FACULTAD DE TECNOLOGA MDICA

ESCUELA DE LABORATORIO Y ANATOMA PATOLGICA

QUMICA

Prctica N
CROMATOGRAFA

DOCENTE
Q.F. Carmen Fernndez Arroyo

INTRODUCCIN
El botnico Mickhail Tsweet (1872-1919) tambin conocido por su nombre latinizado,
Tiselius, emple por primera vez el trmino Cromatografa (del griego chroma y
graphein que significan respectivamente coloe y escribir).
La Cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil, que se
aplica para la separacin, deteccin y cuantificacin de una amplia variedad de
sustancias coloreadas e incoloras como gases, iones orgnicos, aminocidos, azcares,
lpidos, drogas, esteroides, protenas, polisacridos y otros.
La Cromatografa se basa en el fraccionamiento de una muestra entre una fase mvil
que puede ser un lquido o un gas y una fase estacionaria que puede ser un lquido o
un slido. Fase mvil + fase estacionaria + muestra= sistema cromatogrfico.
El mtodo consiste en depositar la muestra a analizar o separar, en un lugar de la fase
estacionaria (siembra o punteo), la fase estacionaria con la muestra se introduce en la
fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y
la mvil.
Luego que las sustancias han sido separadas sobre la fase estacionaria, estas pueden
ser detectadas o visualizadas mediante reveladores, constituyendo el cromatograma.

OBJETIVOS
Identificar los colores de la clorofila y de los aminocidos, en este caso a travs de
un revelador.

MARCO TERICO
Tipos de cromatografa
Segn el fenmeno fsico y segn el estado fsico de las fases que intervienen:
a) Cromatografa de ADSORCION: cuando la fase estacionaria es un slido y la
separacin o desplazamiento de las sustancias depende del equilibrio de
adsorcin- desorcin. Para que dos o ms sustancias de una mezcla se separen por
cromatografa intervienen varios factores: estructura qumica, solubilidad en el
solvente, etc.
b) Cromatografa de PARTICIN: si es un lquido que se encuentra soportado en un
slido inerte, se trata de la cromatografa de particin. El soluto se reparte entra en
la fase mvil (lquido o gas) y la fase estacionaria.
c) Cromatografa de INTERCAMBIOS IONICOS: Se lleva a cabo con capas delgadas de
columnas rellenas de resinas. Esta tcnica depende del intercambio de iones entre
la fase mvil y los iones de la fase estacionaria. La fase estacionaria es un slido
insoluble el cual puede intercambiar irreversiblemente cationes y aniones con una
solucin. Una mezcla de iones es sorbida en la fase estacionaria y desarrollada con
una fase mvil inica, los iones son atrados mediante fuerzas electrostticas.

Tcnicas de Cromatografa
a) Cromatografa plana: la fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre
un papel. Las principales caractersticas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
b) Cromatografa en columna: la fase estacionaria se situa dentro de una columna.
Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos superespecficos
I. CROMATOGRAFA DE PARTICIN O REPARTO SOBRE PAPEL
Cromatografa en papel: el papel acta como soporte de la fase estacionaria,
cromatografa de particin.
El procedimiento, consiste en colocar una gota de solucin de mezcla a separar cerca
del borde inferior de una hoja o tira de papel filtro.
El papel se introduce entonces en una cmara hermtica cuya atmsfera est saturada
de disolvente y agua.
El papel puede disponerse en la mezcla sumergido en la mezcla disolvente, de forma
que el frente de la misma lo atraviesa hacia arriba (tecnica ascendente), o bien de
modo que el disolvente, cuyo recipiente est, en este caso, en la parte superior de la
cmara, recorre hacia abajo el papel (tcnica descendente).
A medida que el disolvente se desplaza, los componentes tambin recorren el papel
con velocidades variables, que dependen principalmente de las diferencias de sus
coeficientes de reparto entre las fases: acuosa (capa de hidratacin de las fibras de la
celulosa) y orgnica. Tras desecacin de las tiras de papel de filtro, las posiciones de los
componentes separados pueden averiguarse mediante el uso de reveladores
apropiados.
Determinacin de Rf:
La relacin entre la distancia recorrida sobre el papel por un componente de la
solucin problema y la distancia recorrida por el disolvente se designa Rf, factor de
retencin (Rf) llamado tambin relacin de frentes, el cual es caracterstico de cada
componente especfico.
Los disolventes q dan resultados ms satisfactorios son los parcialmente miscibles en
el agua, como el fenol, n-butanol y alcohol amlico.

MATERIALES Y REACTIVOS

PARTE EXPERIMENTAL
CLOROFILA

Necesitamos para esta prueba

unas
hojas
verdes
de
cualquier planta, en este caso
hemos utilizado espinaca, un
mortero y alcohol.

Luego exprimimos la gasa

sobre una luna de reloj, esta
sustancia vendra a ser la
muestra a observar.

Primero rompemos las hojas

en pequeos trozos para que
sea ms fcil poder triturar las
hojas de espinaca con etanol

Ya una vez trituradas las

hojas, tomamos una gasa y
absorbemos el lquido de las
hojas (clorofila).

Con la ayuda de una

micropipeta tomamos una
muestra para luego llevarla a
la placa cromatogrfica

Como podemos ver en la

imagen, hemos obtenido tres
tipos de colores: clorofila A, B
y C.

Hacemos dos muestras para

poder obtener un mejor
resultado. Llevamos esta placa
a la cmara cromatogrfica.

Observamos que la placa

absorbe
los
solventes:
bencina, acetona y agua.

Haciendo las mediciones

respectivas, como se muestra
en la imagen. El Rf es igual a
2.35

AMINOCIDOS

Preparamos
la
muestra
problema
que
es
la
metioninda y glicina; y la
muestra patrn que es la
metionina, glicina y lisina.
Otra muestra problema es la
glicina y lisina.

Preparamos los solventes y en

cada uno colocamos la
muestra, entonces podemos
observar que esta prctica es
muy lenta, requiere de mucho
tiempo para poder analizarla.

Una vez ya terminadas las

muestras, llevamos a cabina
de flujo laminar para echarle
el reactivo de Ninhidrina.

Luego de rociar la muestra

con ninhidrina llevamos al
calor para ver la coloracin,
este proceso debe ser
prolongado hasta obtener una
coloracin morada