un biorreactor trifsico,
que evit la inhibicin y logr la
produccin de metil esteres a partir de
aceite de raps.

Otros) aspecto(s) que Ud. considere importante(s) en la evaluacin del cumplimiento de los objetivos
planteados en la propuesta original o en las modificaciones autorizadas por los Consejos.
El 50% de los resultados de este trabajo de investigacin fueron desarrollados en el Department of 1
Environmental Microbiology Helmholtz Centre for Environmental Research - UFZ, Leipzig, Alemania, con el
Dr. Lukas Wick, codirector del departamento de microbiologa ambiental. Producto de la pasanta se generaron
dos publicaciones cientficas, las cuales se encuentran en proceso de revisin en la revista Joumal of Bioscience
and Bioengineering. En este Proyecto se realizaron importantes nexos con el centro UFZ.

RESULTADOS OBTENIDOS:

Para cada uno de los objetivos especficos, descnba o resuma los resultados. Relacione las publicaciones y /o
manuscritos enviados a publicacin con los objetivos especficos. En la seccin Anexos incluya informacin
adicional que considere pertinente para efectos de la evaluacin.
La extensin mxima de esta seccin es de 5 pginas (letra tamao 10, Anal o Verdana).
1. Aislar identificar y seleccionar a microorganismos productores de lipasas, provenientes de ambientes

contaminados con grasa y aceite (To isolate, identify and select lipase-producing microorganisms from
environments rich in oils and animal fata).

Se consideraron 3 fuentes para la bsqueda de microorganismos, las cuales se seleccionaron de acuerdo a la

heterogeneidad de la composicin de sus tnglicridos (aceite vegetal y grasa animal) y a la diversidad de sus
microorganismos.
Se seleccionaron las siguientes fuentes: a) suelos contaminados con aceite de raps (SCAR), debido a que el
proyecto se basa en utilizar aceite de raps para la produccin de biodiesel, b) suelos contaminados con grasa
de salmn (SCGS), especficamente con salmones, debido a su alto contenido de triglicridos y c) suelos
contaminados con grasa animal (SCGA), provenientes de una fbrica de cecinas. El acceso a estos suelos fue
facilitado por distintas industrias ligadas a cada rubro.
Cada una de las muestras fue tomada a una profundidad comprendida entre los O y 5 cm en condiciones
aspticas para evitar contaminacin y fueron almacenadas a 4C para ser luego sembradas en el laboratorio. El
muestreo se realiz entre los meses de diciembre de 2007 y enero de 2008.
Las muestras fueron sembradas primero en un medio lquido selectivo enriquecido de acuerdo a Ban et al.
(2002), en el cual se agreg aceite de raps como fuente de carbono. Slo los microorganismos presentes en las
muestras provenientes de SCAR y SCGS mostraron crecimiento. Las muestras provenientes de SCGS, fueron
las que presentaron el mayor nmero de colonias distintas.
Las colonias obtenidas fueron aisladas a travs del traspaso consecutivo a placas, hasta obtener colonias
separadas. Posterior a este proceso se logr asilar 9 cepas, 2 provenientes de SCAR y 7 provenientes de
SCGS.
a) Caracterizacin gentica: Para el caso de los microorganismos provenientes de SCGS, se encontraron 4
gneros distintos Myroides, Arthrobacter, Serratia y Bacillus. Para el caso de los microorganismos provenientes
de SCAR, solo se encontr el gnero Bacillus. Todos los microorganismos aislados pertenecieron al dominio
Bacteria. Para todos los gneros encontrados existen reportes de bacterias productoras de lipasas. Serratias
(Gao et al. 2004, Lee et al. 2003, Long et al. 2007), Bacillus (Ertugrul et al. 2007, Sharma et al. 2001),
Arthrobacter (Arpigny and Jaeger 1999) y Myroides (Arpigny and Jaeger 1999). Adems, en este estudio se
induyeron 2 cepas aisladas desde sedimentos de acuferos contaminados (Pseudomonas veronii 549 y 547)
con hidrocarbonos halogenados de Bitterfeld, Alemania (Vogt et al. 2004), la bacteria Pseudomonas
fluorescence 340 y el hongo Rhizopus oryzae 4697.
b) Condiciones de cuftivo: Para determinar el uso de aceite de raps como fuente de carbono por parte de los
microorganismos se utilizaron 3 diferentes medios para las bacterias: medio basal de Haba et al (2000) con
glucosa y con aceite de raps como fuente de carbono y el medio enriquecido de Ban et aI.(2001). La Figura 1
muestra el crecimiento de los diferentes microorganismos en los diferentes medios de cultivo, donde se observa
que la mayora de las bacterias crece mejor en los medios que contienen aceite de raps, como es el caso de
Serratia sp., que no crece en glucosa. El crecimiento fue evaluado a travs de la medicin de la densidad ptica
(DO) a 578 nm.

