"Ao de la Promocin de la Industria Responsable

y del Compromiso Climtico".

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

SANTA
NOMBRE:

CICLO

CURSO:

GLIMER BOCANEGRA REYES

MARIA CHUNQUE

VI

ANALISIS INSTRUMENTAL

TEMA:

PROFESOR:

AO:

JORGE DOMINGUEZ

INTRODUCCION
En nuestra presenta practica DETERMINACION DE VITAMINA C
POR ESPECTROFOTOMETRIA

que realizamos

fue determinar el

efecto de la longitud de onda dominante en el anlisis cuantitativo por

espectrofotometra mediante la utilizacin de cidos como el oxlico,
ascrbico, tambin utilizamos agua destilada y el colorante DFIF
.haciendo uso de diversos materiales completamente desinfectado para
que no alteren nuestros resultado de la prctica como pipetas, fiolas,
cubetas

del

espectrofotmetro

el

equipo

ms

importante

espectrofotmetro con el cual podemos encontrar nuestros resultados.

COMPETENCIAS
Cuantificar vitamina C en nuestros alimentos por
espectrofotometra .

el

MARCO TERICO
La vitamina C, o cido ascrbico, es un compuesto hidrosoluble de 6 tomos
de carbono relacionado con la glucosa. Su papel biolgico principal parece
ser el de actuar como cofactor en diversas reacciones enzimticas que
tienen lugar en el organismo. El cido ascrbico acta como coenzima de
las hidroxilasas de prolina y lisina, encargadas de hidroxilar la lisina y
prolina en el protocolgeno, modificacin necesaria para que ste pueda
formar los enlaces cruzados para formar las fibrillas de colgeno. En este
sentido, la vitamina C es importante para el mantenimiento del tejido
conjuntivo normal, para la curacin de heridas y para la formacin del
hueso, ya que el tejido seo contiene una matriz orgnica con colgeno. En
su condicin de agente reductor, el cido ascrbico posee otras propiedades
importantes, que parecen ser no enzimticas. Por ejemplo, ayuda a la
absorcin del hierro al reducirlo a su estado ferroso en el estmago; protege
la vitamina A, vitamina E y algunas vitaminas B de la oxidacin; tambin
favorece la utilizacin del cido flico ayudando a la conversin del folato
en tetrahidrofolato o mediante la formacin de derivados poliglutamato
del tetrahidrofolato. Finalmente, la vitamina C es un antioxidante
biolgico que protege al organismo del estrs oxidativo provocado por las
especies oxigeno reactivas.
La mayor parte de sntomas de la carencia de vitamina C se puede
relacionar directamente con sus papeles metablicos. Entre los sntomas de
carencias leves de vitamina C se encuentran la facilidad para producir
heridas, debido al incremento de la fragilidad de los capilares. El escorbuto
est asociado con una disminucin en la capacidad de curar heridas,
osteoporosis, hemorragias y anemia.
La vitamina C se encuentra principalmente en alimentos de origen
vegetal y puede presentarse en dos formas qumicas interconvertibles:
cido

ascrbico

oxidada),

(forma

siendo

reducida)

ambas

formas

cido

dehidroascrbico

funcionales

(forma

biolgicamente

mantenindose en equilibrio fisiolgico. Si el cido dehidroascrbico es

hidratado se transforma en cido dicetogulnico, no activo biolgicamente,
siendo

esta

transformacin

irreversible.

Esta

espontneamente en disolucin neutra o alcalina.

hidratacin

ocurre

O
OH
HO

HO

HO

OH
5

OH

OH

O C

O C

H C

cido dehidroascrbico

HO C

OH
H

CH2 OH
cido dicetogulnico
La vitamina C o cido ascrbico es un nutriente esencial para muchos
primates, un pequeo nmero de otros mamferos (cobayas y murcilagos
por ejemplo), unas pocas especies de pjaros y algunos peces. El hombre en
concreto, carece de la enzima que cataliza la etapa terminal de la sntesis
de cido ascrbico, la gulonolactona oxidasa, por lo que debe adquirirlo a
travs de la alimentacin, siendo esta la razn por la que en el hombre y
en otras especies el cido ascrbico adquiere el carcter de vitamina.
La vitamina C es un compuesto inestable, debido a la facilidad con la que se
oxida e hidrata. Se destruyen con facilidad en el procesamiento y
conservacin de los alimentos, por lo que es utilizada como indicador de la
prdida

vitamnica

de

un

alimento

durante

su

procesamiento

almacenamiento. Por otra parte, el calor y los cationes metlicos (cuidado

al cocinar en recipientes de cobre) destruyen la vitamina C.

