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Escola Tcnica Estadual Juscelino Kubitschek

IMUNOLOGIA

Professor: Fernando Macedo Felcio

ANLISES CLNICAS

Introduo Imunologia

A imunologia aborda todas as reaes (manifestaes celulares e moleculares)


que acontecem quando o organismo invado por substncias estranhas, sejam elas vrus,
bactrias, fungos, etc., ou seja, independe das conseqncias fisiolgicas ou patolgicas.
Essas reaes so chamadas imunolgicas e tem a finalidade de defender e
proteger o organismo contra substncias reconhecidas como estranhas, que so
capazes de causar danos teciduais e doenas em determinadas situaes.
As clulas e molculas responsveis pela imunidade formam o sistema
imunolgico, que trabalha de forma coletiva e coordenada na resposta ao agente agressor
(resposta imunolgica).
A imunologia como qualquer outra cincia se baseia em observaes e
experimentos para explicar fenmenos imunolgicos.
A imunologia comeou a evoluir no momento em que o homem utilizou a sua
habilidade para manipular o sistema imunolgico, como no caso dos chineses que
estimulavam a imunidade das crianas fazendo-as cheirar um p feito de leses cutneas
da pele de pessoas infectadas que estavam recuperando da varola.
A imunologia desenvolveu a partir de estudos de doenas infecciosas e das
respostas do organismo s mesmas.
Em 1546 o contgio foi definido por Girolano Fracastoro, pesquisador da
Universidade de Pdua Itlia, como uma infeco que passa de uma pessoa para outras.
Isso foi importante porque desafiou as crenas da poca.
Dois sculos aps, 1798, outro mdico, Edward Jenner da Inglaterra, observou
uma doena que levava a formao de pstulas em cascos de cavalos e era carreada pelos
trabalhadores das fazendas para os mamilos das vacas e da para os ordenhadores. Os
pontos inflamados apareciam nas mos e pulsos (infeco vaccnia) dos ordenhadores.
Jenner observou que as amas de leite que recuperavam da vaccnia nunca
contraiam a varola humana, que era a doena mais grave. Diante dessa observao,
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Jenner inseriu o material obtido das mos do ordenhadores no brao de um menino atravs
de 2 incises superficiais. 2 meses mais tarde inoculou no mesmo menino material de um
paciente com varola (variolao). O menino desenvolveu apenas uma ferida local. A sua
exposio infeco branda causada pela varola bovina o tinha tornado imune
varola humana.
Dessa forma Jenner iniciou a cincia da imunologia, estudo da resposta do
organismo a substncias estranhas.
Desde os anos 60, a compreenso do sistema imunolgico e das suas funes,
avanos de tcnicas de cultura celular (produo de anticorpos mono clonais,
imunocitoqumica, recombinao de DNA, criao de animais genticamente modificados)
fizeram da imunologia uma disciplina que explica fenmenos imunolgicos atravs de
termos estruturais e bioqumicos.
Marco importante: divulgao da erradicao da varola pelo OMS em 1980,
como a 1 doena a ser erradicada no mundo por um programa de vacinao.

O Sistema Imune

O sistema imune um conjunto de molculas, clulas, tecidos e rgos que os


humanos e outros seres vivos usam para a eliminao de agentes ou molculas
estranhas, incluindo cncer, com o objetivo de se manter a homeostasia do organismo (ou
homeostase, a tendncia existente em alguns organismos para o equilbrio e
conservao de elementos atravs de alguns mecanismos de regulao). Na fisiologia da
resposta Imunolgica o Sistema Imune corresponde a uma resposta coordenada dessas
clulas e molculas diante dos microrganismos infecciosos e outros ativadores, resultando
na ativao de respostas especficas e seletivas, podendo resultar em memria
imunitria, que pode ser mimetizada artificialmente, atravs de vacinas.
Em indivduos imunocomprometidos, ou seja, aqueles que apresentam a resposta
imune funcional ausente ou comprometida, infeces leves podem sobrepujar o hospedeiro
e lev-lo morte. Tanto organismos estranhos, como clulas neoplsicas (cancergenas)
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podem desenvolver mecanismos de driblar e evadir-se da ao do sistema imune


funcional de indivduos imunocompetentes, pois, a resposta imune especfica, diante destes
agressores, no imediata, principalmente em um primo-contato.

Clulas, Tecidos e rgos que participam da Resposta Imune (Resposta


Imunitria)

- As clulas:
Uma variedade de clulas e molculas por elas expressas medeiam as Repostas
Imunes. Clulas tais como os leuccitos desempenham as principais aes, entretanto,
outras clulas, localizadas em tecidos especializados, participam da resposta imune,
enviando sinais e recebendo estmulos dos leuccitos. A origem destas clulas a
medula ssea, onde muitas evoluem para a fase adulta (amadurecimento) e por meio dos
vasos sanguneos, so transportadas com todas as clulas sanguneas, incluindo
hemcias, que transportam oxignio e as plaquetas que participam da coagulao.
Tais clulas que se originam das clulas-tronco progenitora medular, sendo que
as clulas que tm origem dos progenitores Mieloide e Linfoide, so as mais importantes
para a compreenso das aes do sitema imune sem desconsiderar os megacaricitos
(plaquetas) e eritrcitos.
O progenitor Mieloide dar origem aos granulcitos, fagcitos mononucleares
(macrfagos), clulas dendrticas e mastcitos, sendo os macrfagos as clulas fagocitrias
mais importantes. Os macrfagos e outros fagcitos do origem ao Sistema Fagoctico
Mononuclear (S.F.M.) ou Sistema Reticuloendotelial (S.R.E.) quando se diferenciam de
moncitos sanguneos e atravs do processo de transmigrao (ou diapedese) saem
destes vasos e distribuem-se estratgicamente em vrios tecidos passando a ser
denominados macrfagos teciduais. Podemos encontrar vrios macrfagos que so
denominados de acordo com as funes diferenciadas nos diferentes tecidos como, por
exemplo, microglicitos (ou clulas da micrgliacrebro), clulas de Kupffer
(fgado), macrfagos alveolares que fazem parte do tecido pulmonar, e outros macrfagos
residentes presentes em diferentes tecidos, tais como macrfagos sinusais do bao
(polpa vermelha do bao), macrfagos das serosas ( peritnio, pericrdio e pleura), e
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clulas de Langerhans (pele). Os macrfagos tm como principais funes a


neutralizao, ingesto e destruio de partculas, incluindo biopatgenos, alm de
processar e apresentar em sua superfcie eptopos do antgeno para os linfcitos T,
passando a denominar-se A.P.C. (Antigen Presenting Cell). Os eptopos so molculas
especficas dos antgenos capazes de criar uma populao de clulas especficas para
combat-lo) Neste contexto, so as clulas dendrticas as mais especializadas na captura e
apresentao de antgenos para os linfcitos T, atuando assim como uma A.P.C.. As
clulas dendrticas imaturas so amplamente especializadas tanto para a fagocitose quanto
para micropinocitose1. Aps encontrar o antgeno amadurecem rapidamente e migram para
os ndulos linfticos2, encontrando assim um ambiente adequado para a apresentao
do antgeno e ativao da Resposta Imune.
Os granulcitos, possuem grnulos densamente corados, e so tambm
chamados de leuccitos polimorfonucleares (P.M.N.) devido a forma de seus ncleos.
Podemos encontrar 3 tipos de granulcitos: neutrfilos, eosinfilos e basfilos, todos
com o tempo de vida relativamente curto e produzidos em nmero aumentado durante as
respostas inflamatrias.
Dentre estes polimorfonucleares (P.M.N.) os neutrfilos so as principais clulas,
e assim como os macrfagos e clulas dendrticas fazem fagocitose, entretanto,
diferentemente destas clulas no so apresentadoras de antgeno para o linfcito T. Os
neutrfilos so as clulas mais importantes da resposta imune inata.
Os eosinfilos apresentam-se importantes em parasitoses, principalmente,
helmintoses ou processos alrgicos, apresentando na maioria dos casos uma eosinofilia
no curso destas reaes.
J os mastcitos, cuja origem parece ser comum aos basfilos por semelhanas
funcionais, diferenciam-se ao chegarem aos tecidos onde residem margem dos vasos
sanguneos e liberam mediadores qumicos (Exemplo: histamina) que agem nas paredes
vasculares, quando ativados.
A clula progenitora linfoide comum originar os linfcitos, Os linfcitos so
clulas que reconhecem especficamente, os antgenos. Sua forma tpica de uma
pequena clula redonda com ncleo esfrico. Embora quando visualizamos ao microscpio
ptico comum a aparncia destas clulas sejam uniformes, existem vrios tipos de
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linfcitos distintos com base na sua nas suas propriedades funcionais e protenas
especficas que expressam. O que mais os diferenciam consiste na classificao destas
clulas em duas linhagens principais conhecidas como linfcitos B e T.
Os LB tambm chamados de clulas B (de bursa ou Bolsa de Fabrcius nas aves
e derivados da medula ssea, nos mamferos, incluindo o homem) quando ativados,
proliferam e se diferenciam em clulas plasmticas ou plasmcitos que so as clulas
efetoras da linhagem B, cuja a principal funo a secreo de anticorpos.
Os linfcitos T ou clulas T (derivados do Timo) se apresentam sob duas classes
principais. Uma se diferencia, quando ativada, em clulas T CD8+ ou citotxicas, (CD=
Cluster Differentiation) que matam clulas infectadas, por exemplo, por vrus, ao passo
que a outra classe de clulas T, chamadas de clulas T CD4+ ou auxiliares que atuam na
ativao de outras clulas, como os LB e macrfagos (LTCD4+ helper ou auxiliar), alm de
coordenar a resposta imunitria como o LT CD4+ CD25+ supressor.
O Receptor de antgeno da Clula B (BCR) (Figura 2) uma forma de

anticorpo ligado membrana que a clula B passa a produzir, aps a sua ativao e
diferenciao em clulas plasmticas (plasmcitos). Os anticorpos so molculas
agrupadas em uma classe de protenas denominadas imunoglobulinas, e o Receptor de
antgeno do LB (BCR) tambm conhecido como imunoglobulina de membrana. A
Imunidade Humoral mediada pelos LB e plasmcitos e consiste em secretar anticorpos
no sangue e outros lquidos orgnicos, resultando em efeitos protetores, mediados por
lquidos teciduais.

O Receptor de antgeno de clula T (TCR) constitui uma classe heterognea de protenas


de membrana (Figura 1) que, embora estejam evolutivamente relacionadas com as
imunoglobulinas, so diferentes delas j que so adaptadas a detectar antgenos derivados
de protenas (peptdeos) ou patgenos que entram nas clulas hospedeiras (LT CD8+
citotxico). Entretanto, ao contrrio das imunoglobulinas, os TCRs nunca so excretados,
sendo assim o LT precisa migrar at as reas da leso para exercer seus efeitos
protetores, por meio de contato direto com a clula alvo ou influenciar as atividades de
outras clulas do sistema imunitrio. Juntamente com os macrfagos, os LT desenvolvem
uma categoria de resposta imune denominada Imunidade Mediada por Clulas.
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Clula dendrtica fagocitando

Macrfago fagocitando

Ag (bactria)

macrfago

Antgeno
(bactria)
Clula dendrtica

Figura 1
O receptor TCR convencional, ou TCR alfa/beta expresso pela maioria dos linfcitos T e
consiste de duas cadeias polipeptdicas glicosiladas (alfa e beta) mantidas juntas por
ligaes dissulfeto. O TCR alfa/beta por sua vez associado fisicamente a uma protena
chamada CD3, formando o complexo funcional TCR-CD3 na superfcie dos linfcitos T. CD3
um complexo peptdico sendo responsvel pelo sinal de transduo aps o reconhecimento
do Ag pelo TCR.

OBS1: Transduo (sinais que surgem no citoplasma atravs de um estmulo de membrana e


so traduzidos at o ncleo para ativar genes especficos).

OBS2: = psilon, = Delta = gama

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Figura 2

Ativao do LB por antgenos


A ativao dos LB especficos para um Ag inicia-se pela ligao do Ag s molculas
de Imunoglobulina da membrana as quais, em conjunto com as protenas de membrana Ig e
Ig formam o complexo do Receptor de Antgenos de clulas B maduras.

