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FACULTAD DE PESQUERIA
CURSO
TEMA
MICROBIOLOGIA PESQUERA
PROFESORA
ALUMNO
FECHA DE EJECUCION
CICLO
21-08-12
2012-II
INTRODUCCION
En esta primera prctica de laboratorio lo que se hizo fue observar los diferentes equipos
y materiales que se usaran en las prximas prcticas.
Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de
condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se
han distribuido en una gran diversidad de hbitats incluyendo los de condiciones extremas
sobretodo de tipo fsico y qumico. Para esto se han desarrollado y aplicado diversos
procesos de desinfeccin y esterilizacin para limitar su presencia o eliminarlos, el mtodo
ms usado es la esterilizacin por medio de un equipo llamado autoclave que es un
recipiente de metal con un cierre hermtico y trabaja a alta presin para esterilizar con
vapor de agua los diferentes materiales de laboratorio a utilizar.
A parte de la autoclave existen otros equipos ms que son necesarios para el anlisis
microbiolgico.
Los materiales de laboratorio, especialmente los de vidrio tambin forman parte para
hacer los respectivos experimentos tales como lo tubos de ensayo, pipetas, buretas,
probetas, placas, etc.
Por ltimo se debe mencionar que para entrar y trabajar en el laboratorio se debe estar
correctamente uniformado y protegido, tener las manos limpias y desinfectadas. Los
utensilios de limpieza son muy importantes usarlos antes y despus de realizar las
prcticas de laboratorio.
OBJETIVOS
Conocer los equipos y materiales de laboratorio para hacer buen uso de ellos en
las prcticas siguientes.
EQUIPOS
Autoclave
Aparato para esterilizar mediante calor hmedo medios de
cultivo, material de vidrio, material contaminado antes de
lavarlos.
Estufa de cultivo
Aparato elctrico usado para la incubacin de muestras
microbianas con el fin de tener las condiciones necesarias de
temperatura a las cuales puedan crecer sin ningn problema.
Horno de esterilizacin
Se usa para esterilizar material de vidrio a travs de calor
seco.
Bao mara
Contador de colonias
Es ideal para el conteo de colonias de bacterias en
laboratorios, permite la visualizacin de colonias
bacterianas en un fondo oscuro, debido al sistema de
iluminacin uniforme y brillante que est provisto.
Microscopio
Aparato fundamental en el laboratorio de microbiologa,
permite ampliar la imagen de los microorganismos y los
hace ms visible para el ojo humano.
MATERIALES
Placas Petri, tubos de ensayo, matraces, probetas, pipetas, porta y cubreobjetos, vaso de
precipitados.
Mechero Bunsen
Estos son algunos de los materiales utilizados en el laboratorio, pero tambin hay
peachimetro, centrifuga, balanza, jarras anaerbicas, refrigerador para conservar las
muestras, etc.
CUESTIONARIO
1. Qu es esterilizacin?
La esterilizacin es un proceso a travs del cual se logra la destruccin total de los
microorganismos viables presentes en un determinado material.
Este procedimiento es de gran utilidad dentro de un laboratorio, ya que existen muchos
procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles.
Entre stos podemos destacar:
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc.) que
va a ser utilizado en los laboratorios de microbiologa.
- La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes
propsitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o personal,
anlisis microbiolgico de medicamentos, cosmticos, alimentos, etc.)
- La descontaminacin de material utilizado.
La esterilizacin en diversos campos:
- En laboratorios cientficos es empleado principalmente para eliminar
microorganismos de los elementos de trabajo, evitando as la contaminacin de la
muestra, recipientes y material de trabajo.
- En la industria alimentaria se emplea para aumentar la vida til de los alimentos.
Los alimentos esterilizados ms comunes son los enlatados.
- En los hospitales es empleado principalmente para eliminar agentes patgenos de
los instrumentos quirrgicos reutilizables.
- Los fabricantes de productos sanitarios esterilizan los productos para poder
utilizarlo con asepsia (conjunto de mtodos aplicados para la conservacin de la
esterilidad) en un procedimiento quirrgico o de laboratorio por los profesionales
sanitarios.
-
Agentes fsicos
Calor
Hmedo
Ejm. Vapor a presin (autoclave)
Seco
Ejm. Aire caliente (horno)
Radiaciones
Agentes mecnicos
Filtracin
Agentes qumicos
Gaseosos
xido de etileno
No gaseosos
Aldehdos
Perxido de hidrogeno
Agentes fsicos
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el cual
destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco que
destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El calor es
considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material
a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao. La radiacin, o
emisin y propagacin de la energa a travs de un medio, puede ser utilizada como
agente para la eliminacin de microorganismos. As tenemos que las radiaciones
ionizantes se pueden utilizar para la esterilizacin de materiales termolbiles, como por
ejemplo materiales plsticos, y las radiaciones no ionizantes, como la luz ultravioleta,
puede ser empleada en el control de reas cerradas.
Agentes mecnicos
La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos presentes en un lquido o
un gas retenindolos sobre la superficie de un material.