Alimentos

como los ctricos, kiwi, fresones, brcoli, lechuga, entre otros, son fuente
natural de vitamina C, y su contenido depende de la especie, rea
geogrfica en las que son cultivados, las condiciones de almacenamiento
una vez recogidos y del estado de maduracin (generalmente aumenta con
la maduracin).
La vitamina C se puede reconocer mediante azul de metileno. Este
colorante

cuando est oxidado es de color azul y se reduce fcilmente

formando un compuesto

incoloro. Por otra parte, la cromatografa y la

titulacin volumtrica de xido-reduccin son mtodos utilizados para

cuantificar el contenido de vitamina C de un alimento. La cromatografa
lquida de alta presin (HPLC) es el mtodo ms utilizado por ofrecer una
gran precisin de los resultados. Sin embargo la tcnica de HPLC resulta
cara, por ello en esta prctica determinaremos el contenido de vitamina C

presente en la fruta, en bebidas preparadas o en complejos vitamnicos

mediante una titulacin volumtrica de xido reduccin.
Nota: las dosis recomendadas por la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS) para la vitamina C se sitan en 90 mg diarios para hombres y 75 mg
para mujeres.
1.1. Volumetras redox
La titulacin volumtrica es un mtodo de anlisis cuantitativo en el que
se mide el volumen de una disolucin de concentracin conocida (disolucin
patrn o titulante patrn) necesario para reaccionar completamente con
un

compuesto

en

disolucin

de

concentracin

desconocida.

Para

determinar cundo se ha llegado al final de la titulacin, en la disolucin

problema se agrega un indicador que sufre un cambio fsico apreciable,
como por ejemplo cambio de color, en el punto final de la reaccin
En esta prctica determinaremos el contenido de vitamina C mediante una
volumetra de xido-reduccin, la vitamina C tiene carcter reductor y
utilizaremos una disolucin de yodo como agente oxidante que constituye
el titulante patrn.
Para que una sustancia se oxide es necesario que otra se reduzca y al
revs (Reaccin de oxidacin-reduccin; REDOX). Por lo tanto cuando al
cido ascrbico reducido le aadimos yodo, este se reducir a yoduro a
consta de que el cido ascrbico se oxide.

Las titulaciones en las que interviene el yodo como agente oxidante se

denominan yodimetras. Dado que la reaccin entre el yodo y el cido
ascrbico presenta una estequiometra 1:1, en el punto final de la titulacin
el nmero de moles de yodo reducido es equivalente a los moles de cido
ascrbico oxidado. Es importante sealar que con este mtodo se determina
la capacidad reductora total de la disolucin, por ello, si la disolucin a
titular contiene otras sustancias reductoras adems del cido ascrbico el
volumen

de

la

disolucin

oxidante

(yodo)

consumida

puede

estar

aumentada, y por tanto, el contenido de cido ascrbico sobrestimado.

Adems hay que tener en cuenta que la vitamina C es oxidada fcilmente
por el aire, por tanto, las disoluciones que contienen vitamina C deben ser
preparadas inmediatamente antes de ser tituladas, con el fin de obtener
resultados fiables.
El almidn se utiliza como indicador para el yodo, debido a que forma un
complejo de color azul intenso con el mismo. Cuando aadimos yodo sobre
vitamina C reducida desaparecer pues pasar a yoduro (la vitamina C se
oxidar en el proceso). Cuando ya no quede vitamina C reducida el yodo no
desaparecer, se unir al almidn y aparecer el color azul indicando el
fin de la titulacin. El almidn se hidroliza con facilidad y uno de los
productos de la hidrlisis es la glucosa, la cual tiene carcter reductor, por
tanto, una disolucin de almidn parcialmente hidrolizada puede ser una
fuente de error en una titulacin redox.
NOTA: El color amarillo del zumo de naranja puede enmascarar en parte
el color azul por lo que hay que tener cuidado para observar el cambio de
color.

