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FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUMICA Y FARMACIA
TESIS DE GRADO
PREVIA LA OBTENCIN DEL TTULO DE
BIOQUMICO FARMACUTICO
PRESENTADO POR:
JSSICA KARINA POMASQUI BENAVIDES
RIOBAMBA ECUADOR
2012
DEDICATORIA
A Dios por ser mi creador, amparo y
fortaleza, cuando ms lo necesit, y por
hacer palpable su amor a travs de cada uno
de los que me rodea.
A mis padres Wilson y Carmen quienes a lo
largo de mi vida han velado por mi bienestar
y educacin, brindndome su apoyo
incondicional y guindome con sus sabios
concejos en todo momento.
A mis hermanas Jeniffer y Dmaris quienes
han sido mi inspiracin para ser cada da
mejor.
A Cristina y Fernando quienes han apoyado
mi desarrollo y superacin, por ser ms que
mi hermana y cuado mis amigos.
A todos ustedes mi esfuerzo y gratitud, por
ser pilares fundamentales en mi camino y
formar parte de este logro que me abre
puertas inimaginables en mi desarrollo
profesional.
AGRADECIMIENTO
A la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo por ser el
templo en el que se impartieron todos los conocimientos
adquiridos a lo largo de la carrera estudiantil.
Al Comit Central de Mujeres UNORCAC, a la Procesadora
de Alimentos y Bebidas Kutacachi Sara Mama y a la
Asamblea de Unidad Cantonal de Cotacachi por el apoyo
brindado en la realizacin del trabajo investigativo y de
manera especial al equipo del proyecto Mujeres indgenas
y campesinas trabajando por la soberana alimentaria, en
su coordinacin a la Ing. Katiusca Rubio por su confianza y
amistad.
A la Dra. Olga Lucero y al Dr. Carlos Pilamunga., porque
su constancia en la direccin y asesora del presente
trabajo de investigacin, han sido el empuje para su
desarrollo y culminacin.
A la Dra. Susana Abdo, a la Dra. Janeth Gallegos, al Dr.
Carlos Donoso, al Dr. Julio Idrovo, al Bqf. Fausto Contero
y al Bqf. Diego Vinueza, que me colaboraron para que esta
tesis se realice de la mejor manera posible.
A mis amigos y compaeros, en especial a Shirley, Gisela,
Anita y Carlitos que me brindaron su voz de aliento en
momentos duros para continuar la investigacin a pesar de
las pequeas vicisitudes que se presentaron en el camino. A
Tania, Gabriela, Dayana, Mayra y Silvana con quienes
hemos crecido en todos los sentidos y a pesar de la distancia
siempre siguieron ah.
Y a todas aquellas personas que de una u otra forma,
colaboraron o participaron en la realizacin de esta
investigacin.
FIRMA
Dra.Yolanda Daz H.
FECHA
__________________
_______________
__________________
_______________
__________________
_______________
__________________
_______________
__________________
_______________
______________________
________________________________________
JSSICA KARINA POMASQUI BENAVIDES
NDICE DE ABREVIATURAS
ANOVA
ATP
BGCL
C
C
cm
D
ESPOCH
FAO
g
GL
ha
h
INEN
INIAP
kg
L
mg
min
mL
mm
msnm
MO-LSAIA
N
NAD
nm
NTE
OMS
ppm
qq
SPSS
superf.cont.
t
T
UFC
UNORCAC
v/v
m
L
%
3M
Analysis of Variance
Adenosn trifosfato
Caldo verde brillante bilis-lactosa
Concentracin
Grados Celsius
Centmetros
Disolucin
Escuela Superior Politcnica de Chimborazo
Organizacin de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentacin
Gramos
Grados Gay-Lussac
Hectreas
Horas
Instituto Ecuatoriano de Normalizacin
Instituto Nacional Autnomo de Investigaciones Agropecuarias
Kilogramos
Litros
Miligramos
Minutos
Mililitros
Milmetros
Metros sobre el nivel del mar
Mtodo-Laboratorio de Servicio de Anlisis e Investigacin en
Alimentos
Normalidad
Nicotinamina adenina dinucletido
Nanmetros
Norma tcnica ecuatoriana
Organizacin Mundial de la Salud
Partes por milln
Quintales
Statistical Package for the Social Sciences
Superficie de conteo
toneladas
Temperatura
Unidades Formadoras de Colonias
Unin de Organizaciones Campesinas e Indgenas de Cotacachi
Volumen/volumen
Micrmetros
Microlitros
Porcentaje
NYSE: MMM
NDICE GENERAL
NDICE DE ABREVIATURAS........
NDICE GENERAL.......
NDICE DE CUADROS
NDICE DE TABLAS........
NDICE DE GRFICOS.......
NDICE DE FIGURAS......
NDICE DE FOTOGRAFAS...
NDICE DE ANEXOS...
INTRODUCCIN......
CAPTULO I......
1.
MARCO TERICO....
i
ii
iv
v
vi
vii
viii
ix
1.1
Fermentacin alcohlica
1.1.1
Medios de cultivo utilizados en la fermentacin
1.1.1.1
Fuentes de carbono.
1.1.1.2
Fuentes de nitrgeno..
1.1.1.3
Sustratos complejos
1.1.2
Microorganismos fermentadores
1.1.2.1
Levaduras...
1.1.3
Condiciones de la fermentacin alcohlica
1.1.3.1
pH...
1.1.3.2
Oxigenacin...
1.1.3.3
Temperatura...
1.1.3.4
Tiempo de fermentacin.
1.1.4
Mecanismo de fermentacin..
1.2
Bebidas alcohlicas
1.2.1
Definicin...
1.2.2
Importancia y desarrollo histrico..
1.2.3
Clasificacin de las bebidas alcohlicas
1.3
Chicha
1.3.1
Definicin y aspectos generales.
1.3.1.1
La chicha en el Ecuador.
1.3.2
Chicha de jora
1.3.2.1
La tradicin viva de la chicha
1.3.2.2
Definicin y aspectos generales.
1.3.2.3
Maz (Zea mays).
1.3.2.4
Ingredientes utilizados en la elaboracin de chicha de jora..
1.3.2.5
Proceso de elaboracin de chicha de jora..
1.3.2.6
Caractersticas organolpticas
1.3.2.7
Importancia nutricional
CAPTULO II.....
1
2
2
3
3
4
4
12
12
12
13
14
14
16
16
16
17
19
19
20
20
20
21
22
34
35
39
40
41
2.
PARTE EXPERIMENTAL.....
41
2.1
2.2
2.2.1
2.2.2
41
41
41
42
1
1
ii
2.2.3
Material de laboratorio y otros...
2.2.4
Reactivos
2.2.5
Medios de cultivo...
2.3
Mtodos de anlisis
2.3.1
Caracterizacin fsico - qumica del maz..
2.3.1.1
Muestreo y conservacin de la muestra.
2.3.1.2
Estudio de los componentes del maz
2.3.2
Proceso de obtencin de jora..
2.3.3
Caracterizacin fsico - qumica de la jora.
2.3.3.1
Muestreo y conservacin de la muestra.
2.3.3.2
Estudio de los componentes de la jora..
2.3.4
Proceso de elaboracin de chicha de jora...
2.3.4.1
Obtencin del mosto..
2.3.4.2
Fermentacin del mosto.
2.3.5
Determinacin de los parmetros ptimos en la fermentacin alcohlica
2.3.5.1
Factores en estudio, tratamientos y diseo experimental..
2.3.5.2
Fermentacin del mosto.
2.3.5.3
Variables de control y mtodos de evaluacin..
CAPTULO III...
43
45
46
46
46
46
47
59
Resultados y discusin.......
78
3.1
Caracterizacin fsico - qumica del maz..
3.2
Proceso de obtencin de jora.
3.3
Caracterizacin fsico - qumica de la jora
3.4
Proceso de elaboracin de chicha de jora..
3.4.1
Obtencin del mosto..
3.4.2
Fermentacin del mosto.
3.4.2.1
Ensayos preliminares.
3.5
Determinacin de los parmetros ptimos en la fermentacin alcohlica
3.5.1
Variables de control y mtodos de evaluacin...
CAPTULO IV
78
80
84
86
86
89
89
92
93
105
Conclusiones..
105
CAPTULO V.
106
Recomendaciones...
106
CAPTULO VI
107
Resumen.
107
CAPTULO VII..
110
Bibliografa.
110
CAPTULO VIII....
120
Anexos
120
3.
62
63
63
64
65
66
67
68
78
iii
NDICE DE CUADROS
CUADRO No. 1
CUADRO No. 2
CUADRO No. 3
CUADRO No. 4
CUADRO No. 5
CUADRO No. 6
CUADRO No. 7
CUADRO No. 8
CUADRO No. 9
CUADRO No. 10
CUADRO No. 11
CUADRO No. 12
CUADRO No. 13
CUADRO No. 14
78
80
82
84
85
87
88
89
91
92
100
101
102
103
iv
NDICE DE TABLAS
TABLA No. 1
TABLA No. 2
TABLA No. 3
TABLA No. 4
TABLA No. 5
TABLA No. 6
TABLA No. 7
TABLA No. 8
4
5
18
31
32
32
64
67
NDICE DE GRFICOS
Temperatura y Brix vs tiempo de coccin del
88
mosto....
Crecimiento de la poblacin de levaduras en funcin al
GRFICO No. 2 tiempo
de
fermentacin.
Temperatura
de
22
93
C.................................................................