COMPARAO ENTRE BCR E TCR


Clulas B e clulas T reconhecem diferentes substncias como antgenos e
reconhecem de uma forma diferente. A clula B usa a imunoglobulina ligada superfcie
da clula como um receptor e a especificidade deste receptor a mesma da
imunoglobulina que ela capaz de secretar aps a ativao. Clulas B reconhecem os
seguintes antgenos na forma solvel: 1) protenas (ambos determinantes
conformacionais e determinantes expostos pela desnaturao ou protelise); 2) cidos
nucleicos; 3) polissacardeos; 4) alguns lipdios; 5) pequenos agentes qumicos
(haptenos).
Contrariamente, a esmagadora maioria dos antgenos de clulas T so protenas, e
estas precisam ser fragmentadas e reconhecidas em associao com produtos do MHC
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(Major Histocompatibility Complex ou Complexo de Histocompatibilidade Principal


classe I e classe II) expressos na superfcie de clulas nucleadas, no em forma solvel.
Clulas T esto agrupadas funcionalmente de acordo com a classe de molculas de MHC
que se associa com os fragmentos peptdicos da protena: clulas T auxiliares
reconhecem apenas aqueles peptdeos associados com molculas de MHC classe II,
e clulas T citotxicas reconhecem apenas aqueles peptdeos associados com molculas
de MHC classe I.
A maioria dos linfcitos virgens (ou seja, aqueles no expostos ao Ag), possui uma
sobrevida muito curta, sendo programados para morrer, por exemplo por apoptose,
em poucos dias aps ter sado da medula ssea ou timo. Entretanto, caso uma destas
clulas receber sinais indicando a presena de um imungeno (Ag que estimula uma
resposta imune especfica), ela poder por meio de um fenmeno conhecido como
ativao, durante o qual poder sofrer vrios ciclos de diviso celular (proliferao).
Aps este evento algumas das clulas-filhas retornam ao estado de repouso, tornandose clulas T de memria e clulas B de memria, que podem sobreviver por vrios
anos. Estes linfcitos B e T de memria representam uma grande proporo das clulas
do Sistema imunitrio.
A outra prognie de linfcitos virgens ativados diferencia-se em clulas efetoras,
que sobrevivem apenas alguns dias, mas que, durante este perodo desempenham
atividades que resultam em defesa.
Outra classe de clulas linfides, chamadas de clulas matadoras naturais ou
clulas Natural Killer (NK) desprovida de receptores antgeno- especfico, sendo
parte do Sistema Inato. Essas clulas circulam no sangue como grandes linfcitos, com
diferentes grnulos citotxicos, e so capazes de reconhecer e matar algumas clulas
anormais, tais como clulas tumorais e clulas infectadas por vrus e parecem participar
na defesa contra biopatgenos intracelulares na Imunidade Inata.
Glossrio

1-Na Endocitose distinguem-se dois subtipos de acordo com a natureza lquida ou slida
predominante na substncia a ser transportada ao interior da clula. Na predominncia de
lquido, ocorre a Pinocitose, sendo subdividida em Micropinocitose e Macropinocitose, de
acordo com o tamanho e destino da vescula de transporte. Quando h predominncia de slidos,
especialmente de grande volume, ocorre a Fagocitose, podendo atender ao propsito de nutrio,

defesa, remodelao e/ou renovao tecidual. Quando a fagocitose serve reciclagem de


organelas e citoplasma, denominado Autofagia (Exemplo: hemocaterese)

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2- Linfonodos ou ndulos linfticos: rgos linfticos mais numerosos do organismo, cuja funo
a de filtrar a linfa e eliminar corpos estranhos que ela possa conter, como vrus e bactrias. Nele
ocorrem linfcitos, macrfagos e plasmcitos. A proliferao dessas clulas provocada pela
presena de bactrias ou substncias/organismos estranhos determina o aumento do tamanho dos
gnglios, que se tornam dolorosos, formando a ngua.

3- O mastcito uma clula do tecido conjuntivo originado de clulas mesenquimatosas. Contm


no seu interior uma grande quantidade de grnulos cheios de histamina substncia envolvida nos
processos de reaes alrgicas) e heparina (uma substncia anticoagulante). Os grnulos dos
mastcitos so metacromticos (tm a capacidade de mudar a cor de determinados corantes
bsicos) em funo de sua alta concentrao de radicais cidos presentes na heparina. O seu papel
mais conhecido na reao alrgica. Desempenha tambm um papel de proteo, estando
envolvido na cicatrizao e na defesa contra organismos patognicos.O mastcito no pode ser
confundido com os basfilos, pois tm origens diferentes.Tanto o basfilo quanto o mastcito se
originam da medula ssea e suas semelhanas levaram a acreditar que um se diferenciava no outro,
no entanto evidncias experimentais mostraram que seus precursores na medula so diferentes.O
basfilo sai da medula ssea no seu estado maduro e os mastcitos circulam na sua forma imatura,
apenas amadurecendo no tecido de atuao.
OBS1: Sistema linftico: Sistema paralelo ao circulatrio, constitudo por uma vasta rede
de vasos semelhantes s veias (vasos linfticos), que se distribuem por todo o corpo e
recolhem o lquido tissular que no retornou aos capilares sangneos, filtrando-o e
reconduzindo-o circulao sangnea.
constitudo pela linfa, vasos e rgos linfticos.
Os capilares linfticos esto presentes em quase todos os tecidos do corpo. Capilares
mais finos vo se unindo em vasos linfticos maiores, que terminam em dois grandes
dutos principais: o duto torcico (recebe a linfa procedente da parte inferior do corpo, do
lado esquerdo da cabea, do brao esquerdo e de partes do trax) e o duto linftico
(recebe a linfa procedente do lado direito da cabea, do brao direito e de parte do trax),
que desembocam em veias prximas ao corao.
Linfa: lquido que circula pelos vasos linfticos. Sua composio semelhante do
sangue, mas no possui hemcias, apesar de conter glbulos brancos dos quais 99% so
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linfcitos. No sangue os linfcitos representam cerca de 50% do total de glbulos


brancos.
OBS2: Os tecidos linfides so classificados em primrios e secundrios. Os primrios
representam o local onde ocorrem as principais fases de amadurecimento dos linfcitos. O timo e a
medula ssea so tecidos primrios, pois o local onde amadurecem os linfcitos T e B
respectivamente. Os tecidos primrios no formam clulas ativas na resposta imune, formam at o
estgio de pr-linfcitos.
A medula como rgo linfide primrio capaz de formar pr-linfcitos que vem das clulas
totipotentes. O Pr-linfcito no capaz de realizar uma resposta imune, ento se dirige aos rgos
secundrios ( Exemplo: Bao e Timo) para se desenvolver. A clula multipotente mielide e
linfoblastos T iro ao timo para formar linfcitos T.

OBS3: Clulas-tronco so as clulas com capacidade de auto-replicao, isto , com capacidade


de gerar uma cpia idntica a si mesma e com potencial de diferenciar-se em vrios tecidos.
Quanto a sua classificao, podem ser:
- Totipotentes, aquelas clulas que so capazes de diferenciarem-se em todos os 216 tecidos que
formam o corpo humano, incluindo a placenta e anexos embrionrios. As clulas totipotentes so
encontradas nos embries nas primeiras fases de diviso, isto , quando o embrio tem at 16 - 32
clulas, que corresponde a 3 ou 4 dias de vida;
- Pluripotentes ou multipotentes, aquelas clulas capazes de diferenciar-se em quase todos os
tecidos humanos, excluindo a placenta e anexos embrionrios, ou seja, a partir de 32 - 64 clulas,
aproximadamente a partir do 5 dia de vida, fase considerada de blastocisto.
- Oligotentes, aquelas clulas que se diferenciam em poucos tecidos;
- Unipotentes, aquelas clulas que se diferenciam em um nico tecido.

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OBS 4: Resistncia: o conjunto de mecanismos do organismo que servem de defesa


contra a invaso ou multiplicao de agentes infecciosos ou contra efeitos nocivos de seus
produtos txicos e depende da nutrio, da capacidade de reao a estmulos do meio, de
fatores genticos, da sade geral, estresse, ou da imunidade. Resistncia Natural aquela
que independe de anticorpos ou de reao especfica dos organismos e resulta de
fatores anatmicos, fisiolgicos, e outros intrnsecos do hospedeiro; pode ser gentica,
adquirida, permanente ou temporria.

Imunidade: um subtipo de resistncia, especfica, associada presena de


anticorpos que possuem ao especfica sobre o microorganismo responsvel por uma
doena infecciosa ou sobre suas toxinas (OPS/OMS, 92).

Suscetibilidade: medida de fragilidade, a possibilidade de adoecimento por


determinado agente, fator de risco ou conjunto de causas.

rgos linfoides e Rede Linftica

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Os rgos linfoides so tecidos organizados que contem muitos linfcitos em um


ambiente de clulas no linfoides. Nesses rgos, as interaes que os linfcitos tm com
as clulas no linfoides so importantes, tanto para o desenvolvimento dos linfcitos e
incio da resposta imune adaptativa, como para a manuteno dos mesmos. Tais
rgos podem ser divididos em rgos linfoides centrais ou primrios, produtores de
linfcitos, e rgos linfoides perifricos ou secundrios que desempenham a funo de
maximizar o encontro entre os linfcitos e os produtos processados pelas APCs, dando
incio resposta imune. Os rgos linfoides primrios so a medula ssea e o Timo,
sendo este um rgo localizado na poro superior do trax. Tantos os LB quanto os LT tm
origem na medula ssea, mas apenas o LB a se diferenciam. Os LT migram para o Timo
para o seu processo de diferenciao. Uma vez completa sua maturao celular, os dois
tipos linfcitos entram na corrente sanguinea, migrando para os rgos linfoides
perifricos. Durante a vida intrauterina, o fgado fetal desempenha o papel que a medula
ssea desempenhar aps o nascimento.
Os rgos linfoides perifricos tm a funo de capturar o antgeno para
possibilitar o incio das respostas imunes adaptativas. Microorganismos patognicos, por
exemplo, podem penetrar no hospedeiro por muitas portas de entrada, instalando um
processo infeccioso em qualquer local, mas o encontro do Ag com os linfcitos acontecer
nos rgos linfoides perifricos: os ndulos linfticos, o Bao e vrios tecidos

linfoides associados mucosa.


Os linfcitos esto em contnua recirculao entre estes tecidos, para os quais o
Ag tambm carreado, vindo de todos os locais de infeco, primeiramente dentro de
macrfagos e clulas dendrticas maduras. Dentro dos rgos linfoides, clulas
especializadas, como as clulas dendrticas maduras, apresentam o Ag para os linfcitos.
A Rede linftica consiste em um extenso sistema de vasos que coletam o lquido
intersticial, fazendo-o retornar para o sangue. O lquido intersticial produzido
contnuamente pela passagem de gua e solutos de baixo peso molecular atravs das
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paredes vasculares que penetram no espao intersticial, pela secreo celular e outros
fatores de excreo. Ao ser parcialmente drenado para os vasos linfticos, passa a ser
chamado de linfa. A linfa ento flui lentamente pelos vasos linfticos primrios e por fim
desemboca na veia cava superior, que por sua vez, devolve todo o volume para a
corrente sangunea, num processo chamado de recirculao.
Prximos rede vascular, os ndulos linfticos so uma srie de rgos
encapsulados em forma de caroo de feijo que se distribuem ao longo dos vasos
linfticos. Os vasos linfticos aferentes drenam o fluido dos tecidos e carreiam os Ags e
clulas infectadas para os seios dos ndulos linfticos, onde os Ags so capturados e
apresentados aos LB e LT.
O Bao encontra-se situado atrs do estmago e filtra o sangue da mesma forma
como os ndulos linfticos filtra a linfa e coletam Ags. A massa principal deste rgo
composto pela polpa vermelha e os linfcitos circundam as arterolas que penetram o
rgo, formando reas de polpa branca, cuja regio mais interna dividida em uma
camada linfoide periarteriolar, contendo principalmente L T e revestido por uma cora de LB.

Tecidos Linfoides associados mucosa


A expresso tecido linfoide associado mucosa (MALT- Mucosal Associated
Lymphoid Tissue) so tecidos linfoides no capsulados, que existem em regies
subjacentes s mucosas. Os MALTs se distribuem anatmicamente e seus
componentes individuais incluem:
Anel de Waldeyer- Anel de estruturas linfoides que circundam a faringe.
formada pelas tonsilas e adenoides.
Tecido Linfoide associado aos bronquios (BALT- Bronchiol- Associated
Lymphoid Tissue). So agregados linfocitrios semelhantes, mas difusos, que protegem o
epitlio respiratrio.
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Tecido Linfoide associado ao intestino (GALG- Gut- Associated Lymphoid


Tissue). Incluem folculos linfoides isolados e apndice cecal, alm de estruturas
especializadas do intestino delgado, as Placas de Peyer.
Tecido Linftico Urogenital
Os MALTs, ndulos linfticos, Bao e tecidos linfoides demonstram a mesma
arquitetura. Cada um deles operam segundo o mesmo princpio, capturando Ags nos
locais de infeco e apresentando-os a pequenos linfcitos migratrios para, assim
induzirem as repostas imunes adaptativas. Os tecidos linfoides perifricos, tambm
induzem sinais de sobrevivncia aos linfcitos que no encontraram seu Ag
especfico. Isto importante para manter o nmero correto de LB e LT circulantes, e
assegura que somente os linfcitos com potencial de responder ao Ag estranho
sejam mantidos.

Recirculao de Linfcitos

Os pequenos LB e LT que se diferenciam na medula ssea e timo,


respectivamente, mas ainda no se encontraram com o Ag, so chamados de linfcitos
virgens ou em repouso. Estes elementos circulam contnuamente do sangue para os
tecidos linfoides secundrios ou perifricos, nos quais penetram por meio de
interaes adesivas especiais ou no caso do Bao diretamente do sangue. Na presensa
de uma infeco, os linfcitos que reconhecem o Ag so retidos no tecido linfoide, onde
proliferam e se diferenciam em clulas efetoras, capazes de controlar a infeco.
Quando ocorre uma infeco tecidual, os Ags so capturados por clulas
dendrticas que se deslocam do stio da infeco pelos vasos linfticos aferentes para os
ndulos linfticos. Nos ndulos linfticos essas clulas Apresentam o Ag aos L T que esto
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recirculando os quais as clulas dendrticas ajudam a ativa-los. Os LB que encontram o Ag,


a medida que migram atravs do ndulo linftico, tambm so detidos e ativados com
auxlio de alguns LT ativados. Uma vez que estes linfcitos especficos tenha passado
por um perodo de proliferao e diferenciao, eles deixam os ndulos linfticos como
clulas efetoras atravs dos vasos linfticos eferentes.

Linfcito T: Desenvolvimento, Diversidade e Ativao


Os linfcitos so as nicas clulas do organismo que expressam receptores
altamente diversificado para o antgeno, o que permite o reconhecimento de uma grande
variedade de substncias estranhas. Esta diversidade gerada durante o processo de
desenvolvimento dos LT e LB, a partir de clulas precursoras. O desenvolvimento dos
linfcitos T (- alfa-beta) e LT (- gama delta) segue estgios sequenciais, consistindo
na recombinao somtica e expresso de genes TCR, proliferao induzida pelo Ag
e aquisio de fentipos de capacidade funcional. Essas clulas se originam de
precursores do fgado fetal ou da medula ssea de adultos e completam o seu
desenvolvimento no TIMO. As clulas T em desenvolvimento no TIMO so chamadas de
timcitos. Inicialmente, as clulas gama-delta, como as alfa-beta, no expressam os coreceptores CD4 ou CD8, e portanto so denominadas timcitos duplo-negativas e migram
para o crtex, onde eventos de maturao ocorrem quando expressam pela primeira vez
o TCR e iniciam a maturao em clulas CD4+ ou CD8+. Mais adiante no processo de
desenvolvimento, estas clulas podem sofrer apoptose, e as clulas T alfa-beta que
sobrevivem se tornam duplo-positivas (CD4+CD8+), perfazendo a maioria dos timcitos.
Seu TCR sofre rearranjo gnico, e subseqentemente a interao deste TCR com o MHC,
expresso por clulas apresentadoras de antgenos no estroma tmico, medeia a seleo
que determinar a maturao destes timcitos em clulas T CD4+ ou clulas T CD8+. No
entanto, a maioria das clulas T gama-delta permanecem duplo-negativas.