44
-,-

-0-1-PJ1.,..M7

o.- pfr
----

33

-o-

8
.22

-.-O
--4-

1' -am 547

-O-

lO

15

3D

l,,olh)

25

35

35

lO

15

35

,p,IhJ

25

35

35

bqx,LN

Figura 1. Crecimiento de bacterias en con diferentes fuentes de carbono: a) medio basal con glucosa medio, b)
basal con aceite de raps y c) medio enriquecido con aceite de raps y polipeptorta como fuentes de carbono.

Para evaluar el crecimiento del hogo se utilizaron 3 medios slidos: PDA, PBS y medio enriquecido. La Figura 2
muestra que R. oryzae crece tanto en PDA como en medio enriquecido, alcanzando un radio de 5 cm en tres
das de incubacin a 20C.

b) Deteccin de actividad lipasa: Para probar la presencia de microorganismos productores de lipasa, para
tanto el hongo como para las bacterias se utilizaron 3 medios de cultivo slidos: a) un medio de cultivo mnimo
con aceite de raps propuesto por Ko et al. (2005), medio con tween 80 (Haba et al. 2000) y un medio con
rodamina como indicador para detectar lipasa extracelular (Haba et al. 2000).
En el medio mnimo todos los microorganismos mostraron un halo despus de 4 das de incubacin a 20C. Los
mismos resultados fueron encontrados usando tween 80, excepto para Arthrobacter sp., P. fluorescens 340 y P.
veronhi 549, que no crecieron en el agar. Todas las cepas excepto P. fluorescens 340 and P. veronii 549
mostraron presencia de lipasa extracelular, por lo cual fueron descartadas en este estudio.
La composicin del sustrato fue un factor importante en la expresin enzimtica, debido a que P veronii 547 no
mostr actividad cuando fue incubada previamente en medio LB antes de ser inoculada en el medio con
Rodamina (Szczesna-Antczak et al. 2006).
El potencial bioqumico de las cepas fue evaluado utilizando el test Api Zym, donde se evaluaron 19 enzimas
por cada microorganismo, donde se demostr la presencia de lipasas y esterasas en las cepas estudiadas.
Adems, las cepas fueron caracterizadas de acuerdo a su sensibilidad a antibiticos y a metales, donde las
cepas provenientes de SCGS mostraron la mayor resistencia. Este resultado se puede deber a que en proceso
productivo del salmn se utilizan antibiticos, los cuales pueden conferir resistencia a los microorganismos
estudiados.

Figura 2. Crecimiento de R oryzae en medios de cultivos slidos: A) PDA, B) PBS y C) medio enriquecido
2. Inmovilizar microorganismos en zeolita utilizando reactores airlift (To immobiiize and grow
microorganisms onto zeolita in an airlifi reactor).
a) Propiedades fsico-qumicas de la superficie celular: Para determinar cules de los microorganismos

estudiados presentaban potencial de ser fcilmente inmovilizados, se evalu el ngulo de contacto y el potencial
zeta de acuerdo a Wick et al. (2002). De mayor a menor hidrofobicidad el orden es como sigue: R. oi-yzae>
Arthrobacter sp. > Bacillus sp. > Myroides sp. > P. veronii. En el caso de Serratia sp. Existen reportes de su
hidrofobicidad (Bamess et al. 1988). Arthrobacter sp. fue la bacteria ms hidrofbica y R oryzae fue el
microorganismo ms hidroffico, en tanto P. veronhi 547 mostr ser hidroflico.
Para demostrar que la hidrofobicidad tiene directa relacin con la capacidad de inmovilizarse de un
microorganismo, se determin la eficiencia de adhesin de Arthrobacter sp. y P. veron 547 de acuerdo a Wick
et al. (2002), utilizando columnas empacadas con esferas de vidrio de 1 mm de dimetro. La Figura muestra
que Arthrobacter sp. queda retenida en la columna, incluso al labar con un buifer (PBS). Para el caso de P.
veronii 547 se muestra que las clulas tienen un pobre poder de adhesin, adems al aplicar un buffer la
totalidad de las clulas son lavadas de la columna. En cuanto al potencial zeta, todos los valores fueron
rnc Qrrnr
47
&I r1a D
negativ'
t,nnii
ftt1