Crecimiento de la poblacin de levaduras en funcin al
GRFICO No. 3 tiempo
de
fermentacin.
Temperatura
de
28
94
C.................................................................
Comportamiento de los slidos solubles (Brix) durante el
GRFICO No. 4
96
tiempo de fermentacin. Temperatura de 22 C..
Comportamiento de los slidos solubles (Brix) durante el
GRFICO No. 5
96
tiempo de fermentacin. Temperatura de 28 C..
Comportamiento del pH durante el tiempo de fermentacin.
GRFICO No. 6
97
Temperatura de 22 C..
Comportamiento del pH durante el tiempo de fermentacin.
GRFICO No. 7
98
Temperatura de 28 C..
Comportamiento de la acidez durante el tiempo de
GRFICO No. 8
99
fermentacin. Temperatura de 22 C...
Comportamiento de la acidez durante el tiempo de
GRFICO No. 9
99
fermentacin. Temperatura de 28 C...
GRFICO No. 10 Atributos de calidad en funcin de sus porcentajes. 104
GRFICO No.1
vi
NDICE DE FIGURAS
FIGURA No. 1
FIGURA No. 2
FIGURA No. 3
FIGURA No. 4
FIGURA No. 5
FIGURA No. 6
FIGURA No. 7
FIGURA No. 8
FIGURA No. 9
FIGURA No. 10
FIGURA No. 11
FIGURA No. 12
FIGURA No. 13
FIGURA No. 14
FIGURA No. 15
6
7
7
8
10
13
15
24
25
27
38
47
60
63
69
vii
NDICE DE FOTOGRAFAS
FOTOGRAFA No. 1
FOTOGRAFA No. 2
84
84
viii
NDICE DE ANEXOS
ANEXO No. 1
ANEXO No. 2
ANEXO No. 3
ANEXO No. 4
ANEXO No. 5
ANEXO No. 6
ANEXO No. 7
ANEXO No. 8
ANEXO No. 9
ANEXO No. 10
ANEXO No. 11
ANEXO No. 12
ANEXO No. 13
ANEXO No. 14
ANEXO No. 15
ANEXO No. 16
ANEXO No. 17
ANEXO No. 18
ANEXO No. 19
ANEXO N. 20
ANEXO N. 21
ANEXO N. 22
ANEXO N. 23
ANEXO N. 24
120
128
131
133
135
138
139
140
140
140
140
140
141
141
141
141
141
142
143
145
147
149
151
153
ix
INTRODUCCIN
La fermentacin de los alimentos es una prctica muy antigua presente en todas las
culturas del mundo. Existe una gran variedad de este tipo de alimentos como la cerveza, el
vino, el vinagre, etc. que han sido estudiados extensamente. (5)
Sin embargo, existe un gran nmero de alimentos fermentados que se producen en forma
regional y que no se conocen fuera de su lugar de origen. Alimentos que forman parte
importante de la dieta de muchos grupos tnicos, los cuales se han consumido desde
tiempos inmemoriales. (5)
caracterstica de la regin de los Andes (Bolivia, Colombia, Ecuador, Per), cuyo origen se
remonta a la poca preincaica,
Actualmente los procesos que se utilizan para su obtencin son empricos y tradicionales,
en muchos casos se mezclan con valores msticos y religiosos resultando as una
elaboracin de carcter artesanal.
Por otro lado, se ha podido observar que muchas de estas preparaciones tradicionales han
sufrido un decaimiento debido a la introduccin de nuevos productos, poco nutritivos y
costosos, denominada comida chatarra. Pasando de su consumo habitual a
ocasional en fechas especficas de carcter religioso o poltico, formndose el criterio de
que son alimentos de temporada, de fiestas de celebracin. Contribuyendo as al olvido y
poco consumo de estas preparaciones, es decir perdiendo nuestra identidad cultural. (13)
Una propuesta valida dentro de este contexto es la desarrollada por parte del Comit
Central de Mujeres UNORCAC y la Asamblea de Unidad Cantonal de Cotacachi, en su
proyecto Mujeres indgenas y campesinas trabajando por la soberana alimentaria, un
programa de produccin y recuperacin de productos nativos de alto valor nutricional
como es el maz y la actualizacin de tecnologas tradicionales con la finalidad de llevar a
cabo un proceso de industrializacin de la chicha de jora.
Considerando todo lo anterior la presente investigacin tiene como objetivo determinar los
parmetros ptimos en la fermentacin alcohlica para industrializar la chicha de jora en la
procesadora de alimentos y bebidas Kutacachi Sara Mama, propuesta encaminada a dar
una alternativa de procesamiento creando una oportunidad de innovacin e investigacin
dentro de esta rea, ofertando un producto estable, nutritivo e inocuo .
Propsito fundamental que permitir rescatar una preparacin ancestral en extincin, pero
valorizable con la aplicacin de tecnologas modernas, conservando los saberes y los
sabores a partir de las costumbres que caracterizan e identifican a las comunidades alto
andinas del cantn Cotacachi.
-1-
CAPTULO I
1. MARCO TERICO
1.1 FERMENTACIN ALCOHLICA
-2-
a. Almidn
b. Sacarosa
-3-
c. Glucosa
Los substratos complejos brutos son una fuente barata de carbono, nitrgeno y otros
nutrientes para los procesos de fermentacin, e incluyen por ejemplo tejidos de plantas
enteras y una serie de subproductos vegetales, animales y microbianos. En la Tabla No.
1 se encuentran algunos ejemplos de los principales substratos complejos utilizados en
los procesos de fermentacin. (22)
-4-
Ingredientes
Extracto
Seco
Protenas
Carbohidratos
Grasa
Fibra
Cenizas
Cereales Enteros
Maz
Cebada malteada
82.0
96.0
9.9
13.0
69.2
70.0
4.4
2.0
2.3
3.5
1.3
2.5
Subproductos
derivados de
plantas
Melazas de
remolacha
Harina de
germen de maz
Pulpa de agrios
(seca)
77.0
6.7
65.1
0.0
0.0
5.2
93.0
22.6
53.2
1.9
9.5
3.3
90.0
6.0
62.7
3.4
13.0
6.9
Sangre
Lacto suero
Harina de hueso
93.0
95.0
92.0
80.0
12.0
50.0
2.5
68.0
0.0
<1.0
1.0
8.0
<1.0
0.0
3.3
3.0
9.6
31.0
94.6
52.5
0.0
1.5
10.0
Subproductos
derivados de
animales
Subproductos
Hidrolizado de
derivados de
levaduras
microorganismos
1.1.2
MICROORGANISMOS FERMENTADORES
1.1.2.1 Levaduras
-5-
mayora son saprofitas y proliferan en materia orgnica muerta, otras son parsitas,
facultativas u obligadas, por lo que se desarrollan en otros seres. (3)
Levadura
Saccharomyces ellipsoideus
Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces carlsbergensis
Torulopsis utilis
Candida lipolytica
Schizosaccharomyces spp.
Producto
Vino
Cerveza
Fuente de Protenas
Alcohol industrial
1. Morfologa
Las clulas de la levadura son relativamente grandes, su tamao vara entre 1-5 m de
ancho por 5-30 m de largo, aunque la mayora oscila entre 3-8 m de dimetro. Una
levadura tpica tiene forma ovoide pero tambin las hay alargadas, esfricas, e incluso
triangulares. (3)
-6-
La estructura de una levadura es la de una tpica clula eucariota (Figura No. 1). La
envoltura celular incluye la membrana citoplasmtica constituida por un ncleo, una
vacuola y numerosos grnulos y glbulos de grasa. No contiene flagelos u otros rganos
de locomocin. La pared celular est integrada por polmeros de glucosa y manosa, con
cantidades pequeas de protenas, lpidos y quitina. (22) (51)
2. Reproduccin
a. Reproduccin asexual
La mayora de las clulas se reproducen asexualmente por gemacin y unas pocas por
fisin binaria. En la gemacin se forma una protuberancia (yema) sobre su superficie
externa. Cuando la yema se agranda, al irse llenado del material gentico de la clula
madre, el material nuclear se replica por mitosis y una parte pasa a la clula hija. Se
forma la pared que divide a las dos clulas y la clula hija se desprende de la madre
(Figura No. 2). (3)
-7-
Algunas levaduras forman yemas que no puede separarse, dando lugar a cadenas cortas
de levaduras denominados pseudomicelio (Figura No. 3). (3)
b. Reproduccin sexual
-8-
3. Requerimientos nutricionales
Las levaduras son organismos hetertrofos, por lo tanto requieren de carbono orgnico
para obtener su energa y el carbono para la sntesis de sus componentes celulares. Sin
embargo los requerimientos nutricionales especficos de las levaduras pueden variar
entre las diferentes especies. Los azcares constituyen el mejor alimento energtico de
las levaduras.
-9-
El azufre puede ser suplido por sulfato presente en el medio, pero algunas crecen mejor
en presencia de una fuente de azufre orgnico.
La mayor parte de levaduras crecen mejor en medios en los que est disponible una
buena cantidad de agua. Sin embargo muchas de ellas pueden crecer en las condiciones
contrarias, como en soluciones con una elevada concentracin de solutos (sal o azcar).