Agentes qumicos
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen
la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los
componentes celulares de los microorganismos (protenas, membranas,
etc.)
BIBLIOGRAFIA
Laboratorio de microbiologia
CURSO
TEMA
MICROBIOLOGIA PESQUERA
PROFESORA
ALUMNO
FECHA DE EJECUCION
28-08-12
CICLO
2012-II
INTRODUCCION
En esta prctica de laboratorio lo que se realiz fue preparar medios de cultivo para hacer uso de
ellos en las practicas siguientes.
Un mtodo fundamental para estudiar a las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la
superficie de un medio solido de agar. Muchas especies bacterianas son tan parecidas
morfolgicamente que es imposible diferenciarlas solo con el uso del microscopio; en este caso,
para identificar cada tipo de bacteria, se podra estudiar sus caractersticas bioqumicas
sembrndolas en medios de cultivo especiales.
Las exigencias nutritivas de los diferentes microorganismos en general son muy variadas mientras
que unos son capaces de crecer en condiciones ms diversas, otros tienen necesidades mucho
ms especficas, por eso los medios tienen que ser adecuados a la especie microbiana que se
desea cultivar y de acuerdo a los fines que se persigue.
En el presente informe se describen las preparaciones de diversos medios de cultivo realizadas en
la prctica de laboratorio.
OBJETIVOS
El objetivo de la presente prctica es aprender a preparar correctamente los principales
medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de microbiologa.
Conocer los diferentes tipos de cultivo, como se clasifican y su importancia.
MATERIALES
Materiales de vidrio:
Otros materiales
Equipos :
Materiales de limpieza
-Probetas
Esptula
Bao mara
Papel toalla
-Pomos de vidrio
Pizeta
Autoclave
Alcohol
-Tubos de ensayo
Algodn
Mechero Bunsen
Jabn
-Matraz
Papel aluminio
Balanza
-Vaso de precipitados
-Placas Petri
-Bagueta
-Pipetas
PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA
Preparacin de los siguientes medios
a) 100 ml de solucin salina peptonada
i)
Pesar los ingredientes:
Cloruro de sodio 4.25g
ii)
iii)
iv)
v)
Peptona
0.5g
Agua destilada
500ml
Medir el agua destilada en la probeta y poner una parte del agua medida al vaso de
precipitados para evitar que se peguen los ingredientes.
Colocar los ingredientes sobre el agua y agregar el resto de agua medido
Disolver bien con la bagueta y comenzar a pipetear para colocarlos en tubos de ensayo
de 9ml.
Taponar y llevarlo a esterilizar
1.5g
Glucosa
0.3g
15g
Medir el agua destilada en la probeta y poner una parte del agua medida al matraz
para evitar que se peguen los ingredientes.
Colocar los ingredientes sobre el agua y agregar el resto de agua medido.
Cubrir la boca del matraz con papel aluminio y llevarlo a bao mara para disolver el
agar.
Luego del bao mara, llevarlo a esterilizar al autoclave.
CUESTIONARIO
De los siguientes medios de cultivo, presentar: sus ingredientes, forma de preparacin, el o los
microorganismos que pueden crecer en el medio, si es selectivo indicar su agente inhibidor.
1. AGAR MANITOL SALT
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
estafilococos.
Formula
g/L
10.0
d-Manitol
10.0
15.0
0.025
Siembra
Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.
Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a
32 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Bueno
Roja
Inhibido
Inhibido
g/L
Peptona de casena
10.0
Extracto de carne
5.0
5.0
Agar
17.0
Glicina
12.00
Piruvato de sodio
10.0
Incubacin
24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Inhibido
..
Bueno
Bueno a excelente
Formula
g/L
Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
5.0
Lactosa
10.0
8.5
Tiosulfato de sodio
8.5
Citrato frrico
1.0
Agar
13.5
Verde brillante
0.00033
Rojo neutro
0.025
Resultados
Microorganismos
Salmonella typhimurium ATCC
14028
Shigella flexneri
Shigella sonnei
Rosadas a rojas
( g/L)
Peptona de gelatina
5.0
Extracto de levadura
3.0
Glucosa
1.0
Lisina
10.0
Citrato de hierro y amonio 0.5
Tiosulfato de sodio
0.04
Prpura de bromocresol 0.02
Agar
15.0
pH final: 6.7 0.2
Instrucciones
Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos
15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un
minuto hasta la disolucin completa. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la puncin.
Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.
Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
Resultados
Microorganismos
Proteus mirabilis ATCC
43071
Salmonella typhimurium
ATCC 14028
Salmonella enteritidis
ATCC 13076
Providencia spp.
Color en el pico
de flauta
Color en la
base del
tubo
Ennegrecimiento
del medio
Rojo
Amarillo
Negativo
Prpura
Prpura
Positivo
Prpura
Prpura
Positivo
Rojo
Amarillo
Negativo
Citrobacter freundii
Prpura
Amarillo
Positivo
Morganella spp.*
Rojo
Amarillo
Negativo
Edwarsiella spp.