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Os nveis de proliferao e apoptose so extremamente altos nos timcitos


corticais, onde cerca de 95% morrem antes de chegar regio medular do TIMO. O
resultado deste processo seletivo vem da restrio do MHC prprio e tolerncia a muito
autoantgenos. A diferenciao funcional e fenotpica em clulas T CD4+ e CD8+ ocorre
na medula tmica, e as clulas T so liberadas para a circulao.

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Receptores de Antgenos e molculas acessrias dos LT


Os LT respondem aos antgenos peptdicos, que so expostos pelas clulas
apresentadoras de antgenos (APCs). O incio desta resposta requer o reconhecimento
especfico do Ag pelos LT, a adeso estvel dos LT s APCs e a transduo de sinais
ativadores.
Cada um destes eventos mediado por molculas diferentes, expressas pelos
LT. As molculas de MHC e os peptdeos formam um complexo na membrana plasmtica
das APCs. O receptor que reconhece esse complexo peptdeo-MHC o TCR (Figura 37) que distribudo em clones de linfcitos que apresentam diferentes especificidades com
TCRs diferentes. Os sinais bioqumicos acionados no LT pelo reconhecimento do Ag, no
so traduzidos pelo TCR, mas por protenas no variveis chamadas CD3 e (Zeta) que
est ligado ao TCR para formar o complexo TCR. Portanto, nos LT o reconhecimento do Ag
basicamente realizado por dois grupos de molculas: um receptor para Ag altamente
varivel, o TCR, e protenas sinalizadoras no variveis CD3 e cadeia (Zeta) .
O LT que expressam o TCR LT (- gama delta) pertecem a uma linhagem distinta
dos LT restritos ao MHC. Eles no reconhecem os antgenos peptdicos associados s
molculas do MHC e no so restritas ao MHC. Esses LT correspondem a
aproximadamente 5% do total de LT. Alguns clones destes LT reconhecem uma pequena
molcula que pode ser apresentada por molculas similares s da classe I do MHC, ou
seja, uma apresentao no clssica de molculas normalmente encontrada nas
micobactrias e outros microorgansmos. A diversidade limitada destes LT (- gama
delta) sugere que ligantes destes receptores so bem conservados. Elas podem iniciar a
Resposta Imune contra um pequeno nmero de microorganismos antes mesmo do
reconhecimento do LT antgeno especfico (- alfa-beta).

22

Alm dos componentes do complexo TCR, os LT apresentam protenas de


membrana, cujo papel crucial na resposta destas clulas no reconhecimento do Ag. Tais
molculas ligam-se especficamente a outras molculas de membrana de outras clulas,
como as APCs, clulas do endotlio dos vasos e da matriz extracelular. Tais molculas
no apresentam regies vaiveis, no so polimrficas sendo IDNTICAS EM TODOS OS
LT DE TODOS OS INDIVDUOS DE UMA MESMA ESPCIE, E SO RESPONSVEIS
PELA TRANSDUO DE SINAIS BIOQUMICOS PARA O INTERIOR DO L T. Esta
propriedade assegura que os LT e as APCs permaneam ligados o tempo suficiente para
permitir aos TCRs a oportunidade de localizar, reconhecer e responder ao complexo
peptdeo-MHC na APC.

Correceptores CD4 e CD8 = Receptores envolvidos na ativao


As molculas CD4 e CD8 so protenas dos LT que ligam-se s regies no
polimrficas ( constantes) das molculas de MHC e traduzem os sinais que, juntamente
com os sinais expressos pelo complexo TCR-Peptdeo, iniciam a ativao dos LT.
Normalmente, os LT (- alfa-beta) maduros expressam CD4 ou CD8, embora existam
referncias da expresso de ambos os marcadores. Esses marcadores interagem com as
molculas de MHC, quando o TCR reconhece de forma especfica o complexo peptdeoMHC na APC. Cerca de 65% dos LT (- alfa-beta) expressam o correceptor CD4 e 35% do CD8.

23

Figura 3-7

1- NATUREZA DO ANTGENOS
O Antgeno (do grego anti=contra e gen= gerar) qualquer substncia, celular
ou particulada que pode ser especficamente ligada ao Ac ou por receptor de Ag de LT
24

(TCR). Os antgenos possuem duas propriedades: imunogenicidade que a capacidade


de induzir a resposta Imune Especfica e Antigenicidade que a capacidade de reagir
com os produtos desta Resposta Imune Especfica, como os LT ou LB j sensibilizados.
As molculas que desencadeiam a Resposta Imune so chamadas de imungenos.
Pequenas substncias qumicas que NO so capazes de estimular uma Resposta Imune
recebem o nome de haptenos. Para ter capacidade de induzir uma Resposta Imune
(IMUNOGENICIDADE), o hapteno ligado a uma molcula carreadora. O complexo
hapteno-carreador, ao contrrio do hapteno livre, pode atuar como um imungeno, ou
seja, tm as duas propriedades fundamentais: IMUNOGENICIDADE E ANTIGENICIDADE.
1.1-

Determinante antignico

O local de ligao dos anticorpos e dos TCRs interage com uma rea muito
pequena das macromolculas antignicas que chamada de Determinante Antignico ou
Eptopo. Portanto este a menor poro da molcula responsvel pela ligao ao
linfcito ou anticorpo. A presena de vrios determinantes antignicos ou eptopos iguais
chamada de polivalncia ou multivalncia e cada um determinante antignico pode ser
ligado por uma molcula com regio varivel (Ex: Ac ou TCR). As superfcies celulares,
incluindo os microorgansmos, geralmente possuem uma grande quantidade de
Determinantes antignicos (ou Eptopos).

1.2-

Relao Filogentica dos Antgenos

A estimulao de linfcitos de galinhas com protenas (Ags) de pato resulta em


uma resposta imune muito baixa. Por outro lado, se inoculadas em galinhas protenas
(Ags) de coelho a Resposta Imune bastante elevada. Isto acontece porque quanto mais
prximas for a relao filogentica menor ser o estmulo e vice-versa. Existe pouca
diferena entre protenas de aves e

muita diferena entre protenas de aves e

mamferos, entretanto nem todos estes conceitos podem ser tomados como regra, porque
a induo de uma Reposta Imune especfica funo direta da semelhana biolgica entre
a fonte do antgeno e o animal receptor. Lebres e coelhos petencem mesma Famlia e
25

so bastantes semelhantes, tanto morfolgicamente quanto fisiolgiacamente, Portanto se


injetarmos protenas (Ag) de coelho em lebre, poder se obter anticorpos MUITO
ESPECFICOS, ou seja, anticorpos que s interagem contra a protena ( Ag) do coelho.
1.3-

Peso Molecular e Complexidade Molecular

Na maioria dos Antgenos, quanto maior for a molcula, maior ser o nmero
de eptopos, e quanto maior a complexidade destes antgenos maior ser a
imunogenicidade. Um antgeno complexo contm vrios determinantes antignicos
(ou eptopos), onde alguns dos quais so eficientes na induo da Resposta Imune e
so chamados de determinantes antignicos imunodominantes.
1.4-

Configurao Espacial e Acessibilidade

As propriedades de Imunogenicidade e Antigenicidade de uma protena (Ag)


no depende apenas de sua estrutura primria (isto , a sequncias dos aminocidos),
mas tambm das estruturas secundrias, tercirias e quaternrias. Assim, se tratarmos
uma protena (Ag) pelo calor, ou agentes qumicos desnaturantes, e inocularmos esta
protena modificada (Ag) em um animal, poderemos obter a formao de Anticorpos com
especificidade diferente do que se inocularmos a protena intacta, ou seja, a
configurao espacial de diversos eptopos em uma nica molcula de protena (Ag)
pode influenciar a ligao do anticorpo de vrias formas. A rea importante para a
Imunogenicidade deve ficar acessvel, na superfcie da molcula.
1.5-

Forma de Administrao e Adjuvantes

A dose do antgeno, e a via e esquema de imunizao, assim como o uso de


adjuvantes, so fatores fundamentais na Induo da Resposta Imune. As vias de
inoculao

subcutnea,

imungenos

para

os

intradrmica

ndulos

(ou

ou

intramuscular

linfonodos)

levam

linfticos

geralmente

regionais

e,

os
mais

frequentemente, induzem uma Resposta Imune Celular. J os antgenos inoculados por


via endovenosa e intraperitonial acumula-se predominantemente no BAO, e mais
26

frequentemente induzem uma Resposta Imune Humoral. O adjuvante melhora a


imunogenicidade de compostos com ele misturados, sem interferir na especificidade
da resposta. Em medicina preventiva, so muitas vezes adicionados s vacinas os
adjuvantes para reduzir a dose e a frequncia de injees de antgenos utilizados na
imunoprofilaxia de doenas infecciosas. Normalmente, o antgeno aprisionado pelo
adjuvante, formanto depsitos, o qual liberado aos poucos por um perodo de tempo
extenso. Com isso, h o aumento do tempo de exposio do antgeno no organsmo pelo
retardamento de sua destruio, estimulando assim, a migrao de clulas para o local
de inoculao e aumentando a interao destas clulas com o antgeno. O tipo de
adjuvante mais utilizado em estudos experimentais o adjuvante de Freund, que pode ser
classificado em dois tipos: AIF ( Adjuvante Incompleto de Freund), que constitudo por
leo mineral neutro e lanolina (emulsificador-emulso=substncia coloidal na qual tanto a
substncia dispersa quanto a dispersora so lquidas) ou Arlacel (controla a viscosidade
do preparado) e o ACF (Adjuvante Completo de Freund), que alm de leo mineral
neutro, mais lanolina, adicionado um componente bacteriano, normalmente o
Mycobacterium, mortos pelo calor. Alm destes, outros adjuvantes so utilizados, como o
sulfato de alumnio, hidrxido de alumnio, IL-12 entre outros. Dependendo da
composio, os adjuvantes podem seu utilizados em humanos os (AIF e ACF) no so
indicados para humanos por causar uma intensa reao inflamatria, j os mais
indicados so os sais de alumnio.
1.6-

Bases Qumicas da Especificidade Antignica

Anticorpos formados contra determinadas substncias tm uma reao forte


contra elas, principalmente se os anticorpos interagem com antgenos Especficos que
induziram a sua formao (Antgenos Homlogos), mas, podem reagir com a mesma ou
menor intensidade com outros antgenos que so chamados de Antgenos Heterlogos,
que possuem estrutura semelhante. Essas reaes de anticorpos com Antgenos
Heterlogos so chamadas REAOES CRUZADAS. Estas reaes cruzadas podem
ocorrer basicamente em funo da similaridade entre os dois diferentes determinates
antignicos (eptopos), ou ainda pelo fato de dois antgenos diferentes apresentarem O
MESMO determinante antignico (EPTOPO).
27

28

1 DIVERSIDADE DA IMUNOGLOBULINAS

Os Anticorpos so glicoprotenas globolares com funo imunitria e pertencem


a uma superfamlia das Imunoglobulinas. So sintetizados pelos LB e, principalmente, por
plasmcitos, em resposta ao estmulo antignico. Interagem Especficamente, com os
imungenos que estimularam a sua biossntese, desencadeiam vrios mecanismos na
fase efetora da resposta imune que, frequentemente resultam em anular a ao de
biopatgenos, por meio do Sistema Complemento, opsonizao dos antgenos para
facilitar a fagocitose, Citotoxicidade Celular Dependente de Anticorpo (A.D.C.C.), em
que os anticorpos marcam o microorgansmo para serem destrudos pelas clulas do
Sistema Imune Inato e reaes de hipersensibilidade, etc..
Opsonizao em imunologia, o processo que facilita a ao do sistema
imunolgico

por

fixar opsoninas ou

fragmentos

do

complemento

na

superfcie bacteriana, permitindo a fagocitose. Opson uma palavra grega que significa
condimento, tempero, molho, ou seja, algo que facilite a digesto. Uma das mais
importantes opsoninas provm do complemento: a C3b do sistema Complemento.
Uma opsonina uma molcula que age como facilitadora de ligao no processo
de fagocitose. So cofatores que revestem os microrganismos e aumentam a
capacidade de englobamento por parte dos fagcitos, como os neutrfilos e
macrfagos. Algumas opsoninas que podem se destacar so os anticorpos, protenas
do complemento e lectinas. Um exemplo pode ser dado quando estas molculas cobrem
as molculas na membrana celular carregadas negativamente.
Estas funes so estruturalmente separadas na molcula do anticorpo e a regio
de ligao ao antgeno (Fab) varia amplamente, sendo conhecida como Regio Varivel
(V). A regio molecular que participa da funo efetora conhecida como regio Constante

29

(C) e no varia do mesmo modo, embora apresente cinco formas principais que se
especializaram na ativao de diferentes mecansmos.
A notvel diversidade das molculas dos anticorpos consequencia de um
mecansmo altamente especializado, pelos quais os genes expressos so reunidos por
rearranjos de DNA, que juntam dois ou 3 diferentes segmentos para formar um gene
de Regio Varivel durante o desenvolvimento do LB. Subsequentes rearranjos
nucleicos podem reunir o gene composto da regio varivel a qualquer gene da regio
constante produzindo anticorpos de cada um dos 5 isotipos (IgM. IgG, IgA, IgE e IgD)
Estruturalmente (Figura A) a imunoglobulina formada por duas cadeias leves (Llight-leve), IDNTICAS constitudas por polipeptdeos de cerca de 25.000 Daltons e duas
cadeias pesadas (H-heavy-pesada), TAMBM IDNTICAS, (50.000 Daltons ou mais).
Cada cadeia leve est ligada a uma cadeia pesada pos pontes dissulfdricas. O nmero
exato e as posies destas pontes entre as cadeias diferem entre as classes e subclasses
de imunoglobulinas. Alm disso, ambas as cadeias, leves e pesadas, possuem uma Regio
Varivel e outra Constante. Portanto, a Imunoglobulina possui na cadeia leve uma
Regio Constante (CL) e uma Regio Varivel (VH). Exitem dois tipos de cadeias leves a
Kappa () e a Lambda (). Em humanos 60% das cadeias leves so do tipo Kappa, e 40%
so do tipo Lambda.
Os primeiros 110, ou mais, aminocidos da regio aminoterminal das cadeias
leves ou pesadas variam muito entre os anticorpos de especificidade diferentes e por
isso so chamadas Regies Variveis.
A molcula de Imunoglobulinas podem ser digeridas por enzimas proteolticas, A
digesto pela papana quebra a molcula em 3 fragmentos (Figura B): dois fragmentos Fab
(Fragment antigen binding)

que se liga ao antgeno especfico e um fragmento Fc

(Fragment crystallizable), fragmento cristalizavel por formar cristais em locais frios.