(3) (51)
Por tanto, el tiempo de generacin es el tiempo que se requiere para que la poblacin se
duplique, razn por la cual a veces el tiempo de generacin se llama tiempo de
duplicacin. Durante cada generacin, tanto el nmero de clulas como la masa celular
se duplican. Los tiempos de generacin varan ampliamente entre los distintos
microorganismos. (10)
- 10 -
La duracin de esta fase es variable y depende principalmente del tamao del inculo
utilizado para la siembra. (52)
Fase de arranque
Una vez transcurrida la fase de latencia, inicia el crecimiento celular propiamente dicho,
la rapidez de reproduccin aumenta as como la rapidez especfica de crecimiento. (52)
- 11 -
Fase de muerte
- 12 -
1.1.3
continuacin:
1.1.3.1 pH
Durante las fermentaciones se utiliza generalmente cido sulfrico para ajustar el pH del
medio, aunque el cido lctico o el actico son tambin satisfactorios para el desarrollo
de las levaduras. (48) (51)
1.1.3.2 Oxigenacin
- 13 -
1.1.3.3 Temperatura
Las levaduras saprfitas soportan amplios rangos de temperatura, sin embargo a bajas
temperaturas no generan actividad, es decir no fermentan el medio. Por otro lado no
soportan temperaturas superiores a los 35 C, los mejores rangos de temperatura para su
desarrollo y crecimiento oscilan entre 20 a 30 C. (3)
- 14 -
La fermentacin alcohlica inicia con la glucolisis, la cual a su vez consta de dos etapas:
en la primera la glucosa se fosforila es decir incorpora el fosforo a expensas de una
molcula de ATP. Una vez fosforilada se rompe y forma el gliceraldehido 3-fosfato. En
la segunda etapa el gliceraldehido 3-fosfato se convierte en cido pirvico por la
oxidacin del NAD.
- 15 -
- 16 -
1.2.1
DEFINICIN
Por otra parte, la Organizacin Mundial de la Salud considera como bebidas alcohlicas
aquellas que contengan alcohol etlico en una proporcin de 2 y hasta 55% en volumen.
1.2.2
Las bebidas alcohlicas ocupan el primer lugar en volumen de produccin dentro de las
empresas biotecnolgicas. La principal bebida alcohlica por su volumen de produccin
a nivel mundial es la cerveza, proveniente de la fermentacin de cereales malteados y le
siguen en importancia los vinost70 de mesa, obtenidos por la fermentacin del zumo de
fruta, y las bebidas destiladas, elaboradas por concentracin, mediante destilacin, del
alcohol procedente de una fermentacin. (8) (10)
- 17 -
Desde esas pocas las diferentes civilizaciones han aprendido a fermentar diversos
sustratos a fin de producir bebidas alcohlicas autctonas. En general estas bebidas
haban contenido el grado alcohlico logrado exclusivamente por la fermentacin; fue
hasta el siglo XV cuando se empez a popularizar el arte de la destilacin, y por lo
tanto, aparecieron bebidas con mayor contenido alcohlico. (5)
1.2.3
Los dos primeros criterios son empleados en la clasificacin que se presenta en la Tabla
No. 3, adems entre las bebidas destiladas y no destiladas se hace una distincin
intermedia: esta es la de las bebidas fortificadas, resultantes de la mezcla de una bebida
alcohlica no destilada con una destilada o con alcohol, con el fin de aumentar el
contenido alcohlico. (5)
- 18 -
Sustrato
No destiladas
Destiladas
Fortificadas
Brandy, coac,
armaac, pisco, orujo o
grappa
Calvados
Jerez, oporto,
vermouth,
madeira, moscatel
Frutas
Uva
Vino, champaa
Vinos espumosos
Manzana
Pera
Cereza
Otros
Cereales
Cebada
Maz
Arroz
Sorgo
Varios
(incluyendo la Papa)
Vodka, ginebra,
akvavit
Caa
Melazas o jugo
Agaves
Miel
Whisky
Whisky de maz
Pulque
Vino de miel
Ron, aguardiente,
cachaza, pinga,
charanda
Tequila, mezcal
Algunas bebidas alcohlicas tienen denominacin de origen, como las de las culturas
indgenas. Esto significa que ninguna bebida puede ostentar ese nombre particular si
no fue producida dentro de la regin especfica de esta denominacin, con la materia
prima del lugar y bajo determinadas normas de proceso y calidad establecidas por las
autoridades del pas correspondientes y aceptadas en acuerdos internacionales por otros
- 19 -
pases. Algunas bebidas con denominacin de origen son: champaa, coac, tequila,
bourbon, jerez, etc. (5)
El contenido de alcohol en las bebidas no destiladas flucta entre 3,5 y 14% (v/v), con
algunas excepciones en las que se llega a obtener hasta un 20% (v/v), como en el sake.
En el caso de las bebidas destiladas se encuentra entre 35 y 55% (v/v). Las bebidas
fortificadas tienen un contenido de alcohol de alrededor del 20% (v/v). (5)
1.3 CHICHA
1.3.1
"Chicha" es el nombre
fermentacin alcohlica de mostos de uva, jora (malta de maz), frutas y otros vegetales
con caractersticas propias segn su origen. (29)
La chicha es una bebida que habita en el centro de la cosmovisin andina, a travs del
tiempo y en todas las regiones. Imprescindible en los actos sociales, mingas y eventos,
en donde se consolidan las relaciones de reciprocidad andina y la complementariedad.
Esencia de la identidad de los indgenas, que ancla su resistencia a favor de su cultura
gastronmica y privilegia el rol de la mujer en su elaboracin. (20)
Por lo general es una bebida suave, de bajo grado alcohlico, y elaborada con medios
artesanales. Cabe mencionar que el trmino chicha es utilizado en algunos pases de
Amrica latina para referirse a algunas bebidas no alcohlicas como la chicha criolla en
Venezuela o la chicha morada en el Per.
- 20 -
1.3.2
CHICHA DE JORA
La palabra chicha proviene del Caribe, porque la voz quechua para la bebida de maz es
aqa. Segn cuenta la tradicin, durante el mandato de Tpac Yupanqui las lluvias
deterioraron los silos donde se almacenaba maz por lo que los granos se fermentaron y
derivaron en malta de maz. Para que no se eche a perder el maz, se orden el reparto
de esta malta para aprovecharla en forma de mote (maz cocido en agua), pero
finalmente la terminaron desechando. Pero un poblador que rebuscaba entre la basura
debido al hambre, consumi de la malta terminando sumido en la embriaguez. (55)
- 21 -
de herencia
prehispnica. (55)
- 22 -
1. Origen y difusin
Aunque se ha dicho y escrito mucho acerca del origen del maz, todava hay
discrepancias respecto a los detalles de su inicio. La evidencia ms antigua del maz
como alimento humano proviene de algunos lugares arqueolgicos en Mxico donde
algunas pequeas mazorcas de maz estimadas en ms de 5000 aos de antigedad
fueron encontradas en cuevas de los habitantes primitivos. (14) (27) (28)
La difusin del maz a partir de su centro de origen en Mxico a varias partes del mundo
ha sido tan notable y rpida como su evolucin a planta cultivada y productora de
alimentos. Los habitantes de varias tribus indgenas de Amrica Central y Mxico
llevaron esta planta a otras regiones de Amrica Latina, al Caribe y despus a Estados
Unidos de Amrica y Canad. Los exploradores europeos llevaron el maz a Europa y
posteriormente los comerciantes lo llevaron a Asia y frica. De esta manera, en menos
de 300 aos el maz viaj alrededor del globo y se estableci como un importante
cultivo alimenticio en numerosos pases. (60)
Reino
Vegetal
Subreino
Embriobionta
Divisin
Angiospermae
Clase
Monocotyledoneae
- 23 -
Orden
Cyperales
Familia
Poaceae
Gnero
Zea
Especie
mays
Nombre Cientfico
Zea mays L
El cultivo del maz es de rgimen anual. Su ciclo vegetativo oscila entre 80 y 200 das,
desde la siembra hasta la cosecha. La estructura del maz es la siguiente (Figura No. 8):
- 24 -
Las diferencias entre las flores masculinas y las femeninas, se aprecian en la figura No.
9:
- 25 -
3) Flor masculina. Cada una est formada por glumelas, estambres, y un pistilo
rudimentario.
4) Par de glumelas.
5) Tres estambres frtiles.
6) Pistilo rudimentario.
7) Inflorescencia pistilada. Consta de ramas, hojas y estigma.
8) Rama lateral modificada. Los entrenudos son muy cortos.
9) Hojas. Estas cubren la inflorescencia.
10) Estigma. Recibe el polen. Se le conoce como cabello de elote.
11) Mazorca. Cada planta tiene de una a tres mazorcas, segn las variedades y
condiciones ambientales.
12) Tres tipos de granos.
13) Granos de maz cristalino o flint.
14) Granos de maz dentado.
15) Granos de maz dulce.
FIGURA No. 9 DIFERENCIAS ENTRE LAS FLORES MASCULINAS Y FEMENINAS DEL MAZ.
FUENTE:
- 26 -
El grano de maz es, botnicamente, un fruto en caripside que contiene slo una
semilla (o grano).
El embrin o germen (Figura No. 9) est localizado en un extremo del grano, adosado a
la cara ventral, siendo una estructura compleja, formada por el escutelo -tejido de
reserva-, el coleoptilo, la coleorriza, el epiblasto, la radcula, la plmula y el hipocotilo.