LO

0.8

LO

A
Suspensin
celularO.IM

PBS
O.IM

0.8

0.6

0.6

0.4

0.4

sin

oT

celular 0 1 M
0.2

0.2

0.0

.io

vkm

60

lo

2;0

40
POMVDhXTC

Figura 3. Eficiencia de adhesin de A) Artbrobactersp. y 6) P. veronhi 547

50

60

b) inmovilizacin en reactores ailtft: Como soporte para la inmovUizacin se utiliz zeohta nacional comprada
a un proveedor en el norte del pas. La zeolita fue caracterizada de acuerdo a rea superficial, volumen y
tamao de poros en porosmetro de nitrgeno Nova 1000 de Quantachrome. El rea superficial de la zeolita fue
de 237,17 m 3lkg, con un volumen y dimetro de poro de 0,07 cc/g y 40,523 A, respectivamente. Adems se
utiliz poliuretano de acuerdo a Ban etal. (2001).
Para la inmovilizacin de los microorganismos se disearon reactores airlift de 550 mL de volumen til. Se
construyeron 15 reactores en total, los cuales fueron desarmables, por lo que las piezas pudieron ser
esterilizadas por separado. Para suministrar el aire a cada reactor, se dise un sistema de vlvulas
independientes conectadas a un compresor de aire. El flujo de aire se midi con un rotmetro. Los reactores
fueron mantenidos a 35C en una campana extractora especialmente construida para este objetivo. Para evitar
la contaminacin de los reactores, el aire se suministr a travs de filtros de 0,2 pm de dimetro. Posteriormente
se realizaron pruebas preliminares de flujo aire, tamao y cantidad de zeolita a utilizar en los reactores. Se
trabaj en un rango de 1 a 2 Umin de aire, se trabaj con 15 g de zeolita en cada reactor con un rango de
tamao de 0,5 a 2 mm de dimetro.
Las cepas Serratia sp. tendieron mayormente a la formacin de grnulos (agregados celulares) que a la
inmovilizacin en zeolita. La cepa Bacillus sp. y Arthrobacter sp. mostr formacin de peliet, que contenan
varias partculas de zeolitas. Con R. orjzae se produjo tanto la inmovilizacin en partculas individuales de
zeolita como formacin de peliet.
Disear, construir y operar un reactor wtiole ceil para la produccin de biodiesel (To design, construct
and operate a biofulm whole ceil bloreactor for biodiesel production)
Se realizaron pruebas de transestenficacin con las cepas Serratia sp. y Arthrobacter sp. utilizando una razn
metanol aceite de 3:1 a 35C y con 9 % de catalizador (bacteria inmovilizada en zeolita). Al cabo de 12 h de
reaccin se encontr presencia de metil ester de cido oleico, lo que demuestra la capacidad transestenficante
de las cepas aisladas. Sin embargo, la zeolita por s sola no mostr actividad transestenficante, si no que actu
solo como soporte. Dado a este resultado se incluy la inmovilizacin en poliuretano, por el menor gasto
energtico involucrado en su inmovilizacin en reactores airlift (menor densidad). En cuanto al hongo, utilizando
el medio mnimo se logr un 12% de conversin a metil ester. Todos los metil steres fueron cuantificados en
un cromatgrafo con espectrmetro de masa (GC-MS).
Dado al bajo rendimiento de metil esteres obtenidos y a los resultados de las propiedades de superficie celular,
se determin que los microorganismos hidrofbicos podran ser inmovilizados en el mismo aceite. Por otro lado
se determin que la principal desventaja de los catalizadores whole cali es la inhibicin provocada por el alcohol
inmiscible en el aceite. Para solucionar este problema se plante la utilizacin de metanol en estado gaseoso,
debido a que evita el contacto directo entre el microorganismo y el alcohol, tal como muestra la Figura 4A. El
crculo entrecortado representa a los microorganismos productores de lipasa (MPL) en el aceite lquido (zona
ploma), los microorganismos utilizan el agua y nutnente del agar a travs de la difusin hacia el aceite, por otro
lado el metanol en estado gaseoso es utilizado para producir biodiesel (Figura 4A). En este caso el aceite es
utilizado tanto como fuente de carbono como para la produccin de biodiesel. La Figura 4B muestra el
bioreactor trifsico operando, donde el metanol fue agregado indirectamente en un recipiente al interior dei
bioreactor, del cual se fue evaporando a temperatura ambiente. El bioreactor fue sellado para evitar las prdidas
ce metanol.
Los rendimientos alcanzados fueron entre 50 y 80% de conversin a biodiesel con R. oryzae (Figura 5) y entre 5
y 10% para Serratia sp. Las bacterias en general mostraron una alta actividad estenficante.