Os fragmentos Fab so os que contem as cadeias leves (L) completos, emparelhados com
os domnios V (varivel) e C (constante) da cadeia pesada e enquanto o Fc, contem
apenas o domnio constante (C). A papana cliva a molcula na poro aminoterminal
30

das pontes de enxofre, permitindo que as metades carboxiterminais da Fc permaneam


unidas, deixando a Fc livre. J a Pepsina, cliva na mesma regio, mas na poro
carboxiterminal das pontes de dissulfdrica produzindo (Fab)2 onde os dois braos do
anticorpo permanecem unidos.

31

Figura A

32

FiguraB

33

34

1.1-

GERAO

DA

DIVERSIDADE

NA

RESPOSTA

IMUNE

HUMORAL

MATURAO DA AFINIDADE

Afinidade

Medida da fora de ligao entre um stio de combinao de


anticorpo e um determinante antignico. calculado atravs da lei
de ao das massas e expressa em litros de mol.

Avidez

Termo confuso usado por alguns para descrever uma propriedade


do anticorpo que determina a velocidade com que ele reage com o
antgeno, mas usado por outros para se referir fora de
combinao de um antgeno.

Mesmo a resposta a um antgeno simples diversa, com muitas molculas de


Imunoglobulinas (Ig), cada uma com uma afinidade nica e especificidade acurada.
Durante a organizao dos diferentes segmentos genticos necessrios para produzir uma
molcula de Imunoglobulina, combinaes ao acaso (randmica) dos diferentes
componentes gnicos produzem uma enorme diversidade potencial.
Durante as fases iniciais do desenvolvimento do LB, a IgM de membrana
produzida como um receptor (BCR). A mudana de isotipo no LB ocorre ao ser estimulado
pelo Ag. Isto assegura a manuteno da mesma regio varivel, garantindo a
especificidade ao Ag correspondente, expressa nos diferentes isotipos, aos quais
orientam diferentes funes efetoras.
Uma diferena bsica entre o anticorpo nas respostas primria e secundria a
sua afinidade. O anticorpo da classe IgM, produzido para um Ag na resposta primria,
tende a ser de afinidade relativamente baixa e pode contar com uma avidez adicional, por
sua estrutura pentamrica, para ligar-se eficientemente ao Ag.
Entretanto, a IgG e outras classes produzidas na resposta secundria tendem a
ter afinidade maior. Vale ressaltar que o aumento gradual da afinidade do Ac pelo Ag
indutor, que observado no curso de uma resposta ACONTECE NO NDULO
LINFTICO. Este fenmeno ( maturao da afinidade) consequencia da hipermutao
somtica dos genes da Imunoglobulina ligada com a seleo dos L B com a imunoglobulina
de superfcie de alta afinidade.
35

A maturao da afinidade no curso de uma resposta imune, pode ser encarada


como um processo darwinismo, requerendo primeiro a gerao de variabilidade nos
receptores de LB e a seleo daquelas Imunoglobulinas com maior afinidade pelo Ag.
Aps esse processo os LB, que se ligam ao Ag de modo bem-sucedido e sobrevivem
seleo, saem do centro germinativo no ndulo linftico para tornarem-se LB de memria
ou plamcitos secretores de Ac.
1.2-

DISTRIBUIO E PROPRIEDADE DOS ISOTIPOS


Os agentes infectoparasitrios devem achar seus caminhos para a maior parte dos

locais do organismo hospedeiro e os Acs tambm devem ser amplamante distribudos


para cont-los. Os Acs so distribudos por difuso atravs de mecanismos especiais, para
lev-los, por exemplo, aos pulmes e intestino. Anticorpos de diferentes isotipo (Figura C)
operam em locais diferentes. Os primeiros Acs a serem produzidos numa Resposta
Imune Humoral so sempre as IgMs.Estes so produzidos antes que o LB tenha sofrido
hipermutao somtica, portanto, tendem a baixa afinidade. Estas molculas de Ac
formam pentmeros, cujos 10 stios de ligao com o Ag pode liga-se simultaneamente
a Ags multivalentes, tais como polissacardeos de parede celular bacteriana. Esta estrutura
pentamrica tambm torna a IgM capaz de ativar o Sistema Complemento de maneira
mais eficaz, o que contribui para o controle mais eficiente de uma infeco. Quanto IgD
no se conhece muito a sua funo, mas, parece exercer um papel na diferenciao dos LB
induzida pelo Ag. O principal isotipo de imunoglobulina NO SANGUE e fluidos
extracelulares a IgG considerando todas suas subclasses ( IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4). A
IgG tem propriedades diversas, dentre as quais, confere proteo ao feto, pois, a NICA
classe de imunoglobulina humana que pode ser transportada diretamente para a corrente
circulatria do feto. A IgG tambm atua na neutralizao de toxinas, imobilizao de
bactrias, sensibilizao de NK, ativao do Sistema Complemento e opsonizao.
A IgA a principal Imunoglobulina presentes em secrees externas, como
saliva, muco, suor, suco gstrico e lgrimas. Alm disso a principal Imunoglobulina
contida no colostro e leite, e deve ser no neonato a principal fonte de proteo contra
patgenos no intestino. A IgA se divide em duas subclasses IgA1 e IgA2. A IgA presente
36

NO

PLASMA

ENCONTRADA NA FORMA MONOMRICA

em

pequenas

concentraes, enquanto a forma DIMRICA encontrada em grandes concentraes


nas mucosas do organismo. A IgA previne a invaso de bactrias ou a penetrao de
toxinas nas clulas epiteliais. A IgE est difundida de maneira moderada nos espaos
extravasculares e tem como principal funo a sensibilizao de mastcitos e basfilos
promovendo reao inflamatria, atravs da liberao de mediadores qumicos como a
histamina que por sua vez, promove vasodilatao inicial, permitindo a passagem de Acs
do vaso para a rea lesada, e fatores quimioatraentes que recrutam fagcitos para o
local da infeco. Alm disso podem estar envolvidos em processos alrgicos e na ajuda
para a eliminao de helmintos quando sensibilizam eosinfilos.

Figura C

37

Sistema Complemento
O nome complemento foi originado a partir da atividade complementar de
protenas na ao bactericida de alguns de alguns anticorpos.
O Sistema complemento um complexo proteico no plasma sob a forma inativa,
constitudas por substncias termolbeis e/ou termoestveis; e que tem como funo a
eliminao de um agente estranho pela ativao de mecanismos inespecficos, que se
constitui de:
1- Fagocitose: quando algumas protenas do complemento unem-se
bacteria, opsonizando-a para a ingesto pelos fagcitos (por exemplo
neutrfilos e macrfagos) portadores de receptores do complemento.
2- Reao

Inflamatria:

quando

pequenos

fragmentos

terminais

do

complemento lesam certas bactrias, vrus e clulas com a formao de


poros na membrana celular.
Alm destas trs funes o Sistema complemento tambm responsvel pela
depurao imune, que consiste na remoo de complexos imunes (Ag-Ac) da
circulao no fgado e bao. Este sistema, com cerca de 30 protenas ou mais,
interage por ativao enzimtica. O Complemento pode agir sozinho ou com o
Ac e so conhecidas trs vias: a clssica (dependente de Ac), a alternativa (
independente de Ac) e a via das lectinas (independente de Ac). A via clssica
ativada por complexos imunes, enquanto as vias alternativas e das lectinas so
ativadas por microorganismos. Todas as vias de ativao convergem para uma
etapa final de uma reao em cadeia denominada Sequencia em Comum:
Rees aps clivagem do C5: * Formao do MAC (Complexo de Ataque
Membrana- Membrane Attack Complex) e * protenas C5, C6, C7, C8 e C9.

38

No processo de ativao que envolve uma srie etapas proteolticas, uma


protena precursora inativa clivada (quebrada) para fornecer um grande
fragmento ativo; esta se une superfcie celular e contribui para a prxima
clivagem; e um pequeno fragmento peptdico que liberado serve como
mediador da Resposta Inflamatria. Cada uma das trs vias de ativao gera
uma convertase de C3 por um caminho diferente, determinando que as
principais molculas efetoras e os eventos tardios sejam os mesmos para as
trs vias. importante lembrar que a ativao inadequada e a persistncia dos
efeitos inflamatrios so potencialmente prejudiciais ao organsmo, de modo
que a sua regulao deve ser bem rigorosa. E uma maneira de controle se
resume ao pouqussimo tempo que os componentes-chaves pemanecem
ATIVOS (milsimos de segundos), a menos que liguem-se a uma superfcie
celular. Alm da curta vida-mdia dos fragmentos do complemento, existem
protenas reguladoras, em que a ativao inadivertida do complemento sobre
clulas do hospedeiro pode ser evitada.
Quanto nomenclatura, todos os componentes da via clssica so
designados pela letra C, seguido por uma designao numrica simples: C1, C2
etc. Os componentes do sistema complemento foram numerados de acordo com a
ordem de DESCOBERTA no segundo a SEQUNCIA DA REAO (C1, 4, 2, 3,
5, 6, 7, 8, e 9). Quanto aos produtos de clivagem so designados por letras
minsculas, onde o fragmento maior recebe a letra b (exceto o fragmento C2,
que recebe a letra a) e o fragmento menor, recebe a letra a. Os componentes
iniciais da via alternativa, em vez de serem numerados, so indicados por
letras maisculas B e D, e seus produtos de clivagem tambm so designados
pelas letras b e a, onde o maior fragmento de clivagem Bb e o menor, Ba.
Quanto aos componentes ativados recebem uma linha horizontal superior, por
exemplo Bb.

1.1 Ativao da Via Clssica


39

Esta via ativada pelo complexo Ag-Ac entretanto vrias outras substncias, tais
como os complexos da protena C-reativa (PCR), determinados vrus e bactrias Gramnegativas, tambm podem ativar esta via.
O Componente C1 um complexo formado por 3 protenas C1q, C1r, C1s. Uma
vez formado o complexo Ag-Ac, o componente C1q se liga na regio Fc do Ac, dando
incio a uma reao em cascata, onde C1q ativa duas molculas de C1r capazes de se
ligar a outras duas de C1s, resultando no complexo (C1q-C1s-C1r-C1r-C1s) que uma
serina protease. Desta forma, C1s atua em C4 e C2, dissociando em C4a e C4b, C2a e
C2b. Nesta etapa, a unio de C4b e C2b forma a C3 convertase. Aps a formao da C3
convertase (C4bC2b), na literatura podemos ver como 2a, esta cliva (quebra) C3 em
C3a e C3b. O C3 a frao mais abundnte no plasma e o mais importante entre os
componentes do Complemento, pois, inmeras molculas de C3b podem ligar-se
superfcie de um patgeno. Alguns fragmentos C3b se ligam a receptores da
membrana do patgeno (Ag) e atuam como opsoninas, facilitando a fagocitose, outros
fragmentos C3b se ligam C3 convertase (C4bC2b),

originando a C5 convertase

(C4bC2bC3b) da via clssica que vai atuar em C5 dissociando-o em C5a e c5b. Com a
dissociao de C5, inicia-se a etapa em comum a todas as vias de ativao (via
clssica, via alternativa e via das lectinas) do complemento, onde a frao C5b interage
com C6, que abre um stio de ligao para C7. Por sua vez, o complexo C5bC6bC7b
deposita-se na superfcie da membrana do Ag e abre o stio de ligao para C8, que
penetra na membrana da clula. O C8 ento, abre um stio para C9 que aps a ligao

de vrios C9, forma um canal transmembrnico ou poro hidroflico, chamado de


Complexo de Ataque Membrana (MAC- Membrane Attack Complex), ocasionando a
lise celular e desequilbrio osmtico. importante ressaltar que no curso da cascata do
Sistema Complemento, os fragmentos menores C4a, C2a, C3a e C5a liberados no
interstcio, so potentes mediadores inflamatrios.