El germen est envuelto por las cubiertas exteriores del grano -pericarpio y tegmen-, as
como por la aleurona. (14)
- 27 -
La fisiologa del maz est determinada, en gran medida, por el factor gentico. La
forma de crecimiento y desarrollo de la planta depende de las condiciones ambientales,
slo hasta cierto punto. (59)
- 28 -
La duracin del ciclo de vida del maz depende de las condiciones genticas, aunque
tambin del ambiente. Periodos de sequa y temperaturas altas provocan una
maduracin temprana. (59)
6. Tipos de maz
Zea mays indurata o maz cristalino o corneo: Tiene un endospermo duro y granos
de almidn compacto. Generalmente el grano es liso y redondo. El maz duro
germina mejor que otros tipos de maz, particularmente en suelos hmedos y fros.
Es por lo general de madurez temprana y se seca ms rpidamente una vez que
alcanz la madurez fisiolgica. Est menos sujeto a dao de insectos y mohos en el
campo y en el almacenamiento. Sin embargo, los maces duros rinden por lo general
menos que los maces dentados. Los maces duros son preferidos para alimento
humano y para hacer fcula de maz ("maicena"). (59)
- 29 -
El potencial de
Zea mays everta o maz reventado o palomero: Es una de las razas ms primitivas
y es una forma extrema de maz cristalino. Se caracteriza por un endospermo
cristalino muy duro, que solamente tiene una pequea porcin de endospermo
harinoso. Sus granos son redondos o puntiagudos. Se emplea principalmente para
consumo humano en la forma de palomitas (cotufas), dada su caracterstica de
expansin al someterse al calor. (7)
productos. (7)
7. Variedades de maz
En el Ecuador el cultivo de maz est distribuido en casi todo el territorio, desde cerca al
nivel del mar hasta las tierras altas de la serrana (3200 msnm), en suelos frtiles, as
como en terrenos pobres, pedregosos, planos o de pendiente, en colinas y en cerros, con
precipitaciones de 63 a 6000 mm/ao y los ms variados rendimientos. (47)
Las principales razas de maz existentes en el Ecuador son: Canguil, Sabanero, Cuzco,
Patillo, Mishca, Racimo de Uva, Chillo, Chulpi, Morochn, Huandango, Uchima entre
otras. (47)
- 30 -
Las variedades mejoradas conservan las mismas caractersticas de mazorca y grano que
el material original, as como la adaptacin especfica a las regiones que notablemente
superan a las variedades tradicionales; entre ellas estn: Chaucho INIAP-122,
Mishca INIAP-124, Blanco Blandito INIAP-102, Guagal INIAP-111, Zhima
INIAP-153 y Chulpi INIAP-192. (47)
- 31 -
1. Agronmicas y Morfolgicas
Das a la floracin femenina
Das a la cosecha en choclo
Das a la cosecha en seco
Altura de la planta
Altura de la mazorca
Longitud de la mazorca
Formas de consumo
Rendimiento comercial en choclo
Rendimiento comercial grano seco
Color del grano seco
Color del grano tierno
Color de la tusa
Tipo de grano
Textura del grano
Promedio
102
135
225
250 cm
140 cm
18 cm
Choclo, tostado, harina, mote humitas
190 sacos de 125 unidades/ha
88 qq/ha
Amarillo oro
Crema
Rosada 80 %
Blanca 15%
Morada 5%
Harinoso
Suave
13,03%
8,13%
2,32%
74,57%
Buena
FUENTE: SILVA, E. et al., 1997. VARIEDAD DE MAZ AMARILLO PRECOZ PARA LA PROVINCIA DE IMBABURA.
- 32 -
Porcentaje
en Peso
Almidn
Protena
Grasa
Azcares
Cenizas
Grano entero
100
71,5
10,3
4,8
2,0
1,4
Endospermo
82,3
86,4
9,4
0,8
0,6
0,3
Germen
11,5
8,2
18,8
34,5
10,8
10,1
Pericarpio (salvado)
5,3
7,3
3,7
1,0
0,3
0,8
FUENTE: PRIMO, E. et al., 1981. PRODUCTOS PARA EL CAMPO Y PROPIEDADES DE LOS ALIMENTOS.
De dicha tabla se deduce que el 98 % del almidn y el 73% de las protenas del grano se
localizan en el endospermo, y el 83% del aceite, el 70% de los azcares y el 78% de los
minerales, en el germen. El salvado de poco valor nutritivo, contiene alrededor del 45%
de hemicelulosas y un porcentaje elevado de celulosa. Gran parte de las vitaminas se
concentran tambin en el germen. Por tanto la distribucin de constituyentes en el grano
de maz es heterognea. (14)
Tipo
Humedad
Cenizas
Protenas
Fibra
cruda
Extracto
etreo
Hidratos de
carbono
Salpor
12,2
1,2
5,8
0,8
4,1
75,9
Cristalino
10,5
1,7
10,3
2,2
5,0
70,3
Harinoso
9,6
1,7
10,7
2,2
5,4
70,4
Amilceo
11,2
2,9
9,1
1,8
2,2
72,8
Dulce
9,5
1,5
12,9
2,9
3,9
69,3
Reventador
10,4
1,7
13,7
2,5
5,7
66,0
Negro
12,3
1,2
5,2
1,0
4,4
75,9
- 33 -
- 34 -
Maz germinado y preparado especialmente para hacer chicha, en un proceso que suele
denominarse malteado, mediante el cual se consigue que el almidn del cereal se
transforme en azcares y en sustancias solubles y fermentables. (56)
Existen varias calidades y tipos de jora, especialmente: jora blanca, jora roja y jora
negra. El sabor de la chicha depende de la jora y esta depende del nmero de variedades
de maz y de la calidad de los mismos. Las variedades ms utilizadas para la obtencin
de jora son el maz amarillo y maz alazn. (63)
2. Agua
Para hacer chicha se usa agua de muchas regiones con muchos constituyentes qumicos
diferentes. Sin embargo, es deseable que haya por lo menos 60 ppm de calcio presente;
tambin se recomienda utilizar agua potable, con poco contenido en sales, ya que estas
pueden tener un efecto sobre el sabor final del producto. En trminos generales, el cloro
tiende a suavizar el sabor, en tanto que los sulfatos tienden a endurecer el sabor. (17)
3. Azcar
- 35 -
Qumicamente, es un disacrido formado por glucosa y fructosa: 1,2- -Dglucopiranosil- -D-fructofuranosa. (9)
Este azcar tiene un grado de solubilidad muy alto, una gran capacidad de hidratacin, y
es menos higroscpico que la fructosa, todas estas caractersticas hacen que se empleen
en la elaboracin de diversos alimentos. (1)
La sacarosa abunda en forma natural en casi todas las frutas, en algunas races, en
ciertos granos y en leguminosas. Su concentracin en los alimentos vara de manera
considerable segn el grado de madurez de estos productos. Procede de diferentes
plantas azucareras, las ms utilizadas son la caa de azcar y la remolacha azucarera.
(1) (9)
- 36 -
1. Malteado o germinado
Este paso consiste en aumentar el contenido de humedad del grano bajo condiciones
aerbicas. El maz es sumergido en agua hasta conseguir un nivel de humedad de 42 %
a 46% aproximadamente. Esta operacin se realiza con agua y a una temperatura
controlada (15-20 C) en un proceso que dura 24 horas. (58)
b. Germinacin
c. Secado
- 37 -
enzimticas sin originar la destruccin de las enzimas. En esta etapa la malta se puede
almacenar durante algn tiempo. (14) (17)
- 38 -
2. Molienda de la jora
3. Coccin
La funcin de esta etapa es convertir el almidn, la protena, los materiales de la pared
celular, etc., en un lquido fermentable, el mosto. (17)
La jora molida se coloca en un recipiente grande con agua, en una proporcin de un kilo
de jora por 10 litros de agua; se hierbe y calienta la mezcla durante 6 a 24 horas. En esta
etapa se realiza el agregado de sustancias aromticas.
- 39 -
4. Filtracin
5. Fermentacin
- 40 -
Sabor:
la
- 41 -
CAPTULO II
2. PARTE EXPERIMENTAL
2.1 LUGAR Y PRUEBAS DE ENSAYO
2.2.1
MATERIA PRIMA
- 42 -
2.2.2
INGREDIENTES
2.2.3
EQUIPOS
Autoclave.
Balanza de precisin.
Balanza IR.
(SHIMADZU)
Bao mara.
MEMMERT WP14
Bomba de vaco.
(BUCHI)
Caldero.
(PROINGAL)
Cmara fotogrfica.
(SONY)
(PROINGAL)
Centrifuga.
Notebook PC.
Cronmetro.
Digestor de fibra.
(PROINGAL)
0,1g)
0,0001g)
ADAM AQT
ADAM PW 254
HP Pavilion g4-1065la
(LABCONCO)
- 43 -
(MEMMERT)
Estufa.
Incubadora.
(MEMMERT)
Microscopio.
UNICO
Molino de piedras.
(PROINGAL)
Mufla.
pH metro.
HANNA pH211
Polarmetro Polax-2L
(ATAGO)
Refractmetro portable.
(HAND HELD)
INDURAMA RI 470
(PROINGAL)
Titulador automtico.
Ultrasonido.
2.2.4
Alcoholmetro de Gay-Lussac.
Algodn hidrfilo.
Balones aforados.
Balones kjeldahl.
Buretas.
Cmara de Neubauer.
Cajas Petri.
Desecador.
Embudos de vidrio.
Embudos plsticos.
Gradilla.
Lana de vidrio.
Malla de asbesto
BRANSON 2510
- 44 -
Mangueras de plstico.
Material de aseo.
Material de proteccin.
Matraz de destilacin.
