CITOGENTICA DA FIBROSE CSTICA

A Fibrose Cstica (FC) uma doena hereditria autossmica recessiva. Seu

gene localiza-se no brao longo do cromossomo 7, lcus q3.1, formado por
250kb de DNA, com 27 xons que conseguem codificar um RNAm de 6,5
quilobases, transcrevendo uma protena transmembrana, que regula o
transporte inico, formada por 1480 aminocidos com um peso molecular de
170 kDa aproximadamente (Figura 1) (Riordan et al., 1989). Existem vrias
mutaes descritas no gene da FC, a mais frequente a que ocorre por uma
deleo de trs pares de base, que leva deleo de um aminocido chamado
Fenilalanina e a substituio de uma Isoleucina, na posio 508 (F508) da
protena CFTR, impedindo que esta funcione adequadamente.
Essa protena mais conhecida como CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane
Conductance Regulator) ou chamada de canal de cloro. Ela essencial no
transporte de ons pela membrana celular, e est envolvida na regulao do
fluxo de Cl-, Na+ e gua.

Figura 1 Um esquema do gene e da protena CFTR. O gene CFTR transcrito num RNAm de 6.5 kb
que por sua vez traduzido numa protena com 1480 aminocidos que se encontra na regio apical das
clulas epiteliais. Adaptado de Tsui & Durie, 1997

TIPOS DE MUTAES
Aproximadamente 2000 variaes de sequncia no gene CFTR e sua mutao
F508, j foram identificadas. Estas mutaes se localizam ao longo da regio
codificante do gene e em sua regio promotora. Contudo, existem regies em
que as mutaes ocorrem comumente como no domnio de ligao de
nucleotdeos (NBD), no domnio regulador (R) e em regies que correspondem
a aminocidos ou domnios importantes para o funcionamento estrutural da
protena (Rowntree & Harris 2003).
As variaes de sequncia relacionadas a fibrose cstica so variaes
pontuais e afetam poucos nucleotdeos. Os rearranjos cromossmicos, como
inseres e delees, correspondem somente a 1%. Estes rearranjos afetam
milhares de pares de bases.
Os tipos de mutaes so:

Missense: Corresponde a 40,26% do total de mutaes; nela ocorre a

substituio de um aminocido.
Frameshift: Corresponde a 15,88% das mutaes; ocorrem pequenas
delees ou inseres que alteram o sistema de leitura.
As mutaes que alteram o local de Splicing correspondem a 11,65%,
destas, 8,3% so nonsense, que originam cdons prematuros de
terminao.

Das alteraes remanescentes no gene CFTR, o polimorfismo, ou variao de

sequncia, corresponde a 13,87%; As inseres, ou delees in frame
correspondem a 1,96%; 0,77% correspondem a alteraes na regio
promotora e 4,79% so alteraes desconhecidas (Cystic Fibrosis Mutation
Database, 2011). Alguns casos raros como uma dissomia uniparental do
cromossomo 7 j foram reportados de Fibrose Cstica (Hehr et al., 2000, Le
Caignec et al., 2007).
No gene CFTR, a mutao F508 consiste numa deleo de 3 nucleotdeos
CTT, lcus 1521, que leva deleo de uma Fenilalanina(Phe), lcus 508, e
na substituio de uma Isoleucina (Ile), lcus 507, que alteram o domnio
NBD1 e consequentemente o misfolding da protena, o que leva sua
degradao (Bartoszewski et al., 2010).
Existem outras mutaes no gene CFTR, mas so muito raras ou restritas a
uma regio geogrfica. Somente 4 mutaes, apresentam uma ocorrncia
superior a 1%. So elas: G542X, G551D, N1303K e W1282X. Outras
mutaes que podem ocorrer, so exclusivas de um indivduo ou famlia,
outras so encontradas em apenas poucos casos no mundo (Rowntree &
Harris. 2008).
CLASSES DE MUTAES NO GENE CFTR
As mutaes no gene CFTR so expressas em diversos tipos de mecanismos
moleculares que englobam a ausncia de produo dessa protena, a
produo de uma protena alterada com uma ao reduzida ou no funcional