40

Via Clssica

Eptopos reconhecidos

Imunoglobulina (Ac)

41

membrana

Complexo C5 convertase (C4bC2bC3b)


gua
Lisozima

Potssio,

lise de membrana

ATP
aminocidos

42

Ativao da Via Clssica


Complexo Ag-Ac
C1 (C1qC1rC1s)
C1q ativa 2 molculas C1r
que se liga a duas molculas de C1s

C1q-C1s-C1r-C1r-C1s (serina protease)


C1s
C4 e C2

Mediador inflamatrio

C4aC4b

Mediador inflamatrio

C2aC2b
C3 convertase (C4bC2b)
C3

Mediador inflamatrio

C3a

opsoninas
C3b
Liga-se

C3 convertase (C4bC2b) (C4bC2bC3b) = C5 convertase


Mediador inflamatrio

C5
C5a

C5b
(Etapa em Comum)
C5b

(Stio de ligao membrana para C7) C6

C6a C6b
C7
C7a

C7b

Complexo (membrana) (C5bC6bC7b)


43

Deposita-se na superfcie da membrana do Ag e abre o stio de ligao para C8


C8 (penetra na membrana do Ag e abre um poro para C9)
Continuao:

Vrios C9 abrem um canal transmembrnico ou poro hidroflico


Complexo de Ataque Membrana (MAC- Membrane Attack Complex)

Lise celular e desequilbrio osmtico

44

Via Alternativa
Com exceo da etapa final, os eventos da via alternativa so homlogos aos
da via clssica e das lectinas. A via alternativa constantemente ativada, em taxa
muito reduzida, a qual aumentada drasticamente, na presena de superfcies
ativadoras adequadas, como membranas celulares de microorgansmos e por antgenos
de superfcie presentes na membrana externa de bactrias Gram negativas como o LPS
(Lipopolissacardeo) que uma endotoxina. Esta via pode ser ativada ainda pela ligao
de C3b (via clssica, por exemplo) ou de uma forma hidrolizada espontneamente,
conhecida como iC3b, superfcie do patgeno. Este se liga ao Fator B formando C3bB,
componente suscetvel ao fator D, uma protease do plasma. O Fator D cliva o
componente B em Ba (fragmento menor) e Bb (fragmento maior), onde Bb permance
ligado ao C3b, fomando a molcula C3bBb (C3convertase) da via Alternativa ou via
Alternada ou via da Properdina. A C3 convertase da via alternativa produzira mais C3b,
tornando o sistema mais ativo, visto que tal fragmento uma opsonina e muitos fagcitos
possuem receptores para este componente. A C3 convertase da via alternativa
extremamente instvel e, por isso, costuma sofrer rpida dissociao. No entanto, uma
protena plasmtica denominada PROPERDINA se liga a esta convertase e a estabiliza,
diminui sua degradao permitindo a continuao da cascata.
Nesta via, alguns C3b se ligam ao C3bBb (C3 convertase) e formam a C5
convertase da via alternativa designada por C3b2Bb ou C3bBbC3b. Esta convertase cliva
o C5 em C5a e C5b, dando incio sequncia comum, onde C5b inicia o Complexo de
Ataque Membrana (MAC), ligando-se a C6, C7, C8 e C9 acarretando em desequilibrio
osmtico e lise celular.

45

Protenas do Complemento

bicamada fosfolipdica
Inrushing Fluids= fluidos invasores

46

Ativao da Via alternativa

Superfcie de microorgansmos ou C3 fragmentos C3b ou iC3b (hidrlise espontnea)


ativao

C3bB

D ( protease plasmtica)
Ba BbC3bBb (C3 convertase) + Properdina (P)
(Fragmento menor)

C3

(Fragmento maior)

C3a

Mediador inflamatrio

C3b

C3b + C3bBbP (C3 convertase)

C3b2Bb ou C3bBbC3b
(C5 convertase)
Mediador inflamatrio

C5

C5a C5b
(incio da sequncia em comum)

C5b inicia o Complexo de Ataque Membrana


lise da membrana do microorgansmo (Ag).

47

(MAC) ligando-se a C6, C7, C8 e C9 resultando em

Via das Lectinas

A via das Lectinas semelhante via clssica, As lectinas so protenas, ou


glicoprotenas que se ligam a carboidratos (acares) e podem ativar a via clssica do
complemento na ausncia do complexo antgeno-anticorpo. A principal lectina a
Protena (Lectina) Ligadora de Manose (MBL (Mannose-Binding Lectin) ou MBP (MannoseBinding Protein)),

que faz o papel de C1q ao se ligar a resduos de carboidratos da

superfcie de uma bactria ativadora ou outras substncias. A MBL est associada em


duas pr-enzimas MASP-1 e MASP-2 (Serina Protease Associada a MBL- MASP). A
lectina ligadora de manose uma molcula formada por duas a seis cabeas, semelhante a
C1q, que formam um complexo com as duas serina proteases a MASP-1 e MASP-2. MASP2 similar as protenas C1r e C1s. Quando o complexo MBL liga-se superfcie de um
patgeno, MASP-2 ativada para clivar C4, em C4a e C4b, e C2 em C2a e C2b,
originando a C3 convertase da via da lectina - C4b2b. O papel de MASP-1 ainda no
est bem claro na ativao do complemento. Quando a MBL se liga aos grupamentos
manose terminais nos carboidratos bacterianos MASP-1 e MASP-2 so ativados e
continuam a ativar a via clssica.

48

Ativao da Via Lectinas


Lectina Ligadora de Manose (MBLsemelhante a C1q) liga-se superfcie do patgeno

MASP-1

MASP-2 (Ativada)

Similar a C1s C1r


C4 e C2

Mediador inflamatrio

C4aC4b

Mediador inflamatrio

C2aC2b
C3 convertase (C4bC2b)
C3

Mediador inflamatrio

C3a

opsoninas
C3b
Liga-se

C3 convertase (C4bC2b) (C4bC2bC3b) = C5 convertase


Mediador inflamatrio

C5
C5a

C5b
(Etapa em Comum)
C5b

(Stio de ligao membrana para C7) C6

C6a C6b
C7
C7a

C7b

Complexo (membrana) (C5bC6bC7b)


Deposita-se na superfcie da membrana do Ag e abre o stio de ligao para C8
49

C8 (penetra na membrana do Ag e abre um poro para C9)


Continuao:
Vrios C9 abrem um canal transmembrnico ou poro hidroflico
Complexo de Ataque Membrana (MAC- Membrane Attack Complex)

Desequilbrio osmtico e Lise Celular

50

OBS:C3 convertase = C4bC2b


C5convertase = C4bC2bC3b

51

1- Diagnstico Imunolgico: Aplicao e importncia do diagnstico Imunolgico das


doenas infectoparasitrias
O diagnstico sorolgico das doenas transmissveis consiste na investigao no
indivduo ou na populao, mediante a deteco, quantificao e caracterizao de
variveis (Imunoglobulinas, Antgenos, citocinas) presentes no plasma/soro sanguneo
ou outros materiais biolgicos tais como amostras fecais, saliva, escarro ou tecidos.
O desenvolvimento de novas informaes cientficas est relacionada com os
progressos na metodologia pelo desenvolvimento de novos procedimentos, novas tcnicas ou
instrumentos.
Abordaremos as tcnicas sorolgicas, principalmente, sob o ponto de vista dos
profissionais que realizam diagnstico sorolgico das doenas infectoparasitrias.
1.1-

Aplicaes dos testes sorolgicos

Os testes sorolgicos vm sendo constantemente empregados para auxiliar na


confirmao diagnstica das suspeitas clnicas de infeces, permitindo resultados de
curto prazo, em funo de algumas caractersticas que incluem simplicidade de
execuo, baixo custo operacional e a posibilidade de automao. Suas contribuies,
entretanto, so inestimveis, principalmente quando o patgeno ou seus produtos,
dificilmente podem ser demonstrados nos fluidos biolgicos ou na estrutura histica (tecidual)
do hospedeiro.
Estes mtodos so utilizados na qualificao ou quantificao de diversos
componentes, incluindo antgenos, anticorpos, imunocomplexos, enzimas e hormnios,
entre outras molculas relacionadas ao processo inflamatrio. O conhecimento dos
fundamentos gerais para adequada aplicao e criteriosa interpretao dos resultados
exige que estas tcnicas sejam realizadas por profissionais bem treinados, a fim de previnir
a ocorrncia de falsos resultados, que conduzem para diagnstico e tratamento
incorretos dos pacientes.
O mtodo sorolgico pode ser qualitativo ou quantitativo. O mtodo qualitativo
indica uma resposta do tipo tudo ou nada, por exemplo, aglutinou ou no aglutinou,
infectado ou no infectado. O ensaio quantitativo mede a concentrao de Ag ou Ac,
podendo ser expressa sob a forma de cruzes, titulao, densidade tica em reaes
fotocolorimtricas (Ex: ELISA) ou em outras unidades de medida que se aplicam. A
expresso do resultado em cruzes, ou por titulaes, que correspondem maior diluio
que houve reao (Ag-Ac), bastante subjetiva, por retratar a intensidade de uma reao
determinada visualmente por CRITRIOS PESSOAIS. J a utilizao de aparelhos que
realizam leitura automtica das reaes sorolgicas traduz EM NUMEROS os resultados de
maneira visual, reduzindo, por um lado, a probabilidade de erros, mas por outro, elevando
(em alguns casos) o custo do exame laboratorial.
52

53

1.2-

A importncia do diagnstico sorolgico individual

O paciente sintomtico ou assintomtico com nveis de Acs especficos


detectveis denominado soropositivo. Aquele que no possui Acs detectveis
soronegativo. No caso do paciente diagnosticado soronegativo ( em uma
primeira anlise), que ao reavaliar a primeira amostra junto com uma segunda
amostra, de coleta mais recente (processo conhecido como sorologia pareada),
e no caso da primeira amostra se repetir e a segunda resultar positiva diz que
ocorreu soroconverso. O diagntico sorolgico individual normalmente se realiza
com a finalidade de elucidar processos patolgicos com sinais e sintomas
comuns vrias doenas (Ex: Dengue de gripe), procedimento este denominado
diagnstico diferencial. Como exemplos, podem-se distinguir sorolgicamente
doenas como a leishmeniose tegumentar difusa da hansenase lepromatosa (LL); a
leishmaniose visceral da hepatite viral; a hepatite B da hepatite C, a toxoplasmose
da rubeola, entre outras.
Em algumas situaes torna-se importante determinar a fase clnica da
doena, principalmente aquelas em os patgenos possuem a habilidade para
atravessar a barreira placentria e gerar embriopatias ou fetopatias. A presena
de Acs especficos evidncia da exposio atual ou anterior aos agentes
infecciosos, caracterizado pela diversidade funciolnal das vrias classes de
imunoglobulinas e a ordem em que se apresentam nos fluidos biolgicos.
Determinada por fatores genticos, a IgM, regra geral, a primeira a apresentar
nveis que possibilitam a deteco aps o estmulo antignico e caracterizar a fase
inicial (aguda) na maioria das infeces. O seu decrscimo compensado pelo
surgimento da IgG, normalmente encontrada no final de um processo agudo,
permanecendo durante a fase crnica, MESMO APS A CURA COMO
IMUNOGLOBULINA DE MEMRIA. Normalmente nas solicitaoes de exames
laboratoriais, pede-se a pesquisa de IgM e IgG especficas. Porm, em infeces
recentes por Toxoplasma gondii, ou citomegalovrus (Ver Glossrio), a IgM e IgG,
podem resultar eventualmente negativas, mas a IgA positiva pode corrigir falhas
no diagnstico. Por estas razes, imunoglobulinas IgA e IgE especficas tm sido
pesquisadas e utilizadas com maior preciso na determinao de fase inicial das
infeces, uma vez que possuem uma vida mdia menor e permanecem na
circulao aps o incio do processo infeccioso, por um perodo ainda mais curto
que o da IgM.
Os testes sorolgicos so tambm utilizados para verificao do potencial de
virulncia e de invasividade dos enteropatgenos. A Entamoeba histolytica, por
54

exemplo, enquanto parasito do lumen intestinal, parece no induzir ou pouco


induzir, a formao de Acs especficos. Por outro lado, a ulcerao, penetrao
tecidual e consequente multiplicao e disseminao deste parasito no
hospedeiro, pode propiciar ttulos de IgG anti ameba no plasma sanguneo,
facilmente detectveis.
Alm das imunoglobulinas, as Protenas de Fase Aguda (PFA), presentes
normalmente em baixa concentraes no plasma sanguneo, alteram-se em resposta aos
estmulos inflamatrios aps leso tecidual ou infeco. Em linhas gerais, as PFA
constituem um vasto nmero de protenas plasmticas de ORIGEM HEPTICA, , cuja
sntese aumenta 25% ou mais e podem ser classificadas em funo do aumento de sua
produo aps estmulo inflamatrio (Quadro 1)
Tradicionalmente, a quantificao da protena C reativa (PCR) na prtica clnica
tem vrios objetivos, entre eles, a avaliao da extenso e atividade da inflamao e que
permite o acompanhamento do processo patolgico, diferenciao entra doena
inflamatria e no inflamatria e estimativa de seu respectivo prognstico1. 1Prognstico: Indicao ou avaliao mdica sobre um resultado possvel de uma doena: no seu caso
o prognstico no foi favorvel. Ao que consiste na suposio acerca do desenvolvimento futuro de
um processo; suposio sobre o resultado de um processo. Que pode apontar circunstncia,
acontecimentos e/ou situes futuras; diz-se do sintoma que pode indicar uma doena.

Os testes sorolgicos tambm servem para selecionar doadores e receptores de


sangue ou rgos, no s no contexto de quem desempenha a determinao de grupos
sanguneos ou antgenos de histocompatibilidade, como tambm para a preveno de
doenas infecciosas transmissveis por meio de transfuso sangunea e hemoderivados (Ex;
soro, plaquetas etc) como de tecidos e rgos transplantados. No Brasil o Ministrio da
Sade estabeleceu estratgias de controle apoiados na triagem clnica, epidemiolgica e
sorolgica para preveno de doenas transfusionais que incluem doena de Chagas, a
sfilis, hepatites B e C, o vrus da leucemia T em adulto (HTLV I e II) ou vrus linfotrpico
da clula humana , em todo territrio nacional e a malria, em regies endmicas. As
condies que constituem contraindicao absoluta para doao de rgos, relacionadas
s doenas infecciosas, alm das empregadas na preveno de doenas transmissveis por
meio de transfuso de sangue e hemoderivados, incluem avaliao laboratorial de
septicemia bacteriana ou fngica, ativa.
As molculas liberadas pelo parasito e os Acs correspondentes encontrados no
hospedeiro so chamados de marcadores sorolgicos. Estes marcadores podem ser
utilizados para avaliar o prognstico de doenas e alguns marcadores indicam
EVOLUO PARA A CURA, enquanto outros o AGRAVAMENTO. Baseando-se nestes
princpios, pode-se avaliar a eficcia teraputica.