MATERIALES y METODOLOGIA
Materiales:

Cubetas del espectrofotmetro

Filtros del espectrofotmetro 520
Papel Tissue
Pipetas 1, 2, 3, 4, 5 y 10 ml.
Fiolas de 100 y 1000 ml.
Tubos de prueba.

Metodologa :
1. Reactivos:
a) Preparar una solucin de cido oxlico al 4% pesar 4gr. De este
cido y llevar a volumen de 1000 ml.Con agua destilada.

b) Soluciones estndar (madre) de cido ascrbico: Preparar una

solucin de 0.1% de cido ascrbico en una solucin acida de 0.4%
de cido oxalico.Pesar 100mg.de cido ascrbico y llevar a
volumen de 100ml con una solucin de cido oxlico al 4 %

c) estndares de trabajo(ET): tomar 1,2,3,4,5,ml de la solucin

madre de cido ascrbico y llevar a volumen de 100ml.con una
solucin de cido oxlico al 4%.esta solucin numeradas del 1 al 5
concentran

1,2,3,4y

ml.respectivamente.

mg.de

cido

ascrbico

por

100

d) Solucin coloreada (colorantes): Pesar 12mg. De 2_6 DFIF,

disolver y llevar a 1000ml de volumen con agua destilada.
Utilizar agua destilada hirviente. Almacenar en botella de color
oscura y en refrigeracin.
2. Preparacin de la curva estndar

a) tomar 4 tubos de prueba y enumerarlas de I al IV y

agregar lo siguiente:
I 10 ml. De agua destilada /
II 1 ml de cido oxlico al 0.4%
III 1ml de estndar de trabajo (ET) N 1+9ml de agua
IV 1ml del estndar de trabajo (ET) N 1

b) Ajustar a cero la absorbancia usando I

y el filtro

seleccionado.

c) Al tubo II aadir 9ml. Del colorante y exactamente despus

de 15 segundos, leer la absorbancia

d) ajustar a cero la absorbancia con la solucin del tubo III.

e) Al tubo IV aadir 9ml del colorante y exactamente

despus de 15 segundos, leer la absorbancia (L2)

Repetir el paso 3
a) Para cada estndar de trabajo (ET) y registrar los
correspondientes valores de L1 Y L2. construir la curva
estndar con las concentraciones de cido ascrbico(mg/100ml)
en la abscisa y la ordena la absorbancia,(L1-L2) para cada
estndar de trabajo

3. Mtodo: preparacin de la muestra

a) Marcar 5 gr. De muestra fresca con 35 ml. de una

solucin de cido oxlico al 0,4 % en una licuadora por
3 min. y luego filtrar.

b) Determinar L1 como se describi anteriormente (paso 3).

c) En el tubo III colocar 1 ml. de filtrado (muestra) ms 9

ml. de agua ajustar al cero la absorbancia.

d) Luego en el tubo IV colocar 1 ml. de filtrado (muestra)

ms 9 ml. de colorante y registrar la absorbancia L2
despus de 15 segundos.

e) Calcular (L1 - L2) y obtener la concentracin de cido

ascrbico a partir de la curva estndar

RESULTADOS:
muestra (mg/ml

1.53 Fiola(ml)

Tubo(ml)

100

Concentraciones L1
0.0153
0.0306
0.0459
0.0612
0.0765

1
2
3
4
5

L2
0.2783
0.2733
0.272
0.2715
0.2686

0.2424
0.2079
0.1562
0.0024
0.007

L1-L2
0.0359
0.0654
0.1158
0.2691
0.2616

absorvancia
y = 0.0655x - 0.047

0.3
0.25
0.2

absorvancia

0.15

Linear (absorvancia)

0.1
0.05
0
0.0153

0.0306

0.0459

0.0612

0.0765

Como vemos en nuestra grafica la concentracin 0.0153 y

0.0306 estn muy alejados a nuestra curva patrn, por lo
cual el valor de r2 se encuentra demasiado alejado de 0.99 o
debera estar cercano a la unidad por tanto el 0.0153y el
0.0306 no son los datos ptimos.

CONCLUSIONES
Concluimos en el
desarrollo

de

manejo de los instrumentos que utilizamos en el

la

prctica,

notando

la

diferencia

que

hay

instrumentos con mejor medicin que otros.

Al terminar la prctica

podemos concluir que con el desarrollo

experimental de la presente prctica nos pudimos percatar de que la

concentracin de una solucin depende directamente de los factores
de

molaridad

normalidad,

las

cuales

son

propiedades

que

determinan las caractersticas de una solucin.