na membrana apical de clulas epiteliais (Welch et al, 2001). Com isso foi
possvel identificar e classificar as diversas mutaes de acordo com a
repercusso quantitativa e/ou qualitativa que essas alteraes apresentam a
nvel celular. Atualmente so identificadas 6 classes de mutaes no CFTR.
Classe I:Nesta classe encontram-se todas as mutaes que afetam a
biossntese da protena CFTR. Englobam as mutaes nonsense, frameshift,
que altera o local de Splicing, ou as que alteram o cdon de incio da traduo.
Produzem uma protena defeituosa, ou truncada que so reconhecidas no
Retculo Endoplasmtico (RE) por protenas chaperones, estas protenas
degradam as protenas truncadas rapidamente, consequentemente no e
observa protenas CFTR na membrana celular.
Classe II: a principal mutao em fibrocsticos. Ocorre uma alterao na
maturao, provocando um processamento defeituoso da protena a um
misfolding incorreto. As protenas imaturas traduzidas ficam retidas no RE e e
no passam para o aparelho de Golgi para serem glicosiladas, ocorrendo uma
falha de protenas funcionais na membrana. Estas protenas afetadas saem
diretamente do RE para o citosol para serem degradadas no proteossoma.
Devido ausncia de protenas na membrana, as mutaes desta classe
esto associadas a fentipos de FC graves.
Classe III: mutaes que causam uma alterao na regulao do canal de Cl-.
As mutaes no gene CFTR que ocorrem nesta classe esto localizadas nos
domnios NBD1 e NBD2 da protena, impedindo a ligao de ATP a estes
domnios e a sua hidrlise, necessria para a ativao do canal.
Classe IV: Englobam casos em que o gene codifica uma protena CFTR que
corretamente traduzida, processada, transportada e inserida na membrana
apical e que responde a estmulos, contudo, a conduo de Cl- reduzida.
Estas mutaes (geralmente missense) esto localizadas nos domnios
transmembranares (Membrane-spanning domains MSD) que participam na
formao do canal inico. Assim, quando existe uma mutao desta classe, h
uma diminuio do fluxo inico.
Classe V: as mutaes desta classe conduzem a uma produo de protenas
normais mas em nveis reduzidos devido a uma desregulao da transcrio e
esto associadas a um fentipo de FC moderado. Englobam as mutaes no
promotor que reduzem a transcrio, splicing alternativo e uma maturao
ineficiente da protena. Um splicing anormal pode resultar em ausncia de
RNAm normal ou em nveis muito baixos, variando entre pacientes e mesmo
entre rgos de um mesmo paciente.
Classe VI: incluem as mutaes que diminuem a estabilidade da protena
CFTR, tais como mutaes nonsense ou frameshift que causam a deleo dos
ltimos 70-98 bp da zona C-terminal da protena, e mutaes que afetam a
regulao de outros canais. As mutaes desta classe esto associadas a um
fentipo grave de FC.
TABELA DAS CLASSES DE MUTAES DO GENE CFTR

Tabela I Diferentes classes de mutaes do gene CFTR.