11

Metanol gaseoso
1 Metano!
Biod(esel

MPL

cipiente con
metano!

::::.'

Agar con nutrientes

Figura 4. Bioreactor trifsico. A) Esquema conceptual del bioreactor trifsico para la produccin de biodiesel y
6) Bioreactor operativo

1)3)

lO)

CO

rlW

8))

80

so

80

80

OD

Oil

60

.80

41

20

20

-- cxks l60es

20 I

180

rO)

A--

a,tt1,Jl1

80

180

120

14)

160

ci
0

30

40

60

80

Id)

130

140

W:

bT80[h]

FIgura 5. Produccin de biodiesel en reactor trifsico con R o,yzae

Por otro lado, para estudiar el efecto de utilizar aceites residuales en mezclas con aceite de raps, se utiliz la
enzima comercial Novozym 435, donde se determin que la adicin de aceite residual incremente el
rendimiento de metitesteres debido a que es un sustrato ms degradado (mayor presencia de cidos grasos
libres y de mono y digliceridos), por lo tanto ms disponible.
La tabla 1 muestra el efecto del medio de cultivo utilizado para la fse slido (agar nutrititvo) del reacto trifsico,
para el caso de las bacterias el medio basal, que es un medio mnimo, fue el que entreg los mejores
resultados. Para el caso el hongo el medio enriquecido fue el que present la mayor conversin a metil esteres

Tabla 1. Efecto del medio de cultivo en la produccin de cidos grasos libres (AGL) y biodiesel para bioreactor
trifsico

Productos
Agar

Medio enriquecido
AGL
Biodiesel

Medio basal
AGL
Biodiesel

I%1

[%J

1.5
0
0.2
1.9
22.7
0.1
0.1

9.5
0
3
0
5
0
0

Bacterias

[%]

Serratiasp.
Myroidessp.
Arthrobactersp.
Baci/lus sp.
P. veronii 547
P. veronii 549
P. Jluorescens 340
Agar

0
0
O
0
0.4
0
0
0
0.7
0
0.2
0
0.2
O
Medio enrigecido
AGL
Biodiesel

AGL

Biodiesel

Hongo

[%]

[%J

1%]

I%1

R. orvzae

32.5

80.0

20.6

49.7

11

PDA

La Tabla 2 muestra un resumen del potencial de las diferentes cepas para ser utilizadas como catalizadores
whole cali. Para comparar el efecto de utilizar metanol gaseoso, se prob la adicin directa de metanol al
bioreactor (lquido-lquido), donde solo se observ un bajo crecimiento celular, sin conversin a metil steres,
demostrando que el uso de metanol gaseoso, pertime tanto sobrevivir al microorganismos como la produccin
de biodiesel.
Con los datos de la caracterizacin del aceite de raps y produccin de biodiesel, se envi un trabajo al VII
Congreso Internacional en Recursos Naturales de Valdivia, al XXIX Congreso Chileno de Microbiologa y al IV
Conreso Chileno de Microbiologa e Higiene de los Alimentos. Con los resultados del screening se present en
el 5 Internacional Symposium of lnteractions of Soil Mineral with Organic Components and Microorganisms
Chile. Con los datos de la inmovilizacin de las bacterias se present un trabajo en The Third International
Meeting on Environmental Biotechnology and Engineering (3IMEBE) y en el 58h Internacional Symposium of
Interactions of Soil Mineral. with Organic Components and Microorganisms Chile. Con el desarrollo del

bioreactor se present en el workshop internacional "bioenergy for a sustainable development: Biofuels:

Challenges in Technologies and Markets", XVII Congreso Chileno de Ingeniera Qumica, XXXI Congreso
Chileno de Microbiologa y en el Simposio Latinoamericano de Investigacin en Algas. Con el uso de aceites
residuales, se present en The Third International Meeting on Environmental Biotechnology and Engineering
(3IMEBE) y en el XVII Congreso Chileno de Ingeniera Qumica. Con los pnncipales resultados de este proyecto
se enviaron dos publicaciones cientficas a la espera de ser aprobadas en la revista Journal of Bloscience and
Bioenglneering.
Tabla 2 potencial de diferentes MPL como catalizadores whole cel del procesop de produccin de biodiesel
Formacin de halo

Cepa

Serrada sp.
Myroides sp.
Arthrobaeter sp.
Bacillussp.
P. veronil 547
P. veronil 549
P. fluorescens 340
R. oryzae

Agar
eitracto
de suelo
+
+
+
+
+

n.a.
n.a.
+

Test de
lipasa
extracelular

Agar tween

Agar
rodamina

+++

++
++

+
+
+

++
++
+++
-

+++

Crecimiento celular
En bioreactor
Lquidolquido
Methanol:
aceite
1:1
++
+
+
+
+

Lquidolquido
Methanol:
aceite
3:1
+
+
+
+
+

Gaslquido
++
-

++
+

+++
-

+++

Biodiese l
Gaslquido

+
+
+
+

reaccin negativa (sin halo, sin crecimiento o sin formacin de biodiesel)

+: reaccin positiva (formacin de halo, crecimiento o formacin de biodiesel)

-:

Referencias
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Szczesna-Antczak, M., Antczak, T., Piotrowicz-Wasiak, M., Rzyska, M., Binkowska, N. and Bielecki, S. (2006)
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Wick, L.Y., de Munain, A.R., Springael, D. and Harms, H. (2002) Responses of Mycobactenum sp LB501T to the
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Bamess, R., Avrahamy, N., Matsuyama, T. and Rosenberg, M. (1988) Increased CelI-Surface Hydrophobicity of
a Serratia-Marcescens Ns-38 Mutant Lacking Wetting Activity. J. Bacteriol 170(9), 4361-4364.

III. PRODUCTOS GENERADOS POR EL PROYECTO

En esta seccin debe incluir todo documento o material cuyo contenido corresponda substancialmente a los
objetivos del proyecto que se informa y en los que se indique el N 2 del proyecto FONDECYT de Postdoctorado.
Atngase a los formatos que se incluyen para cada tipo de producto generado. Adjunte copia de los documentos
no enviados previamente a FON DECYT. Utilice las hojas adicionales que sean necesarias.

1. Artculos en revistas cientficas nacionales o extranjeras con Comit Editorial.

Marque con una "X" lo que corresponda. Para trabajos En Prensa! Aceptados! Enviados adjunte copia de
carta de aceptacin o de envo.

Ttulo (Idioma Original)

Ciudad G., Isaac Reyes, Milko Jorquera, Laura Azcar, Reinaldo Briones, Lukas Y Wick,
Rodrigo Navia
Novel two-phase bioreactor concept for fatty acid alkyl esters production usirtg whole ceil
Catalysts

Nombre Completo de la
Revista.

Articulo enviado a Joumal of Bioscience and Bioengineering. JBIOSC-D-09-00311.

Autor(a)(es/as)

Ref. bIbliogrfica
Estado de la publicacin a
la fecha.
Otras fuentes de
financiamiento, si las hay
Autor(a)(es/as)
Ttulo (Idioma Original)
mbre Completo de la
Revista.
Ref. bibliogrfica
Estado de la publicacin a
la fecha.
Otras fuentes de
financiamiento, si las hay

Ao

Vol.