55

Os anticorpos protetores, induzidos por parasitos em processos infecciosos ou


por vacinas, podem ser pesquisados e utilizados como marcadores para avaliar a
imunidade especfica, naturalmente adquirida ou artificialmente induzida por vacinas. Os
testes sorolgicos em pacientes pr-natal so de fundamental importncia na pequisa de
doenas congnitas como a toxoplasmose, a sfilis, a citomegalia (ver glossrio) entre
outras e na avaliao da imunidade especfica, principalmente para doenas
imunoprevinveis com aplicao de vacinao (Hepatite B, rubeola, difteria, ttano).

56

Quadro1- Caractersticas cinticas das Protenas de Fase Aguda (PFA)


Protenas de Fase Aguda

Tempo de Resposta entre


estmulo e elevao de nveis
plasmticos

Peso molecular
(KDa)

Grupo I - Aumenta menos de uma vez


Ceruloplasmina

48-72 horas

132

C3

48-72 horas

180

C4

48-72 horas

202

a-1 glicoprotena cida

24 horas

41

a-1 antitripsina

10 horas

54

a-1 antimiotripsina

10 horas

68

Haptoglobina

24 horas

86

Fibrinognio

24 horas

340

Protena C Reativa (PCR)

6-10 horas

110

Amiloide srica A

2-10 horas

180

Grupo II Aumenta duas a quatro vezes

Grupo III Aumenta acima de cinco mil vezes

1.3-

Importncia do Diagnstico Sorolgico Coletivo

A aplicao de testes sorolgicos em inquritos epidemiolgicos


denomina-se soroepidemiologia e serve para estimar a soroprevalncia, que
corresponde ao nmero de indivduos soropositivos em um perodo de tempo
determinado, sem distinguir os outros casos novos dos antigos. Como a
soroprevalncia est intimamente relacionada com a taxa de infeco e a
permanncia dos anticorpos circulantes, este indicador auxilia nos seguintes
57

propsitos em relao s doenas infectoparasitrias: estabelecer prevalncia


sorolgica, identificar os principais problemas sanitrios, estabelecer
prioridades de vacinas, demarcar a distribuio e erradicao de doenas,
verificar a reintroduo de doenas em reas consolidadas, determinar a
peridiocidade de epidemias, avaliar as campanhas de vacinao, investigar
enfermidades descobertas recentemente (Ex: H1N1-gripe suna, Ebola, etc) e
estimar as perdas econmicas atribudas enfermidade.
Testes sorolgicos tambm so aplicados na anlise do contedo intestinal
de insetos hematfagos para identificao das fontes de alimentao dos
vetores envolvidos na transmisso de doenas. Estabelecer o padro alimentar
dos insetos hematfagos de grande importncia para o entendimento da biologia,
alm de possuir valor fundamental para a Sade Pblica, no deliamento de
estratgias de controle de vrios agravos gerados por estes vetores.

Glossrio
1- Citomegalia - (A Citomegalovirose (CMV) uma doena infecciosa produzida por um
vrus que pode infectar o feto ou recm-nascido. A transmisso materno-fetal pode
ocorrer em qualquer perodo da gestao. Tanto no caso da infeco congnita,
quanto na infeco perinatal, a excreo do CMV caracteristicamente prolongada, o
vrus excretado consistentemente na orofaringe e urina, por perodos de at cinco
anos, em quantidade superior s observadas em crianas maiores ou adultos
infectados.)
O citomegalovrus a exemplo dos outros vrus da famlia Herpesviridae. O CMV tem a capacidade
de persistir no hospedeiro infectado por perodos prolongados. Infeces persistentes so
observadas em RN, crianas maiores e adultos, e a excreo viral aps a infeco inicial pode
perdurar por muitos meses ou anos.
Alm disso, o CMV pode acarretar as assim chamadas infeces latentes ou no produtivas. Neste
caso, o genoma viral no se multiplica, nem produz qualquer alterao na clula infectada.
Contudo, por alteraes do equilbrio vrus versus hospedeiro, o CMV pode voltar a se multiplicar e,
eventualmente provocar novamente sintomas clnicos. Esta peculariedade responsvel pelo
carter oportunista observado no CMV e nos outros vrus da famlia Herpesviridae.
O CMV pode atingir todos os rgos, particularmente crebro, fgado, bao, rins e pulmes.
Clulas de incluso so menos freqentemente encontradas no pncreas, tireide e crebro e mais
raramente no intestino, glndulas paratireides e timo.
Formas de apresentao
Assintomtica: a doena praticamente no se manifesta.

58

Subclnica: RN podem apresentar tardiamente nos primeiros anos de vida algumas


anormalidades, principalmente neurolgicas e auditivas, sendo que paralisia
cerebral, retardo mental e a perda da acuidade auditiva constituem as principais
alteraes observadas nesta forma de apresentao da doena.

Sintomtica: RN com a forma sintomtica podem se apresentar com a doena leve


ou
moderada,
esboando
sinais
clnicos
como
ictercia leve,
prpura trombocitopnica transitria, dificuldade para se alimentar, surdez,
insuficincia respiratria leve e hepatoesplenomegalia isolada.
Grave: RN que apresentam a forma mais grave da doena de incluso citomeglica
ocorre em menos de 1: 3.000 nascimentos, sendo acompanhada por envolvimento
de mltiplos rgos, particularmente o sistema reticuloendotelial e o Sistema
Nervoso Central (SNC).

Manifestaes clnicas da forma grave


A grande maioria dos RN infectados pelos vrus CMV so prematuros ou de baixo
peso com retardo do crescimento intra-uterino. Esses RN podem apresentar o
seguinte quadro clnico:
Sinais e sintomas mais comuns logo aps o nascimento no RN com o vrus CMV:

Hepatoesplenomegalia.

Microcefalia.

Ictercia.

Fenmenos hemorrgicos.

Retinocoroidite.

Calcificaes intracranianas.

2- O vrus da leucemia T em adulto (HTLV I e II) ou vrus linfotrpico da clula


humana
O HTLV um retrovrus da mesma famlia do HIV, que infecta a clula T humana, um tipo de
linfcito importante para o sistema de defesa do organismo. Ele foi isolado, em 1980, no portador
de um tipo raro de leucemia e mais prevalente em certas regies geogrficas especficas, como o
Japo, Caribe e alguns pases africanos. No Brasil, representa um problema de sade pblica,
apesar de o nmero de pessoas infectadas ser proporcionalmente baixo, se consideramos as
dimenses e a populao do pas.
59

Existem dois tipos desse vrus: o HTLV-I e o HTLV-II. O primeiro est associado a doenas graves
neurolgicas degenerativas (paraparesia espstica tropical) e hematolgicas, como a leucemia e o
linfoma de clulas T humana do adulto (ATL). Polimiosites, poliartrites, uvetes e dermatites so
enfermidades que parecem relacionadas com esse tipo de vrus.
Quanto ao segundo tipo, ainda no foi plenamente esclarecida sua ligao com alguma patologia
determinada.
Da mesma forma que o HIV, o HTLV transmitido por via sexual (relaes sexuais desprotegidas),
nas transfuses de sangue, pelo uso compartilhado de seringas e agulhas e da me para o filho
durante a gestao, o aleitamento e no momento do parto.

Sintomas
As estatsticas indicam que apenas 5% das pessoas infectadas pelo HTLV desenvolvem problemas
de sade relacionados com o vrus. Nesses casos, em geral, instalam-se quadros neurolgicos
degenerativos graves e de leucemias e linfomas.
No entanto, a infeco pode ser absolutamente assintomtica. Quando se manifestam, so
sintomas indicativos de doena neurolgica: dor na batata da perna e nos ps, na coluna lombar,
fraqueza, dormncia e formigamentos nos membros inferiores,perturbaes urinrias.
Nos quadros de leucemia e linfomas, os sintomas mais comuns so: leses cutneas
maculopapulares, descamao, gnglios infartados, alteraes visuais e sseas.
Diagnstico
Muitas vezes, a pessoa descobre que portadora do HTLV, por acaso, quando vai doar sangue,
por exemplo. O diagnstico de certeza s estabelecido pelos resultados positivos dos testes
ELISA e Western-blot especficos para esse tipo de retrovrus. No entanto, tomar conhecimento da
infeco fundamental para controlar a transmisso do vrus.
Tratamento
Como o risco do desenvolvimento da doena associada ao HTLV-I muito baixo, no existe
tratamento preventivo ainda. Tambm no se descobriu uma soluo teraputica para eliminar o
vrus completamente do organismo infectado.
No entanto, todas as doenas correlacionadas com o retrovrus HTLV tm tratamento O
prognstico depende do estadiamento, tempo de evoluo e da presena de outras infeces.
Diagnstico precoce e a observncia s orientaes mdicas so requisitos bsicos para o bom
resultado do tratamento.
Recomendaes
* No se descuide da sua sade. S pratique sexo seguro;
* Certifique-se sempre de que as agulhas e seringas que vai usar so descartveis;
60

* Pea para seu mdico averiguar a possibilidade da infeco pelo HTLV, se voc est grvida ou
pretende engravidar.

61

Fundamentos Gerais do Imunodiagnstico

A pesquisa laboratorial da Resposta Imune pode ser empregada para a verificao


da resposta humoral e resposta celular. A pesquisa da Resposta Humoral pode ser
realizada de duas maneiras. Uma dessas maneiras refere-se ao emprego de anticorpos
especficos para identificar antgenos parasitrios ou outras substncias que
desempenham o papel de antgeno na reao tais como drogas, hormnios, cidos
nucleicos, citocinas, receptores de clulas, etc. Outra maneira a deteco de
anticorpos especficos na amostra a ser testada, passvel de determinar se um
indivduo foi exposto a um Ag especfico. A medida das interaes entre antgenoanticorpo com o propsito de diagnstico conhecido como imunosorologia.
As tcnicas imunossorolgicas fundamentam-se na natureza da interao
antgeno-anticorpo, nas quais podem expressar-se de duas formas distintas, em
decorrncia da utilizao de imunorreagentes livres de marcao ou de reagentes
marcados. As tcnicas em que no se empregam marcadores (livres de marcao)
demonstram-se por fenmenos visveis. Portanto, ao se combinar com antgenos
solveis, os complexos resultantes podem formar precipitados insolveis. Se os
antgenos so particulados (bactrias, protozorios, hemcias, etc), os anticorpos os
aglutinam (Reao de Aglutinao), Se o anticorpo ativar a Via Clssica do Sistema
Complemento e o antgeno se encontra em uma superfcie celular, o resultado pode ser
por citlise (lise celular) - RFC- Reao de Fixao de Complemento. As tcnicas que
empregam imunorreagentes marcados caracteriza-se pela simples combinao do Ag
com o Ac, necessitando que um deles estejam marcados convenientemente. O
imunorreagente pode ser marcado com corantes fluorescentes ou quimioluminescentes,
radioisotopos, enzimas (ex: ELIZA), ouro ou prata coloidal, entre outros marcadores.

1- Reao de Imunofluorescncia

Os anticorpos tm a capacidade de se ligarem a radicais qumicos sem perder


suas caractersticas de reconhecimento e ligao aos antgenos. Uma das
grandes vantagens desta tcnica a intesa luminosidade emitida por quantidades
muito pequenas de corantes fluorescentes, permitindo identificar estruturas
fluorescentes entre vrias outras estruturas em cortes de tecidos ou
62

esfregaos. Uma das vantagens da imunofluorescncia foi o fato de ter maior


sensibilidade que os outros mtodos, como a hemaglutinao, permitindo
distinguir uma nica clula bacteriana entre 107 bactrias no coradas.
S foi possvel o desenvolvimento da tcnica de fluorescncia devido a
caractersticas especiais que algumas substncias possuem de armazenar
energia luminosa e liber-las mais tarde. A este fenmeno foi dado o nome de
luminescncia. Se a substncia capaz de armazenar e emitir luminescncia
por perodos longos, chama-se ento de fosforescncia, se o perodo de
emisso da luminosidade mais curto, chama-se FLUORESCNCIA. Entre os
corantes fluorescentes mais utilizados destacamos a rodamina (isotiocianato
tetrametil rodamina - TRICT) e fluorescena (isotiocianato de fluorescena FITC), esta ltima supera a primeira por possuir maior eficincia quntica, ou
seja, maior capacidade de absoro e de emisso da luminosidade.
A intensidade da luz emitida por este corante sofre grande interferncia do
meio em que se encontra, o pH um dos fatores que mais interfere, pois, h
um mnimo de fluorescncia em pH cido, por isso o material deve ser montado
em glicerina tamponada alcalina antes da observao em microscpio de
fluorescncia.
Para se ter bons resultados com as tcnicas imunofluorescentes,
fundamental a utilizao de um microscpio ptico equipado com acessrios e
filtros que permitam a boa visualizao e captao da fluorescncia.
Atualmente, existem vrios modelos de vrias procedncias. Para a escolha do
equipamento que mais se adapte s necessidades do laboratrio, deve-se ter em
mente, qual o objetivo do teste, que tipo de material ser utilizado com o Ag
ou com a amostra (para que seja feita a escolha adequada das objetivas e das
oculares), qual corante ou corantes sero empregados (para definir a escolha
adequada dos filtros do equipamento), quantos exames sero em mdia e
quantas vezes por semana, uma vez que tal escolha ir interferir na vida til
DA LMPADA a ser utilizada, entre outros fatores.
A ligao qumica de anticorpos com corantes d origem a um composto
chamado conjugado, que associa a capacidade de reconhecimento e ligao do
63

Ac s propriedades do corante sem que ocorra nenhum prejuzo para ambos.