Classe

Efeito

Ausncia de protena CFTR

na membrana apical

II

Ausncia de protena CFTR

na membrana apical

III

IV

Quantidades normais de
protena CFTR no
funcional na membrana
apical
Quantidade normal de
protena CFTR com funo
residual na membrana apical

Efeito na
protena CFTR

Exemplos de
mutaes

c.1624G>T (G542X)
Sntese anormal de
c.3846G>A (W1282X)
protena
c.1585-1G>A
F508del
Processamento e
c.3909C>G (N1303K)
trfego anormal
c.3773_3774insT
c.1652G>A (G551D)
c.1679G>C (R560T)
Regulao defetiva
c.1475C>T (S492F)
Reduo da
condutncia

Quantidade reduzida de
protena CFTR funcional na
membrana apical

Reduo de
sntese/trfego

VI

Protena CFTR funcional mas

instvel na membrana apical

Diminuio da
estabilidade

Adaptado de O'Sullivan & Freedman, 2009, Culling & Ogle, 2010, Rogan et al., 2011.

c.350G>A (R117H)
c.1040G>C (R347P)
c.1000C>T (R334W)
IVS8T5
c.1364C>A (A455E)
c.3717+12191C>T
c.4234C>T (Q1412X)
c.4196_4197delTC
c.4147_4148insA

Mecanismo
mutacional
Nonsense
Frameshift
Splice
Missense
Deleo de
aminocidos
Missense

Missense

Missense
Splice
Nonsense
Frameshift

FIBROSE CSTICA NO BRASIL

No Brasil, tem-se estudado vrios genes relacionados com a FC, sendo em
resumo os genes:
(i) ACE atua no processo inflamatrio.
(ii) ADRB2 atua na resposta a broncodilatao.
(iii) COX-2 atua no processo inflamatrio.
(iv) ADRA2A bronconstrio e processo inflamatrio em doenas pulmonares
de maneira secundria.
(v) GSTM1, GSTT1, GSTP1, GCLC atua na resposta ao estresse oxidativo,
que leva a degradao do pulmo devido resposta inflamatria.
(vi) IFRD1 importante na resposta imune por atuar na via metablica dos
neutrfilos
(vii) TCF7L2 associado principalmente com o diabetes na fibrose cstica
(viii) MBL2 atua na resposta imune inata
(ix) TGF-1 regula a proliferao e diferenciao das clulas, estando
envolvido em diversas doenas pulmonares.
(x) CD14 receptor de lipopolissacardeos de membrana de bactrias gram
negativas como a Pseudomonas aeruginosa, sendo responsvel em identificar
a bactria como potencial patgeno.
Apesar dos estudos que esto sendo realizados, muito precisa ser
compreendido dos mecanismos que atuam na variabilidade da doena e qual a
funo de cada um desses genes, no complexo panorama que envolve a
fibrose cstica.

REFERNCIAS
Bartoszewski, R.A., Jablonsky, M., Bartoszewska, S., Stevenson, L., Dai, Q.,
Kappes, J., Collawn, J.F. & Bebok, Z. (2010) A synonymous single
nucleotide polymorphism in DeltaF508 CFTR alters the secondary
structure of the mRNA and the expression of the mutant protein. The
Journal of biological chemistry.
Cystic Fibrosis Fundation (2012) Patient Registry: Annual Data Report 2011.).
Bethesda, Maryland: Cystic Fibrosis Fundation.
Cystic Fibrosis Mutation Database (2011) http://www.genet.sickkids.on.ca/app.
Dalcin, P.T.R. & Abreu, F.a.A. (2008) Cystic fibrosis in adults: diagnostic and
therapeutic aspects. Jornal brasileiro de pneumologia : publicacao oficial
da Sociedade Brasileira de Pneumologia e Tisilogia.
Hehr, U., Dorr, S., Hagemann, M., Hansmann, I., Preiss, U. & Bromme, S.
(2000) Silver-Russell syndrome and cystic fibrosis associated with
maternal uniparental disomy 7. American journal of medical genetics.
O'sullivan, B.P. & Freedman, S.D. (2009) Cystic fibrosis. Lancet, 373, 1891-904.
Rowntree, R. & Harris, A. (2002) DNA polymorphisms in potential regulatory
elements of the CFTR gene alter transcription factor binding. Human
genetics.
Rowntree, R.K. & Harris, A. (2003) The phenotypic consequences of CFTR
mutations. Annals of human genetics.