Concluimos con buen entendimiento para resolver problemas sin
ninguna dificultad.

DISCUSIONES

Segn CASTRO, R. y L. SUAREZ 2002. :_En cualquier discusin

de soluciones el primer requisito consiste en especificar sus
composiciones: esto es, las cantidades relativas de los diversos
componentes. Para explicar en forma didctica, consideremos
una solucin de dos componentes, A (soluto) y B (disolvente o
solvente).

Segn CEREZAL, P.T. MARRERO y R.M. PINERA. 1994. :_Las

medidas de composicin para soluciones liquidas son las
siguientes:

Gramos de soluto por volumen de solucin.

Gramos de soluto por 100 gr de disolvente.

Gramos de soluto por 100 gr de solucin.

Mililitros de soluto por 100 gr de disolvente.

Mililitros de soluto por 100 ml de solucin.

Moles de soluto por 1 litro de solucin (molaridad).

Moles de soluto por 100 gr de disolvente (molalidad).

Segn HART, Leslie; FISHER Harry :_La cantidad de una

sustancia que se disuelve en otra depende de la naturaleza del
soluto y del solvente, de la temperatura y la presin.

Segn MORENO-ALVAREZ, M.J.,C. GOMEZ, J. MENDOZA y

D. BELEN. 1999.:_En general, el efecto de la temperatura es
muy pronunciada y su direccin depende del calor de solucin.
Si

una

sustancia

se

disuelve

hasta

la

saturacin

con

desprendimiento de calor, la solubilidad disminuye con el

aumento de la temperatura. Por otra parte, si una sustancia se
disuelve con absorcin de calor, la solubilidad se incrementa
cuando se eleva la temperatura. En general, los compuestos de
carcter qumico anlogo, son mas fcilmente solubles entre si
que los carcter diferente.

Segn DURAN, M. y M.J. MORENO ALVAREZ 2000:_La

solubilidad es la capacidad que tiene una sustancia para
disolverse en otra, la solubilidad de un soluto es la cantidad de
este.

Segn BRACK EGG, :_Algunos lquidos, como el agua y el

alcohol, pueden disolverse entre ellos en cualquier proporcin.
En una solucin de azcar en agua, puede suceder que, si se le
sigue aadiendo ms azcar, se llegue a un punto en el que ya
no se disolver ms, pues la solucin est saturada.

Segn PADILLA, Saul :_La solubilidad de un compuesto en un

solvente concreto y a una temperatura y presin dadas se
define como la cantidad mxima de ese compuesto que puede
ser disuelta en la solucin. En la mayora de las sustancias, la
solubilidad aumenta al aumentar la temperatura del solvente.
En el caso de sustancias como los gases o sales orgnicas de
calcio, la solubilidad en un lquido aumenta a medida que
disminuye la temperatura.

BIBLIOGRAFIA

BRACK EGG, Antonio. Diccionario enciclopdico de Plantas tiles

del Per.
Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo 1999.
CASTRO, R. y L. SUAREZ 2002. Recuperacion de colorantes a partir
de desechos agroindustriales de naranja (citrus sinensis L.) Variedad
Valencia,a nivel piloto Venezuela
CEREZAL, P.T. MARRERO y R.M. PINERA. 1994. Fuentes de
carotenoides a partir de residuos de naranja. Estudio Preliminar. LA
HABANA.

DURAN, M. y M.J. MORENO ALVAREZ 2000. Evaluacion de

algunasmezclas de solvente en la extraccion de carotenoides de
tamarillo(CyphomandrabetaceaeSendt). Venezuela.49
FELLOWS, Peter. Tecnologia del Proceso de Alimentos. Editorial
Acribia S.A. Espana 1984.

HART, Leslie; FISHER Harry. Analisis Moderno de los

Alimentos.INDECOPI, Norma Tecnica para alimentos 1974
MORENO-ALVAREZ, M.J.,C. GOMEZ, J. MENDOZA y D. BELEN.
1999.Carotenoides totales en cascara de naranja (Citrus sinensis L.
variedad Valencia) Revista Unellez de Ciencia y Tecnologia.
Venezuela.

PADILLA, Saul. Manejo Agroforestal Andino. Proyecto FAO /

Holanda.Desarrollo participativo los Andes 1992.