Matraz kitasato.
Matraz volumtrico.
Mechero bunsen.
Mortero y pistilo.
Piceta.
Picnmetro de 20 mL.
Pinzas universales.
Plastic wrap.
Probetas.
Puntas desechables.
Reverbero.
Soportes universales.
Termmetro.
Varillas de agitacin.
- 45 -
Vidrio reloj.
2.2.5
REACTIVOS
Agua destilada.
Alcohol antisptico.
ter etlico.
Hexano.
xido de selenio.
Suero fisiolgico.
- 46 -
2.2.6
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Saboraud
Caldo triptona
Solucin de Cloranfenicol
- 47 -
Una vez molidas, las muestras fueron colocadas en fundas hermticas y estriles, las
mismas que fueron almacenadas en reposteros de plstico con cierre hermtico. Se
trasladaron las muestras correctamente etiquetadas a Riobamba desde Cotacachi, para
ser analizadas en el laboratorio.
Principio
- 48 -
Procedimiento
3C. Enfriar en
3 C, sin la tapa.
Clculos
Siendo:
- 49 -
Principio
Procedimiento
Colocar los balones en el digestor kjeldahl con los calentadores en 5 por 1 hora,
agitando los matraces a los 30 minutos; enfriar y con un poco de agua (2 mL)
para disolver los slidos formados.
Titular con cido clorhdrico 0,02 N hasta obtener una coloracin violeta.
Principio
- 50 -
Procedimiento
5C,
- 51 -
Clculos
)
)
Siendo:
Principio
El almidn es tratado con una solucin diluida de cido clorhdrico en bao mara y
luego se determina el ngulo de rotacin de la luz de una solucin clara en el
polarmetro.
Procedimiento
Para la muestra
Llevar a bao de agua hirviente por 15 min, con agitacin continua. Enfriar.
- 52 -
De ser necesario repetir el paso anterior cuantas veces sean necesarias hasta
obtener una solucin transparente y cristalina.
Para el blanco
Clculos
(
Dnde:
- 53 -
Principio
Una muestra libre de humedad (menos 20%) y grasa (menos 12%) se digiere primero
con una solucin cida y luego con una solucin alcalina; los residuos orgnicos
restantes, se recogen en un crisol filtro, La prdida de peso despus de incinerar la
muestra, se denomina fibra cruda.
Procedimiento
Secar en una estufa a 105 C, por 8 horas (preferible una noche), retirar en un
desecador, enfriar y pesar. Calcinar en una mufla por 4 horas a 600 C, retirar en
un desecador, enfriar y pesar.
Clculos
Segn la ecuacin:
- 54 -
Dnde:
Principio
Procedimiento
15 C, durante
- 55 -
Clculos
)
)(
Siendo:
Principio
- 56 -
Preparacin de la muestra
Procedimiento
Levantar la cubierta, lavar con agua destilada y secar sucesivamente con papel
absorbente.
Clculos
Principio
- 57 -
Procedimiento
Clculos
- 58 -
Siendo:
Principio
Procedimiento
- 59 -
2.3.2
Para la obtencin de la jora se tom como base el mtodo tradicional de malteo del maz
y el ensayo de germinacin que se especifica en la NTE INEN 1557 (Anexo No. 2),
aplicndose las siguientes operaciones: limpieza, maceracin en agua o remojo,
germinacin, secado, molienda y almacenamiento.
- 60 -
MATERIA PRIMA
Maz variedad INIAP 122 Chaucho
mejorado
SELECCIN Y LIMPIEZA
PESAJE
50 kg distribuidos
uniformemente en 5
bandejas.
REMOJO
Se humidifico el
maz con el roco
constante de agua
fra (15-20C).
GERMINACIN
Durante 96-168h, de
acuerdo al grano a
germinar. Con una
humedad prxima a
la saturacin.
SECADO
MOLIENDA
Hasta obtener
harina fina.
ALMACENAMIENTO
A temperatura
ambiente, en un
lugar limpio, seco y
ventilado.
Principio
- 61 -
Procedimiento
La muestra para el ensayo debe ser representativa del lote, tomada de acuerdo a
lo descrito en la norma INEN 1233:95 (Anexo N1).
Evaluacin
El secado se realiza hasta obtener una humedad del grano entre 7-9%.
- 62 -
Principio
Procedimiento
2.3.3
Las muestras
- 63 -
2.3.4
MAIZ
Seleccin y limpieza
Remojo
MALTEO
Germinacin
Secado
MOLIENDA
COCCION
Impurezas
FILTRACION
Aadir azcar
Natural
FERMENTACION
Inoculacin de
levaduras
- 64 -
Ingredientes
Ingredientes
Porcentaje
Harina de jora
83%
Agua
17%
Total
100%
Azcar*
Procedimiento
Mezclar
anteriormente descritos.
-
- 65 -
Evaluacin
1. Ensayos preliminares
La preparacin del medio para la fermentacin se realiz de la misma manera que en el inciso
2.3.4.1.
- 66 -
2.3.5
DETERMINACIN
DE
LOS
PARMETROS
PTIMOS
EN
LA
FERMENTACIN ALCOHLICA
- 67 -
Tratamientos
Descripcin
T1
22C
pH 4,5
T2
22C
pH 5,0
T3
22C
pH 5,5
T4
28C
pH 4,5
T5
28C
pH 5,0
T6
28C
pH 5,5
El anlisis estadstico se ejecut con los programas estadsticos G-Stat 2.0 y SPSS
versin 18.0, se realiz el anlisis de Varianza (ANOVA) multifactorial que es un
mtodo para comparar dos o ms medias, y se aplic la prueba de significancia de
Tukey, se trabaj con un 95% de confianza. (12)
Para evaluar las condiciones en que se llev acabo la fermentacin alcohlica en forma
natural, se utilizaron 12 envases de plstico con capacidad de 400 mL, provistos de
tapas a las que se adaptaron vlvulas airlock, elaboradas de forma casera, adems
dispensadores para tomar muestras. Estos envases se utilizaron como bioreactores.
- 68 -
necesario acidificar el medio utilizando vinagre, un cido dbil que no daa a las
levaduras.
Principio
- 69 -
las cuales se puede alojar un volumen conocido de lquido. Una de las placas posee una
grilla de dimensiones conocidas y que es visible al microscopio ptico.
Procedimiento
- 70 -
Clculos
(
(
Principio
- 71 -
dentro de una muestra (azcares, cidos orgnicos, alcoholes). Los azcares estn
relacionados, directamente con el ndice de refraccin el cual depende de la cantidad de
estos en el medio.
Procedimiento
Levantar la cubierta, lavar con agua destilada y secar sucesivamente con papel
absorbente.
Clculos
Principio
El pH puede definirse como una medida que expresa el grado de acidez o basicidad de
una solucin en una escala que vara entre 0 y 14.
Procedimiento
- 72 -
Para la determinacin de la acidez total se tom como referencia la NTE INEN 348 y
NTE INEN 2322:2002.
Principio
La acidez total se define como la suma de los cidos valorables obtenida cuando se lleva
la bebida alcohlica a neutralidad (pH: 7), por adicin de una solucin alcalina.
Procedimiento
- 73 -
Clculos
En donde
0,09 = mili equivalentes de cido lctico de una solucin de cido lctico 1,0 N.
(
Principio
La densidad relativa se precisa como la relacin por cociente entre la densidad de una
bebida alcohlica y la densidad del agua destilada, considerada ambas a la misma
temperatura.
Se determina la densidad relativa a 20 /20 C por relacin entre la masa de una muestra
analizada y la masa de agua destilada, correspondientes ambas a un mismo volumen,
utilizando un mismo picnmetro.
Procedimiento
- 74 -
Lavar el picnmetro con agua corriente y luego, en forma rpida, con la mezcla
sulfocrmica. Despus, lavar varias veces con agua destilada y finalmente con
etanol y ter etlico;
Retirar el picnmetro del bao, secar exteriormente con papel filtro y pesar con
aproximacin al 0,1 mg.
Retirar el picnmetro del bao, secar exteriormente con papel filtro y pesar con
aproximacin al 0,1 mg.
Clculos
Siendo:
- 75 -
Principio
Preparacin de la muestra
0,5 C o
que sobrepase la marca, utilizando una pipeta, hasta obtener el volumen exacto
de 250 mL.
-
0,5 C o
- 76 -
Procedimiento
Dejar en reposo hasta que desaparezcan las burbujas de aire que se forman en el
seno del lquido y efectuar la lectura en el alcoholmetro, considerando el nivel
real del lquido y no la elevacin del menisco, utilizando una lupa, si fuera
necesario.
7. Anlisis sensorial
Para la
- 77 -
Las panelistas fueron separadas entre s y se realiz la evaluacin en un rea limpia con
iluminacin natural, buena ventilacin, para impedir acumulacin de olores que
interfieran en el proceso de degustacin y libre de ruidos, que puedan distraer a las
catadoras.
- 78 -
CAPTULO III
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1 CARACTERIZACIN FSICO - QUMICA DEL MAZ
Anlisis
Mtodo
Unidad
Valores*
Humedad
INEN 518
16,30
Protena
MO-LSAIA-01.04
7,74
INEN 523
5,79
POLARIMTRICO
70,02
MO-LSAIA-01.05
2,66
Cenizas
INEN 520
1,34
Acidez
INEN 521
0,29
pH
INEN 526
Brix
INEN 380
Grasa
Almidn
Fibra
5,56
%
1,40
El almidn como en todos los cereales es el componente mayoritario del grano de maz
con un contenido del 70, 02 %, el mismo que se ajusta a lo expuesto por Primo, E. et. al.