Apesar do processo de conjugao ser relativamente simples, h uma srie de
cuidados que precisam ser seguidos devido s variaes que podem ocorrer em
cada um dos reagentes a cada associao. Um dos cuidados principais a
imunizao de animais com antgenos mais purificados possveis para evitar
reaes cruzadas com outros antgenos. Atualmente existem no mercado
compostos conjugados de extrema pureza e alta especificidade e que
atendem perfeitamente s necessidades da grande maioria dos laboratrios.
Existem variaes de imunofluorescncia, a imunofluorescncia direta
(IFD) foi a mais simples e a primeira a ser descrita. Nesta tcnica, o conjugado
reage diretamente COM ANTGENOS presentes na superfcie de clulas
(Figura1). Como esta tcnica presta pesquisa de substncias que atuam como
antgenos para o conjugado, torna-se necessrio, a cada procura de um Ag
diferente a produo de um conjugado diferente. Alm disso, de todas as
variaes

da

imunofluorescncia,

esta

menos

especfica,

que

principalmente em tecidos ou esfregaos, devido grande quantidade de


material na amostra, pode ocorrer a presena de antgenos homlogos (pode
ocorrer reao cruzada), ao que se est pesquisando. Quando se trata de clulas
ntegras, h certa facilidade no reconhecimento, porm, em fragmentos celulares
ou estruturas muito pequenas necessrio grande conhecimento e intenso
treinamento para diminuir a inespecificidade.
A imunofluorescncia direta amplamente aplicada no diagnstico de
infeces por Chlamydia trachomatis em esfregaos cervicais e uretrais. Este
mtodo foi amplamente utilizado na identificao dos Ags do MHC e na triagem
de LB e LT.
Outra variedade do mtodo a Imunofluorescncia Indireta (RIFI). Nesta
modalidade, pode-se realizar a PESQUISA DE ANTICORPOS contra os mais
variados antgenos. O conjugado uma imunoglobulina que reconhece a outra
imunoglobulina como Ag, ou seja, uma anti-imunoglobulina ou anticorpo
secundrio (Figura 2). A vantagem deste mtodo que o Ac pode estar ancorado
(ligado) superfcie de qualquer Ag e ainda assim ser reconhecido pelo
64

conjugado. Assim, um nico conjugado pode ser utilizado na pesquisa de Acs


contra vrias infeces diferentes, tornando o mtodo mais barato. Uma vez que
o reconhecimento de uma imunoglobulina por outra imunoglobulina se d
pela REGIO CONSTANTE do fragmento cristalizvel (Fc), a ligao espcie
especfica, conferindo ao mtodo grande especificidade. Ele tambm mais
sensvel que a imunofluorescncia direta, porque existem normalmente mais
eptopos na imunoglobulina para se ligar. Quanto maior a quantidade de
conjugado maior ser a emisso de fluorescncia.
A RIFI auxilia no diagnstico de vrias doenas e permite a pesquisa de
diferentes isotipos (IgM, IgG, IgD, IgE, IgA), sendo que, neste caso h
necessidade de utilizar conjugado para cada um dos isotipos. Desta forma,
este mtodo utilizado no acompanhamento de doenas e, EM ALGUNS
CASOS, pode tambm ser utilizado como CRITRIO DE CURA.
De uma maneira geral, a tcnica de imunofluorescncia apresenta nveis de
sensibilidade que variam de 70% a 90%, e especificidade que varia de 85% a
99%. Por ser um mtodo com perfil mais especfico, este mais utilizado em
CONFIRMAES

SOROLGICAS.

Deve-se

utilizar

mtodo

de

imunofluorescncia sempre aliado a outro mtodo mais sensvel para a


triagem e fornecer os dois resultados em combinao. A sua utilizao
pesquisando IgM e IgG sricas pode aumentar a sensibilidade, uma vez que a IgM
aparece mais precocemente.

Figura1- Reao de Imunofluorescncia Direta (IFD)

65

IFD- Protenas de superfcie tecidual

66

IFD Chlamydia trachomatis

67

Figura 2- RIFI- Reao de Imunofluorescncia Indireta

FTA-ABS- RIFI para o diagnstico de sfilis

68

RIFI de Neutrfilos Humanos

RIFI de Toxoplasma gondii

69

70

2- Ensaios Imunoenzimticos- Enzyme-linked immunosorbent assay (Ensaio de


Imunoabsoro Ligada a Enzima) ELISA

Em 1971, dois grupos de pesquisadores, um holands, e um sueco, idealizaram e


introduziram, pioneiramente, o mtodo imunoenzimtico para a deteco e
quantificao

de

antgenos

ou

anticorpos

especficos.

Estes

grupos

observaram que protenas poderam ser imobilizadas em superfcie slida de


poliestireno e a reao imune, ser revelada pela formao de produtos
coloridos da reao enzima-substrato, na presena de um componente doador
de eltrons, denominado cromgeno.
O Mtodo ELISA, quando efetuado em timas condies (enzimas altamente
ativas, antgenos puros, substratos de alta qualidade, anticorpo e conjugado),
apresenta sensibilidade semelhante ao radioimunoensaio (conjugado com
radioistopo), com a vantagem de no ser necessrio utilizar material radioativo.
Entretanto, esse mtodo apresenta algumas desvantagens, pois, alguns
substratos

nessas reaes

so

teratognicos

(causam

formao

congnita) e a presena de enzimas endgenas interferem nos resultados


quando se usa clulas ntegras com o antgeno.
A reao desenvolvida frequentemente em placas de microdiluio (suporte),
contendo sries de orifcios, onde so depositados os imunorreagentes, antgenos
ou anticorpos, dependendo do objetivo do mtodo. O processo de revestimento
da placa com o imunorreagente adequado denomina-se sensibilizao
(sensibilizao da placa ou adsoro). Para sensibilizar a placa deve-se tratar
o imunorreagente com soluo alcalina, deixando-o com carga negativa, e
assim promover, passivamente, a adsoro placa por interaes eletrostticas
(foras colmbicas), as quais ocorrem em virtude das cargas positivas do
poliestireno ou polivinil (polyvinyl chloride - P.V.C.) utilizado para confeccion-las.
Alm das placas de microdiluio de 96 cavidades, tambm podem ser
empregadas outros suportes, entre os quais, esferas de sefarose (derivado de
grnulos de agarose), esferas de poliestireno ou P.V.C., que possibilitam a
adsoro adequada para a maioria dos imunorreagentes.
71

As estapas de LAVAGEM das placas de microdiluio interpem-se s demais


etapas

de

execuo

servem

para

RETIRAR

EXCESSOS

DE

IMUNORREAGENTES NO LIGADOS. Podem ser usados procedimentos


manuais ou automatizados, que vo desde o uso de jorradeiras contendo a soluo
de lavagem, ou de pente multicanal adaptado a um sistema de vcuo (lavadora
semi-automtica), at a utilizao de lavadoras de placas automticas, que
reduzem o tempo de realizao do teste e propiciam maior uniformidade ao
processo (ver figuras).
O revestimento da superfcie interna da placa de ELISA, pelo menos no plano
terico, no absoluto, e, portanto, algumas regies permanecem livres de
ligao. Estes espaos devem ser ocupados com qualquer outra molcula alheia
ao sistema reacional (que no interfira na reao- inerte), no sentido de
reduzir, ou mesmo evitar, geradores de reaes indesejveis que possibilitem
falsas interpretaes. A cobertura destes espaos vazios chamada de
bloqueio. Entre as protenas mais empregadas nesta etapa (bloqueio) destacam a
ALBUMINA BOVINA SRICA (BSA), a ovalbumina e a casena, alm de um
complexo proteico, como soro de cobaio.
Dependendo do material a ser pesquisado, pode-se conjugar antgenos com
enzimas (E) (Ag-E) e Ac ou Anti-Ac com enzima (Ac-E). Enzimas so
macromolculas de natureza proteica, com funo biolgica de alto poder cataltico
(degradador) de reaes qumicas e elevada especificidade ao substrato
correspondente. As mais usadas nestes testes so a fosfatase alcalina e
peroxidase.
Para revelar a presena da enzima no complexo formado utiliza-se uma soluo
reveladora, que consiste em um tampo adequado, onde se adicionam o
substrato correspondente enzima conjugada e um componente doador de
eltrons (cromgeno). A enzima conjugada quebra o substrato e seus produtos
ATUAM NO CROMGENO, alterando a colorao do sistema.
A leitura da reao em condies de trabalho de campo pode ser feita de forma
visual, simplesmente pela observao da alterao da colorao. Em condio
laboratorial utiliza-se espectrofotmetro apropriado (leitor de ELISA- ver
72

figuras) para a leitura dos orfcios das placas, que transforma a intensidade de
cor em NMEROS. Quanto maior a leitura, maior ser a concentrao de
enzima conjugada e consequentemente, maior ser a concentrao da
substncia pesquisada (Ex: Ag, Ac, etc) EM TCNICAS NO COMPETITIVAS.
O mtodo ELISA pode ser classificado de acordo com a atividade de
amplificao, ou seja, por mtodos no competitivos, ou baseados em atividades
moduladoras (reguladoras), que so mtodos competitivos.
O ELISA direto mais utilizado em imuno-histoqumica. Seu fundamento
consiste na utilizao de anticorpos especficos primrios marcados com
enzima (conjugado), que se combinam especficamente aos Ags presentes em
cortes histolgicos. (Figura 1).
ELISA indireto empregado para a pesquisa de anticorpos, onde amostras de
soro ou plasma so colocadas para reagir com antgenos imobilizados em fase
slida (fundo dos poos da placa de ELISA, por exemplo). Posteriormente, so
revelados com o acrscimo de conjugado enzimtico especfico (Ac anti-Ac
humano conjugado a uma enzima- ex: peroxidase) levando formao de um
produto corado ao agir sobre os substratos cromognicos; j para a pequisa
de antgenos (ELISA sanduicheou de captura) presentes no material biolgico, a
amostra acrescentada aos poos para reagir com Acs especficos na fase
slida (fundo do poo) e a reao revelada acrescentando Ac especfico
marcado com uma enzima (conjugado) para reagir com o Ag pesquisado ligado
ao Ac da fase slida e, em seguida acrescentamos o substrato cromognico
levando formao de um produto corado. ( Figura 2).
O ELISA competitivo consiste na pesquisa de antgeno, onde o anticorpo
imobilizado na fase slida e o Ag correspondente compete com uma
quantidadede Ag padronizada e marcada para stio de combinao disponveis.
Neste caso, A REDUO da reao (COR) indica MAIOR quantidade de Ag na
soluo.
Para a pesquisa de Acs aplicando o ELISA competitivo, o Ag imobilizado no
fundo dos poos e poder se ligar ao Ac da amostra ou ao j conhecido e
marcado (conjugado enzimtico - Ac ligado enzima), para assim,
73

DECRESCER a intensidade da colorao da reao (Figura 3). Em ambos os


mtodos competitivos, dois procedimentos podem ser seguidos: a competio
simultnea, cujo antgeno ou Ac marcado (conjugados) adicionado junto com
a amostra, ou a saturao sequencial, onde o Ag ou Ac adicionado primeiro,
seguido de uma incubao com o imunorreagente (conjugado).

74

Figura 1- ELISA Direto- Corte histolgico- Cordes de hepatcitos (detalhe da veia


centrolobular)

75

Figura 2- ELISA Indireto

ELISA sanduiche ou de captura - Pesquisa de Ag

76

ELISA indireto - Pesquisa de Ag = ELISA sanduiche ou de captura

Figura 3- ELISA competitivo- Exemplo Pesquisa de anticorpos

77

78

Placas de microdiluio para realizao da tcnica de ELISA (96 poos)

Pente Multicanal (automatizado)

79

Pente Multicanal (lavadora semi-automatizada)

Micropipeta Multicanal

80

81

Leitor de ELISA

82

Reaes de Aglutinao e Hemaglutinao

A aglutinao a formao de redes de clulas (Ex: hemcias, microorgansmos,


etc) ou partculas inertes (ltex ou gelatina), interligados por pontes moleculares de
anticorpos especficos, que se combinam com DOIS determinantes antignicos (ou
eptopos) nas superfcies das clulas ou partculas adjacentes (prximas, ladeadas).

1.1-

Reao de aglutinao (ou hemaglutinao) direta

A aglutinao (ou hemaglutinao) direta a formao de agregados


suficientemente grandes que ocorre entre partculas insolveis, em sua forma
ntegra ou fragmentada, contendo antgenos NATURAIS de superfcie.
Hemcias (hemaglutinao), bactrias, fungos e protozorios podem ser
aglutinados DIRETAMENTE por anticorpos especficos, os quais, sendo
bivalentes (DUAS FRAES Fab, ou seja 1 Ac liga-se simultaneamente a dois
Ags), formam pontes, ligando determinantes antignicos nas superfcies de
partculas vizinhas (adjacentes). Para se detectar Ac especficos, diluies
seriadas das amostras so postas para reagir junto a uma quantidade
CONSTANTE de Ag. Aps um perodo de incubao, a reao se concretiza e o
resultado geralmente expresso em ttulos da amostra, ou seja, a maior diluio
em que ocorreu reao com o Ag, neste caso uma reao de aglutinao direta.

83

Figura 1 Hemaglutinao Direta

Exemplo 2: Hemaglutinao Direta: Tipagem sanguinea:

Tipo sanguneo: B positivo (Observe que no houve aglutinao com soro anti-A, mas houve aglutinao
com soro anti-B, o que nos indica que a pessoa pertence ao grupo B. Tambm ocorreu aglutinao com o
soro anti-D, o que nos indica a presena do fator Rh nas hemcias dessa pessoa.