IN

Publicada

En Prensa

Pginas

11 Aceptada

Enviada

1 1 En
Preparacin
1

Parcialmente financiado por: Proyecto tesis en la industria TPI-16/2008, proyecto FONDEF

D05110391417, FONDECYT de iniciacin 11080159
Laura Azcar, Gustavo Ciudad, Hermann J Heipieper, Robinson Muoz, Rodrigo Navia
lmproving fatty acid alkyl esters production yield iri a lipase-catalyzed process by using
waste frying oils as feedstock
Artculo enviado a Journal of Bioscience and Bioengineering. JBIOSC-S-09-00495.
Ao
Publicada

IN

( Vol.

Aceptada

En Prensa

Ipginas

TEnviada

1 En
Preparacin

1 1

Proyecto tesis en la industria TPI-16j2008, FONDEF D05110391 y proyecto FONDECYF

1090382.

2. Otras publicaciones /productos.

11

3. Presentaciones a -Congresos Nacionales e 1ntenaciona1es. Adjunte copia del res-uinen o teo de la ponencia y de
la fapa del libro de Res timen es, si no la ha enviado previamente.

Autor(a)(es/as)
T1t4

R. Navia, G. (iudad, L. Azcar, R. Briones,

4ioa Original) Pr

Nombre del Congreso

Lugar y Fecha

-biotecwWlgicos en i

.4iod1eseLa p

Ciudad
Antofagasta

Pas

Fecha

Re. bibliogrfica

-Chile
Ao 2009

Autor()(es/as)

R. Navia, G.tiudad, L. Azcar, R. Briones, C. tatril

Nombre del Congreso

Lugar y Fecha

Re. bibliogrfica

Autor(aXesjas)

Vol.

ni-uso4e .p

'9de octubre
IN

sobioteo14gicos.ptr 1 prn4e-biodies!

XXX! Congreso Chileno de Microbiologia

Ciudad

Pas

Fecha

Sata-CTUZ

TAzcar,

L.,Muhoz,R, Ciudad, 1., tatril, t., Navia., T<.

rcdxn 4e .me4ii ste-res n proc.esos ataliz-a4os por .1ipasa -a -brawksg -deJ

uso de aceites residuales

XVII Congreso Chileno de Ingeniera Qumica.
Ciudad
Viia di Mar

Ref. bibliogrfica

Pas
Chile
Ao 2009

Autor()(es/as)

tiudad,.,Reyes,i., Azocar, L.,WdL.,Navia,R.

T1

Test para identificar

Lugar y Fecha

~UWWW Chigin.l)

Nombre del Congreso

Lugar y Fecha

[Ref. bibliogrfica

24-25'de-diciembre

Vol.

Ao 2009

T4t4o -(4dioma Original) -Incremento 4e -la

Nombre del Congreso

4e.aei4es

Simposio Latinoamericano de Investigacin en Algas

T4@a4o 4ionaCgin) Pr

. Betancourt

1 Vol.

Fecha
Octubre 25

IN

rgaxismos on

ividad i

eic-anie para i prodwxin ie

biodieseL
XVII Congreso Chileno de Ingeniera Qumica.
Pas

fCiudad
1 v1fl uCi 1vai
,.

Ao 2009

1 Vol.

- -

fecha

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25

utor()(es/as)

R. Navia, JG. tiudad, L. Azcar, R. Briones & 1. Reyes

Ttu1diotnaiigina1)

Nombre del Congreso

International workshop "bioenergy for a sustainable developrnent: Biofuels: Challenges in

Technologies and Markets"
Pas
Ciudad
Fecha
'Valparaso
124- 25Setember 2009
Ao 2009
Vol.
N

Lugar y Fecha
Ref. bibliogrfica

Autor(a)(esfas)

ncesndiesol.prod

Lugary Fecha

eoii.in Chile.

Ciudad, G., Jorquera, M., Briones, R., Azcar, L., Leal, J., Navia, R

Iii4iom CriginL) 1 reli

Nombre del Congreso

nfromrapeed.andal

atetoctini

The Third International Meeting on Environmental Biotechnology and Engineering (3IMEBE)

Pas

Pas
Espana

LsparLa

Pas
fspana

Ref. bibliogrfica

Ao
2008

Autor(a)(es/as)

Azcar,L,Ciudad,t.,Naria,'R.