(1981), los hidratos de carbono representan del 65-90% del peso seco de los granos de
cereales, el componente principal de est fraccin es el almidn y la FAO. (1993) al
mencionar que este en el maz corresponde hasta el 72-73% del peso del grano.
- 79 -
Con respecto al contenido de grasa el resultado obtenido (5,79%) se ajusta a los lmites
establecidos en la norma INEN 2051: 1995 (mnimo 3,5%, no se expresa un valor
mximo). Adems este valor se ratifica, con el porcentaje de grasa en maces harinosos
(5,4 %) dados por la FAO (1993).
En cuanto a los Brix que representa el contenido de solidos solubles y que en el caso de
los cereales es igual al contenido de azcares, se obtuvo un resultado de 1,4%, dato que
concuerda con lo expresado por Primo, E. et.al. (1981) de que los granos de los
cereales contienen alrededor de 1-3 %, en peso, de azcares libres. El azcar ms
abundante es la sacarosa.
Las cenizas en el maz evaluado son del 1,34 %, que est dentro de la concentracin de
cenizas en el grano de maz (1,3 %), segn indica la FAO. (1993).
molido (mx. 13 %). Esto se debe a que la composicin qumica del maz se ve
influenciada por factores externos como las condiciones de cultivo -climatologa,
abonado, poca de cosecha, humedad relativa etc.- y de la historia de partida, una vez
- 80 -
cosechado, hasta que llega al consumidor como lo seala Primo, E. et.al. (1981). La
humedad, constituye un elemento importante, que influye adems en los cambios de
calidad durante el almacenamiento, elaboracin, en su valor econmico y en su
estabilidad.
En efecto el maz con humedad elevada, de textura blanda, se deteriora con facilidad
durante el almacenamiento, mientras que el cereal con niveles bajos de humedad se
quiebra. El nivel de humedad ms aceptado para la comercializacin del maz segn lo
adoptado por la FAO. (1993) en su publicacin El maz en la nutricin humana es de
15,5%.
Parmetros controlados
Fase
Remojo
Germinacin
Secado
Aireacin
Humedad
Relativa
Temperatura
No
Si
No
90%
90%
0%
20 C
20 C
40-60 C
Tiempo
4 das
2- 3 das
- 81 -
aireacin.
Una vez germinado el grano, se procedi a disminuir el contenido de agua del cereal; se
utiliz para ello aire caliente. En esta fase denominada secado, se restablecieron los
parmetros fijados en la cmara para ser utilizada como deshidratadora. Se removi el
porcentaje de humedad hasta alcanzar un 0 % y se ajust la temperatura a 60C.
El tiempo de secado se defini entre 2-3 das, hasta conseguir bsicamente, una
deshidratacin del producto, y generar determinadas reacciones qumicas entre
componentes del cereal germinado que confieren a la malta acabada parte de los
caracteres organolpticos y tecnolgicos que la distinguen.
Cada especie necesita absorber cierto mnimo de humedad para que ocurra la
germinacin, en el maz el porcentaje adecuado es de aproximadamente 30,5%. La
evidencia experimental ensea que el hecho de que la semilla necesite un contenido de
humedad alto para germinar no implica que su germinacin se retarde por esa
condicin. El exceso de agua puede ser tan pernicioso para la semilla como la carencia.
S el nivel de agua llega a excluir o restringir la penetracin de oxgeno a la semilla, la
germinacin se retarda o no ocurre, en un gran nmero de especies.
El proceso de germinacin, como todos los procesos fisiolgicos est afectado por la
temperatura. Para cada clase de semillas existe una temperatura mnima y una mxima
en la que ocurre la germinacin. Adems, dentro del rango temperatura mnimamxima, existe un punto en el que se obtiene mxima germinacin y sta ocurre ms
rpidamente; este punto corresponde a la temperatura ptima. En el maz la temperatura
- 82 -
Las necesidades de oxgeno cambian con las diferentes fases a travs del malteo. Se ha
encontrado que el grano de maz es indiferente a la presencia o ausencia de oxgeno
durante la imbibicin, pero requiere de oxgeno durante la emergencia de la radcula, en
un rango muy amplio de concentraciones. Sin embargo a concentraciones de oxgeno
menores que la del aire el desarrollo y crecimiento de la radcula se reduce
drsticamente.
Para verificar que las condiciones obtenidas en el proceso sean las ptimas se monitore
en cada fase las siguientes operaciones.
Remojo
Germinacin
Secado
Humedad
Desarrollo de
la plmula del
germen
Ensayo de Fheling
Caractersticas
organolpticas
43%
De 1 a 2 cm
Positivo
6,28%
Color dorado y
olor dulce.
El contenido de humedad fue medido a lo largo del proceso con el fin alcanzar un valor
ptimo que permita la iniciacin de la germinacin del grano, valor que concuerda con
lo expresado por Gigliarelli, P. (2009) que hay que hidratar el grano durante el remojo,
llevando su humedad a un 35-46%.
- 83 -
Segn Primo, E. et.al. (1981) el desarrollo de la plmula debe alcanzar la mitad o los
dos tercios de longitud del grano. Este criterio ratifica el dato encontrado para el grano
germinado, 1-2 cm como desarrollo de la radcula (Fotografa No. 1).
2 cm
- 84 -
Anlisis
Unidad
Valores de referencia
Jora 2
Jora 1
12,3
8,23
Resultados de la
jora obtenida*
6,28
Humedad
Protena
8,8
8,16
7,43
Grasa
4,4
5,45
7,38
Almidn
69,7
49,27
63,40
Fibra
3,0
2,80
3,95
Cenizas
1,8
1,51
1,44
Acidez
0,29
6,02
8,13
pH
Brix
- 85 -
Los resultados de almidn tambin difieren entre las dos joras de referencia, siendo los
valores ms bajos asociados a la jora 2, donde se ha producido mayor hidrlisis del
almidn, lo que puede estar influenciado por el proceso de germinacin del maz al que
han sido sometidas.
Los procesos bioqumicos que tienen lugar durante el proceso de malteado dan lugar a
la transformacin del grano de maz en jora y quedan resumidos en el Cuadro No 5.
CUADRO No. 5 COMPARACIN DE LA COMPOSICIN FSICO-QUMICA DEL MAZ Y DE LA JORA
Mtodo
Unidad
Maz*
Jora*
Humedad
INEN 518
16,30
6,28
Protena
MO-LSAIA-01.04
7,43
7,74
INEN 523
5,79
7,38
POLARIMTRICO
70,02
63,40
MO-LSAIA-01.05
2,66
3,95
Cenizas
INEN 520
1,34
1,44
Acidez
INEN 521
0,33
0,29
pH
INEN 526
5,56
6,02
Brix
INEN 380
1,4
8,13
Anlisis
Grasa
Almidn
Fibra
El anlisis comparativo de los resultados establece que el proceso de malteado del maz
produce cambios importantes, entre los que se destaca: la hidrlisis parcial del almidn
que de 70,02 % queda en 63,40 %, como consecuencia hay un aumento considerable de
- 86 -
los grados brix de 1,4% a 8,13%, deshidratacin debido al secado lo que se refleja en el
contenido de humedad (6,28%) y en el aumento de protena, grasa, ceniza y fibra, al
respecto Primo, E. et. al (1981) expresa que tras los procesos bioqumicos que tiene
lugar en el malteado, se observa el incremento notable de las actividades enzimticas, lo
que origina la hidrlisis parcial del almidn, un aumento considerable de los azcares
libres y solubilizacin parcial de las protenas, valores que sugieren una adecuada
germinacin del maz.
3.4.1
Parmetros
Temperatura de ebullicin
Mosto
92 C
Tiempo de coccin
2 horas
25-30C
6,02
5,57
8,13 %
17 %
- 87 -
Tiempo
Temperatura
Brix
30min
70 C
13 %
60min
90 C
16 %
90 min
92 C
17 %
120min
92 C
17 %
- 88 -
Grfico No.1
100
95
90
85
80
75
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Temperatura
Brix
30
60
90
120
Tiempo (min)
- 89 -
3.4.2
Tipo de Tratamiento
Fermentacin
natural (mosto sin
esterilizar)
0,083% de inculo
(mosto esterilizado)
0,16% de inculo
(mosto esterilizado)
0,33% de inculo
(mosto esterilizado)
0,5% de inculo
(mosto esterilizado)
Formacin de
carbonato de bario*
Caractersticas
organolpticas
0,0119
0,0200
0,0230
0,1238
0,0959
- 90 -
Previamente al proceso de catado las muestra fueron filtradas para eliminar cualquier
residuo que haya quedado tras el proceso de fermentacin.
- 91 -
Degustadores
Tratamientos
(muestras)
(repeticiones)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
A
4
5
5
4
3
2
5
5
5
5
B
1
2
4
2
1
4
4
2
4
4
C
3
3
3
5
4
3
2
3
3
3
D
5
4
2
3
2
5
3
4
2
2
E
2
1
1
1
5
1
1
1
1
1
Totales
43
28
32
32
15
= 150
De acuerdo a las tablas de Ranking total requerido para significacin a nivel del 5%
(p>5), o 1% (p>0,1). (Anexo No. 19, Tablas D-1 y D-2), se indica:
Para 1 % de significacin los valores para este caso son 18-42 y 20-40. En consecuencia
los valores inferiores a 20 y 18, indican aceptacin a nivel del 5 y 1 % respectivamente;
y los valores superiores a 40 y 42, indican rechazo a nivel del 5 y 1 % respectivamente.