84

1.2-

Reao de inibio da Aglutinao direta de hemcias (inibio direta da


Hemaglutinao) por antgenos virais

Diversos antgenos virais encontram receptores na superfcie de


hemcias, principalmente hemcias avirias. E induzem sua aglutinao
(hemaglutinao). Esta propriedade particular de muitos virus aproveitada
para a titulao de Acs especficos produzidos contra estes antgenos virais
(receptores para hemcias avirias), durante os processos infecciosos ou na
convalescncia (fase de recuperao), para fins diagnsticos.
Todas as reaes de inibio baseiam-se na COMPETIO, ou seja,
DOIS determinantes antignicos semelhantes por UM MESMO STIO DE
COMBINAO (na frao Fab do Ac) ou de DOIS ANTICORPOS
DIFERENTES por UM MESMO determinante antignico (no Ag). A reao
efetua-se entre imunorreagentes que formam o composto mais estvel. Neste
caso, o soro do paciente, contendo Acs especficos pesquisados (que
inibem a hemaglutinina viral, em diluies seriadas (titulao) misturado
a uma QUANTIDADE FIXA DE Ag viral padronizado, sendo incubado a
37C, em seguida, as hemcias so adicionadas s diluies do soro.
Verifica-se ento at qual diluio houve neutralizao, ou seja, inibio da
propriedade viral de aglutinar as hemcias (inibio ou neutralizao da
hemaglutinao).

85

1.3-

Reao de Aglutinao (ou Hemaglutinao) passiva ou indireta de


hemcias e suportes inertes

A reao baseia-se na aglutinao de hemcias (hemaglutinao passiva)


ou de partculas de ltex ou gelatina (aglutinao passiva) que funcionam
como suporte, revestido (sensibilizado) por Ag especfico solvel, em
presena de amostra de soro ou plasma contendo os anticorpos
especficos correspondentes (a serem pesquisados). A formao de
pontes de Acs entre as partculas adjacentes (1 Ac possui - 2 fraes Fab

liga-se

2Ag

(determinantes

antignicos

ou

eptopos

adjacentes/prximos - aglutinao (ou hemablutinao) passiva) indica a


ocorrncia de reao (Figura 3).

Figura 3- Aglutinao Passiva ou indireta (Partculas de ltex)


Pesquisa de Anticorpo

86

Hemaglutinao passiva ou indireta: 1 caso pesquisa de Ac, 2 caso


pesquisa de Ag:

antgenos

1.4-

2 caso

Reao de Inibio Passiva ou Indireta de Partculas Inertes (Ltex)

Partculas de ltex sensibilizadas (adsorvidas) sua superfcie


antgenos que podem ser aglutinadas pela formao de ponte anticrpica
(Frao Fab ligando-se a 2 Ags de superfcie e aglutinando-as), do
mesmo modo que a aglutinao direta de hemcias (hemaglutinao
direta), como j foi exposto. No entanto, ao se acrescentar antgenos
solveis ao soro do paciente (1 fase), caso contenha o Ac especfico
pesquisado, haver BLOQUEIO dos stio de combinao (dos dois stios de
ligao ao Ag na frao Fab) das molculas de Ac do soro e consequente
inibio

(ou

neutralizao)

da

aglutinao

(ltex

ou

gelatina

sensibilizados com Ag) ou hemaglutinao (hemcias sensibilizada) quando


acrescentamos as partculas inertes ou hemcias, respectivamente (2 fase)
(Figura 4).
87

Figura 4 - Reao de Inibio Passiva ou Indireta da Aglutinao de


Partculas Inertes (Ltex) ou Hemcias:

88

OBS:

A gonadotrofina corinica humana (hCG)

uma glicoprotena hormonal

produzida

pelas clulas trofoblsticas sinciciais nos lquidos maternos. No incio da gravidez, as concentraes
de hCG no soro e na urina da mulher aumentam rapidamente, sendo um bom marcador
para testes de gravidez. Sete a dez dias aps a concepo, a concentrao de hCG alcana
25 mUI/mL e aumenta ao pico de 37 000 - 50 000 mUI/mL entre oito e onze semanas.

89

REAO DE FIXAO DE COMPLEMENTO

A fixao do complemento ocorre aps a interao antgeno-anticorpo. O


consumo dos elementos da cascata do complemento `in vitro` pode ser utilizado como um
teste para detectar e quantificar concentraes de antgenos e anticorpos. A reao se
manifesta em trs momentos: no primeiro se combina o anticorpo com o Ag. No segundo,
se os imunocomplexos (Ag-Ac) estiverem presentes, os componentes do sistema
complemento ligam-se aos imunocomplexos (Ag-Ac), SENDO ASSIM CONSUMIDOS.
Finalmente na terceira etapa, adiciona-se o sistema revelador que consiste de hemcias
de carneiro sensibilizadas com hemolisina (anticorpo antieritrocitrio). Aps um
perodo de incubao, observa-se se ocorreu ou no hemlise das hemcias
sensibilizadas e a atividade hemoltica pode ser medida, a fim de se determinar a
quantidade de imunorreagentes pesquisados (Figura 1).
Ao pesquisar a presena de anticorpos em fluidos biolgicos, a ausncia de lise do
sistema hemoltico indica a presena do Ac especfico na amostra, pois os principais
componentes do sistema complemento FORAM CONSUMIDOS NA PRIMEIRA ETAPA na
LISE DO IMUNOCOMPLEXO INICIAL, sendo assim no estaro disponveis para a lise
do sistema hemoltico (quando acrescentamos as hemcias com anti-hemolisina um
imunocomplexo) e a reao ser positiva.
Tanto os Acs como os Ags devem ser destitudos de atividade anti-complementar
para no ativar o complemento, sem que antes haja a formao dos imunocomplexos
(Ag-Ac) O complemento obtido de soro de cobaio, colhido de maneira apropriada para
presenvar a atividade hemoltica.

Reao de MACHADO & GUERREIRO (Diagnstico da Doena de Chagas


(Triponossomase americana)
Os testes sorologicos sao utilizados como um dos criterios para confirmacao de suspeita clinica da
Doenca de Chagas e triagem em bancos de sangue. Entretanto, alguns cuidados sao necessrios na
escolha do metodo e sua interpretacao. O Machado Guerreiro (Fixacao de complemento) era o exame de
escolha no passado, mas por apresentar baixa sensibilidade (60%), baixa especificidade e complexidade na

90

sua execucao nao mais deve ser utilizado. Os metodos Hemaglutinacao, imunofluorescencia e imunoensaio
apresentam sensibilidade proximo a 100%. Tendo em vista a possibilidade de falso-positivos (leishmania,
malaria, sifilis, toxoplasmose, hanseniase, doencas do colageno (Lupus Eritematoso Sistmico), hepatites)
recomendado que o soro seja testado, em pelo menos dois metodos diferentes antes de aceito, pelo
clinico assistente, a positividade da sorologia. A Hemaglutinacao utilizada para triagem devido sua
praticidade e boa sensibilidade, entretanto, tem especificidade inferior a imunofluorescncia e ao
imunoensaio enzimatico (ELISA). A imunofluorescencia indireta IgG e exame sensivel no diagnostico
da Doenca de Chagas. A imunofluorescencia indireta IgM e util para caracterizar fase aguda. Ambos
apresentam menor reprodutibilidade que o imunoensaio enzimatico (ELISA). O imunoensaio
enzimatico utiliza antigenos altamente purificados com maior sensibilidade (98 a 100%), maior
especificidade (93 a 100%) e leitura mais objetiva. O imunoensaio de particular em gel apresenta
sensibilidade de 96,8% e especificidade de 94,6%.

Nota: Informamos que a Organizacao Mundial de Sade preconiza o uso de pelo menos dois testes de
diferentes metodologias para o diagnostico laboratorial da doenca de chagas.

Figura 1- Reao de Fixao de Complemento

91

Reaes de Precipitao

As

reaes

de

precipitao

ocorrem

entre

Ags

solveis

seus

Acs

corresposndentes, com formao de agregados insolveis que se precipitam. Os


determinantes mais importantes das reaes de precipitao consistem nas concentraes
relativas de Ag e Ac. Ocorre precipitao mxima quando a quantidade de Ag e de Ac
SO EQUIVALNTES (ZONA DE EQUIVALNCIA- Figura 1), com quantidades
decrescentes das ZONAS DE EXCESSO DE Ag OU EXCESSO DE Ac. O FENMENO
PROZONA refere-se precipitao subtima, invisvel a olho n, que ocorre na
REGIO DE EXCESSO DE Ac ou Ag. Portanto, necessrio que diluies de
antissoros reajam com quantidades fixas de Ag a fim de se obter o mximo de linha de
precipitao. O fenmeno prozona pode ser responsvel por resultados falso-negativos
92

em outros testes sorolgicos, alm dos testes de precipitao, como reao de


aglutinao.

Figura 1- Zona de Equivalncia e fenmeno prozona

Prozona

Existem vrios sistemas disponveis para a prtica de reao de precipitao,


dentre estes, destacam-se a precipitao em meios lquidos, meios semisslidos, como
gar ou agarose, e outros suportes, tais como acetato de celulose.

1- Reao de Precipitao em meio lquido

Conhecida tambm como tcnica da precipitina ou do anel, a reao de precipitao


em meio lquido consiste em colocar em tubos de ensaio ou tubos capilares uma soluo
de Acs conhacida como soro hiperimune e sobre ela adicionar, cuidadosamente, a soluo
antignica (Ag) que se deseja pesquisar, de modo a se constituir uma INTERFACE entre
ambas. As molculas da soluo antignica iro se difundir (espalhar-se) atravs da outra
soluo formando um GRADIENTE DE CONCENTRAO. Ao NVEL DE EQUIVALNCIA
93

IDEAL (2 Ag para 1 Ac (duas fraes Fab) SE FORMAR UMA FAIXA DE


PRECIPITAO VISVEL (Um anel de turvao branco leitoso na interface.

1.2-

Reao de imunodifuso simples em meio semisslido

Neste sistema, tambm chamado de imunodifuso unidirecional ou tcnica de


Oudin, soluo antignica (Ag) sobreposta a uma coluna de gar, em um tubo
de 35- 45 mm de altura contendo o soro hiperimune (Ac). As molculas de Ag
penetram no gel e se difundem com velocidade caracterstica para cada espcie
molecular (Coeficiente de difuso) influenciada pela concentrao do gel. Ao final
de certo tempo de difuso, em geral de uma semana, cada antgeno ter formado,
com seu Ac correspondente, um disco ou zona de precipitao (Figura 1).

Figura 1- Imunodifuso simples em meio semisslido

94

S.F. = Soluo Fisiolgica

1.3-

Reao de Imunodifuso dupla (Imunodifuso de Ouchterlony)

Em uma fina camada de gel sobre uma lmina de vidro escavam-se


pequenos orifcios. Em um deles, coloca-se soro ou plasma (Ac?) e, no outro
orifcio coloca-se o Ag. Um difunde-se em direo ao outro, formando precipitados
brancos em forma de linhas ou arcos, tambm conhecidos como banda de
precipitao. Quando a concentrao de Ags e Acs muito pequena, as bandas
no so visveis, necessitando, nesse caso, que se use soluo corante de
protenas (lembrem-se Acs so glicoprotenas). Quando necessrio, corar o gel
para visualizar as bandas deve-se retirar do gel os imunorreagentes que NO
FORMARAM IMUNOCOMPLEXOS por processos de lavagens em soluo
fisiolgica. O imunocomplexo (agregado insolvel), em funo de seu tamanho
efetivo, fica retido no gel, aps a lavagem, onde, em seguida, submetido a um
corante adequado (Ex:Comassie Blue), o que possibilta a visualizao das
bandas quando formadas. A velocidade de difuso de cada imunorreagente
comandada pelas leis da difuso e depende da concentrao e do tamanho dos
poros do gel, da temperatura, da concentrao do gar e de sua pureza.(Figura
2)
95

Figura 2- Reao de Imunodifuso dupla (Imunodifuso de Ouchterlony)

96

1.4-

Reao de imunodifuso radial simples ou Imunodifuso de Mancini)


Nesta tcnica, Ac especfico para determinado Ag INCORPORADO ao gel e
distribudo sobre lminas ou placa de Petri. Em posies adequadas, so feitos
orifcios onde colocam a soluo antignica (Ag) a serem testados, bem como a
soluo padro (Ag conhecido) com pelo menos trs concentraes conhecidas do
Ag. A partir desse momento, ocorre a difuso radial do antgeno, resultando na
opacificao (opaco) em forma circular ( Halo ou anel) em torno do orifcio. O
dimetro deste anel de precipitao proporcional concentrao de Ag e, deste
modo, a quantidade deste pode ser determinada POR COMPARAO com
dimetros obtidos por PADRES CONHECIDOS por meio de uma curva de
referncia. (Figura 3)

97

Figura 3- Reao de imunodifuso radial simples ou Imunodifuso de Mancini)

98

Std=Standard= Padro = Concentrao de Ag conhecida

1.5-

Reao de Contraimunoeletroforese

Tambm conhecida como eletroimunodifuso dupla unidirecional. Nesta


tcnica, Ags e Acs migram por eletroforese, SIMULTANEAMENTE, em direes
opostas, a partir de orifcios separados no MESMO EIXO, resultando na
precipitao no ponto de encontro dos imunorreagentes entre os orifcios.
Para a realizao deste mtodo, Ags e Acs devem apresentar diferentes
mobilidades eletroforticas. Os Acs (carga positiva) possuem propriedade de
migrarem para o polo negativo (Ctodo) em um campo eltrico, enquanto os Ags
devem ser previamente tratados com soluo tampo de pH adequado para
otimizar os efeitos ELETROENDOSMTICOS que orientem sua migrao para
o polo positivo (nodo). Este fenmeno pode ser induzido com o uso de
tampes alcalinos. Este mtodo permite a realizao de vrias anlises em uma
lmina ou cuba de eletroforese, fornece resultados rpidos e mais sensveis que a
99

imunodifuso convencional e pode ser realizados em outros suportes, como o


acetato de celulose.

Figura 4- Reao de Contraimunoeletroforese

Reao de Contraimunoeletroforese bidirecional quantitativa em acetato de celulose

100