Ttulo (Idioma Original)

Determining waste lipids stabiity and possible effects in biodiesel production

Nembredel-Cerese

:Fhe ThirdInternatienal Mecting en Eiwirenmental-BieteehneiogyandEngineei5ng(3MESE)

ugary fecha

Ref. blbliorflca

Autor(a)(es/as)

Vol.

Pas
Espana

AAo

Pas

I Espana
Vol.

LPas
Espana

Ciudad, G., Briones, R, Leal, j., jorquera, i\iL, Azcar, L., Navia, R.

Ttuo.(maCigina1) Oil.contaminated
Nombre del Congreso
Lugary Fecha
Ref. bibhogrfica

151h Internacional Symposium of Interactions of Soil Mineral with Organic Components and
j Microorganisms
1 Pas
Pas
Pas
jChiIe
'Ctule
Cinle
Vol.
Ao
N
t2008

Autor(a)(es/as)

Leal, 1. Ciudad, ti., Azcar, L., Bones, T Navia, R.

T4tu1o(4d4ema4Driginal) lnmozilkacin-de-Rhizopus oyze-utiliando-unmedio-deextraQto4e suelo-para laproduccin

de biodiesel
Nombre del Congreso 15ffi Internacional Symposium of Enteractions of Soil Minera! with Organic Components and
Microorgarnsms
Pas
Pas
Pas
Lugar y Fecha
Illo

Que

Ref. bibliogrfica

AlIo
2008

Autor(a)(es/as)

Azcar,L., tiuiad

T4tulo-(444ema-iginal) T
Nombre del Congreso
Lugar y Fecha
Ref. bIbliogrfica

Autofla)(es/as)
o4l4aigin4
Nombre del Congreso
Lugar y Fecha
Ref. bibliogrfica

ILail

Vol.

N2

.,Vergara, C, Navia, T<.

sesterificacinon NocatL

irn*ica para-la -

diocin4ebio4iesel-de grasa-animal

XXIX Congreso Chileno de Microbiologa y IV Congreso Chileno de Microbiologa e Higiene

de los Alimentos
Pas
Ciudad
Fecha
chdle
VIfa del Mn
3-5 Dici(ffit$,
Ao
VOL
N
2007

Azcar, L., Ciudad,G.,Scheuermann, E.. R. Navia

1Ltilidn -de -gras-as y -aceites

siduale s -corro -aiternatiia sjstentabIe -para J prdicciin -de

biodiesel
VII Congreso Internacional en Recursos Naturales
Pas

Chile
Ao 2007

Ciudad
Valdivia

1 Vol.

Fecha
20-23 Noviembre
N9

14
1

DESTAQUE OTROS LOGROS DEL PROYECTO TALES COMO:

- Estadas de investigacin.
- Actividades de difusin y/o extensin en la temtica del proyecto.
- Cualquier otro logro no contemplado en los tem anteriores y que Ud. quiera destacar.
La extensin mxima de esta seccin es de 1 pgina (letra tamao 10, Anal o Verdana).
1) Pasantas en el extranjero
En el marco de este proyecto se realiz un pasanta de investigacin desde el 18/09/2008 al 01/04/2009 en el
Department of Environmental Microbiology Helmholtz Centre for Environmental Research - UFZ, Leipzig,
Alemania. En la estada se trabaj con el Dr. Lukas Wick en el desarrollo de un reactor whole calI en tres fases,
con adicin de metanol en estado gaseoso. Producto de la estada cientfica se generaron dos publicaciones en
conjunto UFRO-UFZ, las cuales ests sometidas a revisin en la revista Journal of Biosclence and
Bioengineering.
2) DifusIn
a) Workshop
El proyecto fue difundido mediante una exposicin oral en el International Workshop "Bioenergy for a
Sustainable Development" Blotop. Producto de esta presentacin se generaron lazos cientficos con el
"Programa iberoamericano de ciencia y tecnologla para el desarrollo, CYTED", del cual formo parte como
coordinador en la Universidad de La Frontera.
b) EXPLORA
El proyecto ha sido difundido adems en colegios a travs del programa EXPLORA CONICYT en la actividad
"1000 Clentlflcos-1000 Aulas" con la charla "ProduccIn de biocombustibles a travs de
microorganismos".
3) Postgrado
Por otro lado el desarrollo de este proyecto ha permitido que el estudiante de doctorado Isaac Reyes realice una
unidad de investigacin enmarcada en el programa de post grado en Ciencias de recursos Naturales de la
Universidad de La Frontera. Adems, el Alumno del programa de Magister en Ciencias de la Ingeniera
Reinaldo Briones, ha enfocado su tesis en la separacin de las lipasas extracelulares extradas de los
microorganismos encontrados mediante el screening preliminar planteado como actividad en este proyecto
postdoctoral.
Los resultados de este proyectos fueron utilizados para la postulacin al proyecto de consorcio en microalgas