- 92 -
3.5 DETERMINACIN
DE
LOS
PARMETROS
PTIMOS
EN
LA
FERMENTACIN ALCOHOLICA
CUADRO No. 10 ACONDICIONAMIENTO DEL MOSTO PARA LA FERMENTACIN
T1
Volumen de
mosto
300 mL
Temperatura
pH 4,5
Brix
iniciales
21 %
T2
300 mL
pH 5,0
21 %
22 C
T3
300 mL
pH 5,5
21 %
22 C
T4
300 mL
pH 4,5
21 %
28 C
T5
300 mL
pH 5,0
21 %
28 C
T6
300 mL
pH 5,5
21 %
28 C
Tratamientos
pH
22 C
- 93 -
3.5.1
Crecimiento de microorganismos
1,20E+07
1,00E+07
8,00E+06
6,00E+06
Fase de muerte
Fase de adaptacin
Fase estacionaria
T1
T2
4,00E+06
T3
Fase exponencial
2,00E+06
0,00E+00
0 Horas
- 94 -
1,60E+07
Fase de muerte
1,20E+07
1,00E+07
8,00E+06
6,00E+06
Fase de adaptacin
1,40E+07
Fase estacionaria
T4
T5
T6
Fase exponencial
4,00E+06
2,00E+06
0,00E+00
0 Horas
6 Horas
12 Horas
24 Horas 36 Horas
48 Horas
Tiempo (horas)
GRFICO No. 3 CRECIMIENTO DE LA POBLACIN DE LEVADURAS EN FUNCIN AL TIEMPO DE
FERMENTACIN. TEMPERATURA DE 28 C.
Los grficos No. 2 y No. 3 muestran como a temperaturas de 22C se desarrolla una
fermentacin tumultuosa hasta las 18 h y en mayor proporcin en los mostos incubados
a 28C hasta las 12 h, en concordancia Madigan, M. et.al. (2004) pronuncia que como
todas las reacciones qumicas, el crecimiento microbiano es afectado por la temperatura,
- 95 -
ejerciendo dos tipos de efectos opuestos sobre los organismos vivos. As, para cada
organismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no es posible el
crecimiento, una temperatura ptima a la que se produce el crecimiento ms rpido, y
una temperatura mxima por encima de la cual no es posible el crecimiento.
Ward, O. (1989) expresa que la velocidad de fermentacin aumenta generalmente con
la temperatura entre los 15 y 30 C. y Fereyra, M. (2006) indica que las bajas
temperaturas incrementan la duracin del proceso fermentativo, disminuyen la
velocidad de crecimiento de las levaduras y modifican la ecologa de la fermentacin
alcohlica.
En los Grficos No. 4 y 5 se presenta la variacin de Brix del mosto, en funcin del
tiempo de fermentacin de los tratamientos T1, T2, T3 y T4, T5, T6 respectivamente. Se
parti de un tiempo 0 y 21% de slidos solubles.
- 96 -
22,00
21,00
Brix (%)
20,00
19,00
T1
18,00
T2
T3
17,00
16,00
15,00
0 Horas
6 Horas
22,00
21,00
Brix (%)
20,00
19,00
T4
18,00
T5
T6
17,00
16,00
15,00
0 Horas
6 Horas
- 97 -
6,00
5,50
pH
5,00
T1
4,50
T2
4,00
T3
3,50
3,00
0 Horas
6 Horas
- 98 -
6,00
5,50
pH
5,00
T4
4,50
T5
4,00
T6
3,50
3,00
0 Horas
6 Horas
- 99 -
0,70
0,60
0,50
0,40
T1
0,30
T2
T3
0,20
0,10
0,00
0 Horas
Tiempo (horas)
GRFICO No. 8 COMPORTAMIENTO DEL LA ACIDEZ DURANTE EL TIEMPO DE FERMENTACIN.
TEMPERATURA DE 22 C.
0,60
0,50
0,40
T4
0,30
T5
0,20
T6
0,10
0,00
0 Horas
Se observa en los grficos No. 8 y 9 como a media que la fermentacin trascurre los
valores de la acidez se incrementan.
- 100 -
Segn Saltos, H. (1992) la fermentacin de la chicha inicia con los valores de acidez
propios del mosto (0,20 a 0,38 %), conforme el tiempo de fermentacin transcurre la
acidez va aumentando hasta valores cercano a 0,8%, como es de suponerse, el tipo de
nutrientes influye sobre la acidez total.
Los cidos que se forman durante el proceso de fermentacin de chicha de jora son el
cido lctico predominantemente y el cido actico.
Grado alcohlico
Tratamientos
T1
T2
T3
T4
T5
T6
Resultados
1 GL
2 GL
2 GL
2 GL
2 GL
3 GL
- 101 -
Tratamientos
Productividad de formacin de
etanol (gp/Lxh)
T1
T2
T3
T4
T5
T6
0,2500 a
0,5405 a
0,5405 a
0,5000 a
0,5000 a
0,7317 a
Promedio con letras iguales en una misma fila no difieren estadsticamente, segn Tukey 95%.
- 102 -
Degustadores
Tratamientos*
(muestras)
(repeticiones)
T1
T2
T3
T4
T5
T6
(AMARIILO)
(ROJO)
(ROSADO)
(TOMATE)
(BLANCO)
(VERDE)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
3
5
1
1
2
1
2
1
2
2
1
2
5
6
3
2
1
2
1
1
6
4
2
3
5
6
4
4
4
6
4
6
3
4
4
5
3
6
6
3
2
3
4
2
1
4
6
3
3
4
5
1
6
5
6
3
5
5
5
5
Totales
20a
24a
44b
44b
32a
46b
=210
- 103 -
De acuerdo a las tablas de Ranking total requerido para significacin a nivel del 5%
(p>5), o 1% (p>0,1). (Anexo No. 19, Tablas D-1 y D-2), se indica:
Para 1 % de significacin los valores para este caso son 20-50 y 23-47. En consecuencia
los valores inferiores a 23 y 20, indican aceptacin a nivel del 5 y 1 % respectivamente;
y los valores superiores a 47 y 50, indican rechazo a nivel del 5 y 1 % respectivamente.
ATRIBUTOS
Color
Dorado
Amarillo
Pardo
Crema
PORCENTAJES
100%
70 %
20%
0%
10%
Apariencia
Aguado
Normal
60%
0%
60%
Sabor
Fuerte / Maduro
Moderado/ Normal
Dbil/ No maduro
Aroma
Colada de maz
Mote
Tpico a chicha
100%
10%
90%
0%
80%
0%
0%
80%
- 104 -
Para la evaluacin sensorial se vali de los rganos de los sentidos, permitiendo una
valoracin de cada uno de los atributos.
90%
80%
Porcentajes (%)
70%
60%
50%
40%
90%
70%
80%
60%
30%
0%
100%
60%
100%
80%
COLOR
APARIENCIA
SABOR
AROMA
Tpico a chicha
0%
Mote
0%
Colada de maz
Moderado/ Normal
Fuerte / Maduro
10%
0%
Normal
10%
Aguado
Pardo
Amarillo
0%
Dorado
0%
Crema
20%
10%
Dbil/ No maduro
20%
Atributos de Calidad
GRAFICO No. 10 ATRIBUTOS DE CALIDAD EN FUNCIN DE SUS PORCENTAJES
Seguido del aroma con un 80%, es decir existe un nicho de consumidores que muestran
preferencia por la combinacin de aromas de la bebida alcohlica fermentada de jora.
- 105 -
CAPTULO IV
4. CONCLUSIONES
1. Para producir una jora de buena calidad, las condiciones ptimas de trabajo
fueron las siguientes: remojo y germinacin del maz durante 4 das,
manteniendo una humedad de 90% y temperatura 20 C, sometiendo adems al
cereal a aireacin. Una vez finalizada la germinacin, secado del grano entre 2-3
das a una humedad del 0 % y temperatura de 60C.
2. Con base en las condiciones descritas la harina de jora obtenida, presento las
caractersticas fsicas y funcionales apropiadas para la elaboracin de chicha de
jora, con un contenido de almidn 63,40 %, protena de 7,43%, grasa 7,38%,
brix 8,13 %, fibra 3,95%, cenizas 1,44%, pH 6,02 y acidez de 0,29%.
- 106 -
CAPTULO V
5. RECOMENDACIONES
principalmente como alimento para animales, una salida muy poco rentable para
la industria.
- 107 -
CAPTULO VI
6. RESUMEN
La determinacin de los parmetros ptimos en la fermentacin alcohlica para
industrializar la chicha de jora en la procesadora de alimentos y bebidas Kutacachi Sara
Mama, se realiz en las instalaciones de la misma, en los laboratorios de Alimentos y
Bioqumica de la Facultad de Ciencias de la ESPOCH y en el laboratorio de Servicio de
Anlisis e Investigacin en Alimentos de la Estacin Experimental Santa Catalina del
INIAP.