Prpura
Prpura
Positivo
Prpura
Prpura
Negativo
Prpura
Prpura
Negativo
Klebsiella pneumoniae
ATCC 700603
Escherichia coli ATCC
25922
6. CALDO SELENITO
Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de materiales
clnicos, especialmente heces.
Formula
( g/L)
Peptona
Lactosa
Fosfato de sodio
Selenito de sodio
5.0
4.0
10.0
4.0
Crecimiento
Bueno
Bueno
Regular-Escaso
Regular-Escaso
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
7. AGAR BISMUTO SULFITO
Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Salmonella typhi y otros bacilos
entricos.
Ingredientes
cantidad
Extracto de carne
5.0 g.
Digerido pancretico de casena
5.0 g.
Digerido pptico de tejido animal
5.0 g.
Dextrosa
5.0 g.
Fosfato de sodio
4.0 g.
Sulfato ferroso
300.0 mg
Indicador de sulfito de bismuto
8,0 g
Agar
20.0g
Verde brillante
25,0mg
Instrucciones
Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando
Frecuentemente y dejar hervir no ms de 1 a 2 minutos. Evitar el sobrecalentamiento.
Enfriar entre 50C y 55C, mezclar suavemente para que se disperse el precipitado,
colocar 20 mL de medio por cada placa y dejar solidificar.
Este medio no puede ser esterilizado en autoclave por lo que debe utilizarse el mismo da
de su preparacin.
Colonias tpicas
Las colonias tpicas de la Salmonella typhi son marrones o negras, algunas veces con brillo
metlico alrededor de las colonias. Algunas cepas producen colonias verdes con poco o
ningn oscurecimiento.
8. CALDO TETRATIONATO
Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir de
heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Formula
(g/l)
Peptona
5.0
Sales biliares
1.0
Carbonato de calcio 10.0
Tiosulfato de sodio 30.0
pH final: 8.4 0.2
Solucin iodo iodurada
Iodo
6.0
Ioduro de potasio
5.0
Agua
20.0
Instrucciones
Suspender 46 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar vigorosamente y llevar a
ebullicin. Enfriar a 45C o menos. Agregar 20 ml de solucin iodurada. Mezclar y distribuir
10 ml por tubo, en tubos estriles. No debe calentarse luego de agregar la solucin iodada.
El medio base puede mantenerse a 4C, dura varios meses, pero una vez agregada la
solucin iodada debe usarse en el mismo da.
Siembra
Puede realizarse la siembra partiendo de un caldo de pre-enriquecimiento o en forma
directa conservando la proporcin 1:10.
Incubacin
Durante 12-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Salmonella typhi
Escaso
Bueno-excelente
Bueno-excelente
Escaso
Agua destilada
Preparacin
Suspender 37 gr. En agua destilada, agitar y calentar ligeramente en bao de agua mara
hasta disolverlo completamente, distribuir la cantidad requerida en tubos de ensayo y
colocar un tubo Durham dentro de cada tubo, tapar los tubos con algodn o plstico,
autoclavar durante 15 minutos a 15 libras de presin, esperar que la temperatura baje a
75C antes de abrir el autoclave para evitar la formacin de burbujas.
Agente inhibidor: sales biliares inhibiendo el crecimiento de formadora de esporas y
estreptococos fecales.
11. AGAR TIOSULFATO CITRATO BILIS SACAROSA
Ingredientes:
Cantidad (g).
Peptona de casena
5,0
Peptona de carne
5,0
Extracto de levadura
5,0
Citrato sdico
10,0
Tiosulfato sdico
10,0
Bilis de buey, desecada 5,0
Solato sdico
3,0
Sacarosa
20,0
Cloruro sdico
10,0
Citrato de hierro (III)
1,0
Azul de timol
0,04
Azul de bromotimol
0,04
Agar-agar
14,0
Preparacin:
Disolver 88 g/L y verter en placas.
No esterilizar en autoclave
pH: 8,6 +/- 0,2
Las placas con medio de cultivo son claras y de color azul-verdoso.
Agente inhibidor: los citratos contribuyen a llevar el pH a 8.3 e impedir el desarrollo de
otras bacterias.
Microorganismos que crecen en el medio: Vibrio chorelae y vibrios enteropatgenos.
Cantidad (g)
Cloruro de sodio
34.00
20.00
Lactosa
5.00
Fosfato monopotasico
2.75
Fosfato dipotasico
2.75
Lauril sulfato
10
Preparacin:
Suspender 64,6 gramos del medio deshidratado en un litro de agua destilada de. Mezclar
bien, agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Distribuir 10 ml en tubos y
esterilizar y autoclave a 121 C durante 15 minutos. Dejar enfriar y aadir aspticamente
0,1 ml de vancomicina Suplemento (10mg/10ml) a la 10 ml de Lauril sulfato de caldo de
triptosa modificado.
El pH final de 6,8 0,2 a 25 C
Agente inhibidor: Lauril sulfato de sodio a la flora acompaante.
Microorganismos que crecen en el medio: coliformes presentes en aguas residuales y
alimentos.
BIBLIOGRAFIA
http://www.britanialab.com/
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lauril.htm
www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/manitolsalagar.htm