RESUMEN:
Describa en forma precisa y breve el tpico general del proyecto, sus metas y objetivos y los
resultados alcanzados. Utilice un lenguaje apropiado para la comprensin del pblico no
especialista en el tema. Esta informacin podr ser difundida. La extensin mxima de esta
seccin es de 1 pgina (letra tamao 10, Anal o Verdana).
El proyecto postcioctoral FONDECYT 3080021 denominado "Biofilm whole calI bioreactor to produce biodiesel
from rapeseed oil", consisti en la bsqueda de microorganismos capaces de producir lipasas, para ser
directamente utilizados como catalizadores whole ceil en la produccin de biodiesel a partir de aceite de raps.
En este proyecto se consider desde la bsqueda, la inmovilizacin hasta la aplicacin de los microorganismos
en un bioreactor whole calI. Los objetivos especficos planteados en este proyecto fueron los siguientes: 1)
Aislar identificar y seleccionar a microorganismos productores de lipasas, provenientes de ambientes
contaminados con grasa y aceite, 2) Inmovilizar microorganismos en zeolita utilizando reactores airtift y 3)
Disear, construir y operar un reactor whole celI para la produccin de biodiesel.
En este proyecto se encontraron 5 gneros bacterianos (Serratia sp, Arthrobacter sp. Bacillus sp. Myroides sp,
Pseudomonas sp.) y un hongo (Rhizopus o,yzae) de coleccin capases de producir lipasas. Como una manera
optimizar la cantidad de catalizador los microorganismos fueron evaluados de acuerdo a su capacidad de
adhesin en un soporte, donde se determin que Serratia sp, Arthrobacter sp., Bacillus sp. Myroides sp y R.
o,yzae posean una alta hidrofobicidad, y por lo tanto fciles inmovilizar. Los microorganismos fueron
inmovilizados tanto en zeolita como en poliuretano a travs del uso de reactores airlift. Sin embargo, al utilizar
los microorganismos inmovilizados se encontr una alta inhibicin de la enzima por el alcohol inmiscible en el
aceite. Por lo tanto, se concluy que la principal limitante del proceso de produccin enzimtica de biodiesel era
la baja miscibilidad aceite-alcohol.
En conjunto con el Dr. Lukas Wick del Helmholz Centre for Environmental Research UFZ en Leipzig, Alemania,
se desarroll una estrategia para permitir a los microorganismos tanto sobrevivir como producir la enzima
necesaria para producir biodiesel en un ambiente inhspito (alto contenido de alcohol). Para sobrevivir el
microorganismo necesita la presencia de nutnentes, por lo tanto estos se le agregaron a travs de una matriz
slida (agar). Aprovechando la hidrofobicidad (apolaridad) de los microorganismos estudiados estos fueron
mantenidos inmovilizados en el aceite y para evitar el contacto directo del microorganismo con el alcohol, este
fue agregado en estado gaseoso. Utilizando todos estos conceptos se desarroll el bioreactor trifsico
"nutrientes (slido}-aceite (lquido)-metariol (gaseoso)", para la produccin de biodisel utilizando catalizadores
whole cell. Utilizando este concepto de biorreactor se logr entre 50 y 80% de produccin de biodiesel a
temperatura ambiente.

Ban, K., Hama, S., Nishizuka, K., Kaieda, M., Matsumoto, T., Kondo, A., Noda, H. and Fukuda, H. (2002) Repeated use of
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18