Los mtodos usados en la investigacin fueron inductivo-deductivos y cientficoexperimentales, utilizando como materia prima maz de la variedad INIAP-122
chaucho mejorado se parti con la elaboracin de malta (jora), al fijar las condiciones
para optimizar el proceso. En el extracto de malta se realiz pruebas para estudiar la
fermentacin. Para evaluar las condiciones en que se llev acabo la fermentacin
alcohlica en forma natural, se trabaj con distintos pH (4,5; 5,0 y 5,5) y temperaturas
(22 C y 28 C), durante un tiempo de 48 horas, se establecieron los valores ptimos de
acuerdo a la eficiencia del proceso y la aceptabilidad de los tratamientos, obtenindose
buenos resultados.
- 108 -
Se concluye que bajo las condiciones establecidas se obtiene una bebida muy agradable,
de las siguientes caractersticas: 17Brix, pH 3,79, acidez titulable de 0,59% y un
contenido de alcohol de 1 % (v/v).
- 109 -
SUMMARY
The methods used in this research were the inductive-deductive and scientific, using
corn as raw material of the INIAP 122 chaucho improved, it departed with the
development of malta (jora), to set conditions to get better the process. In malt extract
some tests were carried out to study fermentation. To evaluate the conditions of the
alcoholic fermentation in a natural way with different pH (4.5, 5.0, and 5.5) and
temperatures (22 C and 28 C), during 48 hours, the optimum values were established
according to the process with efficiency and acceptability of treatment, obtaining good
results.
To produce jora, this research was submitted to corn soaking and germination for 4
days, maintaining a humidity of 90% and a temperature of 20 C, grain drying 2 to 3
days to a humidity of 0% and temperature of 60 C. On natural alcoholic fermentation,
consideration the productivity of formation of ethanol was taken into account,
establishing that there is no significant difference in these variables, but after the
sensory evaluation, the following alternative was selected for developing technological
chicha, starting the fermentation to pH 4,5 and with a temperature of 22 C.
It is concluded that under the conditions, a nice drink, is obtained with the following
characteristics: 17 Brix, pH 3,79, acidity of 0,59% and an alcohol content of 1% (v/v).
- 110 -
CAPITULO VII
7. BIBLIOGRAFA
1. BADUI., S., Qumica de los alimentos. 4 a. ed., Mxico, D.F.-Mxico.,
Pearson Educacin de Mxico, S. A., 2006., Pp. 48-52
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Mxico, D.F.-Mxico.,
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McGraw-Hill/Interamericana de Espaa.,
1999.
Pp.
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Santiago-Chile.,
Autor.,
1993., 392 p.
12. PAZMIO., R., Principios de biometra y diseo experimental.,
Riobamba-Ecuador. Escuela Superior Politcnica de Chimborazo.,
2010., Pp. 27-42
13. PAZOS., J., Cocinas regionales andinas; Memorias del IV Congreso
Quito, Ecuador., Quito-Ecuador., Corporacin Editora Nacional.,
2010., Pp. 99, 215, 291-293
14. PRIMO., E., y CARRASCO., J. M., Productos para el campo y
propiedades de los alimentos: tecnologa qumica y agroindustrial.,
Madrid-Espaa., Alhambra., 1981., Pp. 27-47, 90-115
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tecnologas para procesar chicha de maz y sidra de manzanas.,
Ambato-Ecuador., Universidad Tcnica de Ambato., 1992., Pp. 16, 10-17, 22-31
16. SALTOS., H., y otros., Proyecto de investigacin tecnolgica para el
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L.,
18. SILVA., E., y otros., Variedad de maz amarillo precoz para la provincia
de Imbabura. Quito-Ecuador., INIAP., 1997., 2p.
19. THIEMAN., J., y PALLADINO., M., Introduccin a la biotecnologa.,
Trad. del ingls por Ediciones Grficas Arial, S. L.,
2 a. ed.,
Santiago- Chile.,
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agriculture and the evolutiSon of maize. CropImprov Vol. 6. No. 1.
1979. Pp. 1-18
28. WILKES, H.G. Teosinte: the closest relative of maize revisited. Maydica
Vol 30. 1985. Pp. 209-223
No. 380.,
Quito-Ecuador.,
INEN.,
- 114 -
No. 526.,
Quito-Ecuador.,
- 115 -
Bebidas
alcohlicas;
Cerveza;
Requisitos.,
No.
46. FULA., J., Desarrollo de una bebida fermentada con adicin de coccin
de maz,. Facultad de Ciencias., Especializacin en Ciencia y
Tecnologa de Alimentos., Universidad Nacional de Colombia.,
Bogot-Colombia., TESIS., 2010., Pp. 8-9, 22-30
Quito-Ecuador.,
- 116 -
Ingeniera
Agroindustria.,
Qumica
Agroindustria.,
Ingeniera
en
Quito-Ecuador.,
Facultad de Ingeniera
Departamento de Ciencias de la
Ingeniera en biotecnologa.,
Ingeniera
Qumica
Agroindustria.,
Ingeniera
en
Quito-Ecuador.,
- 117 -
Bibliografa de internet
PLANTA
PILOTO,
UTILIZANDO
TECNOLOGA
CERVECERA.
http://www.monografias.com/trabajos45/chicha-de-jora/chicha-dejora.shtml
2011/11/21
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2011/10/31
60. EL
MAZ
EN
LOS
TRPICOS.
MEJORAMIENTO
PRODUCCIN
<http://www.fao.org/DOCREP/003/X7650S/X7650S00.HTM
2011/11/06
64. MALTEADO
http://www.revistamash.com/detalle.php?id=335
2012/06/22
- 119 -
2012/04/12
CHICHA
DE
JORA
MASATO:
PURIFICACIN,
- 120 -
CAPTULO VIII
8. ANEXOS
ANEXO No.1 NTE INEN 1233:95
- 121 -
- 122 -
- 123 -
- 124 -
- 125 -
- 126 -
- 127 -
- 128 -
- 129 -
- 130 -
- 131 -
- 132 -
- 133 -
- 134 -
- 135 -
Dnde:
Xf: Concentracin final de levaduras (# levaduras/ml)
Xo: Concentracin inicial de levaduras (# levaduras/ml)
t : Variacin de tiempo (h)
Um: Velocidad mxima de crecimiento (h-1)
El tiempo de duplicacin, segn Scriban, 1985 y Madigan, et al., 2004 se define como
el tiempo en que se duplica la poblacin microbiana; tambin se lo llama tiempo de
generacin. Para determinar el tiempo de duplicacin, se utiliz la frmula.
Dnde:
td: Tiempo de duplicacin (h)
- 136 -
Dnde:
Yp/s: Tasa de rendimiento de etanol (gp/gs)
Pf: Concentracin final de producto (g)
Po: Concentracin inicial de producto (g)
So: Concentracin inicial de sustrato (g)
S: Concentracin final de sustrato (residual) (g)
Dnde:
- 137 -
Dnde:
- 138 -
- 139 -
- 140 -
ANEXO No. 8 RESULTADOS DEL COMPORTAMIENTO DEL pH EN FUNCIN DEL TIEMPO. A UNA
TEMPERATURA DE 22 C.
T1
T2
T3
ANEXO No. 10 RESULTADOS DEL COMPORTAMIENTO DE LOS BRIX EN FUNCIN DEL TIEMPO.
A UNA TEMPERATURA DE 22 C.
T1
T2
T3
0 Horas
3,20E+06
3,20E+06
3,20E+06
6 Horas
4,40E+06
4,60E+06
4,20E+06
12 Horas
5,00E+06
5,20E+06
7,60E+06
18 Horas
8,60E+06
1,02E+07
8,20E+06
24 Horas
6,80E+06
9,60E+06
7,00E+06
36 Horas 48 Horas
6,60E+06 4,60E+06
6,40E+06 4,60E+06
6,40E+06 5,60E+06
Xf
Xo
Tf-To
Um
td
Pf Po Sf So Yp/s
48 0,00756053 91,6796942 1 0 21 17 0,2500
T1 4,60E+06 3,20E+06
48 0,00756053 91,6796942 2 0 21 17,3 0,5405
T2 4,60E+06 3,20E+06
48 0,01165866 59,453406 2 0 21 17,3 0,5405
T3 5,60E+06 3,20E+06
- 141 -
ANEXO No. 13 RESULTADOS DEL COMPORTAMIENTO DEL pH EN FUNCIN DEL TIEMPO. A UNA
TEMPERATURA DE 28 C.
T4
T5
T6
T4
T5
T6
ANEXO No. 15 RESULTADOS DEL COMPORTAMIENTO DE LOS BRIX EN FUNCIN DEL TIEMPO. A
UNA TEMPERATURA DE 28 C.
T4
T5
T6
T4
T5
T6
0 Horas
4,60E+06
4,60E+06
4,60E+06
6 Horas
7,20E+06
6,40E+06
8,60E+06
12 Horas
1,50E+07
1,40E+07
1,52E+07
24 Horas
9,80E+06
1,02E+07
1,08E+07
36 Horas
6,40E+06
6,20E+06
9,00E+06
48 Horas
6,80E+06
6,40E+06
9,20E+06
Xf
Xo
Tf-To
Um
td
Pf Po Sf So
48 0,00088666 781,752023 2 0 21 17
T4 4,80E+06 4,60E+06
48 0,00688004 100,747622 2 0 21 17
T5 6,40E+06 4,60E+06
48 0,01444057
48 3 0 21 16,9
T6 9,20E+06 4,60E+06
Yp/s
0,5000
0,5000
0,7317
- 142 -
MAZ
A DIFERENTES
- 143 -
- 144 -
- 145 -
- 146 -
- 147 -
- 148 -
- 149 -
- 150 -
- 151 -
- 152 -
- 153 -
- 154 -